1.一株出芽短梗霉alb1基因敲除突变株,其特征在于,是将出芽短梗霉菌株中的alb1基因的全部或部分编码基因敲除,替换为潮霉素B抗性基因盒;
优选的,是将alb1基因从第1位至1911位之间的编码基因敲除,替换为潮霉素B抗性基因盒。
2.如权利要求1所述的出芽短梗霉alb1基因敲除突变株,其特征在于,所述潮霉素B抗性基因盒包含:出芽短梗霉转录延长因子启动子PTEF和潮霉素B抗性基因HygR;
所述出芽短梗霉转录延长因子启动子PTEF的序列如序列表中SEQ ID NO.2所示;
所述潮霉素B抗性基因序列hygR序列如序列表中SEQ ID NO.3所示。
3.如权利要求1或2所述的出芽短梗霉alb1基因敲除突变株,其特征在于,所述出芽短梗霉菌株为菌株As3.3984。
4.如权利要求3所述的出芽短梗霉alb1基因敲除突变株,已于2016年6月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,简称CGMCC,地址为:北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研究所,菌种保藏号为CGMCC NO.12509。
5.权利要求1-4任一项所述的出芽短梗霉alb1基因敲除突变株的构建方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)合成含alb1左同源臂-潮霉素B抗性基因盒-alb1右同源臂的重组片段,重组片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示;
(2)将步骤(1)的重组片段连接到pUC18质粒上的EcoRI位点,得到alb1基因敲除质粒;
(3)将alb1基因敲除质粒转化到出芽短梗霉感受态细胞中,通过潮霉素B抗性筛选得到抗性菌株;对抗性菌株进行鉴定,筛选得到敲除alb1基因的突变株。
6.如权利要求5所述的构建方法,其特征在于,步骤(3)中,敲除alb1基因的突变株的筛选方法为:根据SEQ ID NO.4序列合成可以扩增潮霉素B抗性基因的引物hyg-1和hyg-2,如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示;根据出芽短梗霉As3.3984基因组中alb1左同源臂左侧序列设计引物out-1,如SEQ ID NO.7所示,根据alb1右同源臂右侧序列的反向互补序列设计引物out-2,如SEQ ID NO.8所示。用hyg-1/hyg-2和out1-1/out-2两对引物通过PCR的方法对抗性菌株进行鉴定。
7.权利要求1-4任一项所述的出芽短梗霉alb1基因敲除突变株在制备微生物多糖中的应用。
8.一种制备微生物多糖的方法,其特征在于,包括如下步骤:在多糖发酵培养基中发酵培养上述的出芽短梗霉alb1基因敲除突变株,发酵液离心,收集上清液,向上清液中加入工业乙醇沉淀多糖,离心,收集沉淀,干燥,纯化,即得微生物多糖。
9.如权利要求8所述的方法,其特征在于,所述多糖发酵培养基的组成为:蔗糖100.0g/L,酵母膏2.0g/L,NaCl 1.0g/L,MgSO4.7H2O 0.2g/L,K2HPO4 5.0g/L,(NH4)2SO4 0.6g/L,pH6.5。
10.如权利要求8所述的方法,其特征在于,发酵培养的条件为:28℃震荡培养72小时。