一种反硝化菌的保藏方法与流程_2

1.一种反硝化菌的保藏方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）将反硝化菌培养至稳定生长期，并收集菌体；

（2）配制保藏营养液，主要包括碳源、氮源和微量物质；

（3）步骤（1）反硝化菌与步骤（2）保藏营养液混合，加入适量保藏助剂，所述保藏助剂包括糖脂、糖醇和有机酸盐；

（4）低温冷冻保藏。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（3）所述保藏助剂中，以重量份计，糖脂含量为0.5-15重量份，糖醇含量为0.5-15重量份，有机酸盐为5-30重量份。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：保藏助剂中，所述糖脂为海藻糖脂、槐糖脂和鼠李糖脂中的至少一种；糖醇选自甘露醇、木糖醇、乳糖醇、核糖醇、半乳糖醇、肌醇和赤藓醇中的一种或几种；有机酸盐为乙酸钠、琥珀酸钠和柠檬酸钠中的一种或几种。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：保藏助剂中，糖脂为内酯型槐糖脂，糖醇为乳糖醇，有机酸盐为乙酸钠。

5.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：保藏助剂的使用量按照保藏体系中保藏剂浓度为0.01-3.0mg/L进行投加。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）的反硝化菌培养采用SBR法，培养液采用人工配制的培养液或者实际废水，培养液所含氮源为硝酸盐氮和/或亚硝酸盐氮，氮源浓度为100～800mg/L；所含碳源为甘油或甲醇，浓度以COD计为1000～5000mg/L，还含有少量Fe²⁺、Mg²⁺、K⁺、Ca²⁺以及磷酸根离子。

7.根据权利要求1或6所述的方法，其特征在于：步骤（1）反硝化菌培养条件为：温度15～40℃，pH为7.0～8.5，溶解氧浓度低于1mg/L，搅拌转速10～50rpm，培养3～10天至稳定生长期。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（2）保藏营养液中碳源为甘油，氮源为硝酸盐氮和/或亚硝酸盐氮，硝酸盐为NaNO₃和/或KNO₃，亚硝酸盐为NaNO₂，微量物质为FeSO₄、KH₂PO₄、MgCl₂和CaCl₂。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：步骤（3）反硝化菌与保藏营养液混合物中，甘油浓度以COD 计为0.5～3.0g/L，NO₃^--N和/或NO₂^--N浓度为 0.2～0.8g/L，Fe²⁺浓度为0.01～0.06g/L，K⁺浓度为0.05～0.5g/L，Ca²⁺浓度为0.01 ～0.1g/L，Mg²⁺浓度为0.05～0.5g/L。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（4）低温冷冻温度为-10℃～-70℃。