一种基于qPCR法检测白细胞端粒长度的方法与流程

文档序号:12167891阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种基于qPCR法检测白细胞端粒长度的方法,其特征在于,包括如下步骤:

1)提取不同组织的基因组DNA,稀释DNA样本浓度至5ng/ul,取各组织样本5ul合并混合后制成全基因组DNA模板;

2)进行第一次实时定量PCR检测,检测端粒重复序列的端粒引物为:

SEQ ID NO.1:CGGTTTGTTTGGGTTTGGGTTTGGGTTTGGGTTTGGGTT;

SEQ ID NO.2:GGCTTGCCTTACCCTTACCCTTACCCTTACCCTTACCCT;

3)进行第二次实时定量PCR检测,转录RNase P酶的单拷贝参照RNase P基因;

4)计算相对端粒长度T/S。

2.根据权利要求1所述的一种基于qPCR法检测白细胞端粒长度的方法,其特征在于:所述步骤1)的基因组DNA提取自血液、组织、唾液、精子或卵子的组织细胞。

3.根据权利要求1所述的一种基于qPCR法检测白细胞端粒长度的方法,其特征在于:所述步骤1)的提取方法包括酚/氯仿法、自动提取仪提取法或过柱离心试剂盒法。

4.根据权利要求1所述的一种基于qPCR法检测白细胞端粒长度的方法,其特征在于:所述步骤2)的第一次实时定量PCR检测和步骤3)的第二次实时定量PCR检测采用的染料均为SYBR Green I。

5.根据权利要求1所述的一种基于qPCR法检测白细胞端粒长度的方法,其特征在于:所述步骤2)的第一次实时定量PCR检测和步骤3)的第二次实时定量PCR检测均为检测样本设置三个平行孔,并设置模板DNA的五个梯度浓度,比例为1、0.5、0.25、1.25、0.625,每个梯度设置三个平行孔,制作标准曲线。

6.根据权利要求1所述的一种基于qPCR法检测白细胞端粒长度的方法,其特征在于:所述步骤2)的端粒重复序列检测的PCR反应体系为一定配比的SuperReal Premix Plus,SEQ ID NO.1,SEQ ID NO.2,DNA混合物;总反应体积为10ul;反应条件为:98℃,10min一个循环;95℃30s,60℃1min,共45个循环。

7.根据权利要求1所述的一种基于qPCR法检测白细胞端粒长度的方法,其特征在于:所述步骤3)的转录RNase P酶的单拷贝参照RNase P基因的PCR反应体系为一定配比的Taqman Expression Master Mix,RNase P,DNA混合物,总反应体积为10ul;反应条件为:98℃,10min一个循环;95℃30s,60℃1min,共45个循环。

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