一种玉米赤霉醇完全抗原的制备方法与流程

文档序号:12399383阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种玉米赤霉醇完全抗原的制备方法,其特征在于包括以下步骤:

(1)称取2mgZER溶于3mL丙酮,加过量碳酸钾10mg和1微升4-溴丁酸乙酯,在60℃

下回流24h;

(2)反应完成后,室温下避光静置2d,抽滤去除沉淀,旋转蒸发干滤液,用2mLΦ=20%的NaOH-甲醇溶液80摄氏度环境下碱解1h,旋转蒸发干溶液;

(3)用2mL双蒸水溶解,2mol/L的硫酸调pH3.5,再用2~3mL乙酸乙酯反复萃取5次,弃去水相,用饱和食盐水过滤1次后加无水硫酸钠干燥,抽滤后将溶液旋转蒸发干,收集黄色油状物即为改造好的半抗原,称为ZERO;

(4)称取2mgZERO溶于1mL二氧六环,加入1.2扯L三丁胺,4℃冷却15min后加入0.5微升氯甲酸异丁酯,4℃下继续搅拌20min;反应结束后将混合液缓慢滴加入含6mgBSA的溶液中,加入过程在20min内完成;

(5)反应1h后用0.5mol/LNaOH溶液将pH调至8.5后继续反应2h;

(6)反应产物用2L蒸馏水透析3d,每天换透析液6~8次;透析后所得溶液即为免疫抗原ZERBSA;

(7)取2mg改造好的ZER半抗原溶于1mLN,N-二甲基甲酰胺(DMF),加入2mgEDC和1.2mgNHS,室温下搅拌反应2h即为A液;

(8)将3mgOVA提前1d用0.5mL的1.3g/L碳酸氢钠溶液溶解,4℃冷藏即为B液;

(9)将A溶液缓慢滴加至B液中,室温搅拌2h后把合成产物在0.01mol/L的PBS溶液中透析3d,每天换透析液6~8次,透析后所得溶液即为免疫抗原ZER—OVA。

2.如权利要求1所述一种玉米赤霉醇完全抗原的制备方法,其特征在于所述步骤(4)6mgBSA溶解在500微升CBS和500微升二氧六环的混合溶液中。

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