一种与致病力相关的灰霉病菌基因BcPCK1及其应用的制作方法

文档序号：12097421阅读：856来源：国知局

本发明属微生物基因工程技术领域，具体涉及植物保护领域中控制真菌致病性的基因及其编码蛋白质的应用。

背景技术：

灰霉病菌(Botrytis cinerea)通常又称作灰葡萄孢，属于子囊菌门(Ascomycota)真菌，是灰霉病的病原菌，可侵染400多种植物，包括几乎所有的蔬菜及果树。寄主从苗期、挂果期到贮存期均可发病，而且，植株各部位均可被灰霉病菌侵染，叶部发病的典型症状表现为“V”形病斑，花部主要表现为腐烂和调萎，果实主要表现为腐烂和脱落。病害的发生和蔓延与环境的湿度、温度存在密切的关系，在20℃-23℃，相对湿度90％以上时发生严重。因此，灰霉病属低温高湿型病害，在多雨季节或者保护地生产中极易发生，世界上每年因该病导致的经济损失高达100-1000亿美元。由于寄主范围广泛，生产上危害严重，再加上相关分子研究技术成熟，灰霉病菌已成为最重要的模式植物病原真菌之一，受到广泛研究。

灰霉病菌是典型的死体营养型病原真菌，可生成多种致病因子参与致病，主要包括细胞壁降解酶类、角质酶、毒素、植物激素、抵抗寄主反应的酶类、小RNA及小分子物质等，这些因子相互协作使灰霉病菌能够杀死寄主细胞，并分解死亡的寄主组织作为营养。自然条件下，灰霉菌多以分生孢子作为侵染寄主的初侵染和再侵染来源。灰霉病菌常以菌丝体、分生孢子或菌核附着在植物病残体上，或在土壤中越冬和越夏，成为下一生长季的初侵染来源。当条件适宜时，菌核萌发产生菌丝体和分生孢子梗，并产生大量的分生孢子。成熟的分生孢子能够借助风、雨水、灌溉水和农事操作等进行传播。在低温高湿条件下，分生孢子萌发形成芽管，芽管末端稍稍膨大发育成附着胞或者进一步形成侵染垫等侵染结构，主要从衰败的花器、伤口以及坏死组织侵入。

当高浓度的灰霉病菌分生孢子侵染寄主时，发病迅速，此时主要通过芽管顶端形成的附着胞侵入；伴随孢子浓度降低，通过芽管顶端侵入的比例降低，发病速度也相应延缓1-4天，此时主要通过由菌丝发育成的附着胞或侵染垫侵入。灰霉病菌侵入寄主细胞后，将会直接面临寄主组织内敌对环境的挑战，病原菌必须迅速做出调整，一方面抑制植物的防御反应，另一方面要积极适应寄主细胞内物理、化学环境，做到这两方面，灰霉病菌才有望成功地寄生植物。在很大程度上，灰霉病菌是通过改变自身的代谢途径，并分泌相关效应因子(如毒素)来实现上述目标的，但参与相应过程的基因、蛋白及代谢产物及其调控的分子机制仍所知甚少。对该领域进行深入研究，鉴定灰霉病菌用以适应寄主内环境的关键因子，不仅有助于揭示灰霉病菌这种死体营养型病原真菌致病的分子机制，还有可能从中发现可以作为杀真菌剂作用靶标的蛋白质，为开发防治灰霉病及其它类似病害的高效药剂奠定理论和技术基础。

灰霉病菌Pck1是一类磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(phosphoenolpyruvatecarboxykinase,PEPCK)，参与催化草酰乙酸生成磷酸烯醇式丙酮酸，是糖异生途径的第二个限速酶，通过分析其编码基因BcPCK1的致病功能，评价该基因在灰霉病菌调控孢子萌发、孢子产量及致病过程的作用，有利于鉴定潜在的防治靶标，用于筛选新型杀真菌药剂。

技术实现要素：

本发明的目的旨在提供一种调控孢子萌发、孢子产量及致病性的基因及其编码的蛋白质。

本发明所提供的调控孢子萌发、孢子产量及致病性基因来源于灰霉病菌，名称为BcPCK1，其DNA序列如SEQ ID No:1所示。该DNA序列为BcPCK1基因开放阅读框，由2644个核苷酸组成，其中包含4个外显子，分别位于SEQ ID No:1的5’端第1位至277位核苷酸之间，第327位至844位核苷酸之间，第895位至1446位核苷酸之间，第1891位至2226位核苷酸之间，组成的编码区长度合计为1683个核苷酸。

本发明提供了BcPCK1基因所编码的蛋白质，其氨基酸序列如SEQ ID No:2所示，该序列由560个氨基酸组成。

来自灰霉病菌的调控孢子萌发、孢子产量及致病性基因BcPCK1可应用于植物抗灰霉病基因工程领域。

来自灰霉病菌的调控孢子萌发、孢子产量及致病性基因BcPCK1所编码的蛋白质可作为靶标应用于抗灰霉病菌药剂的设计与筛选。

本发明证明了BcPCK1基因的缺失或突变，导致灰霉病菌致病力显著降低，说明BcPCK1基因是灰霉病菌引起农作物灰霉病所必需的基因。因此，筛选能够阻止该基因表达与其蛋白质的表达、修饰及定位的化合物，可以有效控制灰霉病的发生，从而有助于开发新型杀菌剂，即本发明所提供的BcPCK1基因的一个重要用途是：该基因的表达与其编码的蛋白质产物，可以作为重要候选靶标位点，用于抗灰霉病菌药剂的设计与筛选。

本发明所使用的灰霉病菌菌株B05.10，购买自美国真菌遗传材料保藏中心(Fungal Genetics Stock Center，FGSC)，其他人员如需要该菌株，可从该保藏中心购买获得，相关信息如下：保藏中心地址：Fungal Genetics Stock Center，Department of Plant Pathology，Kansas State University，4024 Throckmorton Plant Sciences Center，Manhattan,KS 66506 USA；网址：http://www.fgsc.net/scripts/StrainSearchReturnPage.asp？OrgID＝23812；菌株编号：FGSC 10317。

附图说明

图1为BcPck1蛋白质的结构域分析示意图

其中：PEPCK为磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶的保守结构域；

图2为灰霉病菌BcPCK1基因的敲除策略(通过同源重组进行基因替换)示意图

其中：WT为野生型菌株B05.10，PXEH-KO为敲除载体

图3为BcPCK1基因在野生型、缺失突变体及遗传互补菌株中的半定量RT-PCR电泳图

其中：使用BcPCK1基因cDNA设计的一对引物PCKU、PCKD，及另一对做内参的引物Actin-U、Actin-D同时进行半定量PCR；WT为野生型菌株B05.10，ΔBcpck1为BcPCK1基因缺失突变体，Bcpck1-C为在BcPCK1基因缺失突变体基础上转入完整BcPCK1基因的互补菌株；

图4为野生型菌株B05.10、BcPCK1基因的缺失突变体与遗传互补菌株孢子萌发率统计图

其中：分别取浓度为1×10⁵/mL分生孢子与PDB溶液1:1混合，滴5ul混合液于载玻片上，在20℃恒温分别培养2h、4h、6h，分别于显微镜观察，利用血球计数板统计萌发率；***表示在p<0.001水平上差异极显著。

图5为BcPCK1基因的缺失突变体与野生型菌株及互补菌株的产孢照片

图6为BcPCK1基因的缺失突变体与野生型菌株及互补菌株的产孢量统计图

其中：***表示在p<0.001水平上差异极显著。

图7为BcPCK1基因的缺失突变体与野生型菌株及互补菌株的致病力比较照片

其中：所选择寄主为番茄叶片，采用离体叶片接种孢子的方法。接种3天后进行评价；

图8为BcPCK1基因的突变体与对照菌株侵染寄主所产生病斑大小的定量分析示意图

其中：接种方法同上，接种3天后对叶片病斑面积进行测量计算，换算成相对大小；***表示在p<0.001水平上差异极显著。

具体实施方式

为了更好地描述本发明，下面通过具体的实施例予以进一步的说明，下述实施例中的方法，如无特别说明，均为常规方法。

实施例1 BcPCK1基因的相关性分析

灰霉病菌BcPCK1基因的开放阅读框由2644个核苷酸组成，包含4个外显子，编码区cDNA全长为1683个核苷酸，编码的蛋白质产物由560个氨基酸组成，结构域分析发现，BcPck1蛋白质功能结构域非常保守(见图1)。

实施例2 BcPCK1基因的敲除

1)敲除载体的构建

采用引物PCK-UP-F(5'-AGATCTCGGAGCATGTGAATGCCAAGT-3')与PCK-UP-R(5'-GAGCTCAGCCGCCGTCGTTCGTAAAT-3')，以灰霉病菌菌株B05.10的基因组DNA为模板扩增BcPCK1基因上游555bp片段，采用PCK-DN-F(5'-GTCGACAAGAAATACCAGTCGGAAGCTA-3')与PCK-DN-R(5'-CTGCAGGAAAGCCAAACCTACAAAGTTC-3')扩增灰霉病菌BcPCK1基因下游710bp片段，反应体系为：10mmol/L dNTP Mixture，0.5μL；10×PCRbuffer，2.5μL；上下游引物各1μL(10μmol/mL)；模板DNA，1μL；Ex-Taq，0.2μL(5U)；ddH₂O，18.8μL；扩增程序为：94℃预变性3分钟，然后(1)94℃，变性50秒；(2)58℃，退火50秒；(3)72℃，延伸60秒；(4)循环30次；(5)72℃延伸10分钟。将上述两段DNA扩增产物分别克隆到T载体，然后分别用Bgl II、Sac I酶切含上游片段质粒及pXEH载体，将酶切好的上游同源片段克隆至用相同酶酶切的pXEH载体上；验证正确后，再用Sal I、Pst I酶切含下游片段的质粒及连有上游同源片段的pXEH载体，再将酶切好的下游同源片段克隆至用相同酶酶切的连有上游同源片段的pXEH载体上，构建成敲除载体PXEH-KO(见图2)，并进行测序验证。

2)灰霉病菌的转化

a.农杆菌的培养

挑取含有双元载体PXEH-KO的根癌农杆菌菌株Agl-1单菌落，接种至含50μg/ml卡那霉素、10μg/ml利福平的MM液体培养基(磷酸氢二钾0.205％，磷酸二氢钾0.145％，氯化钠0.015％，七水硫酸镁0.05％，六水氯化钙0.01％，七水硫酸亚铁0.00025％，硫酸铵0.05％，葡萄糖0.2％)中，250rpm、28℃振荡培养48h；4000rpm，离心5分钟，弃上清，IM液体培养基(磷酸氢二钾0.205％，磷酸二氢钾0.145％，氯化钠0.015％，七水硫酸镁0.05％，六水氯化钙0.01％，七水硫酸亚铁0.00025％，硫酸铵0.05％，葡萄糖0.2％，200μMAS，MES 0.854％，甘油0.5％)重悬，4000rpm离心5分钟，弃上清；IM培养基重悬，28℃，250rpm振荡培养6h，进行预诱导。

b.灰霉病菌的产孢培养

选用B05.10菌株，取少量孢子涂布于PDA培养基(马铃薯20％煮烂过滤，葡萄糖2％，琼脂1.5％)，置28℃培养8h令孢子快速萌发，然后转移至20℃培养3-5天，待菌体表面被灰色孢子覆盖之后，用IM液体培养基刮取、收集孢子，显微镜观察，利用血球计数器调节孢子浓度为1×10⁶/mL。

c.根癌农杆菌与灰霉病菌分生孢子共培养及转化子筛选

将在IM液体培养基中预先诱导6h的农杆菌菌液和灰霉病菌孢子液等体积混合，加入AS，使终浓度达到500μM，混匀，然后按250～350μL/皿，均匀涂抹至铺有玻璃纸的IM培养基上，22℃黑暗培养48h；共培养完毕后，将玻璃纸转移至含有100μg/mL潮霉素的PDA培养基上，相同条件下继续培养。4～7天后挑取扩展的菌落到含有同样抗生素的筛选培养基上。

3)缺失突变体的验证

选用两对引物通过PCR扩增对转化子进行筛选。扩增结果符合如下结果的，确定为BcPCK1基因缺失突变体：上游同源臂之外基因组上的引物c(5'-ATGACTTCAATGTCCCGCTAA-3')与潮霉素抗性基因的引物d(5'-ACAGACGTCGCGGTGAGTTCA-3')配对可以扩增到预期大小的重组片段；而编码区引物a(5'-CCGAGGGTATGACTTCAGGTA-3')与b(5'-TTGTGGTGCTCAATCTTCTCA-3')无扩增条带(野生型菌株可扩增到0.81kb片段)。结果，从转化子中筛选到BcPCK1基因缺失突变体ΔBcpck1用于后续功能分析。

实施例3 BcPCK1基因缺失突变体的遗传互补

采用引物C-F(5'-AAAGATCAAAGGATCGAATTCCAATGTCCCGCTAAATGTCA-3')与C-R(5'-CCGGGTACCGAGCTCGAATTCCCGATTGCTAGACTGGTGG-3')，扩增灰霉病菌BcPCK1基因全长4672bp(包含启动子、开放阅读框与终止子)，克隆至pXEB载体(含有草铵膦抗性基因)的EcoR I位点，构建成遗传互补载体PXEH-KO-C。载体经测序验证，确认没有氨基酸突变。采用如前所述的农杆菌介导的转化方法，使用400μg/mL草铵膦进行筛选，将该互补片段转入BcPCK1基因缺失突变体基因组中，获得遗传互补菌株Bcpck1-C。选用灰霉病菌菌株B05.10的BcPCK1基因cDNA基因组设计的引物PCKU(5'-CGAAGGTAAGGACGGAGACG-3')与PCKD(5'-CAGAGCCGAATTGGATAGCG-3')、及野生型菌株B05.10另一对做内参的引物Actin-U(5'-CATGGCTGGTCGTGATTTGA-3')、Actin-D(5'-GAGGATTGACTGGCGGTTTG-3')同时进行半定量PCR，电泳结果符合预期(见图3)：BcPCK1基因缺失突变体ΔBcpck1-1、ΔBcpck1-2中没有扩增出条带，野生型和互补菌株接近内参扩增的亮度，说明：在BcPCK1基因缺失突变体中BcPCK1基因的确被敲除，互补菌株额外拥有一个后续转入的BcPCK1基因，因为BcPCK1基因缺失突变体中没有BcPCK1基因的转录，而互补菌株和野生型菌株有BcPCK1基因的正常转录。

实施例4 BcPCK1基因在灰霉病菌的分生孢子萌发过程中的作用

分别取浓度为1×10⁵/mL分生孢子与PDB溶液1:1混合，滴5ul混合液于载玻片上，在20℃恒温分别培养2h、4h、6h，分别于显微镜观察统计萌发率；观察发现，2h时BcPCK1基因缺失突变体分生孢子萌发率不到30％，而野生型菌株和互补菌株接近80％；4h时BcPCK1基因缺失突变体分生孢子萌发率不到60％，而野生型菌株和互补菌株早已达100％；直到6h BcPCK1基因缺失突变体分生孢子萌发率才达到100％。以上研究表明，BcPCK1基因具有调控分生孢子萌发的作用(见图4)。

实施例5 BcPCK1基因在灰霉病菌产孢方面的作用

分别取10μL待测菌株PDB孢子悬浮液(1×10⁶ml^-1)接种在PDA培养基的中心，20℃黑暗培养一周(见图5)，收集孢子，显微镜观察，利用血球计数器统计。分析发现，BcPCK1基因缺失突变体产孢量只有野生型菌株的10％左右，而互补菌株与野生型菌株接近，表明BcPCK1基因具有调控分生孢子产量的作用(见图6)。

实施例6 BcPCK1基因在灰霉病菌致病性方面的作用

采用离体叶片接种法，评价BcPCK1基因缺失突变体的致病力变化情况。从温室培养的番茄植株上采集成熟叶片，水平放置容器中，取15μL待测菌株PDB孢子悬浮液(1×10⁵ml^-1)点接在叶面上，20℃保湿黑暗培养，3天后评价待测菌株的致病力。实验结果显示，BcPCK1基因缺失突变体基本丧失了致病能力，只能在接种点附近发现微小病斑。与此形成鲜明对照的是，野生型可成功侵染番茄叶片，并迅速蔓延至近半个叶面；遗传互补菌株Bcpck1-C的致病力回复正常，基本达到野生型水平(见图7)。对叶片病斑面积进行测量计算，发现BcPCK1基因缺失突变体侵染引起的病斑面积只有野生型引起的25％左右(见图8)。该研究结果表明，BcPCK1是一个关键的致病基因，是灰霉病菌侵染寄主所必需的，如果该基因或其编码的蛋白质丧失活性，灰霉病菌将基本失去侵染寄主引发病害的能力。

SEQ ID No:1的序列

(i)序列特征：(A)长度：2644bp；(B)类型：核苷酸；(C)链性：单链

(ii)分子类型：DNA

(iii)序列描述：SEQ ID No:1

1 ATGTCGACCT CAAATATGAA TAAGAAGGCT TTCGATCCCA TCCAAAGAAC TGCATCTCCA

61 TATCCTGACA AGAGCAGTGT TGGTCCTTCG CACATTATTG CACAACACCA ACCTACAAAC

121 AACTATCATT CTTCATCACT CTCCACTCTC AAAATGGTTT CTACAAATCC AAGCGTCAAT

181 CGCACATGTC AGTATACCTT TCTTCATGCT CCTACTGCTT CAGCACTGCT TCAGACCTGC

241 CGCATTCGAC CTGGCATCTG ATGTTCGGGT CAGATTGGAT GTCGACGCAC CTGCGACTTT

301 AGCAGTCCGC CCACAGTCTT TCAGCTCGCA GCTCAATGAT GACGCTTCGC GATAGCTTTT

361 ATGCAACTTC ACTTTGCTAA CATTATCTTT TACAGCACTT CACCCAAGCG GTGTACAACC

421 ACAAGTTGAG CACACCGAGC TTGAGGAGGA ACTTCACGAG AACGCACATA TCGATTATGA

481 TCGTGTAGCT ATTGTGTGTA TCTCGCCCCC TCTTTGGATC TGCCAGCTGC TAACTCCTAT

541 TCTTTTCTAG GTTCCTAATC CAAGTGTCGC TGCCCTTTAC GAAGATGCAC TTGTTTACGA

601 AACTGGTTCT GCCATCACAT CTACCGGTGC TCTCACTGCA TACTCTGGAG CTAAGACAGG

661 TCGCTCGCCC TTAGACAAGA GAATTGTCAA AGAACCATCA TCTGAAAATG AGATTTGGTG

721 GGGACCAGTC AACAAGCCAA TGACACCTGA TGTAAGAACC TCTCTCTCTC TCTGTTTACA

781 TTCATTTCTT GCGTCTTTTA CTTTTTCCTT GGAAATGCAT TCAATACGTT TTCAGTCGAG

841 GAAATTTACA TTGGCTCTAC AACACTACGG ATTTTGAAAA CGGCAATCTC ATCTCAGCAT

901 TTTTGAGAGC ACATCTTCAC ATCTACAACT CATCACTTTC CTTTCTTCTT TACGCCAAAC

961 AATCATTCTA AGAGATTTCC CCGCACATTT CTACGTCATA AGCTCTTGGG CATCCTCGGC

1021 TTTATCTTTT TCCTTCCTTC CCCAAGCGAA AACGCGGGGT GCAGATAAAC CGATATTATC

1081 CCGATCTTGC TGCTATTAGT GATCAGCTAT CATATTCCCC CTTTACATGT CGCGTGCGAA

1141 CTTTATCTAT GAGTTTTTGA ATGTTGGAAA TTTAGTAGAC TAACATCAAT GATAGGTATG

1201 GAGAATCAAC CGTGAACGTG CAATTGATTA CTTAAACACG AGAAATCGTA TTTACGTCGT

1261 CGATGGTTTC GCAGGATGGG ACGAGAAATA CAGAATCAAG GTTCGAGTCG TATGCGCTCG

1321 TGCCTACCAC GCTCTTTTCA TGCGCAATAT GCTCATTAGA CCTGAACGCA AAGATCTCGA

1381 ACATTTCCAC CCAGATTATA CTATTTACAA CGCAGGATCT TTCCCTGCTA ACAGATACAC

1441 CGAGGGTATG ACTTCAGGTA CTTCAGTTGC TATCAACTTC GCAGCGAAGG AGATGGTTAT

1501 CTTGGGTACT GAGTACGCCG GAGAGATGAA GAAGGGTGTT TTTACAGTTC TCTTCTACGA

1561 GATGCCTGTC AAGCATAACG TTCTCACTCT TCACTCGTCA GCCAACGAAG GTAAGGACGG

1621 AGACGTCACT GTCTTCTTTG GTCTTTCGGG TACCGGTAAA ACAACACTTT CAGCAGACCC

1681 CAACCGTGCC TTGATTGGTG ACGACGAGCA CTGCTGGAGT GACCGTGGTG TTTTCAACAT

1741 TGAGGGTGGT GTAAGTGTTT CAGAATCTGC ATTACGTTGT ATCAAGCTAA CAATCTGCAG

1801 TGCTACGCTA AGTGCATCGG TCTTTCAGCA GAGAAGGAGC CTGATATCTT TGGCGCTATC

1861 CAATTCGGCT CTGTTCTTGA GAACGTTGTT TTTGACCCAG ACACTCGTCT TGTTGATTAT

1921 GATGACTCAA CCTTGACTGA GAACACCCGT TGCGCATACC CAATTGAGTA CATTTCCAAC

1981 GCTAAGATTC CTTGTCTATC GACAAACCAC CCAAGCAACA TCATTCTTCT TACATGTGAT

2041 GCTCGTGGTG TCCTTCCACC CATTTCCAAG CTTGACTCCG CCCAAACCAT GTTCCATTTC

2101 ATCTCCGGTT ACACCTCAAA GATGGCCGGT ACCGAAGATG GTGTCACAGA GCCACAGGCT

2161 ACCTTCTCAT CTTGCTTCGC GCAACCTTTC TTGGCTTTAC ACCCAATGCG TTATGCTAAG

2221 ATGTTGGCTG AGAAGATTGA GCACCACAAG GCTAATGCTT GGTTGTTGAA CACTGGATGG

2281 GTTGGAGCTG GTGCTACCAC TGGTGGCAAG CGTTGCCCGT AAGTACAATT GGAATCTTCC

2341 GGAAAAACGC ATGCTAACAT GAACTAGATT GAAATACACT CGTGCTATTC TTGACGCAAT

2401 TCACTCTGGA GAGCTTGCAA AGGTTGAGTA TGAAAACTAC GAGACCTTCA ACCTCCAAGT

2461 ACCAAAGACT TGCACCAATG TTCCATCGGA ATTGTTGAAC CCAAGAAATG CATGGAGTCA

2521 AGGAGAGGAT AGCTTCAAAG CCGAGGTTAA CAAACTTGGT GGTCTCTTCG TTGAGAACTT

2581 TAAGAAATAC CAGTCGGAAG CTACTGAGGA TGTCATTGCA GCAGGGCCAG CTGTTAAGGT

2641 TTAA

SEQ ID No:2的序列

(i)序列特征：(A)长度：560个氨基酸；(B)类型：氨基酸；(C)链性：单链

(ii)分子类型：多肽

(iii)序列描述：SEQ ID No:2

1 MVSTNPSVNR TSLHPSGVQP QVEHTELEEE LHENAHIDYD RVAIVPNPSV AALYEDALVY

61 ETGSAITSTG ALTAYSGAKT GRSPLDKRIV KEPSSENEIW WGPVNKPMTP DVWRINRERA

121 IDYLNTRNRI YVVDGFAGWD EKYRIKVRVV CARAYHALFM RNMLIRPERK DLEHFHPDYT

181 IYNAGSFPAN RYTEGMTSGT SVAINFAAKE MVILGTEYAG EMKKGVFTVL FYEMPVKHNV

241 LTLHSSANEG KDGDVTVFFG LSGTGKTTLS ADPNRALIGD DEHCWSDRGV FNIEGGCYAK

301 CIGLSAEKEP DIFGAIQFGS VLENVVFDPD TRLVDYDDST LTENTRCAYP IEYISNAKIP

361 CLSTNHPSNI ILLTCDARGV LPPISKLDSA QTMFHFISGY TSKMAGTEDG VTEPQATFSS

421 CFAQPFLALH PMRYAKMLAE KIEHHKANAW LLNTGWVGAG ATTGGKRCPL KYTRAILDAI

481 HSGELAKVEY ENYETFNLQV PKTCTNVPSE LLNPRNAWSQ GEDSFKAEVN KLGGLFVENF

541 KKYQSEATED VIAAGPAVKV

序列表

SEQ ID No:1的序列

　　　（i）序列特征：（A）长度：2644 bp；（B）类型：核苷酸；（C）链性：单链

　　　（ii）分子类型：DNA

　　　（iii）序列描述：SEQ ID No:1