一种用于检测羊奶粉中牛奶粉掺假比例的特征肽组合及方法与流程

文档序号:12399332阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种用于检测羊奶粉中牛奶粉掺假比例的特征肽组合,其特征在于,包括牛奶特征肽和羊奶特征肽,其中牛奶特征肽氨基酸序列为LSFNPTQLEEQCHI,羊奶特征肽氨基酸序列为LAFNPTQLEGQCHV。

2.一种用于检测羊奶粉中牛奶粉掺假比例的内标特征肽组合,其特征在于,包括内标牛奶特征肽和内标羊奶特征肽,所述内标牛奶特征肽的氨基酸序列为LSFNPTQL*EEQCHI*,内标羊奶特征肽的氨基酸序列为LAFNPTQL*EGQCHV*,其中L*、I*和V*为碳氮全同位素标记的氨基酸残基。

3.一种检测羊奶粉中牛奶粉掺假比例的方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1)向待检测样品中加入内标羊奶特征肽和内标牛奶特征肽;

(2)将添加内标特征肽的待检测样品经蛋白变性处理后,使用胰蛋白酶酶解;

(3)酶解产物用高效液相色谱-质谱联用技术进行检测;

(4)计算待检测样品中如权利要求1所述的羊奶特征肽和牛奶特征肽与对应的内标特征肽的峰面积比;

(5)将所述峰面积比代入标准曲线中,计算得到其中羊奶比例和牛奶比例,

所述内标羊奶特征肽和内标牛奶特征肽分别为权利要求1中所述羊奶特征肽和牛奶特征肽经同位素标记所得。

4.如权利要求3所述的方法,其特征在于,所述内标牛奶特征肽的氨基酸序列为LSFNPTQL*EEQCHI*,内标羊奶特征肽的氨基酸序列为LAFNPTQL*EGQCHV*,其中L*、I*和V*为碳氮全同位素标记的氨基酸残基。

5.如权利要求3或4所述的方法,其特征在于,所述标准曲线由以下方法获得:

将标准羊奶粉与标准牛奶粉按不同比例混合获得一系列标准品,重复权利要求3的步骤(1)~(4),计算得到各个标准品中内标羊奶特征肽和牛奶特征肽与对应的内标特征肽的峰面积比,最后绘制得到标准曲线。

6.如权利要求3或4所述的方法,其特征在于,所述内标羊奶特征肽和内标牛奶特征肽的添加比例分别为8~12μmol/L。

7.如权利要求6所述的方法,其特征在于,所述内标羊奶特征肽和内标牛奶特征肽按质量比1∶1进行添加。

8.如权利要求3或4所述的方法,其特征在于,使用DTT进行蛋白变性。

9.如权利要求3或4所述的方法,其特征在于,高效液相色谱的条件为:

色谱柱:Acquity BEH 300 C18柱,1.7μm,2.1×100mm;柱温:40℃;进样体积:10μL;流动相A:0.1%甲酸/水;流动相B:0.1%甲酸/乙腈;流速:0.3mL/min。

10.如权利要求3或4所述的方法,其特征在于,质谱的条件为:

电喷雾离子源电离模式:ESI+,毛细管电压:3.5kv,锥孔电压:35kv,脱溶剂温度:500℃,脱溶剂气流量:900L/min,锥孔反吹气流量:30L/hr,碰撞室压力:3.0×10-3Mbar;低端分辨率1:2.5V,高端分辨率1:15.0V,离子能量1:0.5;低端分辨率2:2.8V,高端分辨率2:15.0V,离子能量2:1.0;离子源温度:150℃,提取器电压:3.0V,入口透镜电压:0.5V,出口电压:0.5V,碰撞梯度:1.0。

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