包含作为活性成分的7-氮杂吲哚啉-2-酮衍生物或其可药用盐的药物组合物的制作方法

本发明涉及用于预防或治疗癌症疾病的药物组合物，所述药物组合物包含7-氮杂吲哚啉-2-酮衍生物或其可药用盐作为活性成分。

背景技术：

癌症患者死亡的主要原因之一是癌症的转移，这也是当前临床应用中的化学疗法或免疫疗法不能大大有助于提高癌症患者的生存力的原因。

大多数实体瘤转移显示癌细胞在癌细胞首次出现的部位增殖，并且随着癌块增大，通过新的血管为肿瘤提供生长和增殖所需的营养和氧。然后，癌细胞从癌块中分离出来，通过血管迁移到身体的其他部位，然后迁入在此再次发生细胞增殖的继发性部位。也就是说，渗透到肿瘤中的新血管赋予转移性癌细胞进入血液循环系统的机会，这对于癌细胞转移是至关重要的帮助(非专利文献1)。

在癌症的生长和转移以及血管生成中发挥关键作用的信号传导分子是包括VEGF(Vascular Endothelial Growth Factor，血管内皮生长因子)的生长因子及其受体。为生长因子受体的关键部分的受体酪氨酸激酶(RTK)参与多种细胞活动，例如细胞存活、分化、迁移、增殖等。这样的RTK通过在各种癌细胞中的异常调节和过度活化而在癌症的生长和恶性进展中发挥关键作用。多种RTK(包括VEGF受体2(KDR)酪氨酸激酶)调节癌细胞的存活和增殖，并且还通过促进血管内皮细胞的增殖和迁移以及管状形成来诱导血管生成。在癌症的情况下，分泌除VEGF以外的多种生长因子以刺激癌细胞和血管内皮细胞的RTK，由此导致肿瘤生长和通过血管转移。因此，在仅抑制KDR酪氨酸激酶的情况下，癌细胞显示出对其的抗性，并且被抑制的癌症的生长重新开始。因此，抑制多种生长因子的受体RTK是用于开发抗癌药物的有效策略。代表性的实例是舒尼替尼(商标：Sutent[苹果酸舒尼替尼])，其为一种多靶点RTK抑制剂。

为了使癌细胞通过血管迁移到身体的其他部位，癌细胞必须经历侵入过程。为此，癌细胞分泌过表达的蛋白酶以使细胞外基质降解。这样的降解酶包括基质金属蛋白酶(MMP)、组织蛋白酶和多种蛋白酶。存在许多类型的MMP，并且MMP是通过从癌症周围组织中的细胞例如成纤维细胞和巨噬细胞以及癌细胞中分泌来介导癌症侵袭和转移的最重要酶组之一。通过VEGF与VEGFR2结合的细胞间信号传导抑制MMP的表达(非专利文献2)。此外，MMP参与调节VEGF或VEGFR2的表达(非专利文献3和4)。

癌症生长、血管生成和转移的综合调节最终将成为用于治疗癌症和降低由于癌症转移引起的死亡率的有效方式。此外，选择参与癌症生长、血管生成和癌细胞侵袭/转移的整个过程的靶向分子例如RTK将是有效的。此外，抑制癌症生长的常规抗癌药物由于长期施用引起毒性问题的事件需要开发为针对转移具有抑制作用且具有低毒性的有效抗癌剂的药物。

[非专利文献]

1.Folkman and Tyler，Cancer Invasion and metastasis，Biologic mechanisms and Therapy(S.B.Day ed.)Raven press，New York，pp94-103，1977；Polverini PJ，Grit.Rev.Oral.Biol.Med..1995，6，230-247.

2.Ugarte-Berzal E.et al.，Blood 2010，11 5(4)：846-849.

3.Mazor R.et al.，The Journal of Biological Chemistry 2013，288，598-607.

4.Eisenach P.A.et al..Journal of Cell Science 2013，123：4182-4193.

技术实现要素：

技术问题

本发明人证实，具有某些结构的7-氮杂吲哚啉-2-酮衍生物或其可药用盐显示出针对癌症生长的优异的抑制作用，由此完成了本发明。

因此，本发明的目的是提供一种用于预防或治疗癌症疾病的药物组合物，所述药物组合物包含7-氮杂吲哚啉-2-酮衍生物或其可药用盐作为活性成分。

技术方案

为了实现该目的，本发明提供了由以下式1表示的化合物或其可药用盐：

[式1]

其中，

R¹、R⁴和R⁵各自独立地表示选自氢、卤素和C1-C4烷基中的任一者；

R²和R³各自独立地表示C1-C4烷基；

R⁶表示选自氢、C1-C12烷基、C2-C12烯基、C6-C12芳基和包含1至3个杂原子的C3-C12杂芳基中的任一者；

其中所述C1-C12烷基或所述C2-C12烯基未经取代或经C6-C12芳基取代；

所述C6-C12芳基未经取代或经选自卤素、-NO2、C1-C4烷基、-OR¹¹和-NR²⁰R²¹的一个或更多个取代基取代；

所述C3-C12杂芳基未经取代或经选自C1-C4烷基、-C(O)R¹⁴、-C(O)OR¹⁵和-C(O)NR²²R²³的一个或更多个取代基取代；

R¹¹、R¹⁴和R¹⁵各自独立地表示选自氢和C1-C4烷基中的任一者；

R²⁰至R²³各自独立地表示选自氢和C1-C6烷基中的任一者，或者

R²²和R²³一起可形成包含1至3个杂原子的C3-C8杂芳基；

其中R¹¹、R¹⁴、R¹⁵和R²⁰至R²³的C1-C4烷基和C3-C8杂芳基各自独立地未经取代或经选自C1-C4烷基和-NR²⁴R²⁵的一个或更多个取代基取代；

R²⁴和R²⁵各自独立地表示选自氢和C1-C4烷基中的任一者，或者

R²⁴和R²⁵一起可形成包含1至3个杂原子的C3-C8杂芳基。

此外，本发明提供了用于制备以下式1的化合物的方法，所述方法包括使以下式2的化合物与以下式3的化合物反应：

[式2]

[式3]

[式1]

此外，本发明提供了用于预防或治疗癌症疾病的药物组合物，所述药物组合物包含上述化合物或其可药用盐作为活性成分。

此外，本发明提供了用于预防或抑制癌症侵袭或癌症转移的药物组合物，所述药物组合物包含上述化合物或其可药用盐作为活性成分。

本发明的效果

根据本发明的7-氮杂吲哚啉-2-酮衍生物或其可药用盐可以有利地用作用于抑制癌症生长和癌症转移的药物。

具体实施方式

下文中，更详细地描述本发明。

本发明提供了由以下式1表示的化合物(在下文中称为式1的化合物)或其可药用盐：

[式1]

其中，

R¹、R⁴和R⁵各自独立地表示选自氢、卤素和C1-C4烷基中的任一者；

R²和R³各自独立地表示C1-C4烷基；

R⁶表示选自氢、C1-C12烷基、C2-C12烯基、C6-C12芳基和包含1至3个杂原子的C3-C12杂芳基中的任一者；

其中所述C1-C12烷基或所述C2-C12烯基未经取代或经C6-C12芳基取代；

所述C6-C12芳基未经取代或经选自卤素、-NO2、C1-C4烷基、-OR¹¹和-NR²⁰R²¹的一个或更多个取代基取代；

所述C3-C12杂芳基未经取代或经选自C1-C4烷基、-C(O)R¹⁴、-C(O)OR¹⁵和-C(O)NR²²R²³的一个或更多个取代基取代；

R¹¹、R¹⁴和R¹⁵各自独立地表示选自氢和C1-C4烷基中的任一者；

R²⁰至R²³各自独立地表示选自氢和C1-C6烷基中的任一者，或者

R²²和R²³一起可形成包含1至3个杂原子的C3-C8杂芳基；

其中R¹¹、R¹⁴、R¹⁵和R²⁰至R²³的C1-C4烷基和C3-C8杂芳基各自独立地未经取代或经选自C1-C4烷基和-NR²⁴R²⁵的一个或更多个取代基取代；

R²⁴和R²⁵各自独立地表示选自氢和C1-C4烷基中的任一者，或者

R²⁴和R²⁵一起可形成包含1至3个杂原子的C3-C8杂芳基。

在本发明中，式1的化合物可被称为7-氮杂吲哚啉-2-酮衍生物。

此外，根据本发明的化合物的取代基的定义中使用的术语如下。

除非另有说明，否则术语“烷基”是指具有指定碳原子数的直链、支链或环状饱和烃。

除非另有说明，否则术语“烯基”是指具有指定碳原子数，至少两个(2)碳原子和至少一个(1)碳-碳双键的烃。

术语“卤素”是指氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)或碘(I)。

除非另有说明，否则术语“杂环”是指包含氧(O)、氮(N)和硫(S)的杂原子的非芳族饱和烃环，或者作为芳环的单环和稠环。

除非另有说明，否则术语“芳基”是指包含5元和6元单环芳族基团的一价或二价芳族基团。

术语“杂芳基”是指包含5元和6元单环芳族基团的一价或二价芳族基团，其包含1至3个独立地选自氮(N)、氧(O)和硫(S)的杂原子。杂芳基的实例包括但不限于呋喃基、吡咯基、噻吩基、噻唑基、异噻唑基、咪唑基、三唑基、四唑基、吡唑基、唑基、异唑基、吡啶基、吡嗪基、哒嗪基、嘧啶基、异喹啉基、咔唑基、苯并唑基、苯并二唑基、苯并噻唑基、苯并咪唑基、苯并噻吩基、三嗪基、酞嗪基、喹啉基、吲哚基、苯并呋喃基、嘌呤基和中氮茚基。

术语“药物组合物”是指根据本发明的化合物或其生理学上可接受的盐/可药用盐或其前药与其他化学组分(例如生理学上可接受的载体/可药用载体和生理学上可接受的赋形剂/可药用赋形剂)的混合物。药物组合物的目的是促进化合物向生物体的施用。

此外，式1的化合物可充当前药。术语“前药”是指在身体内转化为母体药物的物质。因为前药有时比母体药物更容易施用，因此它们常常是有用的。例如，即使母体药物不能通过经口施用生物可利用，其前药也可以通过经口施用生物可利用。此外，与药物组合物中的母体药物相比，前药可显示出提高的溶解度。

术语“生理学上可接受的载体/可药用载体”是指不会对生物体造成显著刺激且不消除所施用的化合物的生物活性和特性的载体或稀释剂。

术语“生理学上可接受的赋形剂/可药用赋形剂”是指添加到药物组合物中以进一步促进活性成分的施用的惰性物质。赋形剂的实例包括但不限于碳酸钙、磷酸钙、各种糖和各种类型的淀粉、纤维素衍生物、明胶、植物油和聚乙二醇。

术语“治疗”(“treat”、“treating”和“treatment”)是指减轻或消除根据本发明的疾病和与其相关的症状的方法。特别是关于癌症，这些术语仅意指提高患有癌症的个体的存活率或减少疾病的一种或更多种症状。

术语“生物体”意指由至少一个或更多个细胞构成的所有生物。活生物体可以如真核单细胞一样简单，或者可以如哺乳动物(包括人)一样复杂。

术语“治疗有效量”是指可以在一定程度上减轻所治疗的疾病的一种或更多种症状的所施用的化合物的量。关于癌症的治疗，治疗有效量是指具有以下效果的量：

(1)减小肿瘤的尺寸；

(2)抑制(即，在一定程度上减缓，优选停止)肿瘤转移；

(3)在一定程度上抑制(即，在一定程度上减缓，优选停止)肿瘤生长；和/或

(4)在一定程度上减轻(或，优选消除)与癌症有关的一种或更多种症状。

在本发明的一个实施方案中，在式1的化合物中，R¹、R⁴和R⁵可为氢；

并且R²和R³可为甲基。

此外，在一个实施方案中，在式1的化合物中，R⁶可表示：氢；或者

未经取代的或经C6-C12芳基取代的C1-C12烷基或C2-C12烯基，其中所述C6-C12芳基未经取代或经选自OH和甲氧基的一个或更多个取代基取代；或者

C6-C12芳基，所述C6-C12芳基未经取代或经选自以下的一个或更多个取代基取代：卤素、-NO2、OH、甲氧基、甲基、乙基、丙基、甲胺、乙胺、二甲胺和二乙胺；或者

包含1至3个杂原子的C3-C12杂芳基，所述C3-C12杂芳基未经取代或经选自甲基、乙基、-C(O)OR¹⁵和-C(O)NR²²R²³的一个或更多个取代基取代；

R¹⁵表示氢、甲基或乙基；

R²²和R²³各自独立地表示氢；或者未经取代的或经选自甲胺、乙胺、二甲胺、二乙胺和哌啶的一个或更多个取代基取代的甲基或乙基；或者

R²²和R²³一起可形成未经取代的或经甲基取代的环己烷、哌嗪、哌啶、吡咯烷或吗啉。

此外，在一个实施方案中，在式1的化合物中，R⁶可表示：

未经取代的或经一个或更多个苯基取代的C1-C8烷基；或者

未经取代的或经苯基取代的C2-C8烯基，其中所述苯基未经取代或经选自OH和甲氧基的一个或更多个取代基取代；或者

C6-C10芳基，所述C6-C10芳基未经取代或经选自以下的一个或更多个取代基取代：卤素、-NO2、OH、甲氧基、甲基、乙基、二甲胺和二乙胺；或者

包含1至3个杂原子的C3-C10杂芳基，所述C3-C10杂芳基未经取代或经选自甲基、乙基、-C(O)OR¹⁵和-C(O)NR²²R²³的一个或更多个取代基取代；

R¹⁵表示氢、甲基或乙基；

R²²和R²³各自独立地表示氢；或者未经取代的或经选自甲胺、乙胺、二甲胺、二乙胺和哌啶的一个或更多个取代基取代的甲基或乙基；或者

R²²和R²³一起可形成未经取代的或经甲基取代的环己烷、哌嗪、哌啶、吡咯烷或吗啉。

更具体地，根据本发明的式1的化合物可为3-亚烷基-5-羟基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2(3H)-酮衍生物。

衍生物可为选自以下由如下表1所示的式I-01至I-46表示的化合物中的任一者。

[表1]

在本发明中，可药用盐可为酸加成盐的形式，所述酸加成盐由选自草酸、马来酸、富马酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸和苯甲酸的有机酸，或者选自盐酸、硫酸、磷酸和氢溴酸的无机酸形成。

此外，本发明提供了用于制备式1的化合物的方法。式1的化合物可例如通过使以下式2的化合物与以下式3的化合物反应来制备：

[式2]

[式3]

[式1]

其中，

R¹、R⁴和R⁵各自独立地表示选自氢、卤素和C1-C4烷基中的任一者；

R²和R³各自独立地表示C1-C4烷基；

R⁶表示选自氢、C1-C12烷基、C2-C12烯基、C6-C12芳基和包含1至3个杂原子的C3-C12杂芳基中的任一者；

其中所述C1-C12烷基或所述C2-C12烯基未经取代或经C6-C12芳基取代；

所述C6-C12芳基未经取代或经选自卤素、-NO2、C1-C4烷基、-OR¹¹和-NR²⁰R²¹的一个或更多个取代基取代；

所述C3-C12杂芳基未经取代或经选自C1-C4烷基、-C(O)R¹⁴、-C(O)OR¹⁵和-C(O)NR²²R²³的一个或更多个取代基取代；

R¹¹、R¹⁴和R¹⁵各自独立地表示选自氢和C1-C4烷基中的任一者；

R²⁰至R²³各自独立地表示选自氢和C1-C6烷基中的任一者，或者

R²²和R²³一起可形成包含1至3个杂原子的C3-C8杂芳基；

其中R¹¹、R¹⁴、R¹⁵和R²⁰至R²³的C1-C4烷基和C3-C8杂芳基各自独立地未经取代或经选自C1-C4烷基和-NR²⁴R²⁵的一个或更多个取代基取代；

R²⁴和R²⁵各自独立地表示选自氢和C1-C4烷基中的任一者，或者

R²⁴和R²⁵一起可形成包含1至3个杂原子的C3-C8杂芳基。

在一个实施方案中，式1的化合物可通过诸如以下反应方案1的方法来制备：

[反应方案1]

反应式1可根据实施例1至7进行。

此外，本发明提供了用于预防或治疗癌症疾病的药物组合物，所述药物组合物包含上述式1的化合物或其可药用盐作为活性成分。

此外，本发明提供了用于预防或抑制癌症侵袭或癌症转移的药物组合物，所述药物组合物包含上述式1的化合物或其可药用盐作为活性成分。

癌症可为选自以下中的任一者：肺癌、乳腺癌、膀胱癌、骨癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、直肠癌、前列腺癌、肾癌、喉咽癌、喉癌、食管癌、胰腺癌、结肠直肠癌、胃癌、舌癌、皮肤癌、脑肿瘤、子宫癌、头或颈癌、胆囊癌、口腔癌、结肠癌、肛门癌、中枢神经系统肿瘤和肝癌。

根据本发明的式1的化合物或其可药用盐可以本身施用于患者或者可以以其中该化合物与合适的载体或赋形剂混合的药物组合物施用。药物的配制和施用的技术可见于“Remington’s Pharmacological Sciences,”Mack Publishing Co.,Easton,PA.,最新版中。

根据上述文献，术语“施用”(“administration”和“administer”)是指将式1的化合物或其可药用盐，或者包含式1的化合物的药物组合物递送至生物体用于治疗或预防上述疾病。

合适的施用途径可为经口、经直肠、经黏膜或经肠施用或者肌内、皮下、髓内、鞘内、直接心室内、血管内、玻璃体内、腹膜内、鼻内或眼内注射。优选的施用途径可为经口和肠胃外。

或者，化合物可通过局部(topical,local)施用而不是通过全身施用来施用，例如，通过将化合物直接注射到实体瘤中，常常以贮库制剂或持续释放制剂施用。

此外，药物可以以靶向药物递送系统施用，例如以用肿瘤特异性抗体包被的脂质体施用。脂质体可靶向肿瘤并被肿瘤选择性摄取。

本发明的药物组合物可通过本领域公知的方法来制造，例如，通过常规混合、溶解、造粒、制糖衣丸、研细、乳化、包封、包埋和冻干方法制造。

根据本发明的药物组合物可与活性化合物一起配制成药学上可以使用的制剂。合适的制剂可根据施用途径的选择而变化。

为了注射，本发明的化合物可在水溶液，优选在生理学上相容的缓冲液例如Hanks溶液、Ringer溶液、或生理盐水缓冲液中配制。

为了经鼻黏膜施用，允许药物穿透屏障的渗透剂可用于制剂中。可使用本领域通常已知的渗透剂。

为了经口施用，化合物可以通过与可药用载体组合来配制。这样的载体使得本发明的化合物能够被配制为用于由患者经口摄入的片剂、丸剂、锭剂、糖衣丸、胶囊剂、液体剂、凝胶剂、糖浆剂、浆剂、混悬剂等。在添加其他合适的助剂(如果需要)之后，用于经口使用的药物制剂可以使用固体赋形剂来制备以获得片剂或糖衣丸的芯。任选地，可将所得混合物研磨并加工以制备颗粒。有用的赋形剂可为糖，包括乳糖、蔗糖、甘露糖醇或山梨醇；纤维素制剂例如玉米淀粉、小麦淀粉、米淀粉和马铃薯淀粉；以及填料例如明胶、树胶、橡胶树液、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。如果需要，可添加崩解剂例如交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂或藻酸。还可添加盐例如藻酸钠。

糖衣丸芯可通过合适的包被来制备。为此目的，可使用可以任选地包含阿拉伯树胶、聚乙烯吡咯烷酮、卡波姆凝胶(carbopol gel)、聚乙二醇和/或二氧化钛、漆溶液的浓缩糖溶液。

可以经口使用的药物组合物包括由明胶制成的推入配合胶囊(push-fitcapsule)，以及由明胶和增塑剂例如甘油或山梨醇制成的软、密封胶囊。在软胶囊中，活性化合物可溶解或悬浮在合适的液体(例如脂肪油、液体石蜡或液体聚乙二醇)中。也可在组合物中添加稳定剂。

可使用的药物组合物包括硬明胶胶囊。

可将胶囊包装在棕色玻璃或塑料瓶中以保护活性化合物免受光的影响。可将包含活性化合物胶囊制剂的容器储存在可控室温(15℃至30℃)下。

为了通过吸入施用，根据本发明的化合物可使用压缩容器、喷雾器和合适的推进剂(例如，二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷和二氧化碳)以气溶胶喷雾的形式方便地递送。

化合物也可配制成用于肠胃外施用，例如，通过推注或连续静脉内输注。注射用制剂可以以单位剂量形式与添加的防腐剂存在于例如安瓿或多剂量容器中。组合物可采取如油性或水性载体中的混悬液、溶液或乳液的形式，并且可包含配制材料例如助悬剂、稳定剂和/或分散剂。

用于肠胃外施用的药物组合物包括水溶性形式的水溶液，例如，活性化合物的水溶性形式(例如盐)的水溶液。此外，活性化合物的混悬液可在亲脂性载体中制备。合适的亲脂性载体包括脂肪油、合成脂肪酸酯例如油酸乙酯和甘油三酯、以及诸如脂质体的材料。水性注射混悬液可包含增加混悬液的粘度的物质，例如羧甲基纤维素钠、山梨醇或葡聚糖。任选地，混悬液还可包含合适的稳定剂和/或增加化合物的溶解度以允许制备高度浓缩的溶液的试剂。

也可使用常规栓剂基质例如可可脂或其他甘油酯将化合物配制成经直肠施用的化合物例如栓剂或保留灌肠剂。

除了先前描述的制剂以外，化合物也可配制成贮库制剂。这样的长效制剂可通过植入(例如皮下或肌内)或通过肌内注射施用。本发明的化合物可用合适的聚合物材料或疏水性材料(例如，以具有药理学上可接受的油的乳液)、离子交换树脂或者作为微溶衍生物(例如但不限于微溶盐)配制用于这种施用途径。

根据本发明的药物组合物意指包含足以实现预期目的的量的活性化合物的组合物，所述预期目的例如预防或治疗选自以下的疾病：肺癌、乳腺癌、膀胱癌、骨癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、直肠癌、前列腺癌、肾癌、喉咽癌、喉癌、食管癌、胰腺癌、结肠直肠癌、胃癌、舌癌、皮肤癌、脑肿瘤、子宫癌、头或颈癌、胆囊癌、口腔癌、结肠癌、肛门癌、中枢神经系统肿瘤、肝癌和结肠直肠癌。

在这种情况下，治疗有效量意指有效预防、缓解或减轻疾病的症状或者延长所治疗的对象的存活的量。

基于组合物的总重量，根据本发明的药物组合物可以以0.1重量％至50重量％的量包含式1的化合物或其可药用盐。

根据本发明的式1的化合物或其可药用盐可以以0.01mg/kg至100mg/kg，并优选0.1mg/kg至10mg/kg的量使用，一天一次或数次，但该量可根据患者的年龄、性别和体重而改变。式1的化合物或其可药用盐的施用量可根据施用途径、疾病的严重程度、性别、体重和年龄等增加或减少。因此，上述施用量不限制本发明的范围。

药物组合物可通过多种途径施用到哺乳动物例如大鼠、小鼠、家畜和人中。

根据本发明的式1的化合物或其可药用盐的50％致死剂量(LD50)为至少2g/kg。也就是说，式1的化合物或其可药用盐是足够安全的并且可以用于本发明的药物组合物。

此外，本发明的式1的化合物或其可药用盐或前药可与其他化学治疗剂组合以用于治疗上述病症和疾病。其他化学治疗剂可以是用于治疗以下疾病的药物：肺癌、乳腺癌、膀胱癌、骨癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、直肠癌、前列腺癌、肾癌、喉咽癌、喉癌、食管癌、胰腺癌、结肠直肠癌、胃癌、舌癌、皮肤癌、脑肿瘤、子宫癌、头或颈癌、胆囊癌、口腔癌、结肠癌、肛门癌、中枢神经系统肿瘤、肝癌和/或结肠直肠癌。

具体实施方式

实施例

<实施例1>5-(羟甲基)-2，4-二甲基吡啶-3-醇盐酸盐(2)的制备

在以小份将锌(Zn)粉(12.7g，0.195mol)添加到盐酸吡哆醇(1，10.0g，48.6mmol)在乙酸(40mL)中的溶液中之后，使混合物回流24小时。在使反应混合物冷却至室温之后，将反应混合物在减压下过滤并用乙腈(CH3CN，50mL)洗涤，并将过量的盐酸-甲醇溶液(150mL)添加到滤液中。在冰冷却下搅拌2小时之后，将所得悬浮液在减压下过滤以获得作为白色固体的期望的化合物2(8.7g，94％)。

¹H-NMR((CD3)2SO)δ10.62(br s，1H)，8.08(s，1H)，5.70(br s，1H)，4.60(s，2H)，2.61(s，3H)，2.32(s，3H).

<实施例2>(5-(苄氧基)-4，6-二甲基吡啶-3-基)甲醇(3)的制备

将碳酸钾(107g，0.776mol)和苄基氯(26.2mL，0.228mol)添加到化合物2(8.6g，45.7mmol)在DMF(N，N-二甲基甲酰胺，450mL)中的溶液中之后，将混合物在室温下搅拌24小时。在减压下浓缩反应溶液之后，将反应溶液用乙酸乙酯(EtOAc，1L)稀释并用水(3×100mL)洗涤。将乙酸乙酯溶液用饱和盐水洗涤，使用无水硫酸镁(MgSO4)干燥并过滤，并在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱法(CH2Cl2∶MeOH＝20∶1)纯化以获得作为棕色固体的期望的化合物3(8.2g，74％)。

¹H-NMR(CDCl3)δ8.07(s，1H)，7.38-7.47(m，5H)，4.80(s，2H)，4.65(s，2H)，2.48(s，3H)，2.32(s，3H).

<实施例3>3-苄氧基-5-氯甲基-2，4-二甲基吡啶盐酸盐(4)的制备

将DMF(0.09mL，23.43mmol)和亚硫酰氯(1.7mL，23.43mmol)添加到化合物3(2.85g，11.71mmol)在1，2-二氯乙烷(35mL)中的溶液中，并将混合物在80℃下搅拌1小时。在使反应溶液冷却至室温之后，向反应溶液中添加乙醚(150mL)，在冰冷却下搅拌1小时。在减压下过滤出沉淀的固体之后，将过滤的固体用乙醚洗涤并干燥以获得作为棕色固体的期望的化合物4(3g，86％)。

¹H-NMR(CDCl3)δ8.19(s，1H)，7.34-7.44(m，5H)，4.81(s，2H)，4.56(s，2H)，2.50(s，3H)，2.32(s，3H).

<实施例4>2-(5-苄氧基-4，6-二甲基吡啶-3-基)乙腈(5)的制备

将氰化钾(KCN，7.42g，114.04mmol)添加到化合物4(9.95g，38.01mmol)在DMF(500mL)中的溶液中，并将混合物在30℃至40℃下搅拌2天。在浓缩反应溶液之后，将残余物用乙酸乙酯(2L)稀释并用水(4×200mL)洗涤。使用无水硫酸镁干燥乙酸乙酯溶液并过滤，并在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱法(CHCl3∶MeOH＝50∶1→20∶1)纯化以获得作为棕色固体的期望的化合物5(8.06g，95％)。

¹H-NMR(CDCl3)δ8.18(s，1H)，7.35-7.43(m，5H)，4.80(s，2H)，3.61(s，2H)，2.51(s，3H)，2.26(s，3H).

<实施例5>2-(5-羟基-4，6-二甲基吡啶-3-基)乙酸乙酯(6)的制备

将浓硫酸(3.7mL，69.36mmol)添加到化合物5(500mg，1.98mmol)在乙醇(20mL)中的溶液中，并使混合物回流24小时。将反应溶液冷却至室温并用乙醇(150mL)稀释。以小份向反应溶液中添加碳酸钠(Na2CO3，7.35g，69.36mmol)，并将混合物在室温下搅拌3小时。将反应溶液浓缩，并将残余物用乙酸乙酯(150mL)稀释，在减压下过滤以过滤出固体并用乙酸乙酯洗涤。在减压下浓缩滤液之后，将残余物通过柱色谱法(CHCl3∶MeOH＝70∶1→20∶1)纯化以获得作为黄色固体的期望的化合物6(366mg，88％)。

¹H-NMR(CDCl3)δ7.80(s，1H)，6.96(br s，1H)，4.11(q，J＝7.1Hz，2H)，3.56(s，2H)，2.38(s，3H)，2.19(s，3H)，1.21(t，J＝7.1Hz，3H).

<实施例6>2-(5-羟基-4，6-二甲基-2-(苯基二氮烯基)吡啶-3-基)乙酸乙酯(7)的制备

在烧杯中将化合物6(1g，4.78mmol)溶解在水-THF(四氢呋喃)(1：1，30mL)的混合溶剂中，并且在具有搅拌器和pH计的情况下搅拌混合物并在冰冷却下冷却。在单独的锥形瓶中将苯胺(0.48mL，5.26mmo1)溶解在6M盐酸(5mL)中之后，使混合物在冰冷却下冷却。然后，以小份向苯胺-盐酸溶液中添加NaNO2(亚硝酸钠，363mg，5.26mmol)在水(2mL)中的冷溶液以制备重氮化的苯胺溶液。将重氮化的苯胺溶液以小份添加到化合物6的冷溶液中。同时，用10M氢氧化钠溶液将反应溶液保持在pH 8。向其中添加所有的重氮化的苯胺溶液，并在室温下搅拌反应溶液2小时。用乙酸乙酯(3×150mL)萃取反应溶液，并用饱和盐水洗涤乙酸乙酯溶液，使用无水硫酸镁干燥并过滤，并在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱法(CHCl3∶MeOH＝80∶1→20∶1)纯化以获得作为红色固体的期望的化合物7(1.3g，87％)。

¹H-NMR(CDCl3)δ7.32-7.37(m，4H)，7.08-7.13(m，1H)，4.14(q，J＝7.1Hz，2H)，3.89(s，2H)，2.40(s，3H)，2.06(s，3H)，1.22(t，J＝7.1Hz，3H).

<实施例7>5-羟基-4，6-二甲基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-2(3H)-酮(8)的制备

将锌(Zn)粉(344mg，5.26mmol)以小份添加到化合物7(550mg，1.75mmol)在乙酸(35mL)中的溶液中，并使混合物回流12小时。在使反应溶液冷却至室温之后，将反应溶液在减压下过滤以过滤出固体，并用乙腈(CH3CN)洗涤。在滤液浓缩之后，将残余物通过柱色谱法(CHCl3∶MeOH＝80∶1→10∶1)纯化以获得作为棕色固体的期望的化合物8(273mg，87％)。

¹H-NMR((CD3)2SO)δ10.4(s，1H)，8.05(s，1H)，3.38(s，2H)，2.27(s，3H)，2.07(s，3H).

<实施例8-1>(Z)-3-亚己基-5-羟基-4，6-二甲基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-2(3H)-酮(I-01)的制备

将1-己醛(20.7μL，0.168mmo1)和哌啶(22.3μL，0.224mmol)添加到化合物8(20mg，0.112mmol)在甲醇(1mL)中的溶液中，并将混合物在室温下搅拌2小时。在减压下过滤反应溶液中的固体，并且将过滤的固体用乙酸乙酯洗涤并干燥以获得作为黄色固体的期望的化合物I-01(26mg，88％)。

¹H-NMR((CD3)2SO)δ10.59(s，1H)，8.12(s，1H)，6.90(t，J＝7.7Hz，1H)，2.93(q，J＝7.5Hz，2H)，2.30(s，6H)，1.52-1.48(m，2H)，1.35-1.31(m，4H)，0.88(t，J＝6.9Hz，3H).

<实施例8-2至8-46>

以与实施例8-1中相同的方式制备实施例8-2至8-46的期望的化合物，不同之处在于使用对应于期望的化合物的化合物代替实施例8-1中使用的1-己醛和哌啶。

<实施例8-2>(Z)-3-(2-乙基亚丁基)-5-羟基-4，6-二甲基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-2(3H)-酮(I-02)的制备

¹H-NMR((CD3)2SO)δ11.07(s，1H)，6.71(d，J＝10.4Hz，1H)，3.82(s，1H)，2.35(d，J＝1.6Hz，6H)，1.62-1.49(m，2H)，1.42-1.29(m，2H)，0.83(t，J＝7.3Hz，6H).

<实施例8-3>(Z)-5-羟基-4，6-二甲基-3-(3-甲基丁-2-烯亚基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-2(3H)-酮(I-03)的制备

¹H-NMR(CD3OD)δ7.86(d，J＝12.1Hz，1H)，7.70(d，J＝11.9Hz，1H)，2.63(s，3H)，2.53(s，3H)，2.07(s，6H).

<实施例8-4>(Z)-5-羟基-3-((E)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)亚烯丙基)-4，6-二甲基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-2(3H)-酮(I-04)的制备

¹H-NMR((CD3)2SO)δ11.05(s，1H)，8.36(dd，J＝15.5，11.4Hz，1H)，7.53(d，J＝11.5Hz，1H)，7.23(d，J＝15.5Hz，1H)，7.07(d，J＝9.4Hz，2H)，6.85(d，J＝8.0Hz，1H)，3.82(s，3H)，2.43(s，3H)，2.34(s，3H).

<实施例8-5>(Z)-3-(环己基亚甲基)-5-羟基-4，6-二甲基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-2(3H)-酮(I-05)的制备

¹H-NMR(CD3OD)δ6.80(d，J＝9.8Hz，1H)，3.83(d，J＝10.1Hz，1H)，2.38(d，J＝1.8Hz，6H)，1.80(d，J＝11.4Hz，4H)，1.34(dt，J＝20.7，11.4Hz，6H).

<实施例8-6>(Z)-5-羟基-4，6-二甲基-3-(4-甲基亚苄基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-2(3H)-酮(I-06)的制备

¹H-NMR(CD3OD)δ8.09(d，J＝8.1Hz，2H)，7.97(s，1H)，7.26(d，J＝8.0Hz，2H)，2.71(s，3H)，2.56(s，3H)，2.40(s，3H).

<实施例8-7>(Z)-5-羟基-4，6-二甲基-3-(2-硝基亚苄基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-2(3H)-酮(I-07)的制备

¹H-NMR(CD3OD)δ8.40(s，1H)，8.26(d，J＝8.0Hz，1H)，8.26(d，J＝8.0Hz，1H)，7.78-7.62(m，4H)，2.69(s，3H)，2.57(s，3H).

<实施例8-8>(Z)-5-羟基-4，6-二甲基-3-(4-硝基亚苄基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-2(3H)-酮(I-08)的制备

¹H-NMR(CD3OD)δ8.28(s，1H)，8.24(s，1H)，8.18(s，1H)，8.15(s，1H)，8.11(s，1H)，2.74(s，3H)，2.60(s，3H).

<实施例8-9>(Z)-3-(4-氟亚苄基)-5-羟基-4，6-二甲基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-2(3H)-酮(I-09)的制备

¹H-NMR(CD3OD)δ8.31-8.20(m，2H)，8.03(s，1H)，7.24-7.14(m，2H)，2.73(s，3H)，2.57(s，3H).

<实施例8-10>(Z)-3-(4-氯亚苄基)-5-羟基-4，6-二甲基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-2(3H)-酮(I-10)的制备

¹H-NMR((CD3)2SO)δ11.27(s，1H)，8.11(d，J＝8.5Hz.2H)，7.74(s，1H)，7.47(d，J＝8.5Hz，2H)，2.52(s，3H)，2.40(s，3H).

<实施例8-11>(Z)-5-羟基-3-(2-羟基亚苄基)-4，6-二甲基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-2(3H)-酮(I-11)的制备

¹H-NMR((CD3)2SO)δ11.06(s，1H)，10.55-10.04(m，1H)，8.31(d，J＝7.7Hz，1H)，7.98(s，1H)，7.25(t，J＝7.6Hz，1H)，6.95(d，J＝8.2Hz，1H)，6.80(t，J＝7.5Hz，1H)，2.45(s，3H)，2.37(s，3H).

<实施例8-12>(Z)-5-羟基-3-(2-甲氧基亚苄基)-4，6-二甲基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-2(3H)-酮(I-12)的制备

¹H-NMR((CD3)2SO)δ10.80(s，1H)，8.16(d，J＝7.8Hz，1H)，7.86(s，1H)，7.40(t，J＝7.8Hz，1H)，7.06(d，J＝8.4Hz，1H)，6.94(t，J＝7.6Hz，1H)，3.86(s，3H)，2.42(s，3H)，2.35(s，3H).

<实施例8-13>(Z)-5-羟基-3-(3-甲氧基亚苄基)-4，6-二甲基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-2(3H)-酮(I-13)的制备

¹H-NMR((CD3)2SO)δ11.21(s，1H)，7.91(s，1H)，7.75(s，1H)，7.63(d，J＝7.7Hz，1H)，7.35(t，J＝8.0Hz，1H)，7.01(dd，J＝8.2，2.5Hz，1H)，3.80(s，3H)，2.53(s，3H)，2.40(s，3H).

<实施例8-14>(Z)-5-羟基-3-(4-甲氧基亚苄基)-4，6-二甲基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-2(3H)-酮(I-14)的制备

¹H-NMR(CD3OD)δ8.32(d，J＝8.9Hz，2H)，7.99(s，1H)，7.02(t，J＝6.1Hz，2H)，3.89(d，J＝3.0Hz，3H)，2.73(s，3H)，2.56(s，3H).

<实施例8-15>(Z)-3-(2，5-二甲氧基亚苄基)-5-羟基-4，6-二甲基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-2(3H)-酮(I-15)的制备

¹H-NMR(CD3OD)δ8.35(s，1H)，8.16(d，J＝2.9Hz，1H)，7.13-6.94(m，2H)，3.91-3.87(m，3H)，3.82-3.77(m，3H)，2.69-2.60(m，3H)，2.56-2.51(m，3H).

<实施例8-16>(Z)-5-羟基-4，6-二甲基-3-(3，4，5-三甲氧基亚苄基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-2(3H)-酮(I-16)的制备

¹H-NMR((CD3)2SO)δ11.20(s，1H)，7.76(s，2H)，7.72(s，1H)，3.82(s，6H)，3.74(s，3H)，2.54(s，3H)，2.39(s，3H).

<实施例8-17>(Z)-3-(5-溴-2-甲氧基亚苄基)-5-羟基-4，6-二甲基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-2(3H)-酮(I-17)的制备

¹H-NMR(CD3OD)δ8.45(d，J＝2.4Hz，1H)，8.19(s，1H)，7.58(dd，J＝8.9，2.5Hz，1H)，7.03(d，J＝8.9Hz，1H)，3.93(s，3H)，2.68(s，3H)，2.57(s，3H).

<实施例8-18>(Z)-3-(4-(二甲基氨基)亚苄基)-5-羟基-4，6-二甲基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-2(3H)-酮(I-18)的制备

¹H-NMR((CD3)2SO)δ10.45(s，1H)，8.28(d，J＝9.0Hz，2H)，7.94(br s，1H)，7.56(s，1H)，6.74(d，J＝9.0Hz，2H)，3.03(s，6H)，2.47(s，3H)，2.33(s，3H).

<实施例8-19>(Z)-3-(2，2-二苯基亚乙基)-5-羟基-4，6-二甲基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-2(3H)-酮(I-19)的制备

¹H-NMR(CD3OD)δ7.72(d，J＝10.8Hz，1H)，7.35-7.24(m，11H)，6.78(d，J＝10.7Hz，1H)，2.61(s，3H)，2.55(s，3H).

<实施例8-20>(Z)-5-羟基-4，6-二甲基-3-(萘-2-基亚甲基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-2(3H)-酮(I-20)的制备

¹H-NMR((CD3)2SO)δ11.33(s，1H)，8.59(s，1H)，8.28(d，J＝8.5Hz，1H)，7.99-7.83(m，4H)，7.56(s，2H)，2.56(s，3H)，2.40(s，3H).

<实施例8-21>(Z)-5-羟基-4，6-二甲基-3-(吡啶-2-基亚甲基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-2(3H)-酮(I-21)的制备

¹H-NMR(CD3OD)δ9.07(dd，J＝5.8，1.3Hz，1H)，8.75(td，J＝7.9，1.6Hz，1H)，8.56(d，J＝8.1Hz，1H)，8.22-8.14(m，1H)，8.05(s，1H)，2.77(s，3H)，2.58(s，3H).

<实施例8-22>(Z)-5-羟基-4，6-二甲基-3-(吡啶-3-基亚甲基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-2(3H)-酮(I-22)的制备

¹H-NMR(CD3OD)δ9.４5(s，1H)，9.02(d，J＝8.2Hz，1H)，8.86(d，J＝5.8Hz，1H)，8.16(dd，J＝8.0，5.9Hz，1H)，8.07(s，1H)，2.73(s，3H)，2.57(s，3H).

<实施例8-23>(Z)-5-羟基-4，6-二甲基-3-(吡啶-4-基亚甲基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-2(3H)-酮(I-23)的制备

¹H-NMR(CD3OD)δ8.83(d，J＝6.8Hz，2H)，8.41(d，J＝6.3Hz.2H)，7.87(s，1H)，2.59(s，3H)，2.46(s，3H).

<实施例8-24>(Z)-5-羟基-4，6-二甲基-3-(喹啉-2-基亚甲基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-2(3H)-酮(I-24)的制备

¹H-NMR(CD3OD)δ9.27(d，J＝8.6Hz，1H)，8.53(d，J＝8.6Hz.1H)，8.43-8.20(m，5H)，8.06(dd，J＝11.1，4.1Hz，1H)，2.83(s，3H)，2.61(s，3H).

<实施例8-25>(Z)-3-((1H-吲哚-4-基)亚甲基)-5-羟基-4，6-二甲基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-2(3H)-酮(I-25)的制备

¹H-NMR((CD3)2SO)δ11.38(s，1H)，10.99(s，1H)，8.39(d，J＝7.5Hz，1H)，8.12(s，1H)，7.51(d，J＝8.3Hz，2H)，7.15(t，J＝7.8Hz，1H)，6.67(s，1H)，2.59(s，3H)，2.39(s，3H).

<实施例8-26>(Z)-3-((1H-吲哚-3-基)亚甲基)-5-羟基-4，6-二甲基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-2(3H)-酮(I-26)的制备

¹H-NMR((CD3)2SO)δ12.40(d，J＝2.4Hz，1H)，11.64(s，1H)，9.37(d，J＝3.0Hz，1H)，8.15(s，1H)，7.91(dd.J＝6.4，2.6Hz，1H)，7.54(dd，J＝6.2，2.8Hz，1H)，7.29-7.23(m，2H)，2.69(s，3H)，2.44(s，3H).

<实施例8-27>(Z)-3-(呋喃-2-基亚甲基)-5-羟基-4，6-二甲基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-2(3H)-酮(I-27)的制备

¹H-NMR((CD3)2SO)δ10.74(s，1H)，8.23(d，J＝3.5Hz，1H)，8.17(s，1H)，7.93(d，J＝1.6Hz，1H)，7.45(s，1H)，6.73(dd.J＝3.5.1.7Hz，1H)，2.43(s，3H)，2.33(s，3H).

<实施例8-28>(Z)-3-(呋喃-3-基亚甲基)-5-羟基-4，6-二甲基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-2(3H)-酮(I-28)的制备

¹H-NMR(CD3OD)δ10.77(s，1H)，8.78-8.64(m，1H)，8.20(s，1H)，7.76(t，J＝1.5Hz，1H)，7.52(s，1H)，7.40(d，J＝1.6Hz，1H)，2.43(s，3H)，2.31(s，3H).

<实施例8-29>(Z)-5-羟基-4，6-二甲基-3-(噻吩-2-基亚甲基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-2(3H)-酮(I-29)的制备

¹H-NMR((CD3)2SO)δ10.82(s，1H)，8.25(br s，1H)，7.96(s，1H)，7.92(d，J＝3.0Hz，1H)，7.87(d，J＝5.1Hz，1H)，7.21(dd，J＝5.1，3.7Hz，1H)，2.48(s，3H)，2.33(s，3H).

<实施例8-30>(Z)-5-羟基-4，6-二甲基-3-((3-甲基噻吩-2-基)亚甲基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-2(3H)-酮(I-30)的制备

¹H-NMR(CD3OD)δ8.18(s，1H)，7.82(d，J＝5.1Hz，1H)，7.11(d，J＝5.1Hz，1H)，2.73(s，3H)，2.54(s，6H).

<实施例8-31>(Z)-5-羟基-4，6-二甲基-3-(噻吩-2-基亚甲基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-2(3H)-酮(I-31)的制备

¹H-NMR(CD3OD)δ8.15(s，1H)，7.78(d，J＝3.8Hz，1H)，6.97(dd，J＝3.8，0.9Hz，1H)，2.71(s，3H)，2.58(s，3H)，2.54(s，3H).

<实施例8-32>(Z)-3-((1H-吡咯-3-基)亚甲基)-5-羟基-4，6-二甲基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-2(3H)-酮(I-32)的制备

¹H-NMR((CD3)2SO)δ13.18(s，1H)，11.53(s，1H)，7.72(s，1H)，7.38(s，1H)，7.03(s，1H)，6.40-6.34(m，1H)，2.53(s，3H)，2.40(s，3H).

<实施例8-33>(Z)-3-((1H-咪唑-2-基)亚甲基)-5-羟基-4，6-二甲基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-2(3H)-酮(I-33)的制备

¹H-NMR((CD3)2SO)δ14.91(br s，1H)，11.66(s，1H)，8.62(s，1H)，7.85(d，J＝1.1Hz，2H)，7.76(s，1H)，2.46(s，3H)，2.37(s，3H).

<实施例8-34>(Z)-3-((1H-咪唑-4-基)亚甲基)-5-羟基-4，6-二甲基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-2(3H)-酮(I-34)的制备

¹H-NMR((CD3)2SO)δ13.67(s，1H)，11.06(s，1H)，7.95(s，1H)，7.74(s，1H)，7.67(s，1H)，2.45(s，3H)，2.33(s，3H).

<实施例8-35>(Z)-5-羟基-4，6-二甲基-3-(噻唑-2-基亚甲基)-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-2(3H)-酮(I-35)的制备

¹H-NMR((CD3)2SO)δ10.99(s，1H)，8.31(s，1H)，8.09(d，J＝3.1Hz，1H)，8.00(d，J＝3.1Hz，1H)，7.96(s，1H)，2.48(s，3H)，2.35(s，3H).

<实施例8-36>(Z)-3-((3，5-二甲基-1H-吡咯-2-基)亚甲基)-5-羟基-4，6-二甲基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-2(3H)-酮(I-36)的制备

¹H-NMR((CD3)2SO)δ13.26(s，1H)，10.99(s，1H)，8.13(s，1H)，7.43(s，1H)，6.00(d，J＝2.2Hz.1H)，2.46(s，3H)，2.33(s，3H)，2.31(s，3H)，2.23(s，3H).

<实施例8-37>(Z)-5-((5-羟基-4，6-二甲基-2-氧代-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3(2H)-亚基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸(I-37)的制备

¹H-NMR((CD3)2SO)δ13.72(s，1H)，12.08(br s，1H)，11.11(s，1H)，8.17(br s，1H)，7.49(s，1H)，2.52(s，3H)，2.47(s，3H)，2.42(s，3H)，2.33(s，3H).

<实施例8-38>(Z)-乙基-5-((5-羟基-4，6-二甲基-2-氧代-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3(2H)-亚基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-羧酸酯(I-38)的制备

¹H-NMR((CD3)2SO)δ13.8(s，1H)，11.19(br s，1H)，8.25(br s，1H)，7.48(s，1H)，4.25-4.13(m，2H)，2.50-2.46(m，6H)，2.42(s，3H)，2.33(s，3H)，1.33-1.25(m，3H).

<实施例8-39>(Z)-N-(2-(二乙基氨基)乙基)-5-((5-羟基-4，6-二甲基-2-氧代-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3(2H)-亚基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺(I-39)的制备

¹H-NMR((CD3)2SO)δ13.50(s，1H)，11.03(s，1H)，8.13(br s，1H)，7.42(s，1H)，7.36(t，J＝5.2Hz，1H)，3.30-3.21(m，2H)，2.50-2.37(m，12H)，2.30(s，6H)，0.95(t，J＝7.0Hz，6H).

<实施例8-40>(Z)-N-(2-(乙基氨基)乙基)-5-((5-羟基-4，6-二甲基-2-氧代-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3(2H)-亚基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺(I-40)的制备

¹H-NMR(CD3OD)δ13.30(s，1H)，7.76(s，1H)，3.69(s，2H)，3.25(s，2H)，3.13(s，2H)，2.71(s，3H)，2.56-2.38(m，9H)，1.35(s，3H).

<实施例8-41>(Z)-N-环己基-5-((5-羟基-4，6-二甲基-2-氧代-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3(2H)-亚基)甲基)-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺(I-41)的制备

¹H-NMR((CD3)2SO)δ13.49(s，1H)，11.08(br s，1H)，8.21(br s，1H)，7.55(d，J＝8.0Hz，1H)，7.45(s，1H)，3.78-3.62(m，1H)，2.46(s，3H)，2.40(s，3H)，2.33(s，3H)，2.29(s，3H)，1.85-1.66(m，4H)，1.63-1.53(m，1H)，1.36-1.07(m，5H).

<实施例8-42>(Z)-5-((5-羟基-4，6-二甲基-2-氧代-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-3(2H)-亚基)甲基)-2，4-二甲基-N-(2-(哌啶-1-基)乙基)-1H-吡咯-3-甲酰胺(I-42)的制备

¹H-NMR((CD3)2SO)δ13.54(s，1H)，7.48-7.42(m，2H)，3.35-3.25(m，2H)，2.46(s，3H)，2.43(s，3H)，2.40-2.24(m，12H)，1.55-1.27(m，6H).

<实施例8-43>(Z)-3-((3，5-二甲基-4-(哌啶-1-羰基)-1H-吡咯-2-基)亚甲基)-5-羟基-4，6-二甲基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-2(3H)-酮(I-43)的制备

¹H-NMR((CD3)2SO)δ13.46(s，1H)，11.09(s，1H)，8.21(br s，1H)，7.43(s，1H)，3.60-3.40(m，4H)，2.46(s，3H)，2.33(s，3H)，2.27(s，3H)，2.17(s，3H)，1.65-1.36(m，6H).

<实施例8-44>(Z)-3-((3，5-二甲基-4-(吡咯烷-1-羰基)-1H-吡咯-2-基)亚甲基)-5-羟基-4，6-二甲基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-2(3H)-酮(I-44)的制备

¹H-NMR((CD3)2SO)δ 13.43(s，1H)，11.09(s，1H)，8.18(s，1H)，7.43(s，1H)，3.51-3.40(m，2H)，3.27-3.18(m，2H)，2.46(s，3H)，2.33(s，3H)，2.29(s，3H)，2.19(s，3H)，1.92-1.74(m，4H).

<实施例8-45>(Z)-3-((3，5-二甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-羰基)-1H-吡咯-2-基)亚甲基)-5-羟基-4，6-二甲基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-2(3H)-酮(I-45)的制备

¹H-NMR((CD3)2SO)δ13.49(s，1H)，11.11(s，1H)，8.21(br s，1H)，7.45(s，1H)，3.49-3.35(m，4H)，2.47(s，3H)，2.33(s，3H)，2.31-2.27(m，7H)，2.21-2.17(m，6H).

<实施例8-46>(Z)-3-((3，5-二甲基-4-(吗啉-4-羰基)-1H-吡咯-2-基)亚甲基)-5-羟基-4，6-二甲基-1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-2(3H)-酮(I-46)的制备

¹H-NMR((CD3)2SO)δ13.49(s.1H)，11.10(s，1H)，8.19(br s，1H)，7.43(s，1H)，3.62-3.54(m，4H)，3.53-3.39(m，4H)，2.46(s，3H)，2.33(s，3H).2.29(s，3H)，2.20(s，3H).

<实验例1>细胞毒性测试

通过MTT测定测量细胞毒性测试。将各细胞系以1×10⁴个细胞/孔的密度在96孔板中培养。在24小时之后，处理包含1％FBS(胎牛血清)的培养基并与化合物或化合物的溶液反应48小时。

向各孔中添加MTT(3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑溴化物)溶液(5mg/mL)并在培养箱中反应4小时。最后，弃去包含MTT溶液的培养基并添加DMSO以溶解在细胞中形成的甲(5-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-1，3-二苯基甲)。在培养箱中反应30分钟之后，使用微板读数仪在540nm的吸光度下量化甲的形成。

首先，通过用MCF-7(人乳腺癌细胞系)和PANC-1(人胰腺癌细胞系)处理浓度为30μM的化合物以寻找在癌细胞死亡方面有效的化合物来检查每种化合物的细胞毒性。此时，使用舒尼替尼作为对照组。细胞毒性测试的结果示于下表2和3中。

选择显示出针对MCF-7细胞的等于或大于70％的细胞毒性的化合物，显示出比舒尼替尼更好的抑制活性的化合物，并且特别是在化学结构方面有重大意义的化合物以在8种不同的人癌细胞系中测量细胞毒性IC50。本文中使用的人癌细胞系为MCF-7(乳腺癌)、MDA-MB-231(乳腺癌)、HT-29(结肠癌)、DU145(前列腺癌)、U937(髓细胞样白血病)、A549(肺癌)、PANC-1(胰腺癌)和MIA PaCa-2(胰腺癌)。测量结果示于下表4至11中。

显示出大于或等于参照药物舒尼替尼针对各癌细胞系的细胞毒性的化合物为针对MCF-7的I-19、I-24、I-39、I-40和I-41，针对MDA-MB-231的I-24、I-39、I-40和I-41，针对HT-29的I-24、I-40和I-41，针对DU-145的I-15、I-17、I-18、I-22、I-24、I-39、I-40和I-41，针对U937的I-24和I-41，以及针对A-549的I-24、I-40和I-41。如下表10和11所示，发现PANC-1和MIA PaCa-2细胞系、胰腺癌细胞系对吉西他滨具有抗性。显示出大于或等于参照药物舒尼替尼针对这些细胞系的细胞毒性的化合物为针对PANC-1的I-18、I-19、I-24、I-39、I-40、I-41和I-46以及针对MIAPaCa-2的I-39、I-40和I-41。对于为正常细胞系的HEK293(人胚肾细胞系)和CHO-K1(蚕卵巢细胞系)测量包括上述化合物的20种化合物的细胞毒性IC50。测量结果示于下表12和13中。

所有20种化合物均显示出针对HEK293和CHO-K1细胞的比舒尼替尼更高的IC50值，表明它们是比舒尼替尼更安全的化合物。

[表2]

[表3]

[表4]

[表5]

[表6]

[表7]

[表8]

[表9]

[表10]

[表11]

[表12]

[表13]

工业实用性

根据本发明的7-氮杂吲哚啉-2-酮衍生物或其可药用盐可以有利地用作用于抑制癌症生长和癌症转移的药物。