本发明属于植物抗病鉴定技术领域，具体涉及一种评价作物抗辣椒疫病的方法。
背景技术：
辣椒疫病是一种世界范围内普遍发生的毁灭性真菌病害，其首先于1918年在美国新墨西哥州发现，引起辣椒疫病的辣椒疫霉菌Phytophthora capsici Leonian是Leon Leonian于1922年命名的，它属于植物病原卵菌。辣椒疫霉以卵孢子或厚垣孢子在土壤病残体中越冬，可以存活数月甚至更长时间，寄主范围广，主要侵染辣椒、番茄、茄子、黄瓜、南瓜等多种重要蔬菜作物。辣椒疫病露地和保护地均能发生，该病的流行致使辣椒损失严重，一般病株率为15-30％，严重时达80％以上。自1980年以来，辣椒疫病在我国蔬菜种植区域发病程度日趋加重，严重影响了蔬菜种植业的经济效益，给我国的蔬菜安全生产造成了巨大的经济损失。防治该病害最安全有效的措施是利用抗病品种。抗病品种需要通过抗性鉴定验证。常用的菌丝块创伤法接种需要将待测定的辣椒品种播种培育至成苗、再移栽，时间长，每品种至少10株，在盆栽条件下占用空间较大。因此，开发一种能缩短时间、节省空间的接种方法是非常必要的。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种评价作物抗辣椒疫病的方法，本发明通过定量辣椒疫霉菌游动孢子接种作物苗根部，避免了接种量过大而导致同一的品种抗感的表现差异，在抗性鉴定时更准确、有效。
本发明提供的方法，包括苗的准备、辣椒疫霉菌游动孢子悬浮液的制备、灌根接种、统计评价4个步骤，具体包括：
A、作物苗的准备：种子经30%次氯酸钠表面消毒后，再用灭菌蒸馏水冲洗干净，在55℃～58℃水浴锅中烫种20分钟后，将种子播种于3-5层湿润滤纸上，于相对湿度80-90%，光照强度3000-5000 LUX，温度25-28℃下培养，7-10天后形成4-5叶苗备用；B、辣椒疫霉菌游动孢子悬浮液的制备：将辣椒疫霉模式菌LT1534接种至10% V8培养基平板，于25℃下黑暗培养7-10天至菌丝长满整个平板，打开封口膜在光照强度5000-8000 LUX下照射3-4天，加无菌水覆盖整个平板过夜，4℃处理15-20分钟促进孢子囊释放游动孢子，用无菌水调节游动孢子浓度为1.0×105个/mL，得到辣椒疫霉菌游动孢子悬浮液；
C、灌根接种：取B步骤获得的孢子悬浮液缓慢滴加至有长苗的湿润滤纸周围，让其渗透到每株苗的根部，悬浮液滴加量是一根苗2-3 mL；
D、统计发病情况，评价抗病结果：接种后的作物苗在相对湿度80-90%、光照强度3000-5000 LUX，温度25-28℃下继续培养3-7天，调查作物苗的发病率，按发病率划分抗感性，免疫或高抗发病率为0，抗病发病率为0.1-25%，中抗发病率为25.1-45%，中感发病率为45.1-65%，感病发病率为65.1-80%，高感发病率为80.1-100%，其中免疫或高抗、抗病、中抗的材料即可作为抗源。
本发明的有益效果：
本发明的辣椒疫霉菌游动孢子接种作物苗根部可以严格定量，避免了接种量过大而导致同一的品种抗感的表现差异，游动孢子既可从根部侵入也可从下胚轴侵入，与田间自然侵入方式相同，在筛选抗源时更准确、有效；在实际操作中，可大批量进行，在人工气候箱/室进行，具有占用空间小、节约劳动成本、缩短实验周期等优点。
具体实施方式
为进一步公开而不是限制本发明，以下结合实例对本发明作进一步的详细说明。
实施例1
评价辣椒品种抗辣椒疫病的方法
（1）辣椒苗的准备：美国西元椒（感病品种）和闽椒3号（抗病品种）种子经30%次氯酸钠表面消毒后，再用灭菌蒸馏水冲洗干净，在56℃水浴锅中烫种20分钟后，将种子播种于4层湿润滤纸上，于相对湿度85%，光照强度4000 LUX，温度25℃下培养，8天后形成4叶苗备用；
（2）辣椒疫霉菌游动孢子悬浮液的制备:将辣椒疫霉模式菌LT1534接种至10% V8培养基平板，于25℃下黑暗培养8天至菌丝长满整个平板，打开封口膜在光照强度7000 LUX下照射3天，加无菌水覆盖整个平板过夜，4℃处理17分钟促进孢子囊释放游动孢子，用无菌水调节游动孢子浓度为1.0×105个/mL，得到辣椒疫霉菌游动孢子悬浮液；
（3）灌根接种：取B步骤获得的孢子悬浮液缓慢滴加至有长苗的湿润滤纸周围，让其渗透到每株苗的根部，悬浮液滴加量是一棵苗2-3 mL；
（4）统计发病情况，评价抗病结果：接种后的辣椒苗在相对湿度80-90%、光照强度3000-5000 LUX，温度25-28℃下继续培养3-7天，调查发病率。为确定实验结果的可靠性，均进行3-5次重复。
实验结果表明，感病品种美国西元椒3-5天后水浸状发病症状明显，发病率在80.3-95.7%之间，而抗病品种闽椒3号7天后发病率在5.3-9.8%之间。重复发病率稳定在各自的范围内，说明方法重复性符合实验要求。上述结果与菌丝块接种的抗性鉴定结果一致。
实施例2
评价西瓜品种抗辣椒疫病的方法
（1）西瓜苗的准备：新红宝（感病品种）和湘西瓜6号种子（抗病品种）经30%次氯酸钠表面消毒后，再用灭菌蒸馏水冲洗干净，在56℃水浴锅中烫种20分钟后，将种子播种于4层湿润滤纸上，于相对湿度85%，光照强度4000 LUX，温度25℃下培养，8天后形成4叶苗备用；
（2）辣椒疫霉菌游动孢子悬浮液的制备:将辣椒疫霉模式菌LT1534接种至10% V8培养基平板，于25℃下黑暗培养7-10天至菌丝长满整个平板，打开封口膜在光照强度7000 LUX下照射3-4天，加无菌水覆盖整个平板过夜，4℃处理17分钟促进孢子囊释放游动孢子，用无菌水调节游动孢子浓度为1.0×105个/mL，得到辣椒疫霉菌游动孢子悬浮液;
（3）灌根接种：取B步骤获得的孢子悬浮液缓慢滴加至有长苗的湿润滤纸周围，让其渗透到每株苗的根部，悬浮液滴加量是一棵苗2-3 mL；
（4）统计发病情况，评价抗病结果：接种后的西瓜苗在相对湿度90%、光照强度4000 LUX，温度25℃下继续培养7天，调查发病率。为确定实验结果的可靠性，均进行3-5次重复。
实验结果表明，感病品种新红宝3-5天后水浸状发病症状明显，发病率在78.5-93.7%之间，而抗病品种湘西瓜6号5天后发病率在8.3-15.4%之间。重复发病率稳定在各自的范围内，说明方法重复性符合实验要求。上述结果与菌丝块接种的抗性鉴定结果一致。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。