一种鉴定木薯块根肉质颜色的分子标记方法与流程

文档序号:12412839阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种鉴定木薯块根肉质颜色的分子标记方法,其特征在于,由以下步骤组成:

(1)采用CTAB法从木薯叶片中提取木薯基因组DNA,根据PSY2基因的DNA序列,设计一对特异引物可以扩增包含SNP2位点的260bp核苷酸序列,然后用该特异引物对木薯基因组DNA进行PCR扩增,得到PCR扩增产物;

(2)利用限制性内切酶Alu I酶切步骤(1)得到的PCR扩增产物,获得酶切产物;

(3)使用浓度为3.0%琼脂糖凝胶对步骤(2)的酶切产物进行电泳分离,然后根据电泳结果进行木薯材料的块根肉质颜色判定,块根肉质颜色判定标准为:

若电泳后可见2条带——194bp和66bp,或电泳后见1条带——194bp,则该木薯材料的块根肉质颜色为黄色;

若电泳后可见2条带——172bp和66bp,或电泳后见1条带——172bp,则该木薯材料的块根肉质颜色为白色;

若是电泳后可见3条带——194bp、172bp和66bp,或电泳后见2条带——194bp和172bp,则该木薯材料的块根肉质颜色为浅黄色。

2.根据权利要求1所述的一种鉴定木薯块根肉质颜色的分子标记方法,其特征在于:在步骤(1),所述特异引物核苷酸序列为:

上游引物:5’GCTTCACACATAACGCCAACA-3’;

下游引物:5’TGGCTGAAACAGATGTTCAAAGG-3’。

3.根据权利要求1所述的一种鉴定木薯块根肉质颜色的分子标记方法,其特征在于:在步骤(1),所述PCR扩增的反应体系为25μL,由下列成分组成:10×PCR buffer反应缓冲液2.5μL、MgCl2(25mmol/L)2μL、dNTPs(2.5mmol/L)2μL、正向引物(10μmol/L)0.5μL、反向引物(10μmol/L)0.5μL、Taq(5 U/μL)0.5μL、模板DNA(50ng/μL)1μL。

4.根据权利要求3所述的一种鉴定木薯块根肉质颜色的分子标记方法,其特征在于:在步骤(1),所述PCR扩增的条件为:先在94℃下预变性3min,94℃变性30s,58℃退火30s,72℃延伸30s,进行35个循环,72℃延伸10 min,4℃下保存。

5.根据权利要求1所述的一种鉴定木薯块根肉质颜色的分子标记方法,其特征在于:在步骤(2),所述酶切体系为15μL,其中包含:PCR产物10μL、10×L buffer1.5μL、限制性内切酶AluI3.0U,其余为ddH2O。

6.根据权利要求1所述的一种鉴定木薯块根肉质颜色的分子标记方法,其特征在于:在步骤(3),所述电泳方法为:用3.0%琼脂糖凝胶电检测泳,缓冲液为0.5×TBE,上样量为15μL,在5V/cm恒压下电泳1.5h。

当前第2页1 2 3 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1