一种促进人癌细胞发生凋亡的化合物及其应用的制作方法

技术特征：

1.一种促进癌细胞发生凋亡的化合物，其特征在于：所述化合物是2-(4-羟基苯胺)酚，其分子式如下：

2.根据权利要求1所述的一种促进癌细胞发生凋亡的化合物，其特征在于：所述化合物用二甲基亚砜(DMSO)溶解，分装后放置于-80℃冰箱中进行保存。

3.根据权利要求1所述的一种促进癌细胞发生凋亡的化合物，其特征在于：所述化合物能够与人的p53蛋白结合后，恢复突变型p53蛋白为野生型的构象，引起癌细胞发生凋亡。

4.根据权利要求1所述化合物的应用，其特征在于：是抗癌和制备抗癌药物的应用。

5.根据权利要求4所述的化合物的应用，其特征在于：所述化合物能够与人的p53蛋白结合后，恢复突变型p53蛋白为野生型的构象，引起癌细胞发生凋亡，从而实现抗癌作用。

6.根据权利要求4所述的化合物的应用，其特征在于：所述化合物能抑制细胞增殖并促进细胞的凋亡，能够增加p53蛋白的转录活性。

7.根据权利要求1～4任一所述的化合物或者权利要求5～6任一所述的化合物的应用，其特征在于：所述化合物能在体外与人的重组p53蛋白结合。

8.根据权利要求7所述的化合物或者化合物的应用，其特征在于：所述的重组p53蛋白是谷胱甘肽转移酶(GST)为标签的融合蛋白。

9.根据权利要求7所述的化合物或者化合物的应用，其特征在于：所述的重组p53蛋白采用以下方式进行构建：

a)通过构建人的cDNA文库中，通过PCR扩增得到人p53基因并经过测序为野生型的p53基因，然后使用Fast Mutagenesis System试剂盒，获得在175位精氨酸突变为组氨酸和在220位酪氨酸突变为半胱氨酸的突变体p53基因；

b)将步骤a)中获得野生型的p53基因和突变体p53基因均通过内切酶BamH1和Xho1双酶切后连接到原核表达的载体pGEX6p-2质粒上，然后转化到原核表达菌株BL21DE3中；

c)将步骤b)中的原核表达菌株BL21DE3在37℃培养至OD600为0.6左右时，加入异丙基硫代半乳糖苷使其在培养液中的浓度为0.5mM，然后摇菌培养收集菌体，用磷酸盐缓冲液重悬细胞，超声破碎，离心后取上清液与Glutathione sepharose 4 FastFlow琼脂糖介质结合，4摄氏度孵育3个小时后，用30ml磷酸盐缓冲液清洗介质，再用10mM还原型谷胱甘肽洗脱，得到重组p53蛋白。