拟海桑提取物的生物活性CPE+MTT测定方法与流程

文档序号:12712775阅读:来源:国知局

技术特征:

1.拟海桑提取物的生物活性CPE+MTT测定方法,其特征在于,包括MTT法和CPE法;

MTT法:MDCK细胞37ºC下在通入5%CO2和95%氧气,含有10%FBS的RPMI-1640细胞悬浮液中培养;将细胞密度调至5×104个/mL,在96孔细胞培养板中每孔加入200uL培养24h;每孔加入2uL,50ug/mL含药物的甲醇溶液的维持液继续培养72h;然后,每孔加入20uLMTT(5mg/mL的RPMI-1640)溶液,继续培养4h;以DMSO更换溶解MTT的介质,至Formazan结晶完全溶解;酶标仪测定每孔540nm处的吸光值(OD值);获得剂量反应曲线,计算IC50

CPE法:单层MDCK细胞首先与流感病毒(A/PuertoRico/8/34(H1N1),PR/8)于37ºC培养1h;弃去病毒稀释液,将细胞于37ºC保持在含有不同浓度测试药物的感染媒介中(RPMI1640,4ug/mL胰蛋白酶);37ºC培养48h后,用100uL4%的多聚甲醛与MDCK细胞在室温下固定20min;除去甲醛后,MDCK细胞用0.1%的结晶紫染色30min;将板洗净干燥,酶标仪(Bio-Rad,USA)在570nm处测定各孔中结晶紫染色的强度;计算IC50值,即感染后48h抑制CPE为50%时的化合物浓度。

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