本发明涉及一种姬松茸原生质体的制备方法。
背景技术：
为了提高食用菌产量和产品质量，以及抗病、抗虫等抗逆性能，食用菌的育种越来越受到重视。然而由于食用菌的有性繁殖比较复杂，给杂交育种带来困难，目前食用菌的育种工作多数是选种和驯化。近年来生物技术发展迅速，操作方法也日趋完善，在遗传育种学上引起了广泛的重视，通过原生质体培养为诱导突变体和远缘杂交开辟了一条新的途径。一般来说食用菌菌种保藏或扩大增殖都是利用菌丝体来进行，因此菌丝体是最容易取得的实验材料。当然子实体和有性繁殖中的担孢子，以及无性繁殖中的厚垣孢子、节孢子、粉孢子也都可以作为游离原生质体的材料。但要取得一定数量则不如前者方便，脱壁也比较困难。因此绝大多数都是用菌丝体作为游离原生质体的材料来源。在食用菌方面，近年来也开始进行了原生质体分离、培养和融合的研究，涉及的菇种有：香菇、金针菇、灵芝、糙皮侧耳、羊肚菌、榆黄蘑、草菇、蘑菇等。不同菌丝体状态、不同菌丝体培养基、不同渗透压稳定剂、不同作用时间等因素对原生质体的制备与分离效果影响不同。
技术实现要素：
本发明提出一种姬松茸原生质体的制备方法。
一种姬松茸原生质体的制备方法，包括以下步骤：
（1）接种黄豆粒大小的菌块于固体培养基平板中央，培养4-6d的菌丝体用于原生质体制备；
（2）于250ml烧瓶中装入培养基，转接于斜面菌种，于250摄氏度，160r/min环境中培养8-10h，取发酵液，经过无菌过滤得菌丝体备用；
（3）将菌丝体用渗透压稳定剂洗涤，1000r/min的速度离心10min，重复洗涤两次，用酶液在20-50摄氏度环境下作用2-5h；然后用无菌脱脂棉过滤，将滤液离心后，去除上清液后即得。
优选地，所述步骤（1）的菌丝培养时间为5d。
优选地，所述步骤（2）离心速率为160r/min。
优选地，所述步骤（3）离心速率为1000r/min。
优选地，在30摄氏度环境下作用4h。
本发明所述方法制备的姬松茸原生质体，制备方法简单，成品率高，可工业化生产，实用性强。
具体实施方式
实施例1。
一种姬松茸原生质体的制备方法，包括以下步骤：
（1）接种黄豆粒大小的菌块于固体培养基平板中央，培养4-6d的菌丝体用于原生质体制备；
（2）于250ml烧瓶中装入培养基，转接于斜面菌种，于250摄氏度，160r/min环境中培养8-10h，取发酵液，经过无菌过滤得菌丝体备用；
（3）将菌丝体用渗透压稳定剂洗涤，1000r/min的速度离心10min，重复洗涤两次，用酶液在20-50摄氏度环境下作用2-5h；然后用无菌脱脂棉过滤，将滤液离心后，去除上清液后即得。
实施例2。
一种姬松茸原生质体的制备方法，包括以下步骤：
（1）接种黄豆粒大小的菌块于固体培养基平板中央，培养4-6d的菌丝体用于原生质体制备；
（2）于250ml烧瓶中装入培养基，转接于斜面菌种，于250摄氏度，160r/min环境中培养8-10h，取发酵液，经过无菌过滤得菌丝体备用；
（3）将菌丝体用渗透压稳定剂洗涤，1000r/min的速度离心10min，重复洗涤两次，用酶液在20-50摄氏度环境下作用2-5h；然后用无菌脱脂棉过滤，将滤液离心后，去除上清液后即得；所述步骤（1）的菌丝培养时间为5d。
实施例3。
一种姬松茸原生质体的制备方法，包括以下步骤：
（1）接种黄豆粒大小的菌块于固体培养基平板中央，培养4-6d的菌丝体用于原生质体制备；
（2）于250ml烧瓶中装入培养基，转接于斜面菌种，于250摄氏度，160r/min环境中培养8-10h，取发酵液，经过无菌过滤得菌丝体备用；
（3）将菌丝体用渗透压稳定剂洗涤，1000r/min的速度离心10min，重复洗涤两次，用酶液在20-50摄氏度环境下作用2-5h；然后用无菌脱脂棉过滤，将滤液离心后，去除上清液后即得；所述步骤（1）的菌丝培养时间为5d；所述步骤（2）离心速率为160r/min。
实施例4。
一种姬松茸原生质体的制备方法，包括以下步骤：
（1）接种黄豆粒大小的菌块于固体培养基平板中央，培养4-6d的菌丝体用于原生质体制备；
（2）于250ml烧瓶中装入培养基，转接于斜面菌种，于250摄氏度，160r/min环境中培养8-10h，取发酵液，经过无菌过滤得菌丝体备用；
（3）将菌丝体用渗透压稳定剂洗涤，1000r/min的速度离心10min，重复洗涤两次，用酶液在20-50摄氏度环境下作用2-5h；然后用无菌脱脂棉过滤，将滤液离心后，去除上清液后即得。
所述步骤（1）的菌丝培养时间为5d；所述步骤（2）离心速率为160r/min；所述步骤（3）离心速率为1000r/min。
实施例5。
一种姬松茸原生质体的制备方法，包括以下步骤：
（1）接种黄豆粒大小的菌块于固体培养基平板中央，培养4-6d的菌丝体用于原生质体制备；
（2）于250ml烧瓶中装入培养基，转接于斜面菌种，于250摄氏度，160r/min环境中培养8-10h，取发酵液，经过无菌过滤得菌丝体备用；
（3）将菌丝体用渗透压稳定剂洗涤，1000r/min的速度离心10min，重复洗涤两次，用酶液在20-50摄氏度环境下作用2-5h；然后用无菌脱脂棉过滤，将滤液离心后，去除上清液后即得。
所述步骤（1）的菌丝培养时间为5d；步骤（2）离心速率为160r/min；步骤（3）离心速率为1000r/min；在30摄氏度环境下作用4h。