1.用于检测CYP2C19基因SNP位点rs4986893基因型的试剂盒,其特征在于:所述试剂盒包括引物对和PCR检测反应试剂;其中,所述引物对为(1)或(2)中的一种:
(1)上游引物:CYP2C19-F 5'- CATCAGGATTGTAAGCACCCCC-3'
下游引物:CYP2C19-R 5'- TTTCTCAGGAAGCAAAAAACTTGG-3';
(2)与(1)中的互补序列。
2.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于:所述PCR检测反应试剂包括含EvaGreen 的Green-2-Go qPCRMastermix。
3.根据权利要求2所述的试剂盒,其特征在于:所述PCR扩增时的反应体系为:
Green-2-Go qPCRMastermix(含EvaGreen) 5μl
引物F(10μM) 0.1μl
引物R(10μM) 0.1μl
模板(50ng/μl) 0.5μl
ddH2O 4.3μl
总体积 10μl。
4.根据权利要求1-3任一所述的试剂盒,其特征在于:所述试剂盒还包括标准品,所述标准品为重组阴性质粒和重组阳性质粒,所述重组阴性质粒的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.1,所述重组阳性质粒的核苷酸序列为序列表中SEQ ID No.2。
5.一种检测CYP2C19基因SNP位点rs4986893基因型的方法,其特征在于:步骤如下:
(1)构建重组阴性质粒和重组阳性质粒:所述重组阴性质粒的核苷酸序列为序列表中SEQ ID No.1,所述重组阳性质粒的核苷酸序列参见序列表中SEQ ID No.2;
(2)构建PCR扩增时的引物对,所述引物对为a或b中的一种:
a、上游引物:CYP2C19-F 5'- CATCAGGATTGTAAGCACCCCC-3'
下游引物:CYP2C19-R 5'- TTTCTCAGGAAGCAAAAAACTTGG-3';
b、与a中的互补序列;
(3)提取待测样本的外周血基因组DNA,对重组阴性质粒、重组阳性质粒和待测样本的DNA均使用步骤(2)所述引物,且在同一条件下进行PCR扩增和HRM分析,收集数据;
作为优选,所述HRM分析的条件为:94℃ 90s;60℃ 30s;83-94℃收集数据,温度上升速率为0.06℃/s;
(4)根据收集数据绘制高分辨率熔解曲线,根据重组阴性质粒、重组阳性质粒的熔解曲线判断待测样本CYP2C19基因SNP位点rs4986893的基因型:
与重组阴性质粒的熔解曲线重合则CYP2C19基因SNP位点rs4986893的基因型为GG;
与重组阳性质粒的熔解曲线重合则CYP2C19基因SNP位点rs4986893的基因型为AA;
在重组阴性质粒和重组阳性质粒之间的则CYP2C19基因SNP位点rs4986893的基因型为GA。
6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于:所述PCR扩增时的反应体系为:
Green-2-Go qPCRMastermix(含EvaGreen) 5μl
引物F(10μM) 0.1μl
引物R(10μM) 0.1μl
模板(50ng/μl) 0.5μl
ddH2O 4.3μl
总体积 10μl。
7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于:所述PCR扩增时的反应条件为:94℃预变性3min;94℃变性10s;60℃退火/延伸20s;40个循环。
8.权利要求1-4任一所述的试剂盒的使用方法,其特征在于:步骤如下:
(1)提取待测样本的外周血基因组DNA,对重组阴性质粒、重组阳性质粒和待测样本的DNA均使用相同引物,且在同一条件下进行PCR扩增和HRM分析,收集数据;
所述HRM分析的条件为:94℃ 90s;60℃ 30s;83-94℃收集数据,温度上升速率为0.06℃/s;
(2)根据收集数据绘制高分辨率熔解曲线,根据重组阴性质粒、重组阳性质粒的熔解曲线判断待测样本CYP2C19基因SNP位点rs4986893的基因型:
与重组阴性质粒的熔解曲线重合则CYP2C19基因SNP位点rs4986893的基因型为GG;
与重组阳性质粒的熔解曲线重合则CYP2C19基因SNP位点rs4986893的基因型为AA;
在重组阴性质粒和重组阳性质粒之间的则CYP2C19基因SNP位点rs4986893的基因型为GA。
9.权利要求1-4任一所述的试剂盒在制备与CYP2C19 rs4986893相关的药物个体化治疗试剂中的应用。