一种树脂再生提高柱效纯化尿激酶的方法与流程

文档序号:12097272阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种纯化尿激酶的方法,该方法包括:将尿激酶粗品通过吸附柱层析、超滤液沉淀、沉淀物冻干步骤进行纯化,所得纯化后的尿激酶的总收率提高到75%以上,总效价不低于50000iu/mg,柱效提升约55%。

2.如权利要求1所述的方法,其特征在于:所述尿激酶粗品是通过以男性尿液为原料,将原料依次经过甲壳质吸附、氨水洗脱、硫酸铵盐析制备得到的。

3.如权利要求1或2所述的方法,其特征在于所述工序包括如下步骤:

(1)用洗脱液A溶解尿激酶粗品,搅拌、离心,留取离心液,所述洗脱液A为0.01-0.4mol/L的醋酸盐缓冲液;

(2)用洗脱液B平衡经特异性处理再生的吸附柱,将上述离心液上柱,洗脱液B为0.01-0.55mol/L醋酸钠和0.1-5.5mol/L NaCl的缓冲液;

(3)用洗脱液B洗脱吸附柱,收集洗脱液;

(4)用洗脱液C平衡亲和层析柱,将超滤液上柱,洗脱液C为0.01-0.55mol/L甘氨酸和0.1-5.5mol/L NaCl的缓冲液;

(5)上样结束后,用洗脱液C洗脱,收集洗脱液;

(6)柱中的亲和树脂经洗脱液C 洗脱后,用洗脱液 D洗涤去除吸附在上面的杂质,密封待用,洗脱液D为0.01-0.3mol/L盐酸和0.1-5.5mol/L NaCl的缓冲液;

(7)将洗脱液经超滤膜,加入磷酸盐缓冲液反复超滤,得超滤液;

(8)超滤液中加入乙醇沉淀,离心,固体再用无水乙醇脱水,离心,弃去上清液,留取沉淀物;

(9)将沉淀物冻干,即得尿激酶。

4.如权利要求3所述的方法,其特征在于,所述磷酸盐缓冲液的浓度为0.01-0.55mol/L。

5.如权利要求3所述的方法,其特征在于,所述吸附柱为阴离子交换柱。

6.如权利要求5所述的方法,其特征在于,所述阴离子交换柱包括:强阴离子交换柱Q-Sephadex A-25,Q-Sephadex A-50,Q-Sephadex C-25,Q-Sephadex C-50;弱阴离子交换柱DEAE-Cellulose DE-22,DEAE-Cellulose DE-23,DEAE-Cellulose DE-51,DEAE-Cellulose DE-52,DEAE-Cellulose DE-53。

7.如权利要求3所述的方法,其特征在于,所述的树脂再生法即一定次序的水洗、酸洗、碱洗处理,提高树脂柱的效率。

8.如权利要求3所述的方法,其特征在于:所述亲和层析柱包括:CM-Sephadex A-25,CM-Sephadex A-50,CM-Sephadex C-25,CM-Sephadex C-50,SP-Sepharose 2B,SP-Sepharose 4B,SP-Sepharose 6B,SP-Sepharose CL-2B,SP-Sepharose CL-4B,SP-Sepharose CL-6B。

9.如权利要求1或2所述的方法,其特征在于:所述超滤液沉淀步骤包括:超滤液中加入乙醇沉淀。

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