本发明涉及食品检测技术领域，具体涉及一种牛奶中抗生素检测方法。
背景技术：
牛奶中抗生素残留问题在世界范围内一直没有被彻底攻克,已成为行业发展以及食品安全的隐患之一。抗生素主要指能抑制或杀死其他微生物的一类化学物质,如青霉素、四环素、金霉素、链霉素、氯霉素、磺胺类药物等。在医学上,抗生素被广泛的应用于预防和治疗多种微生物感染性疾病以及某些癌症。在奶业的源头中,抗生素使用频率很高,特别是治疗牛乳房炎,常常大剂量反复使用。据统计,约有十多种抗生素以一种或多种联合的形式采用粉剂、涂擦剂、注射剂,以及乳导管注入等方式加以应用,导致抗生素残留相当严重,在奶牛饲料中,也含有抗生素添加剂。
目前,国内外用于检测奶及奶制品中抗生素残留的方法很多,而为满足奶及奶制品生产需要和遵守新法规,人们对快速检测开始感兴趣,而现有检测方法均存在耗时长，成本高，检测不便等诸多缺陷。
技术实现要素：
本发明为解决上述问题，提供一种便捷快速，成本低廉的牛奶中抗生素检测方法。
本发明所要解决的技术问题采用以下的技术方案来实现：
一种牛奶中抗生素检测方法，包括以下步骤：
(1)使用灭菌缓冲液对试管、容量瓶进行灭菌，再用蒸馏水进行冲洗，烘干后经115℃蒸气灭菌20min备用；
(2)用经过灭菌的试管量取待检测试样10ml进行稀释，稀释分三步进行，第一步取5ml待检测试样置于50ml容量瓶中加水稀释，第二步从第一步所得试样中量取5ml置于50ml容量瓶中加水稀释，第三步从第二步所得试样中量取5ml置于100ml容量瓶中加水稀释，每次量取用刻度吸管，量取前用被量测溶液清洗吸管2～3次，吸取试样溶液后，用滤纸将外壁多余的液体擦去，从起始刻度开始放液，保证量取试样的纯度和精确度；
(3)将步骤(1)中所得试样置于恒温槽中，控制恒温槽温度22℃，保持时间30min，使试样中的抗生素进行充分活化；
(4)将经过消毒的不锈钢中空管放置在含有敏感试验菌的琼脂培养基中，量取步骤(2)所得试样10ml注入不锈钢中空管，试样中的抗生素分子向琼脂培养基呈球面放射状扩散；同时将琼脂培养基置于培养箱中，控制温度20-23℃，湿度60％，琼脂培养基中的试验菌开始生长；抗生素分子在琼脂培养基中的浓度，随离开不锈钢中空管的距离增大而降低，离不锈钢中空管越远，琼脂培养基中抗生素分子越少，相应的抗生素浓度越低；当抗生素分子扩散到一定时间，在不锈钢中空管周围形成一个能有效的抑制试验菌生长的范围，即抑菌圈，抑菌圈的大小随抗生素溶液浓度的不同而不同；
(5)使用抑菌圈测量仪或者游标卡尺测量抑菌圈大小，使用游标卡尺测量时，眼睛视线与读数刻度垂直，用游标卡尺的尖端与抑菌圈直径的切点成垂直方向测量；
(6)将步骤(4)所测得结果进行比对，高剂量抗生素所形成的抑菌圈直径在20～24mm，中剂量抗生素所形成的抑菌圈直径在16～20mm，低剂量抗生素所形成的抑菌圈直径在12～16mm；
(7)重复步骤(4)～(5)并对每次结果进行记录，以验证检测结果准确性。
所述步骤(1)中灭菌缓冲液由以下重量份的原料组成：
磷酸氢二钠30-40份，磷酸二氢钠20-25份，氯化钠15-20份，氯化钾10-20份，无水乙醇12-18份，二氯化钙6-10份，二氯化镁5-8份，三氯甲烷4-6份，氢氧化钠7-9份。
所述灭菌缓冲液选择常规化学试剂，价格便宜方便配制，与市场上普通灭菌液相比，杀菌效果更好，不会对容器内壁造成二次污染，易于清理。
所述步骤(1)中灭菌缓冲液PH值为7.4～7.6。
所述步骤(4)中试验菌由短小芽孢杆菌，产氨短杆菌，凝结芽孢杆菌，双歧杆菌一种或数种组成。
所述步骤(4)中琼脂培养基由以下重量份的原料组成：
琼脂100-125份、增菌液80-100份、酵母提取物10-20份、氨基酸20-25份、磷酸二氢钾5-10份、蛋白胨20-30份、猪胆盐15-20份、水解酪蛋白12-18份、硝酸钠7-12份、酵母膏5-8份、葡萄糖10-12份、牛肉膏16-20份。
所述琼脂培养基营养成分丰富且分布均匀，与试验菌表面接触充分，还能大量溶解微生物的代谢产物。
所述步骤(5)在测量抑菌圈大小先检查抑菌圈是否完整，如有破圈或者不完整应舍弃。
本发明的有益效果为：本发明能够对牛奶中的各种抗生素进行定性及定量检测，样品的前处理简单，对检测人员要求低，检测结果重复性好，本方法使检测人员无需接触高温、高毒物品，对人体健康安全有保障，同时检测周期短，成本低廉。
具体实施方式
为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合实施例，进一步阐述本发明。
一种牛奶中抗生素检测方法，包括以下步骤：
(1)使用灭菌缓冲液对试管、容量瓶进行灭菌，再用蒸馏水进行冲洗，烘干后经115℃蒸气灭菌20min备用；
(2)用经过灭菌的试管量取待检测试样10ml进行稀释，稀释分三步进行，第一步取5ml待检测试样置于50ml容量瓶中加水稀释，第二步从第一步所得试样中量取5ml置于50ml容量瓶中加水稀释，第三步从第二步所得试样中量取5ml置于100ml容量瓶中加水稀释，每次量取用刻度吸管，量取前用被量测溶液清洗吸管2～3次，吸取试样溶液后，用滤纸将外壁多余的液体擦去，从起始刻度开始放液，保证量取试样的纯度和精确度；
(3)将步骤(1)中所得试样置于恒温槽中，控制恒温槽温度22℃，保持时间30min，使试样中的抗生素进行充分活化；
(4)将经过消毒的不锈钢中空管放置在含有敏感试验菌的琼脂培养基中，量取步骤(2)所得试样10ml注入不锈钢中空管，试样中的抗生素分子向琼脂培养基呈球面放射状扩散；同时将琼脂培养基置于培养箱中，控制温度20-23℃，湿度60％，琼脂培养基中的试验菌开始生长；抗生素分子在琼脂培养基中的浓度，随离开不锈钢中空管的距离增大而降低，离不锈钢中空管越远，琼脂培养基中抗生素分子越少，相应的抗生素浓度越低；当抗生素分子扩散到一定时间，在不锈钢中空管周围形成一个能有效的抑制试验菌生长的范围，即抑菌圈，抑菌圈的大小随抗生素溶液浓度的不同而不同；
(5)使用抑菌圈测量仪或者游标卡尺测量抑菌圈大小，使用游标卡尺测量时，眼睛视线与读数刻度垂直，用游标卡尺的尖端与抑菌圈直径的切点成垂直方向测量；
(6)将步骤(4)所测得结果进行比对，高剂量抗生素所形成的抑菌圈直径在20～24mm，中剂量抗生素所形成的抑菌圈直径在16～20mm，低剂量抗生素所形成的抑菌圈直径在12～16mm；
(7)重复步骤(4)～(5)并对每次结果进行记录，以验证检测结果准确性。
所述步骤(1)中灭菌缓冲液由以下重量份的原料组成：
磷酸氢二钠30-40份，磷酸二氢钠20-25份，氯化钠15-20份，氯化钾10-20份，无水乙醇12-18份，二氯化钙6-10份，二氯化镁5-8份，三氯甲烷4-6份，氢氧化钠7-9份。
所述步骤(1)中灭菌缓冲液PH值为7.4～7.6。
所述步骤(4)中试验菌由短小芽孢杆菌，产氨短杆菌，凝结芽孢杆菌，双歧杆菌一种或数种组成。
所述步骤(4)中琼脂培养基由以下重量份的原料组成：
琼脂100-125份、增菌液80-100份、酵母提取物10-20份、氨基酸20-25份、磷酸二氢钾5-10份、蛋白胨20-30份、猪胆盐15-20份、水解酪蛋白12-18份、硝酸钠7-12份、酵母膏5-8份、葡萄糖10-12份、牛肉膏16-20份。
所述步骤(5)在测量抑菌圈大小先检查抑菌圈是否完整，如有破圈或者不完整应舍弃。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的仅为本发明的优选例，并不用来限制本发明，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。