本发明属于领域生物技术领域，具体涉及一种乳酸菌多肽复合物、其制备方法及应用。
背景技术：
哺乳动物和禽类的生长发育过程当中，微循环系统发挥了重要作用。一方面，氧气和营养成分通过毛细血管运送到组织深部，另一方面，组织深部在生命活动中积累的废物通过微循环的毛细血管系统回流，从而维持了个组织的新陈代谢。
在畜牧养殖业，由于生长指标的快速提升，组织对养分的需求以及局部废物的积累都大大增加，对微循环系统的功能要求也越来越来越高。肉鸡腹水综合症就是因为肉鸡生长速度过快，而循环系统、呼吸系统功能相对低下导致的肉鸡猝死性疾病。
因此改善畜禽的微循环系统，促进毛细血管的发育增生，促进微循环功能对提高畜禽的存活率和生长指标有重要意义。
技术实现要素：
为了解决现有技术存在的上述问题，本发明提供了一种乳酸菌多肽复合物、其制备方法及应用。利用所述制备方法得到的乳酸菌多肽复合物，能够作为饲料添加剂使用。
本发明所采用的技术方案为：一种乳酸菌多肽复合物的制备方法，包括以下步骤：
A、取乳酸菌用MRS培养液在30-39℃下培养8-16小时，得乳酸菌发酵液Ⅰ；
B、将乳酸菌发酵液Ⅰ接种于MRS培养液中，调节初始pH值为4.5-8.5，在30-39℃下培养48-72小时；得乳酸菌发酵液Ⅱ；
C、使用NaCl溶液将乳酸菌发酵液Ⅱ重悬成20-30％的混合物，加热至90-100℃，并保持5-10分钟，然后破碎乳酸菌菌体，释放内容物，并在3500-5000rpm的转速下离心10-15分钟，离心后取上清液Ⅰ；
D、在步骤C得到的上清液Ⅰ中加入复合蛋白酶进行酶解，在35-45℃的温度下酶解8-15小时，酶解后将体系加热至90-100℃并保持5-10分钟，取上清液Ⅱ；
E、分离回收步骤D得到的上清液Ⅱ中相对分子质量小于5000的物质，并冷冻干燥，即可得到乳酸菌多肽复合物。
所述乳酸菌多肽复合物的形态为冻干粉，便于保存和使用。
为进一步优化乳酸菌的培养方法，优选的技术方案是，步骤A中，取乳酸菌，活化后用MRS培养液在30-39℃下，180rpm转速下摇床培养8-16小时，得乳酸菌发酵液Ⅰ。
本发明中，所述MRS培养液的组分为：碳源1-2.5％，氮源1-2.5％，磷酸氢二钾0.1-0.8％，牛肉膏0.5-1％，酵母粉0.5-1％，柠檬氢二胺0.2％，乙酸钠0.5％，硫酸镁0.058％，硫酸锰0.025％，余量为蒸馏水。
步骤B中，将乳酸菌发酵液Ⅰ的接种量为1-5％。步骤C中，NaCl溶液的浓度为2％。
为了得到相对分子质量小于5000的物质，本发明采取以下三种方案中的一种：
步骤E中，使用凝胶层析柱分离回收步骤D得到的上清液Ⅱ中相对分子质量小于5000的物质。
或者，步骤E中，使用截留分子量为5000的透析袋对步骤D得到的上清液Ⅱ进行分离回收。
再或者，步骤E中，使用截留5000分子量的醋酸纤维素膜对步骤D得到的上清液Ⅱ进行超滤浓缩。
以上三种方案均有操作简便，效果可靠的优点。
本发明还提供了一种乳酸菌多肽复合物，所述乳酸菌多肽复合物由上述制备方法制备而成。
本发明还公开了所述乳酸菌多肽复合物在制备改善禽畜微循环药物或作为饲料添加剂中的应用。
当然，所述乳酸菌多肽复合物可以为现有技术中任何可接受的剂型，包括但不限于粉剂、颗粒和液体剂型。
根据本发明的实施例4，所述乳酸菌多肽复合物能够改善禽畜的微循环。微循环不良会导致禽畜出现缺氧或局部缺血等症状，进而造成死亡率升高、生长速度放缓、免疫力低下现象、严重肢体缺血和外周动脉疾病，并且会影响禽畜伤口愈合。
本发明提供了一种乳酸菌多肽复合物、其制备方法和应用。利用所述制备方法得到的乳酸菌多肽复合物，能够改善禽畜的微循环，改善禽畜的缺氧或局部缺血等症状，进而降低禽畜的外周动脉疾病和死亡率，提高生长速率和免疫力，促进禽畜伤口愈合。
附图说明
图1为本发明中实施例4中实验组和空白对照组的血液灌流率检测结果图。
具体实施方式
下面结合实施例，更具体地说明本发明的内容。应当理解，本发明的实施并不局限于下面的实施例，对本发明所做的任何形式上的变通和/或改变都将落入本发明保护范围。
在本发明中，若非特指，所有的份、百分比均为重量单位，所有的设备和原料等均可从市场购得或是本行业常用的。下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。
实施例1
一种乳酸菌多肽复合物的制备方法，包括以下步骤：
A、取乳酸菌，活化后用MRS培养液在30℃下，180rpm转速下摇床培养16小时，得乳酸菌发酵液Ⅰ；
B、将乳酸菌发酵液Ⅰ以1％的接种量接种于MRS培养液中，调节初始pH值为8.5，在30℃下培养72小时；得乳酸菌发酵液Ⅱ；
C、使用质量分数为2％的NaCl溶液将乳酸菌发酵液Ⅱ重悬成20％的混合物，加热至100℃，并保持5分钟，然后破碎乳酸菌菌体，释放内容物，并在5000rpm的转速下离心10分钟，离心后取上清液Ⅰ；
D、在步骤C得到的上清液Ⅰ中加入复合蛋白酶进行酶解，在45℃的温度下酶解8小时，酶解后将体系加热至100℃并保持5分钟，取上清液Ⅱ；
E、使用凝胶层析柱分离回收步骤D得到的上清液Ⅱ中相对分子质量小于5000的物质，并冷冻干燥，即可得到乳酸菌多肽复合物。
本实施例中，所述MRS培养液的组分为：碳源1％，氮源2.5％，磷酸氢二钾0.1％，牛肉膏1％，酵母粉0.5％，柠檬氢二胺0.2％，乙酸钠0.5％，硫酸镁0.058％，硫酸锰0.025％，余量为蒸馏水。
实施例2
一种乳酸菌多肽复合物的制备方法，包括以下步骤：
A、取乳酸菌，活化后用MRS培养液在39℃下，180rpm转速下摇床培养8小时，得乳酸菌发酵液Ⅰ；
B、将乳酸菌发酵液Ⅰ以5％的接种量接种于MRS培养液中，调节初始pH值为4.5，在39℃下培养48小时；得乳酸菌发酵液Ⅱ；
C、使用质量分数为2％的NaCl溶液将乳酸菌发酵液Ⅱ重悬成30％的混合物，加热至90℃，并保持10分钟，然后破碎乳酸菌菌体，释放内容物，并在3500rpm的转速下离心15分钟，离心后取上清液Ⅰ；
D、在步骤C得到的上清液Ⅰ中加入复合蛋白酶进行酶解，在35℃的温度下酶解15小时，酶解后将体系加热至90℃并保持10分钟，取上清液Ⅱ；
E、使用截留分子量为5000的透析袋对步骤D得到的上清液Ⅱ中相对分子质量小于5000的物质进行分离回收，并冷冻干燥，即可得到乳酸菌多肽复合物。
本实施例中，所述MRS培养液的组分为：碳源2.5％，氮源1％，磷酸氢二钾0.8％，牛肉膏0.5％，酵母粉1％，柠檬氢二胺0.2％，乙酸钠0.5％，硫酸镁0.058％，硫酸锰0.025％，余量为蒸馏水。
实施例3
一种乳酸菌多肽复合物的制备方法，包括以下步骤：
A、取乳酸菌，活化后用MRS培养液在35℃下，180rpm转速下摇床培养12小时，得乳酸菌发酵液Ⅰ；
B、将乳酸菌发酵液Ⅰ以3％的接种量接种于MRS培养液中，调节初始pH值为6.5，在35℃下培养60小时；得乳酸菌发酵液Ⅱ；
C、使用质量分数为2％的NaCl溶液将乳酸菌发酵液Ⅱ重悬成25％的混合物，加热至95℃，并保持7分钟，然后破碎乳酸菌菌体，释放内容物，并在4200rpm的转速下离心12分钟，离心后取上清液Ⅰ；
D、在步骤C得到的上清液Ⅰ中加入复合蛋白酶进行酶解，在40℃的温度下酶解11小时，酶解后将体系加热至95℃并保持5-10分钟，取上清液Ⅱ；
E、使用截留5000分子量的醋酸纤维素膜对步骤D得到的上清液Ⅱ中相对分子质量小于5000的物质进行超滤浓缩，并冷冻干燥，即可得到乳酸菌多肽复合物。
本实施例中，所述MRS培养液的组分为：碳源1.5％，氮源1.5％，磷酸氢二钾0.5％，牛肉膏0.75％，酵母粉0.75％，柠檬氢二胺0.2％，乙酸钠0.5％，硫酸镁0.058％，硫酸锰0.025％，余量为蒸馏水。
实施例4
本实施例为所述乳酸菌多肽复合物的应用。
将实施例3制得的乳酸菌多肽复合物按体积比1：1000与饮用水混合均匀，代替肉鸡日常饮水，作为实验组，并给另一组肉鸡喂食普通饮用水作为空白对照。48天后，使用激光多普勒灌注成像仪检测肉鸡左腿上部血液灌流率，结果如图1所示。从图中能够看出，在日常饮水中添加所述乳酸菌多肽复合物后，肉鸡的体内的血液灌流率有明显提升，说明所述乳酸菌多肽复合物能够改善畜禽的微循环系统。
最后所应说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，所应理解的是，以上所述仅为本发明的具体实施方式而已，并不用于限定本发明的保护范围，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。