一种大银鱼与太湖新银鱼的分子鉴别方法与流程

文档序号:11126231阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种大银鱼与太湖新银鱼的分子遗传鉴别方法,其特征在于包含以下步骤:

(1)分别提取待鉴定的大银鱼与太湖新银鱼基因组DNA;

(2)以提取的基因组DNA为模板,PCR扩增大银鱼与太湖新银鱼的细胞色素b基因Ctyb;

(3)扩增产物纯化后,直接测序,Cytb基因第45位点碱基是T的为大银鱼,若该位点是C的为太湖新银鱼。

2.根据权利要求1所述的分子遗传鉴别方法,其特征在于用于PCR扩增大银鱼与太湖新银鱼的细胞色素b基因的上游引物为L14321:SEQ ID NO.1,下游引物为H15634:SEQ ID NO.2。

3.根据权利要求1所述的分子遗传鉴别方法,其特征在于PCR反应体系为50μL:100ng/μL的模板DNA 1μL,PCR缓冲液5μL,dNTP混合液4μL,每种dNTP 0.1mmol/L,10μmol/L的上、下游引物各1μL,2μL 2.5IU的Taq酶;双蒸水36μL;所述的PCR缓冲液由10mmol/L Tris-HCl,pH9.0,0.5mmol/L KCl,30mmol/L MgCl2,0.01%(w/v)明胶组成。

4.根据权利要求1所述的分子遗传鉴别方法,其特征在于PCR扩增反应程序为:94℃预变性4min,94℃变性40s,55℃退火40s,72℃延伸90s,经35个循环后再72℃延伸10min。

5.一种引物对在分子遗传鉴别大银鱼与太湖新银鱼中的应用,所述的引物对由上游引物为L14321:SEQ ID NO.1,下游引物为H15634:SEQ ID NO.2组成。

6.一种引物对在制备大银鱼与太湖新银鱼分子遗传鉴别试剂中的应用,所述的引物对由上游引物为L14321:SEQ ID NO.1,下游引物为H15634:SEQ ID NO.2组成。

7.一种大银鱼与太湖新银鱼分子遗传鉴别试剂,其特征在于包含上游引物L14321:SEQ ID NO.1和下游引物H15634:SEQ ID NO.2组成的引物对。

8.根据权利要求7所述的大银鱼与太湖新银鱼分子遗传鉴别试剂,其特征在于所述的大银鱼与太湖新银鱼分子遗传鉴别试剂,还优选包括PCR缓冲液和dNTP混合液,所述的PCR缓冲液由10mmol/L Tris-HCl,pH9.0,0.5mmol/L KCl,30mmol/L MgCl2,0.01%明胶组成。

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