本发明涉及一种从羊小肠中提取肝素钠的方法，属于肝素钠制备技术领域。
背景技术：
肝素钠是广泛存在于动物器官(如：猪、牛的小肠粘膜、肝、胰脏及肺组织等)的一种葡萄胺聚糖，和大多数粘多糖一样在体内作为蛋白质结合的复合物存在，这种复合物的抗凝活性随着蛋白质的去除而增加。肝素纳及其衍生物药品是经典的抗凝、抗血栓药物，在临床上广泛用于治疗肾脏病患者的渗血，急性心肌梗塞症，防止血栓形成，脑血管疾病，皮肤病，清除肾病形成的尿毒以及配合治疗暴发性流脑败血症，肾炎等，同时，肝素钠在降血脂和免疫等方面也有较好的作用，而且随着对其逐渐深入了解，其医疗用途日益扩大，市场供不应求。
目前提取肝素钠的方法主要有三种，第一种高锰酸钾和过氧化氢两步氧化法存在二氧化锰吸食肝素，使肝素活性损失大，回收率低；过滤困难，生产周期长，色泽不好，质量差等缺点；第二种过氧化氢分次加入的二次氧化法工艺，因产品色泽较好，目前被普遍采用，但该工艺主要存在二次氧化氢处理对肝素结构造成破坏，难以得到较高效价的精品肝素产品；第三种酶解结合氧化法工艺其存在杂质比较多，纯度低。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题：针对目前提取肝素钠的氧化法和酶解等方法制备的肝素钠活性损失大，难以得到较高效价的肝素成品，且回收率低，纯度低的问题，提供了一种从羊小肠中利用发酵，曝气，煮沸，超滤膜浓缩干燥制备得肝素钠的方法，本发明制备的肝素钠其效价可达155～170u/mg，回收率达到97％以上。
为解决上述技术问题，本发明采用如下所述的技术方案是：
（1）取新鲜羊小肠，向其内部灌入清水，并用肠衣机挤压出小肠粘膜，将小肠粘膜置于粉碎机中粉碎成70～80目粘膜颗粒，再按固液质量比1:5，将厌氧池中被处理的生活污水与粘膜颗粒进行搅拌混合，直至均匀。
（2）待混合均匀后，向其加入质量分数为30％的氢氧化钠溶液调节其pH至8.5～9.0，并将调节后的混合浊液置于发酵罐中进行发酵处理，控制发酵温度为35～38℃，发酵3～4天。
（3）待发酵完成后，向发酵罐中充入氧气，充入量的为发酵罐容积的2/3，并在充氧的同时对发酵罐中的混合浊液进行搅拌，搅拌30～45min后，静置1～2h，收集发酵罐中上浮物，并用去离子水对其冲洗2～3次后，置于烘箱中烘干，得干燥上浮物。
（4）按固液质量比1:3，将干燥上浮物与草酰乙酸进行混合，置于水浴锅中进行加热直至煮沸，待煮沸后，对其进行保温1～2h，再静置冷却至室温。
（5）待上述静置冷却至室温后，向其中加入混合物质量10～15％的硫酸铵，搅拌至均匀后，进行超滤，控制混合物流速为5～6m/s，压力为0.5～1.0MPa，收集超滤液，所述的超滤膜截留分子量为1000～2000。
（6）将上述收集的超滤液经沉淀，脱水，干燥，粉碎即可制备得肝素钠。
本发明的应用方法：将上述制备的从羊小肠中提取的肝素钠按照配制，过滤，灌封，灭菌，包装等常规注射剂制备工艺制成供皮下注射的注射剂，来作为抗凝、抗血栓药物，其用量为成人每天一次30～40mg，经测试，治疗效果好抗凝血因子a的值为165～170IU/mg，抗凝血酶值为0.6～0.7IU/mg。
本发明与其他方法相比，有益技术效果是：
（1）本发明制备的肝素钠其效价可达155～170u/mg，回收率达到97％以上；
（2）本发明制备的肝素钠所需原材料成本，制备步骤简单。
具体实施方式
首先取新鲜羊小肠，向其内部灌入清水，并用肠衣机挤压出小肠粘膜，将小肠粘膜置于粉碎机中粉碎成70～80目粘膜颗粒，再按固液质量比1:5，将厌氧池中被处理的生活污水与粘膜颗粒进行搅拌混合，直至均匀，待混合均匀后，向其加入质量分数为30％的氢氧化钠溶液调节其pH至8.5～9.0，并将调节后的混合浊液置于发酵罐中进行发酵处理，控制发酵温度为35～38℃，发酵3～4天；待发酵完成后，向发酵罐中充入氧气，充入量的为发酵罐容积的2/3，并在充氧的同时对发酵罐中的混合浊液进行搅拌，搅拌30～45min后，静置1～2h，收集发酵罐中上浮物，并用去离子水对其冲洗2～3次后，置于烘箱中烘干，得干燥上浮物；按固液质量比1:3，将干燥上浮物与草酰乙酸进行混合，置于水浴锅中进行加热直至煮沸，待煮沸后，对其进行保温1～2h，再静置冷却至室温；待上述静置冷却至室温后，向其中加入混合物质量10～15％的硫酸铵，搅拌至均匀后，进行超滤，控制混合物流速为5～6m/s，压力为0.5～1.0MPa，收集超滤液，所述的超滤膜截留分子量为1000～2000；最后将上述收集的超滤液经沉淀，脱水，干燥，粉碎即可制备得肝素钠。
实例1
首先取新鲜羊小肠，向其内部灌入清水，并用肠衣机挤压出小肠粘膜，将小肠粘膜置于粉碎机中粉碎成80目粘膜颗粒，再按固液质量比1:5，将厌氧池中被处理的生活污水与粘膜颗粒进行搅拌混合，直至均匀，待混合均匀后，向其加入质量分数为30％的氢氧化钠溶液调节其pH至9.0，并将调节后的混合浊液置于发酵罐中进行发酵处理，控制发酵温度为38℃，发酵4天；待发酵完成后，向发酵罐中充入氧气，充入量的为发酵罐容积的2/3，并在充氧的同时对发酵罐中的混合浊液进行搅拌，搅拌45min后，静置2h，收集发酵罐中上浮物，并用去离子水对其冲洗3次后，置于烘箱中烘干，得干燥上浮物；按固液质量比1:3，将干燥上浮物与草酰乙酸进行混合，置于水浴锅中进行加热直至煮沸，待煮沸后，对其进行保温2h，再静置冷却至室温；待上述静置冷却至室温后，向其中加入混合物质量15％的硫酸铵，搅拌至均匀后，进行超滤，控制混合物流速为6m/s，压力为0.5～1.0MPa，收集超滤液，所述的超滤膜截留分子量为2000；最后将上述收集的超滤液经沉淀，脱水，干燥，粉碎即可制备得肝素钠。
将上述制备的从羊小肠中提取的肝素钠按照配制，过滤，灌封，灭菌，包装等常规注射剂制备工艺制成供皮下注射的注射剂，来作为抗凝、抗血栓药物，其用量为成人每天一次40mg，经测试，治疗效果好抗凝血因子a的值为170IU/mg，抗凝血酶值为0.7IU/mg。
实例2
首先取新鲜羊小肠，向其内部灌入清水，并用肠衣机挤压出小肠粘膜，将小肠粘膜置于粉碎机中粉碎成70目粘膜颗粒，再按固液质量比1:5，将厌氧池中被处理的生活污水与粘膜颗粒进行搅拌混合，直至均匀，待混合均匀后，向其加入质量分数为30％的氢氧化钠溶液调节其pH至8.5，并将调节后的混合浊液置于发酵罐中进行发酵处理，控制发酵温度为35℃，发酵3天；待发酵完成后，向发酵罐中充入氧气，充入量的为发酵罐容积的2/3，并在充氧的同时对发酵罐中的混合浊液进行搅拌，搅拌30min后，静置1h，收集发酵罐中上浮物，并用去离子水对其冲洗2次后，置于烘箱中烘干，得干燥上浮物；按固液质量比1:3，将干燥上浮物与草酰乙酸进行混合，置于水浴锅中进行加热直至煮沸，待煮沸后，对其进行保温1h，再静置冷却至室温；待上述静置冷却至室温后，向其中加入混合物质量10％的硫酸铵，搅拌至均匀后，进行超滤，控制混合物流速为5m/s，压力为0.5MPa，收集超滤液，所述的超滤膜截留分子量为1000；最后将上述收集的超滤液经沉淀，脱水，干燥，粉碎即可制备得肝素钠。
将上述制备的从羊小肠中提取的肝素钠按照配制，过滤，灌封，灭菌，包装等常规注射剂制备工艺制成供皮下注射的注射剂，来作为抗凝、抗血栓药物，其用量为成人每天一次30mg，经测试，治疗效果好抗凝血因子a的值为165IU/mg，抗凝血酶值为0.6IU/mg。
实例3
首先取新鲜羊小肠，向其内部灌入清水，并用肠衣机挤压出小肠粘膜，将小肠粘膜置于粉碎机中粉碎成75目粘膜颗粒，再按固液质量比1:5，将厌氧池中被处理的生活污水与粘膜颗粒进行搅拌混合，直至均匀，待混合均匀后，向其加入质量分数为30％的氢氧化钠溶液调节其pH至8.7，并将调节后的混合浊液置于发酵罐中进行发酵处理，控制发酵温度为37℃，发酵3天；待发酵完成后，向发酵罐中充入氧气，充入量的为发酵罐容积的2/3，并在充氧的同时对发酵罐中的混合浊液进行搅拌，搅拌40min后，静置2h，收集发酵罐中上浮物，并用去离子水对其冲洗2次后，置于烘箱中烘干，得干燥上浮物；按固液质量比1:3，将干燥上浮物与草酰乙酸进行混合，置于水浴锅中进行加热直至煮沸，待煮沸后，对其进行保温2h，再静置冷却至室温；待上述静置冷却至室温后，向其中加入混合物质量12％的硫酸铵，搅拌至均匀后，进行超滤，控制混合物流速为5m/s，压力为0.7MPa，收集超滤液，所述的超滤膜截留分子量为2000；最后将上述收集的超滤液经沉淀，脱水，干燥，粉碎即可制备得肝素钠。
将上述制备的从羊小肠中提取的肝素钠按照配制，过滤，灌封，灭菌，包装等常规注射剂制备工艺制成供皮下注射的注射剂，来作为抗凝、抗血栓药物，其用量为成人每天一次35mg，经测试，治疗效果好抗凝血因子a的值为167IU/mg，抗凝血酶值为0.65IU/mg。