鉴定埃及伊蚊抗药性状的成套试剂及其应用的制作方法

文档序号:12412825阅读:来源:国知局

技术特征:

1.鉴定或辅助鉴定埃及伊蚊抗药性状的成套试剂,由名称为分别为A和B的引物组组成;

所述A包括CD2和CD3,所述CD2为SEQ ID No.2所示的单链DNA,所述CD3为SEQ ID No.3所示的单链DNA;所述B包括所述CD2和CD4,所述CD4为SEQ ID No.4所示的单链DNA。

2.根据权利要求1所述的成套试剂,其特征在于:所述A由所述CD2、所述CD3和CD1组成,所述CD1为SEQ ID No.1所示的单链DNA;所述B由所述CD2、所述CD4和所述CD1组成。

3.鉴定或辅助鉴定埃及伊蚊抗药性状的引物组,为权利要求1或2所述B或所述A。

4.鉴定或辅助鉴定埃及伊蚊抗药性状的系统,由X1和X2组成;所述X1为权利要求1或2所述成套试剂、所述A或所述B,所述X2为进行PCR扩增所需的试剂和/或仪器。

5.鉴定或辅助鉴定埃及伊蚊抗药性状的方法,包括如下Ⅰ或Ⅱ:

Ⅰ、如下J和K:

J、以待测埃及伊蚊基因组DNA为模板,采用权利要求1或2中所述A和所述B分别进行PCR扩增得到A的PCR产物和B的PCR产物;

K、检测步骤J得到的PCR产物,按照K1)、K2)或K3)确定埃及伊蚊抗药性状:

K1)所述A的PCR产物在250-500bp间为一条带,所述B的PCR产物在250-500bp间无条带,所述待测埃及伊蚊不抗药或候选不抗药;所述A的PCR产物和所述B的PCR产物在250-500bp间均为一条带,所述待测埃及伊蚊抗药或候选抗药;所述A的PCR产物在250-500bp间无条带,所述B的PCR产物在250-500bp间为一条带,所述待测埃及伊蚊抗药或候选抗药;

K2)所述A的PCR产物为344bp的一条带或587bp和344bp的两条带,所述B的PCR产物无条带或为587bp的一条带,所述待测埃及伊蚊不抗药或候选不抗药;所述A的PCR产物和所述B的PCR产物均为344bp的一条带或587bp和344bp的两条带,所述待测埃及伊蚊抗药或候选抗药;所述A的PCR产物无条带或587bp的一条带,所述B的PCR产物为344bp的一条带或587bp和344bp的两条带,所述待测埃及伊蚊抗药或候选抗药;

K3)所述A的PCR产物为SEQ ID No.6和SEQ ID No.5所示的两个DNA片段或SEQ ID No.6所示的DNA片段,所述B的PCR产物为SEQ ID No.5所示的DNA片段或无DNA片段,所述待测埃及伊蚊不抗药或候选不抗药;所述A的PCR产物为SEQ ID No.6和SEQ ID No.5所示的两个DNA片段或SEQ ID No.6所示的DNA片段,所述B的PCR产物为SEQ ID No.7和SEQ ID No.5所示的两个DNA片段或SEQ ID No.7所示的DNA片段,所述待测埃及伊蚊抗药或候选抗药;所述A的PCR产物为SEQ ID No.5所示的DNA片段或无DNA片段,所述B的PCR产物为SEQ ID No.7和SEQ ID No.5所示的两个DNA片段或SEQ ID No.7所示的DNA片段,所述待测埃及伊蚊抗药或候选抗药;

Ⅱ、如下L和M:

L、以待测埃及伊蚊基因组DNA为模板,采用权利要求1或2中所述B进行PCR扩增得到B的PCR产物;

M、检测步骤L得到的PCR产物,按照M1)、M2)或M3)确定埃及伊蚊抗药性状:

M1)所述B的PCR产物在250-500bp间无条带,所述待测埃及伊蚊不抗药或候选不抗药;所述B的PCR产物在250-500bp间为一条带,所述待测埃及伊蚊抗药或候选抗药;

M2)所述B的PCR产物无条带或为587bp的一条带,所述待测埃及伊蚊不抗药或候选不抗药;所述B的PCR产物为344bp的一条带或587bp和344bp的两条带,所述待测埃及伊蚊抗药或候选抗药;

M3)所述B的PCR产物为SEQ ID No.5所示的DNA片段或无DNA片段,所述待测埃及伊蚊不抗药或候选不抗药;所述B的PCR产物为SEQ ID No.7和SEQ ID No.5所示的两个DNA片段或SEQ ID No.7所示的DNA片段,所述待测埃及伊蚊抗药或候选抗药。

6.下述H1或H2:

H1、权利要求1或2所述成套试剂、权利要求3所述引物组或权利要求4所述系统在制备鉴定或辅助鉴定埃及伊蚊抗药性状的试剂或试剂盒中的应用;

H2、权利要求1或2所述成套试剂、权利要求3所述引物组或权利要求4所述系统在鉴定或辅助鉴定埃及伊蚊抗药性状中的应用。

7.鉴定或辅助鉴定埃及伊蚊基因型的方法,所述基因型为RR基因型、RS基因型和SS基因型,所述方法包括如下O和P:

O、以待测埃及伊蚊基因组DNA为模板,采用权利要求1或2中所述A和所述B分别进行PCR扩增得到A的PCR产物和B的PCR产物;

P、检测步骤O得到的PCR产物,按照P1)、P2)或P3)确定埃及伊蚊基因型:

P1)所述A的PCR产物在250-500bp间为一条带,所述B的PCR产物在250-500bp间无条带,所述待测埃及伊蚊的基因型为SS基因型;所述A的PCR产物和所述B的PCR产物在250-500bp间均为一条带,所述待测埃及伊蚊的基因型为RS基因型;所述A的PCR产物在250-500bp间无条带,所述B的PCR产物在250-500bp间为一条带,所述待测埃及伊蚊的基因型为RR基因型;

P2)所述A的PCR产物为344bp的一条带或587bp和344bp的两条带,所述B的PCR产物无条带或为587bp的一条带,所述待测埃及伊蚊的基因型为SS基因型;所述A的PCR产物和所述B的PCR产物均为344bp的一条带或587bp和344bp的两条带,所述待测埃及伊蚊的基因型为RS基因型;所述A的PCR产物无条带或587bp的一条带,所述B的PCR产物为344bp的一条带或587bp和344bp的两条带,所述待测埃及伊蚊的基因型为RR基因型;

P3)所述A的PCR产物为SEQ ID No.6和SEQ ID No.5所示的两个DNA片段或SEQ ID No.6所示的DNA片段,所述B的PCR产物为SEQ ID No.5所示的DNA片段或无DNA片段,所述待测埃及伊蚊的基因型为SS基因型;所述A的PCR产物为SEQ ID No.6和SEQ ID No.5所示的两个DNA片段或SEQ ID No.6所示的DNA片段,所述B的PCR产物为SEQ ID No.7和SEQ ID No.5所示的两个DNA片段或SEQ ID No.7所示的DNA片段,所述待测埃及伊蚊的基因型为RS基因型;所述A的PCR产物为SEQ ID No.5所示的DNA片段或无DNA片段,所述B的PCR产物为SEQ ID No.7和SEQ ID No.5所示的两个DNA片段或SEQ ID No.7所示的DNA片段,所述待测埃及伊蚊的基因型为RR基因型。

8.权利要求7所述鉴定或辅助鉴定埃及伊蚊基因型的方法在鉴定或辅助鉴定埃及伊蚊抗药性状中的应用。

9.根据权利要求1或2所述成套试剂、权利要求3所述引物组、权利要求4所述系统、权利要求5或7所述方法或权利要求6或8所述应用,其特征在于:所述抗药为抗拟除虫菊酯。

10.权利要求1或2所述成套试剂的制备方法,包括1)或2):

1)将所述A和所述B单独包装;

2)将所述A和所述B的各单链DNA单独包装。

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