猪流行性腹泻病毒强毒株和疫苗株多重RT‑PCR检测试剂盒及其引物组的制作方法

文档序号:12250026阅读:来源:国知局

技术特征:

1.猪流行性腹泻病毒强毒株和疫苗株多重RT-PCR检测引物组,其特征在于包括三对特异性引物,分别是引物1和2、引物3和4、引物5和6,它们分别具有序列表SEQ.ID.No.1至SEQ.ID.No.6的碱基序列。

2.根据权利要求1所述的多重RT-PCR检测引物组,其特征在于:所述引物1、引物2、引物3、引物4、引物5、引物6的摩尔比为1∶1∶1∶1∶1∶1。

3.一种猪流行性腹泻病毒强毒株和疫苗株多重RT-PCR检测试剂盒,其特征在于该试剂盒含有以下试剂:反转录RT反应液、PCR反应液、灭菌双蒸水,所述PCR反应液包括三对特异性引物,分别是引物1和2、引物3和4、引物5和6,它们分别具有序列表SEQ.ID.No.1至SEQ.ID.No.6的碱基序列。

4.根据权利要求3所述的多重RT-PCR检测试剂盒,其特征在于:所述反转录RT反应液每管15μL,包括:5×Prime Scrip II buffer 4.0μL,dNTP 1.0μL含各dNTP 10mM,随机引物6聚体50pmol/μL、1.5μL,RNA酶抑制剂40U/μL、0.5μL,RNase H-型反转录酶200U/μL、1.0μL,灭菌双蒸水7μL;所述PCR反应液每管45μL,包括:2×Taq PCR MasterMix 25μL,引物1和2 25pmol/μL各1μL、引物3和4 25pmol/μL各0.75μL、引物5和6 25pmol/μL各1.25μL,灭菌双蒸水14μL。

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