发明背景
在本说明书中对明显在先公布的文件的列出或讨论不应必然视为承认该文件是现有技术的一部分或者是公知常识。
泛素是由76个氨基酸组成的小蛋白，其对于细胞中蛋白质功能的调节是重要的。泛素化和去泛素化是酶促介导的过程，通过该过程泛素通过去泛素化酶(DUB)共价结合靶蛋白或从靶蛋白上裂解，在去泛素化酶中人细胞中存在大约95种DUB，它们基于序列同源性被分成亚家族。USP家族的特征在于它们共同的Cys和His盒，该盒包含对于它们的DUB活性至关重要的Cys和His残基。泛素化和去泛素化过程涉及许多细胞功能的调节，包括细胞周期进程、细胞凋亡、细胞表面受体的修饰、DNA转录的调节和DNA修复。因此，泛素系统涉及许多疾病状态的发病机制，所述的疾病状态包括炎症、病毒感染、代谢功能障碍、CNS紊乱和肿瘤发生(Clague等人，Physiol Rev 93：1289-1315，2013)。
泛素是线粒体动力学的主要调节剂。线粒体是动态细胞器，其生物发生、融合和分裂事件经由许多关键因素(如线粒体融合蛋白)的泛素化通过翻译后调控而得到调节。尽管已知泛素连接酶(如帕金蛋白)使许多线粒体蛋白质泛素化，但是直到最近，去泛素化酶仍然是难以理解的。USP30是在线粒体外膜中发现的517个氨基酸的蛋白质(Nakamura等人，Mol Biol 19：1903-11，2008)。它是具有线粒体寻址信号的唯一去泛素化酶，并且已显示它使许多线粒体蛋白质去泛素化。已证明USP30抵抗帕金蛋白介导的线粒体自噬，并且USP30活性的下降可以拯救线粒体自噬中帕金蛋白介导的缺陷(Bingol等人，Nature 510：370-5，2014)。
线粒体功能障碍可以被定义为线粒体含量减少(线粒体自噬或线粒体生物发生)、线粒体活性和氧化磷酸化降低以及活性氧物质(ROS)产生的调节。因此，线粒体功能障碍在非常众多的老化过程和病理学中发挥作用，包括，但不限于，在神经变性疾病(例如，帕金森病(PD)、阿尔茨海默病、亨廷顿病、肌萎缩侧索硬化(ALS)、多发性硬化)、癌症、糖尿病、代谢紊乱、心血管疾病、精神疾病(例如，精神分裂症)和骨关节炎。
例如，帕金森病影响全世界约1000万人(帕金森病基金会(Parkinson’s Disease Foundation))，且其特征在于黑质中多巴胺能神经元的丧失。PD潜在的确切机制尚不清楚；然而，线粒体功能障碍越来越多地被认为是PD中多巴胺能神经元易感性的关键决定因素，并且是家族性和散发性疾病二者的特征，以及毒素诱导的帕金森综合征中的特征。帕金蛋白是涉及早发性PD的许多蛋白质之一。虽然大多数PD病例与α-突触核蛋白中的缺陷相关，但10％的帕金森病例与特定的基因缺陷有关，其中之一是在泛素E3连接酶帕金蛋白中。帕金蛋白和蛋白激酶PTEN诱导的推定激酶1(PINK1)共同作用使导致线粒体自噬的受损线粒体的线粒体膜蛋白泛素化。线粒体自噬的失调导致氧化性应激提高，它被描述为PD的特征。因此，抑制USP30可能是治疗PD的潜在策略。例如，具有导致活性降低的帕金蛋白突变的PD患者可以通过抑制USP30得到治疗性代偿。
据报道，USP30的耗尽增强了线粒体的线粒体自噬清除，并且还增强了帕金蛋白诱导的细胞死亡(Liang等人，EMBO Reports 2015 DOI：10.15252/embr.201439820)。还显示USP30调节与帕金蛋白超表达无关的BAX/BAK-依赖性细胞凋亡。USP30的耗尽使癌细胞对BH-3模拟物(如ABT-737)敏感，而不需要帕金蛋白超表达。因此，已针对USP30证明了抗细胞凋亡作用，因此USP30是抗癌疗法的潜在靶标。
在治疗多发性骨髓瘤的蛋白酶体抑制剂硼替佐米批准后，泛素-蛋白酶体系统作为治疗癌症的靶标已获得关注。使用硼替佐米的延长治疗受限于其相关毒性和耐药性。然而，预期靶向蛋白酶体的泛素-蛋白酶体途径上游的特定方面(如DUB)的治疗策略被更好的耐受(Bedford等人，Nature Rev 10：29-46，2011)。因此，对于抑制DUB(如USP30)的化合物和药物组合物存在需求，它们用于治疗观察到DUB活性的适应证，包括，但不限于，涉及线粒体功能障碍的状况和癌症。
发明概述
根据本发明的第一方面，提供式(I)的化合物
或其药学上可接受的盐，其中：
R1b，R1c，R1d，R1e各自独立地表示氢或任选被取代的C1-C6烷基，或R1b连接至R1a或R1c形成任选被取代的环烷基环，或R1e连接至R1d或R1f形成任选被取代的环烷基环；
R1a和R1g各自独立地表示氢、氟、氰基、羟基、氨基、任选被取代的C1-C6烷基或任选被取代的C1-C6烷氧基，或R1a和R1g一起形成任选被取代的环烷基环，或R1a连接至R1b形成任选被取代的环烷基环，或R1g连接至R1f形成任选被取代的环烷基环；
R1f表示氢、氟、氰基、羟基、氨基、任选被取代的C1-C6烷基、任选被取代的C1-C6烷氧基，或R1f连接至R1g或R1e形成任选被取代的环烷基环，或R1f与R2一起形成任选进一步被取代的杂环；
R2表示氢、任选被取代的C1-C6烷基或R2与R1f一起形成任选进一步被取代的杂环；
X是C(R3)(R4)，其中R3和R4各自独立地表示氢、氰基、任选被取代的C1-C6烷基、5或6元杂芳基或芳基环或R3和R4一起形成任选被取代的3至6元杂烷基或环烷基环；
L表示共价键、-SO-、-SO2-、-C(O)-、-C(O)O-、-CONR5-、-SO2NR5-、-C(O)-C1-C6亚烷基、-C(O)-C2-C6亚烯基、C1-C6亚烷基-C(O)-、C2-C6亚烯基-C(O)-、-C1-C6亚烷基-NR5CO-、-C1-C6亚烷基-CONR5-、任选被取代的C1-C6亚烷基或任选被取代的-C2-C6亚烯基；
A表示被取代的单环杂芳基或芳基环或任选被取代的双环杂芳基或芳基环；
R5表示氢或任选被取代的C1-C6烷基。
在一方面，本发明还涉及药物组合物，其包含本发明的化合物以及一种或多种药学上可接受的赋形剂。
在另一方面，本发明的化合物可用于治疗癌症或者涉及线粒体功能障碍的疾病或状况。
附图简述
图1是显示使用荧光偏振测定法测定的USP30的蛋白水解活性的图。将所示的不同体积的纯化USP30与经由异肽键连接至泛素的TAMRA标记的肽一起孵育。
发明详述
下面的定义和解释用于包括说明书和权利要求书在内的整个文件中使用的术语。对本申请中所述的化合物(例如式(I)化合物)的提及包括对式(I)的提及，包括其任意子通式的实施方案，例如式(IA)。
当式(I)化合物的任意基团被称为任选被取代时，该基团可以是被取代的或未被取代的。取代可以为特定取代基的一个或多个，所述的取代基可以相同或不同。将被理解的是，将选择取代基的数量和性质以避免任意空间上不合需求的组合。
在本说明书的上下文中，除非另有说明，否则烷基、亚烷基、烷氧基、烯基或炔基取代基(或连接基)基团或取代基基团中的烷基、烯基部分可以是直链或支链的。烷基、亚烷基和烯基链还可以包括居间的杂原子，例如氧。
Cx-Cy烷基是指具有x-y个碳原子的饱和脂族烃基，其可以是直链或支链的。例如C1-C6烷基包含1至6个碳原子且包括C1、C2、C3、C4、C5和C6。“支链”是指基团上存在至少有一个碳分支点。例如，叔丁基和异丙基都是支链基团。C1-C6烷基的实例包括甲基、乙基、丙基、2-甲基-1-丙基、2-甲基-2-丙基、2-甲基-1-丁基、3-甲基-1-丁基、2-甲基-3-丁基、2,2-二甲基-1-丙基、2-甲基-戊基、3-甲基-1-戊基、4-甲基-1-戊基、2-甲基-2-戊基、3-甲基-2-戊基、4-甲基-2-戊基、2,2-二甲基-1-丁基、3,3-二甲基-1-丁基、2-乙基-1-丁基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基和正己基。R1a、R1b、R1c、R1d、R1e、R1f、R1g、R2、R3、R4、R5、R7、R8、R9、R10、R11、R12、Q1的定义内以及R6的取代基的定义内的C1-C6烷基、C1-C4烷基和C1-C3烷基可以未被取代或被本申请中所定义的一个或多个取代基取代。因此，被取代的C1-C6烷基的实例包括CF3、CH2CF3、CH2CN、CH2OH和CH2CH2OH。
Cx-Cy亚烷基基团或部分可以是直链或支链的，并且是指由上文所定义的Cx-Cy烷基少一个氢原子形成的二价烃基。C1-C6亚烷基可以包括居间的杂原子，例如氧，因此包括亚烷基氧基。本申请中所使用的亚烷基氧基还扩展至特定氧原子或非特定氧原子(例如单个氧原子)位于亚烷基链内的实施方案，例如CH2CH2OCH2或CH2OCH2。C1-C6亚烷基的实例包括亚甲基、亚甲氧基、亚乙基、亚乙氧基、亚正丙基、亚正丙氧基、亚正丁基、亚正丁氧基、甲基亚甲基和二甲基亚甲基。除非另有描述，否则R7、R8、R9、L、Q1和Q2的定义内的C1-C6亚烷基、C1-C4亚烷基和C1-C3亚烷基可以是未被取代的或被本申请中所定义的一个或多个取代基取代。
C2-C6烯基是指包含至少两个碳原子和至少一个双键的直链或支链烃链基团并且包括C2-C4烯基。烯基的实例包括乙烯基、丙烯基、2-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、1-己烯基、2-甲基-1-丙烯基、1,2-丁二烯基、1,3-戊二烯基、1,4-戊二烯基和1-己二烯基。除非另有描述，否则Q1的定义内以及R6的取代基的定义内的C2-C6烯基可以是未被取代的或被本申请中所定义的一个或多个取代基取代。
C2-C6亚烯基是指由如上所定义的C2-C6烯基少氢原子形成的直链或支链烃链基团。C2-C6亚烯基的实例包括亚乙烯基、亚丙烯基和亚丁烯基。除非另有描述，否则L、Q1和Q2的取代基的定义内的C2-C6亚烯基和C2-C4亚烯基可以是未被取代的或被本申请中所定义的一个或多个取代基取代。
C2-C6炔基是指包含至少两个碳原子和至少一个三键的直链或支链烃链基团。烯基的实例包括乙炔基、丙炔基、2-丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基和1-己炔基。除非另有具体说明，否则Q1的定义内以及R6的取代基的定义内的C2-C6炔基可以是未被取代的或被本申请中所定义的一个或多个取代基取代。
C1-C6烷氧基是指根据上述Cx-Cy烷基定义具有-O-Cx-Cy烷基的基团或基团的一部分。C1-C6烷氧基包含1-6个碳原子且包括C1、C2、C3、C4、C5和C6。C1-C6烷氧基的实例包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、戊氧基和己氧基。本申请中所使用的烷氧基还扩展至特定氧原子或非特定氧原子(例如单个氧原子)位于烷基链内的实施方案，例如CH2CH2OCH3或CH2OCH3。因此，烷氧基可以通过碳连接至分子的其余部分，例如-CH2CH2OCH3，或者，烷氧基通过氧连接至分子的其余部分，例如-OC1-6烷基。在一种情况中，烷氧基通过氧连接至分子的其余部分，但该烷氧基包含另一个氧原子，例如-OCH2CH2OCH3。除非另有具体说明，否则R1a、R1f、R1g、Q1的定义内以及R6的取代基的定义内的C1-C6烷氧基和C1-C3烷氧基可以是未被取代的或被本申请中所定义的一个或多个取代基取代。被取代的C1-C6烷氧基的实例因此包括OCF3、OCHF2、OCH2CF3、CH2CH2OCH3和CH2CH2OCH2CH3。
术语“卤素”或“卤代”是指氯、溴、氟或碘原子，特别是指氯或氟原子。
术语“氧代”是指＝O。
为了避免疑问，将被理解的是，本申请中所公开的以及R1a、R1b、R1c、R1d、R1e、R1f、R1g、R2、R3、R4、R6、R10、R11、R12、环A的定义内以及R6的取代基的定义内的环烷基、杂环基、芳基和杂芳基环不包括任何不稳定的环结构，或在杂芳基和杂环环系统的情况下，不包括任何O-O、O-S或S-S键。所述的环系统可以是单环或双环。双环系统包括桥接、稠合和螺环系统。取代基(如果存在)可以连接到任何适合的环原子上，该环原子可以是碳原子或者在杂芳基和杂环环系统的情况下可以是杂原子。环上的取代还可以包括在该取代位置上环原子的变化。例如，苯环上的取代可以包括取代位置上的环原子从碳至氮的变化，得到吡啶环。
“环烷基”是指单环饱和或部分不饱和的非芳族环，其中所有的环原子均为碳，且具有所示数目的环原子。例如，C3-C10环烷基是指包含3-10个碳原子的单环或双环烃环。C3-C10环烷基的实例为环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基和十氢萘基。双环环戊基包括桥接环系，例如双环庚烷和双环辛烷。除非另有具体说明，否则R1a、R1b、R1c、R1d、R1e、R1f、R1g、R3、R4、R6、R10、R12、R13的定义内以及R6的取代基的定义内的环烷基可以是未被取代的或被本申请中所定义的一个或多个取代基取代。
“芳基”基团/部分是指包含至少一个芳族基团并且具有5至10个碳原子环成员的任何单环或双环烃基。芳基的实例包括苯基和萘基。双环可以为稠合芳族环，其中两个环均为芳族的，例如萘基。优选的芳基是苯基和萘基，更优选是苯基。除非另有具体说明，否则R3、R4、R6、R10、R11、R12、环A的定义内以及R6的取代基的定义内的芳基可以是未被取代的或被本申请中所定义的一个或多个取代基取代。
本申请中所使用的“杂芳基”是指本领域技术人员已知的稳定组合的多不饱和的单环或双环5至10元芳族部分，其包含至少一个且至多5个杂原子，特别是1、2或3个杂原子，所述的杂原子选自N、O和S，且其余环原子为碳原子。杂芳基环氮和硫原子任选被氧化，且氮原子任选被季铵化。杂芳基环可以是单个芳族环或稠合双环，其中双环环系可以是芳族的，或稠合环之一为芳族的而另一个是至少部分饱和的。在一个实例中，双环杂芳基是整个稠合环系是芳族的芳基。环之一是芳族的且另一个是至少部分饱和的稠合环的实例包括四氢吡啶并吡嗪基、四氢喹啉基和四氢异喹啉基。在这类情况中，双环经由L与基团的连接是相对于氰基吡咯烷核的取代基，例如N(R2)，由双环的芳族环连接。双环杂芳基可以在稠合环的任一环上具有至少一个杂原子。例如，芳族环与部分饱和的环稠合的双环在所述的族环或部分饱和的环中可以含有所述的至少一个杂原子。双环与所述基团的连接(它是取代基)可以经由包含杂原子的环或仅包含碳的环。杂芳基连接至基团(它是取代基)的点可以通过碳原子或杂原子(例如，氮)。在环A为杂芳基的情况中，该环是芳族环，且可以与另一个芳族或部分饱和的环稠合。杂芳基的实例包括吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、呋喃基、吡咯基、唑基、噻唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、吲哚基、吲嗪基、异吲哚基、嘌呤基、呋咱基、咪唑基、吲唑基、异噻唑基、异唑基、二唑基、四唑基、噻二唑基、苯并呋喃基、异苯并呋喃基、苯并噻吩基、异苯并噻吩基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、萘啶基、蝶啶基、吡嗪基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、咪唑并吡啶基、吡唑并吡啶基、噻唑并吡啶基、三嗪基、二氢吡啶基、二氢吡咯并吡啶基、异二氢吲哚基、苯并唑基、喹喔啉基、苯并吗啉基、四氢吡啶并吡嗪基、四氢喹啉基和四氢异喹啉基。除非另有具体说明，否则R3、R4、R6、R10、R11、R12、环A的定义内以及R6的取代基的定义内的杂芳基可以是未被取代的或被本申请中所定义的一个或多个取代基取代。
除非另有描述，否则本申请中描述环中所使用的“杂环基”或“杂环”是指单环饱和的或部分不饱和的非芳族环，或双环饱和的或部分不饱和的环(其中双环环系是非芳族的)，所述的单环或双环具有例如3至10个成员或5至10个成员，其中环的至少一个成员且至多5个成员、特别是1、2或3个成员是选自N、O和S的杂原子，且其余环原子为碳原子，以本领域技术人员已知的稳定组合。例如，R2和R3可以一起形成5至7元杂环，该杂环并入了所述的胺氮。杂环氮和硫原子可以任选被氧化，且氮原子可以任选被季铵化。如本申请中所使用的，杂环可以是与另一个环系稠合的环以形成双环，即与另一个环系统共有杂环碳的一个或两个。在杂环基是双环的情况中，第二个环可以是芳族的，例如稠合的苯基、吡啶基、吡唑基等。双环杂环基在稠合环的任一环中可以具有至少一个杂原子。杂环基可以通过碳或杂原子连接至分子的其余部分，且在杂环基是双环的情况中，连接可以经由含杂原子的环或稠合的环。在杂环基是双环(其中第二个环是芳族的)的情况中，双环基团与所述基团的连接(它是相对于所述的氰基吡咯烷核的取代基)是来自所述的非芳族环。杂环基的实例包括氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、氮杂庚环基、二氮杂庚环基、二氢呋喃基(例如2,3-二氢呋喃基、2,5-二氢呋喃基)、二氧戊环基、吗啉基、唑烷基、嗪基、二氢吲哚基、异二氢吲哚基、哌嗪基、四氢呋喃基、硫代吗啉基、二氢吡喃基(例如3,4-二氢吡喃基、3,6-二氢吡喃基)、高哌嗪基、二烷基、六氢嘧啶基、吡唑啉基、吡唑烷基、4H-喹嗪基、奎宁环基、四氢吡喃基、四氢吡啶基、四氢嘧啶基、四氢噻吩基、噻唑烷基、苯并吡喃基、四氢喹啉基、苯并吗啉基和四氢异喹啉基。除非另有具体说明，否则R1f、R2、R3、R4、R6、R10、R11、R12的定义内以及R6的取代基的定义内的杂环基可以是未被取代的或被本申请中所定义的一个或多个取代基取代。被取代的杂环基环的实例包括，4,5-二氢-1H-马来酰亚氨基、四亚甲基亚砜和乙内酰脲基。
适用于任意基团的“任选被取代的”是指所述的基团，如果期望，可以被一个或多个取代基(例如1、2、3或4个取代基)取代，它们可以相同或不同。
例如在R1a、R1b、R1c、R1d、R1e、R1f、R1g、R2、R3、R4、R5、R7、R8、R9、R10、R11、R12、Q1的定义内以及R6的取代基的定义内，“被取代的”和“任选被取代的”C1-C6烷基(包括C1-C4烷基、C1-C3烷基和C1-C2烷基)和C1-C6烷氧基(包括C1-C4烷氧基、C1-C3烷氧基和C1-C2烷氧基)和C2-C6烯基(包括C2-C4烯基)和C2-C6炔基(包括C2-C4炔基)的合适取代基的实例，以及例如在R5、R7、R8、R9、L、Q1和Q2的定义内，C1-C6亚烷基(包括C1-C3亚烷基)和C2-C6亚烯基的合适取代基的实例包括卤素、羟基、硫氢基、氰基、氨基、硝基和SF5(已知的硝基模拟物)，特别是卤素(优选氟或氯)、羟基和氰基。
例如在R1a、R1b、R1c、R1d、R1e、R1f、R1g、R2、R3、R4、R6、R10、R11、R12的定义内以及R6的取代基的定义内，“被取代的”和“任选被取代的”环(即环烷基、杂环基、芳基和杂芳基环)的合适取代基的实例包括卤素、氰基、氧代、硝基、氨基、酰胺、羟基、C1-C6烷基或C1-C3烷基、C1-C6烷氧基或C1-C3烷氧基、芳基、杂芳基、杂环基、C3-C6环烷基、C1-3烷基氨基、C2-6烯基氨基、二-C1-C3烷基氨基、C1-C3酰基氨基、二-C1-C3酰基氨基、羧基、C1-C3烷氧基羰基、甲酰胺基、一-C1-3氨基甲酰基、二-C1-3氨基甲酰基或烃基部分自身被卤素(尤其是氟)、羟基、氰基、氨基、硝基、或SF5(已知的硝基模拟物)取代的任意上述基团。在含有氧原子的基团，例如羟基和烷氧基中，氧原子可以被硫替代，形成基团例如硫基(SH)和硫-烷基(S-烷基)。因此，任选的取代基包括基团例如S-甲基。在硫-烷基中，硫原子可以进一步被氧化成亚砜或砜，因此任选的取代基包括基团例如S(O)-烷基和S(O)2-烷基。
“被取代的”和“任选被取代的”环的合适取代基的实例特别地包括卤素、氧代、氰基、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基、杂环基、环烷基、杂芳基或芳基，其中烷基或烷氧基任选被一个或多个(例如，一个、两个或三个)取代基取代，所述的取代基选自卤素、羟基、硫氢基、氰基、氨基、硝基和SF5。特别地，本申请中所公开的“被取代的”和“任选被取代的”环的合适取代基包括氟、氯、氧代、氰基、C1-C3烷基、C1-C3烷氧基，其中烷基或烷氧基任选被一个或多个(例如，一个、两个或三个)取代基取代，所述的取代基选自卤素、羟基、硫氢基、氰基、氨基、硝基和SF5，特别是一个或多个氟。
被取代的基团因此包括，例如Br、Cl、F、CN、Me、Et、Pr、Bu、i-Bu、OMe、OEt、OPr、C(CH3)3、CH(CH3)2、CF3、OCF3、C(O)NHCH3、环丙基、苯基等。在芳基的情况中，取代基可以是来自芳基环中邻近碳原子的环形式，例如环缩醛类，如O-CH2-O。
术语“治疗(treat)”或“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”包括预防并且意指在暂时或永久基础上改善、缓解症状、消除症状的原因作用，或防止或减缓所称的障碍或状况的症状的出现。本发明的化合物可用于治疗人类和非人类动物。
化合物的剂量是预防患者所患的障碍的症状发生或治疗该障碍的一些症状有效的量。“有效量”或“治疗有效量”或“有效剂量”是指足以引起所期望的药理效应或治疗效果从而导致有效预防或治疗该障碍的量。障碍的预防表现为在医学显著的程度上延迟该障碍的症状发作。障碍的治疗表现为与该障碍相关的症状的减少或该障碍的症状复发的改善。
本发明化合物的药学上可接受的盐包括但不限于加成盐(例如磷酸盐、硝酸盐、硫酸盐、硼酸盐、乙酸盐、马来酸盐、柠檬酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、甲磺酸盐、苯甲酸盐、水杨酸盐和氢卤酸盐)、衍生自有机碱(例如锂、钾和钠)的盐、氨基酸(例如甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸和脯氨酸)的盐、无机碱(如三乙基胺、氢氧化物、胆碱、硫胺和N-N'-二乙酰基乙二胺)。其它药学上可接受的盐包括铵盐、被取代的铵盐和铝盐。另外的药学上可接受的盐包括本发明化合物的季铵盐。
用于生产盐的一般方法是本领域技术人员公知的。这类盐可以通过常规方法形成，例如通过游离酸或游离碱形式的化合物与一当量或多当量的合适酸或碱(任选在溶剂或在盐不溶的介质中)反应，然后使用标准技术(例如，真空、通过冷冻干燥或通过过滤)除去所述溶剂或所述介质。也可以通过以另一种反离子交换盐形式的化合物的反离子，例如使用适合的离子交换树脂，来制备盐。
在本发明的化合物以不同的对映体形式和/或非对映异构体形式存在的情况中，本发明涉及制备为异构体混合物或外消旋体的这些化合物，无论它们是以光学纯的形式存在，还是以与其它异构体的混合物形式存在。对映体仅在以等量沿其相反方向旋转平面偏振光的能力方面不同，分别表示为(+)/(S)或(-)/(R)形式。单独的对映体或异构体可以通过本领域中已知的方法制备，例如产物或中间体的光学拆分(例如手性色谱法分离，例如，手性HPLC或不对称合成方法)。类似地，在本发明的化合物作为可替代的互变异构形式存在的情况中，例如，酮/烯醇、酰胺/亚氨酸，则本发明涉及分离的单独互变体以及所有比例的互变体的混合物。
同位素
本申请中所述的化合物可以包含一个或多个同位素取代，并且对特定元素的提及，包括其范围内该元素的所有同位素。例如，对氢的提及，包括其范围内的1H、2H(D)和3H(T)。类似地，对碳和氧的提及分别包括其范围内的12C、13C和14C和16O和18O。同位素的实例包括2H、3H、11C、13C、14C、36Cl、18F、123I、125I、13N、15N、15O、17O、18O、32P和35S。
以类似的方式，对特定官能团的提及也包括其范围内同位素的变化，除非上下文另有说明。例如，对烷基(如乙基)的提及也涵盖该基团上氢原子的一个或多个为氘或氚同位素形式的变化体，例如，全部五个氢原子为氘同位素形式的乙基(全氘代乙基)形式。
同位素可以是放射性的或非放射性的。在一个实施方案中，化合物不含放射性同位素。这类化合物优选用于治疗用途。然而，在另一个实施方案中，化合物可以包含一种或多种放射性同位素。包含这类放射性同位素的化合物在诊断环境中可能是有用的。
某些同位素标记的式(I)的化合物，例如结合了放射性同位素的那些，可用于药物和/或底物组织分布研究。鉴于其容易结合和现成的检测方式，放射性同位素，即3H和14C，对于此目的特别有用。用较重的同位素(即2H)取代可以获得某些由更高的代谢稳定性带来的治疗优点，所述的更高的代谢稳定性例如为增加的体内半衰期或降低的剂量需求，因此在某些情况下可能是优选的。用正电子发射同位素(例如11C、18F、15O和13N)进行取代可用于正电子发射断层摄影术(PET)研究，用于检查受体占有率。通常可以通过本领域技术人员已知的常规技术或通过与所附实施例和制备中描述的那些类似的方法，并使用合适的同位素标记的试剂替代之前使用的非标记试剂，来制备式(I)的同位素标记的化合物。
结晶形式和无定形形式
式(I)的化合物可以以结晶形式或无定形形式存在，并且一些晶型可以以多晶型物存在，其包括在本发明的范围内。式(I)的多晶型物可以使用许多常规分析技术进行表征和区分，所述的技术包括但不限于红外光谱、拉曼光谱、X射线粉末衍射、差示扫描量热法、热重分析和固态核磁共振。
因此，在进一步的实施方案中，本发明提供根据任何所述实施方案的结晶形式的化合物。该化合物可以是50％至100％结晶，更具体地为至少50％结晶，或至少60％结晶，或至少70％结晶，或至少80％结晶，或至少90％结晶，或至少95％结晶，或至少98％结晶，或至少99％结晶，或至少99.5％结晶，或至少99.9％结晶，例如100％结晶。或者，该化合物可以是无定形形式。
本申请中所述的发明涉及无论用什么方法制备的任何所公开的化合物的所有晶型、溶剂合物和水合物。在本申请中所公开的任何化合物具有酸或碱性中心(如羧酸酯或氨基)的范围内，所述的化合物的所有盐形式均包括在本申请中。在药物用途的情况下，盐应视为药学上可接受的盐。
本发明涉及化合物及其盐的任何溶剂合物。优选的溶剂合物是通过将无毒的药学上可接受的溶剂(以下称为溶剂化溶剂)的分子结合到本发明化合物的固态结构(例如晶体结构)中所形成的溶剂合物。这类溶剂的实例包括水、醇(例如乙醇、异丙醇和丁醇)和二甲亚砜。溶剂合物可以通过用溶剂或包含溶剂化溶剂的溶剂混合物重结晶本发明化合物制备。在任何给定情况下是否形成溶剂合物都可以通过使用众所周知的技术和标准技术，例如热重分析(TGE)、差示扫描量热法(DSC)和X射线晶体学，对化合物的晶体进行分析来确定。
溶剂合物可以是化学计量的或非化学计量的溶剂合物。特定的溶剂合物可以是水合物，水合物的实施例包括半水合物、一水合物和二水合物。关于溶剂合物的更详细讨论以及用于制备和表征它们的方法，参见Bryn等人，Solid-State Chemistry of Drugs，第2版，SSCI出版，Inc of West Lafayette，IN，USA，1999，ISBN 0-967-06710-3。
本发明涉及本申请中所定义的化合物的药学上功能性衍生物，包括酯衍生物和/或具有或提供与本发明任何相关化合物相同的生物功能和/或活性的衍生物。因此，出于本发明的目的，该术语还包括本申请中所定义的化合物的前药。
相关化合物的术语“前药”包括在口服或肠胃外施用之后，在体内代谢以实验可检测到的用量并在预定时间内(例如在施用间隔为6-24小时(即每天1-4次)形成所述化合物的任何化合物。
可以通过某种方式修饰化合物上存在的官能团来制备化合物的前药，该方式使得当这种前药被施用于哺乳动物受试者时，修饰物在体内裂解。修饰典型地通过用前药取代基合成母体化合物来实现。前药包括其中化合物中的羟基、氨基、巯基、羧基或羰基分别键合到可在体内裂解以再生游离羟基、氨基、巯基、羧基或羰基的任何基团的化合物。
前药的实例包括但不限于羟基官能团的酯和氨基甲酸酯、羧基官能团的酯基、N-酰基衍生物和N-Mannich碱。关于前药的一般信息可以在例如Bundegaard，H.“Design of Prodrugs”p.1-92，Elsevier，NewYork-Oxford(1985)中找到。
本发明的化合物可以在体内代谢。式(I)的化合物的代谢物也在本发明的范围内。术语“代谢物”是指在细胞或生物体，优选哺乳动物中，衍生自根据本发明的任何化合物的所有分子。优选地，该术语涉及不同于在生理条件下存在于任何所述细胞或生物体中的任何分子的分子。
本申请中所定义的治疗可以作为唯一疗法应用或除本发明的化合物外还可以包括常规手术或放疗或化疗。此外，式(I)化合物还可以与现有用于治疗与癌症相关状况的治疗剂(包括小分子治疗剂或基于抗体的治疗剂)联合使用。
本申请中所述的化合物的特征在于氰基吡咯烷核，其具有连接至该氰基吡咯烷环的甲胺基团，其中该甲胺基团被单环杂芳基或芳基环(其中单环杂芳基或芳基环是被取代的)或任选被取代的双环杂芳基或芳基环取代，任选地经由连接基。
根据本发明的第一方面，提供式(I)的化合物
或其药学上可接受的盐，其中：
R1b、R1c、R1d、R1e各自独立地表示氢或任选被取代的C1-C6烷基，或R1b连接至R1a或R1c形成任选被取代的3至6元环烷基环，或R1e连接至R1d或R1f形成任选被取代的3至6元环烷基环；
R1a和R1g各自独立地表示氢、氟、氰基、羟基、氨基、任选被取代的C1-C6烷基或任选被取代的C1-C6烷氧基，或R1a和R1g一起形成任选被取代的C3-C6环烷基环，或R1a连接至R1b形成任选被取代的C3-C6环烷基环，或R1g连接至R1f形成任选被取代的C3-C6环烷基环；
R1f表示氢、氟、氰基、羟基、氨基、任选被取代的C1-C6烷基、任选被取代的C1-C6烷氧基，或R1f连接至R1g或R1e形成任选被取代的3至6元环烷基环，或R1f与R2一起形成任选进一步被取代的杂环；
R2表示氢、任选被取代的C1-C6烷基或R2与R1f一起形成任选进一步被取代的杂环；
X是C(R3)(R4)，其中R3和R4各自独立地表示氢、氰基、任选被取代的C1-C6烷基、5或6元杂芳基或芳基环或R3和R4一起形成3至6元杂烷基或环烷基环；
L表示共价键、-SO-、-SO2-、-C(O)-、-C(O)O-、-CONR5-、-SO2NR5-、-C(O)-C1-C6亚烷基、-C(O)-C2-C6亚烯基、C1-C6亚烷基-C(O)-、C2-C6亚烯基-C(O)-、-C1-C6亚烷基-NR5CO-、-C1-C6亚烷基-CONR5-、任选被取代的C1-C6亚烷基或任选被取代的-C2-C6亚烯基；
A表示被取代的单环杂芳基或芳基环或任选被取代的双环杂芳基或芳基环；
R5表示氢或任选被取代的C1-C6烷基。
R1a表示氢、氟、氰基、羟基、氨基、任选被取代的C1-C6烷基或任选被取代的C1-C6烷氧基。R1a可以表示氢。R1a可以表示氟。R1a可以表示甲基。当R1a表示氟、氰基、羟基、氨基、任选被取代的C1-C6烷基或任选被取代的C1-C6烷氧基时，R1b、R1c、R1d、R1e、R1f和R1g可以各自表示氢。所述的烷基或烷氧基可以未被取代或被一个或多个取代基取代，该取代基选自卤素、羟基、巯基、氰基、氨基、硝基和SF5，尤其氟。可替代地，R1a可以连接至R1b或R1g形成任选被取代的环烷基环。环烷基环可以含有3、4、5或6个原子，尤其3或4个原子。所述的C3-C6环烷基环可以被取代或未被取代。
R1b、R1c、R1d、R1e可以各自独立地表示氢或任选被取代的C1-C6烷基。具体而言，R1b、R1c、R1d、R1e可以各自独立地表示氢或C1-C3烷基(例如甲基或乙基)。R1b可以是氢或C1-C3烷基并且R1c可以是氢。R1d可以是氢或C1-C3烷基并且R1e可以是氢。所述的烷基可以未被取代或被一个或多个取代基取代，该取代基选自卤素、羟基、巯基、氰基、氨基、硝基和SF5。尤其R1b、R1c、R1d、R1e各自表示氢。
R1b可以表示氢。R1b可以表示C1-C6烷基。R1b可以表示C1-C3烷基，例如，甲基或乙基。当R1b表示C1-C6烷基时，R1a、R1c、R1d、R1e、R1f和R1g可以各自表示氢。所述的烷基可以未被取代或被一个或多个取代基取代，该取代基选自卤素、羟基、巯基、氰基、氨基、硝基和SF5，尤其氟。
R1c可以表示氢。R1c可以表示C1-C6烷基。R1c可以表示C1-C3烷基，例如，甲基或乙基。当R1c表示C1-C6烷基时，R1a、R1b、R1d、R1e、R1f和R1g可以各自表示氢。所述的烷基可以未被取代或被一个或多个取代基取代，该取代基选自卤素、羟基、巯基、氰基、氨基、硝基和SF5，尤其氟。
R1d可以表示氢。R1d可以表示C1-C6烷基。R1d可以表示C1-C3烷基，例如，甲基或乙基。当R1d表示C1-C6烷基时，R1a、R1b、R1c、R1e、R1f和R1g可以各自表示氢。所述的烷基可以未被取代或被一个或多个取代基取代，该取代基选自卤素、羟基、巯基、氰基、氨基、硝基和SF5，尤其氟。
R1e可以表示氢。R1e可以表示C1-C6烷基。R1e可以表示C1-C3烷基，例如，甲基或乙基。当R1e表示C1-C6烷基时，R1a、R1b、R1c、R1d、R1f和R1g可以各自表示氢。所述的烷基可以未被取代或被一个或多个取代基取代，该取代基选自卤素、羟基、巯基、氰基、氨基、硝基和SF5，尤其氟。
可替代地，R1b可以连接至R1c形成环烷基环。另外，或可替代地，R1d可以连接至R1e形成环烷基环。环烷基环可以含有3、4、5或6个原子，尤其3或4个原子。当R1b和R1c一起形成C3-C6环烷基环时，R1a、R1d、R1e、R1f和R1g可以是氢。当R1d和R1e一起形成环烷基环时，R1a、R1b、R1c、R1f和R1g可以是氢。环烷基环可以被取代或未被取代。
R1f可以表示氢、氟、氰基、羟基、氨基、任选被取代的C1-C6烷基或任选被取代的C1-C6烷氧基。所述的烷基和烷氧基可以被一个或多个取代基取代，该取代基选自卤素、羟基、巯基、氰基、氨基、硝基和SF5。具体而言，R1f可以表示氢、氟、C1-C3烷基或被取代的C1-C3烷氧基。R1f可以表示氟。R1f可以表示甲基。R1f可以表示甲氧基。R1f可以表示CF3。R1f可以表示OCF3。在特定的实例中，R1f表示氢。
R1g表示氢、氟、氰基、羟基、氨基、任选被取代的C1-C6烷基或任选被取代的C1-C6烷氧基。R1g可以表示氢。R1g可以表示氟。R1g可以表示甲基。当R1g表示氟、氰基、羟基、氨基、任选被取代的C1-C6烷基或任选被取代的C1-C6烷氧基时，R1a、R1b、R1c、R1d、R1e和R1f可以各自表示氢。所述的烷基或烷氧基可以未被取代或被一个或多个取代基取代，该取代基选自卤素、羟基、巯基、氰基、氨基、硝基和SF5，尤其氟。可替代地，R1g连接至R1a或R1f形成任选被取代的环烷基环。环烷基环可以含有3、4、5或6个原子，尤其3或4个原子。当R1g形成C3-C6环烷基环时，R1b、R1c、R1d、R1e和R1a/R1f可以各自表示氢。环烷基环可以未被取代或被取代。
R1a、R1b、R1c、R1d、R1e、R1f和R1g之一可以不是氢，其余的各自是氢。
R1a、R1b、R1c、R1d、R1e、R1f和R1g之二可以不是氢，其余的各自是氢。
R1a、R1b、R1c、R1d、R1e、R1f和R1g之三可以不是氢，其余的各自是氢。
R1a、R1b、R1c、R1d、R1e、R1f和R1g之四可以不是氢，其余的各自是氢。
R1a、R1b、R1c、R1d、R1e、R1f和R1g之五可以不是氢，其余的各自是氢。
R1a、R1b、R1c、R1d、R1e、R1f和R1g之六可以不是氢，其余的各自是氢。
当R1a、R1b、R1c、R1d、R1e、R1f和R1g中的一、二、三、四、五或六个不是氢时，其余的R基团表示根据上文定义的基团。具体而言，R1a、R1b、R1c、R1d、R1e、R1f和R1g中的一、二、三或四个可以不是氢且其余的各自表示氢。更特别地，R1a、R1b、R1c、R1d、R1e、R1f和R1g中的一个或两个可以不是氢且其余的各自表示氢。
所述的化合物可以是其中R1a、R1b、R1c、R1d、R1e、R1f和R1g都是氢的形式。在这类情况中，所述的化合物可以具有式(IA)：
或其药学上可接受的盐，其中：
R2表示氢或任选被取代的C1-C6烷基；
X是C(R3)(R4)，其中R3和R4各自独立地表示氢、氰基、任选被取代的C1-C6烷基、5或6元杂芳基或芳基环或R3和R4一起形成3至6元杂环基或环烷基环；
L表示共价键、-SO-、-SO2-、-C(O)-、-C(O)O-、-CONR5-、-SO2NR5-、-C(O)-C1-C6亚烷基、-C(O)-C2-C6亚烯基、-C1-C6亚烷基-C(O)-、-C2-C6亚烯基-C(O)-、-C1-C6亚烷基-NR5CO-、-C1-C6亚烷基-CONR5-、任选被取代的C1-C6亚烷基或任选被取代的-C2-C6亚烯基；
A表示被取代的单环杂芳基或芳基环或任选被取代的双环杂芳基或芳基环；
R5表示氢或任选被取代的C1-C6烷基。
R2表示氢，C1-C6烷基或R2与R1f一起形成任选进一步被取代的杂环，其中烷基可以被一个或多个取代基取代，该取代基选自卤素、羟基、巯基、氰基、氨基、硝基和SF5。具体而言，R2表示氢、C1-C3烷基，或与R1f一起形成任选进一步被取代的(即除了被–L-A取代外还被取代)5或6元杂环。R2可以表示氢。R2可以表示甲基或乙基，具体而言，甲基。R2不能连接至R3、R4、L或环A。
在特定的实例中，R1f表示氢并且R2表示氢或C1-C3烷基，优选甲基，或R1f和R2一起形成5至7元杂环(其在环中包含胺氮和X)，其中所述的环任选进一步被一个或多个氟、氧代、氰基、羟基、氨基、C1-C6烷基或C1-C6烷氧基取代，其中所述的烷基或烷氧基可以被一个或多个取代基取代，该取代基选自卤素、羟基、巯基、氰基、氨基、硝基和SF5。当R1f和R2一起形成任选进一步被取代的5至7元杂环基环时，该环与吡咯烷环稠合形成8至10元双环。具体而言，R1f和R2可以一起形成5元杂环，该环未被进一步取代。可替代地，R1f和R2一起形成5元杂环，该环进一步被一个或多个卤素、氧代、氨基、酰胺、C1-C6烷基或C1-C6烷氧基取代。具体而言，所述的5元杂环基环进一步被氧代取代。任何进一步取代是除了用环A取代以外的取代，经由L。
在某些情况中，R1a、R1b、R1c、R1d、R1e和R1g可以各自是氢并且R1f可以是氢或与R2一起可以形成任选进一步被取代的5元杂环基环。
X表示C(R3)(R4)，其中R3和R4各自独立地表示氢、氰基、C1-C6烷基、任选被取代的5或6元杂芳基或芳基环或R3和R4与它们所连接的碳一起形成任选被取代的3至6元杂环基或环烷基环，其中所述的烷基可以未被取代或被一个或多个取代基取代，该取代基选自卤素、羟基、巯基、氰基、氨基、硝基和SF5。所述的3至6元杂环基或环烷基环可以是环丙基或环丁基。具体而言，R3可以表示氢并且R4可以表示氢、氰基、C1-C6烷基、任选被取代的5或6元杂芳基或芳基环或R3和R4与它们所连接的碳一起形成任选被取代的3至6元杂环基或环烷基环，其中所述的烷基可以未被取代或被一个或多个取代基取代，该取代基选自卤素、羟基、巯基、氰基、氨基、硝基和SF5。R3和R4可以各自独立地表示氢、氰基或C1-C3烷基。在特定的实例中，R3和R4各自独立地表示氢、氰基或甲基，例如R3是氢并且R4是氢、氰基或甲基。更特别地，X表示CH2、CHCN或CHMe。
L表示共价键、-SO-、-SO2-、-C(O)-、-C(O)O-、-CONR5-、-SO2NR5-、-C(O)-C1-C6亚烷基、-C(O)-C2-C6亚烯基、C1-C6亚烷基-C(O)-、C2-C6亚烯基-C(O)-、-C1-C6亚烷基-NR5CO-、-C1-C6亚烷基-CONR5-、任选被取代的C1-C6亚烷基或任选被取代的-C2-C6亚烯基。所述的亚烷基和亚烯基任选被氢、羟基、巯基、氰基、氨基、硝基和SF5取代。R5表示氢或C1-C6烷基，其中所述的烷基任选被氢、羟基、巯基、氰基、氨基、硝基和SF5取代。
在特定的实例中，L表示共价键、-SO2-、-C(O)-、-C(O)-C1-C6亚烷基优选-C(O)-C1-C3亚烷基、-C(O)-C2-C6亚烯基优选-C(O)-C2-C4亚烯基或-CONR5-其中R5表示氢或甲基，优选氢。
在本申请中所定义的式(I)中，环A表示5至10元(例如5、6、7、8、9或10元)环，其中该环是被取代的单环杂芳基或芳基环或任选被取代的双环杂芳基或芳基环。所述的杂芳基或芳基环可以直接连接至所述的胺氮原子形成N-芳基键或可以经由连接基连接，即当L不是共价键时。
当所述的环是双环时，第二个环(即不与胺氮连接(直接或经由连接基)的环)可以是芳族的或部分不饱和的，因此尽管不是所述5至10元杂芳基或芳基环中的每个原子需要在芳基系统中，但必须是至少一个在5至10个原子内的芳基或杂芳基环，直接或经由连接基与所述的胺氮连接的正是该芳基或杂芳基环。
环A可以表示5至10元杂芳基或芳基环且当被取代时，可以被一个或多个(例如一、二、三或四个)-Q1-(R6)n，尤其一个或两个Q1-(R6)n取代。
具体而言，环A可以表示5或6元杂芳基或芳基环，该环被一个或多个(例如一、二、三或四个)-Q1-(R6)n取代。
可替代地，环A可以表示9或10元双环杂芳基或芳基环，该环可以任选被一个或多个(例如一、二、三或四个)-Q1-(R6)n取代。
当环A是杂芳基环时，该环可以包含一个或多个(例如1、2或3个)独立地选自氮、氧和硫的杂原子。具体而言，所述的杂芳基环含有至少一个氮原子，例如，1、2或3个氮原子，优选1或2个氮杂原子。
环A可以选自有如下基团组成的组：吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、呋喃基、吡咯基、唑基、噻唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、吲哚基、吲嗪基、异吲哚基、嘌呤基、呋咱基、咪唑基、吲唑基、异噻唑基、异唑基、二唑基、四唑基、噻二唑基、苯并呋喃基、异苯并呋喃基、苯并噻吩基、异苯并噻吩基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、萘啶基、蝶啶基、吡嗪基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、咪唑并吡啶基、吡唑并吡啶基、噻唑并吡啶基、三嗪基、二氢吡啶基、二氢吡咯并吡啶基、苯并唑基、喹喔啉基、苯并吗啉基、四氢吡啶并吡嗪基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、异二氢吲哚基、苯基、萘基和萘基。
具体而言、环A选自由以下各项组成的组：吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、呋喃基、吡咯基、唑基、噻唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、吲哚基、吲嗪基、异吲哚基、嘌呤基、呋咱基、咪唑基、吲唑基、异噻唑基、异唑基、二唑基、四唑基、噻二唑基、苯并呋喃基、异苯并呋喃基、苯并噻吩基、异苯并噻吩基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、萘啶基、蝶啶基、吡嗪基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、咪唑并吡啶基、吡唑并吡啶基、噻唑并吡啶基、三嗪基、二氢吡啶基、喹喔啉基、苯并吗啉基、苯基、萘基和萘基。
更具体而言、环A选自由以下各项组成的组：唑基、异唑基、吡唑基、噻唑基、吡啶基、喹啉基、苯并噻唑基、异喹啉基、嘧啶基、苯基、苯并吗啉基、吲唑基、咪唑并吡啶基、喹唑啉基、吡唑并吡啶基、苯并咪唑基、咪唑基和二唑基。
例如、环A选自由以下各项组成的组：唑基、异唑基、吡唑基、噻唑基、吡啶基、喹啉基、苯并噻唑基、异喹啉基、嘧啶基、苯基、苯并吗啉基、吲唑基、咪唑并吡啶基以及异二氢吲哚基。
当环A是单环时，该环是被取代的。当环A是双环时，该环可以未被取代或被取代。当被取代时，环A可以被一个或多个-Q1-(R6)n，尤其一个或两个-Q1-(R6)n取代，其中每次出现的-Q1-(R6)n相同或不同，并且其中：
n是0或1；
Q1表示卤素、氰基、氧代、硝基、-OR7、-SR7、-NR7R8、-CONR7R8、-NR7COR8、-NR7CONR8R9、-COR7、-C(O)OR7、-SO2R7、-SO2NR7R8、-NR7SO2R8、NR7SO2NR8R9、-NR7C(O)OR8、任选被取代的-C1-C6烷基、任选被取代的-C1-C6烷氧基、任选被取代的-C2-C6烯基、任选被取代的-C2-C6炔基、共价键、氧原子、硫原子、-SO-、-SO2-、-C(O)-、-C(O)O-、-CONR7-、-NR7-、-NR7CO-、-NR7CONR8-、-SO2NR7-、-NR7SO2-、-NR7SO2NR8-、-NR7C(O)O-、-NR7C(O)OR8-、任选被取代的C1-C6亚烷基或任选被取代的-C2-C6亚烯基；
R7、R8和R9各自独立地表示氢、任选被取代的C1-C6烷基或任选被取代的C1-C6亚烷基。
当n是1时，R6表示任选被取代的3至10元杂环基、环烷基、杂芳基或芳基环(当n是0时，Q1存在且R6不存在)。
环A可以未被取代(如果是双环)或被一、二、三或四个-Q1-(R6)n取代。具体而言，环A未被取代(如果是双环)或被一个或两个-Q1-(R6)n取代。每次出现的-Q1-(R6)n可以相同或不同。更具体而言，环A未被取代(如果是双环)或被一个Q1-(R6)n取代。Q1、R6和n如本申请中所定义。
具体而言，Q1可以选自卤素(例如氟、氯或溴)、氰基、氧代、硝基、-OR7(例如羟基)、-SR7(例如硫氢基)、-NR7R8(例如氨基或N,N-二甲基氨基)、-CONR7R8(例如酰氨基)、-NR7COR8(N-乙酰基)、-NR7CONR8R9、-COR7(例如乙酰基)、-C(O)OR7(例如甲氧羰基或乙氧羰基)、-SO2R7(例如甲基磺酰基)、-SO2NR7R8(例如二甲基氨基磺酰基)、-NR7SO2R8、NR7SO2NR8R9、-NR7C(O)OR8、任选被取代的-C1-C4烷基(例如丙基、异丁基或叔丁基)、任选被取代的C1-C2烷基(例如甲基或乙基)、任选被取代的-C1-C6烷氧基、任选被取代的-C2-C6烯基、任选被取代的-C2-C6炔基、共价键、氧原子、硫原子、-SO-、-SO2-、-CO-、-C(O)O-、-CONR7-、-NR7-(例如甲基氨基)、-NR7CO-、-NR7CONR8-、-SO2NR7-、-NR7SO2-、-NR7SO2NR8-、-NR7C(O)O-、-NR7C(O)OR8-、任选被取代的C1-C4亚烷基(例如亚甲基或亚乙基)或任选被取代的-C2-C4亚烯基(例如乙烯基)。
当n是0时，环A可以被一个或多个(例如一、二、三或四个)Q1取代基取代，该取代基独立地选自卤素(例如氟、氯或溴)、氰基、氧代、硝基、-OR7、-SR7、-NR7R8、-CONR7R8、-NR7C(O)R8、-NR7C(O)NR8R9、-C(O)R7、-C(O)OR7、-SO2R7、-SO2NR7R8、-NR7SO2R8、NR7SO2NR8R9、-NR7C(O)OR8、-C1-C6烷基、-C1-C6烷氧基、-C2-C6烯基或-C2-C6炔基，其中烷基、烷氧基、烯基或炔基可以未被取代或被一个或多个取代基取代，该取代基选自卤素、羟基、巯基、氰基、氨基、硝基和SF5，且其中R7、R8和R9如上文所定义。
具体而言，当n是0时，Q1可以表示卤素(例如氟或氯)、氰基、氧代、-C(O)NR7R8、-NR7COR8、C1-C6烷基或C1-C6烷氧基，其中所述的烷基和烷氧基可以未被取代或被一个或多个卤素取代，尤其氟。
在特定的实例中，n是0且环A表示5或6元杂芳基或芳基环，其任选被一个或多个(例如一、二、三或四个)Q1取代基取代，该取代基独立地选自卤素、氧代、-NR7COR8、C1-C3烷基(例如甲基)或C1-C3烷氧基(例如甲氧基)，其中所述的烷基或烷氧基任选被一个或多个氟取代。
在其它实例中，n是0且环A表示9或10元杂芳基或芳基环，其任选被一个或多个(例如一、二、三或四个)Q1取代基取代，该取代基独立地选自卤素、氧代、氰基、C1-C3烷基或-C(O)NR7R8，其中所述的烷基任选被一个或多个氟取代。
当n是1时，Q1是共价键或连接基，该连接基选自氧原子、硫原子、-SO-、-SO2-、-CO-、-C(O)O-、-CONR7-、-NR7-、-NR7CO-、-NR7CONR8-、-SO2NR7-、-NR7SO2-、-NR7SO2NR8-、-NR7C(O)O-、-NR7C(O)OR8-、C1-C6亚烷基或-C2-C6亚烯基，其中亚烷基或亚烯基任选被一个或多个取代基取代，该取代基选自卤素、羟基、巯基、氰基、氨基、硝基和SF5。
具体而言，当n是1时，Q1选自共价键，C1-C6亚烷基尤其C1-C3亚烷基，优选亚甲基，或氧原子。
在特定的实例中，环A被另一个环直接或经由连接基取代，即，环A被至少一个-Q1-(R6)n取代，其中n是1。
R6表示3至10元杂环基、环烷基、杂芳基或芳基环。R6可以选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、十氢萘基、苯基、萘基、萘基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、呋喃基、吡咯基、唑基、噻唑基、吡唑基、四唑基、吲哚基、吲嗪基、异吲哚基、二氢吲哚基、嘌呤基、呋咱基、咪唑基、吲唑基、异噻唑基、异唑基、二唑基、四唑基、噻二唑基、苯并呋喃基、异苯并呋喃基、苯并噻吩基、异苯并噻吩基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、萘啶基、蝶啶基、吡嗪基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、咪唑并吡啶基、吡唑并吡啶基、噻唑并吡啶基、三嗪基、二氢吡啶基、二氢吡咯并吡啶基、苯并唑、喹喔啉基、苯并吗啉基、四氢吡啶并吡嗪基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、氮杂环庚烷基、二氮杂环庚烷基、二氢呋喃基(例如2,3-二氢呋喃基、2,5-二氢呋喃基)、二氧杂环戊烷基、吗啉基、唑烷基、嗪烷基、二氢吲哚基、异二氢吲哚基、哌嗪基、四氢呋喃基、硫代吗啉基、二氢吡喃基(例如3,4-二氢吡喃基、3,6-二氢吡喃基)、高哌嗪基、二烷基、六氢嘧啶基、吡唑啉基、吡唑烷基、4H-喹嗪基、奎宁环基、四氢吡喃基、四氢吡啶基、四氢嘧啶基、四氢噻吩基、噻唑烷基、苯并吡喃基、四氢喹啉基以及四氢异喹啉基。
R6可以选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、十氢萘基、苯基、萘基、萘基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、呋喃基、吡咯基、唑基、噻唑基、吡唑基、四唑基、吲哚基、吲嗪基、异吲哚基、二氢吲哚基、嘌呤基、呋咱基、咪唑基、吲唑基、异噻唑基、异唑基、二唑基、四唑基、噻二唑基、苯并呋喃基、异苯并呋喃基、苯并噻吩基、异苯并噻吩基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、萘啶基、蝶啶基、吡嗪基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、咪唑并吡啶基、吡唑并吡啶基、噻唑并吡啶基、异二氢吲哚基、三嗪基、二氢吡啶基、喹喔啉基、苯并吗啉基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、氮杂环庚烷基、二氮杂环庚烷基、二氢呋喃基(例如2,3-二氢呋喃基、2,5-二氢呋喃基)、二氧杂环戊烷基、吗啉基、唑烷基、嗪烷基、二氢吲哚基、异二氢吲哚基、哌嗪基、四氢呋喃基、硫代吗啉基、二氢吡喃基(例如3,4-二氢吡喃基、3,6-二氢吡喃基)、高哌嗪基、二烷基、六氢嘧啶基、吡唑啉基、吡唑烷基、4H-喹嗪基、奎宁环基、四氢吡喃基、四氢吡啶基、四氢嘧啶基、四氢噻吩基、噻唑烷基、苯并吡喃基、四氢喹啉基和四氢异喹啉基。
R6可以表示任选被取代的5或6元杂环基、环烷基、杂芳基或芳基环。
可替代地，R6可以表示任选被取代的9或10元双环杂环基、环烷基、杂芳基或芳基环。
具体而言，R6选自被取代的或未被取代的苯基、噻唑基、吡啶基、吡咯烷基吡唑基、异吲哚基、异唑基和环烷基，例如环丙基或环丁基。
更具体而言，R6选自被取代的或未被取代的苯基、噻唑基、吡啶基、吡咯烷基吡唑基、异吲哚基、异唑基和环丙基。
例如，R6选自被取代的或未被取代的苯基、噻唑基、吡啶基、吡咯烷基、吡唑基和异吲哚基。
更具体而言，R6是被取代的或未被取代的苯基。
在本申请中所述的所有情况中，R6可以任选被一个或多个取代基取代，该取代基独立地选自卤素、氰基、氧代、硝基、-OR10、-SR10、-NR10R11、-CONR10R11、-NR10COR11、-NR10CONR11R12、-COR10、-C(O)OR10、-SO2R10、-SO2NR10R11、-NR10SO2R11、NR10SO2NR11R12、-NR10C(O)OR11、任选被取代的-C1-C6烷基、任选被取代的-C1-C6烷氧基、任选被取代的-C2-C6烯基、任选被取代的-C2-C6炔基、-Q2-R10、-Q2-NR10CONR11R12、-Q2-NR10R11、-Q2-COR10、-Q2-NR10COR11、-Q2-NR10C(O)OR11、-Q2-SO2R10，Q2-CONR10R11、-Q2-CO2R10、-Q2-SO2NR10R11、-Q2-NR10SO2R11和-Q2-NR10SO2NR11R12，其中所述的烷基、烷氧基、烯基或炔基任选被一个或多个取代基取代，该取代基选自卤素、羟基、巯基、氰基、氨基、硝基和SF5。
Q2表示共价键、氧原子、硫原子、-SO-、-SO2-、-CO-、C1-C6亚烷基或任选被取代的C2-C6亚烯基。
R10、R11、R12各自独立地表示氢、任选被取代的C1-C6烷基、任选被取代的杂环基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的芳基或任选被取代的环烷基。
R6可以被被一个或多个(例如一、二、三或四个)，尤其一个或两个取代基取代，该取代基独立地选自卤素、氰基、氧代、硝基、-OR10、-SR10、-NR10R11、-CONR10R11、-NR10COR11、-NR10CONR11R12、-COR10、-C(O)OR10、-SO2R10、-SO2NR10R11、-NR10SO2R11、NR10SO2NR11R12、-NR10C(O)OR11、任选被取代的-C1-C6烷基、任选被取代的-C1-C6烷氧基、任选被取代的-C2-C6烯基、任选被取代的-C2-C6炔基、-Q2-R10、-Q2-NR10CONR11R12、-Q2-NR10R11、-Q2-COR10、-Q2-NR10COR11、-Q2-NR10C(O)OR11、-Q2-SO2R10，Q2-CONR10R11、-Q2-CO2R10、-Q2-SO2NR10R11、-Q2-NR10SO2R11和-Q2-NR10SO2NR11R12，其中Q2表示共价键、氧原子、硫原子、-SO-、-SO2-、-CO-、C1-C6亚烷基或任选被取代的C2-C6亚烯基，且其中R10、R11、R12各自独立地表示氢或任选被取代的C1-C6烷基，其中任一烷基、烷氧基、烯基、炔基、亚烷基或亚烯基任选被一个或多个(例如一、二、三或四个)取代基取代，该取代基选自卤素、羟基、巯基、氰基、氨基、硝基和SF5。
具体而言，R6可以被一个或多个取代基取代，该取代基选自卤素(例如，氟或氯)、氰基、C1-C4烷基(例如丙基、异丁基或叔丁基)或C1-C2烷基(例如甲基或乙基)、C1-C4烷氧基或C1-C2烷氧基(例如甲氧基)，其中烷基和烷氧基可以任选被一个或多个氟取代。
例如，R6可以被一个或多个取代基取代，该取代基选自卤素(例如，氟或氯)、C1-C4烷基(例如丙基、异丁基或叔丁基)或C1-C2烷基(例如甲基或乙基)，其中烷基可以任选被一个或多个氟取代。
可替代地，R6可以任选被另外的任选被取代的3至10元杂环基、环烷基、杂芳基或芳基环取代，直接连接或经由连接基团。所述的连接基团可以是氧原子、羰基或任选被取代的C1-C6亚烷基。所述的连接基团可以是氧、-CO-或亚烷基链，例如，亚甲基。所述的3至10元环可以被一个或多个(例如一、二、三或四个)，尤其一个或两个取代基取代，该取代基选自卤素(例如，氟或氯)、C1-C4烷基(例如丙基、异丁基或叔丁基)或C1-C2烷基(例如甲基或乙基)，其中烷基可以任选被一个或多个氟取代。
R6可以未被取代、被一-取代或二-取代。
在某些情况中，R6表示3至10元杂环基、环烷基、杂芳基或芳基环，其选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、十氢萘基、苯基、萘基、萘基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、呋喃基、吡咯基、唑基、噻唑基、吡唑基、四唑基、吲哚基、吲嗪基、异吲哚基、二氢吲哚基、嘌呤基、呋咱基、咪唑基、吲唑基、异噻唑基、异唑基、二唑基、四唑基、噻二唑基、苯并呋喃基、异苯并呋喃基、苯并噻吩基、异苯并噻吩基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、萘啶基、蝶啶基、吡嗪基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、咪唑并吡啶基、吡唑并吡啶基、噻唑并吡啶基、异二氢吲哚基、三嗪基、二氢吡啶基、二氢吡咯并吡啶基、苯并唑基、喹喔啉基、苯并吗啉基、四氢吡啶并吡嗪基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、氮杂环庚烷基、二氮杂环庚烷基、二氢呋喃基(例如2,3-二氢呋喃基、2,5-二氢呋喃基)、二氧杂环戊烷基、吗啉基、唑烷基、嗪烷基、二氢吲哚基、哌嗪基、四氢呋喃基、硫代吗啉基、二氢吡喃基(例如3,4-二氢吡喃基、3,6-二氢吡喃基)、高哌嗪基、二烷基、六氢嘧啶基、吡唑啉基、吡唑烷基、4H-喹嗪基、奎宁环基、四氢吡喃基、四氢吡啶基、四氢嘧啶基、四氢噻吩基、噻唑烷基、苯并吡喃基、四氢喹啉基和四氢异喹啉基，其未被取代或被一个或多个(例如一、二或三个)取代基取代，该取代基选自卤素(例如氟或氯)、氰基、氧代、硝基、-OR10、-SR10、-NR10R11、-CONR10R11、-NR10COR11、-NR10CONR11R12、-COR10、-C(O)OR10、-SO2R10、-SO2NR10R11、-NR10SO2R11、NR10SO2NR11R12、-NR10C(O)OR11、任选被取代的-C1-C6烷基、任选被取代的-C1-C6烷氧基、任选被取代的-C2-C6烯基、任选被取代的-C2-C6炔基、-Q2-R10、-Q2-NR10CONR11R12、-Q2-NR10R11、-Q2-COR10、-Q2-NR10COR11、-Q2-NR10C(O)OR11、-Q2-SO2R10，Q2-CONR10R11、-Q2-CO2R10、-Q2-SO2NR10R11、-Q2-NR10SO2R11和-Q2-NR10SO2NR11R12，其中所述的烷基、烷氧基、烯基或炔基任选被一个或多个取代基取代，该取代基选自卤素、羟基、巯基、氰基、氨基、硝基和SF5，其中Q2表示共价键、氧原子、硫原子、-SO-、-SO2-、-CO-、C1-C6亚烷基或任选被取代的C2-C6亚烯基，且R10、R11、R12各自独立地表示氢、任选被取代的C1-C6烷基、任选被取代的杂环基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的芳基或任选被取代的环烷基。
R6可以表示3至10元杂环基、环烷基、杂芳基或芳基环，其选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、十氢萘基、苯基、萘基、萘基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、呋喃基、吡咯基、唑基、噻唑基、吡唑基、四唑基、吲哚基、吲嗪基、异吲哚基、二氢吲哚基、嘌呤基、呋咱基、咪唑基、吲唑基、异噻唑基、异唑基、二唑基、四唑基、噻二唑基、苯并呋喃基、异苯并呋喃基、苯并噻吩基、异苯并噻吩基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、萘啶基、蝶啶基、吡嗪基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、咪唑并吡啶基、吡唑并吡啶基、噻唑并吡啶基、异二氢吲哚基、三嗪基、二氢吡啶基、喹喔啉基、苯并吗啉基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、氮杂环庚烷基、二氮杂环庚烷基、二氢呋喃基(例如2,3-二氢呋喃基、2,5-二氢呋喃基)、二氧杂环戊烷基、吗啉基、唑烷基、嗪烷基、二氢吲哚基、异二氢吲哚基、哌嗪基、四氢呋喃基、硫代吗啉基、二氢吡喃基(例如3,4-二氢吡喃基、3,6-二氢吡喃基)、高哌嗪基、二烷基、六氢嘧啶基、吡唑啉基、吡唑烷基、4H-喹嗪基、奎宁环基、四氢吡喃基、四氢吡啶基、四氢嘧啶基、四氢噻吩基、噻唑烷基、苯并吡喃基、四氢喹啉基和四氢异喹啉基，其未被取代或被一个或多个(例如一、二或三个)取代基取代，该取代基选自卤素(例如氟或氯)、氰基、氧代、硝基、-OR10、-SR10、-NR10R11、-CONR10R11、-NR10COR11、-NR10CONR11R12、-COR10、-C(O)OR10、-SO2R10、-SO2NR10R11、-NR10SO2R11、NR10SO2NR11R12、-NR10C(O)OR11、任选被取代的-C1-C6烷基、任选被取代的-C1-C6烷氧基、任选被取代的-C2-C6烯基、任选被取代的-C2-C6炔基、-Q2-R10、-Q2-NR10CONR11R12、-Q2-NR10R11、-Q2-COR10、-Q2-NR10COR11、-Q2-NR10C(O)OR11、-Q2-SO2R10，Q2-CONR10R11、-Q2-CO2R10、-Q2-SO2NR10R11、-Q2-NR10SO2R11和-Q2-NR10SO2NR11R12，其中所述的烷基、烷氧基、烯基或炔基任选被一个或多个取代基取代，该取代基选自卤素、羟基、巯基、氰基、氨基、硝基和SF5，其中Q2表示共价键、氧原子、硫原子、-SO-、-SO2-、-CO-、C1-C6亚烷基或任选被取代的C2-C6亚烯基，且R10、R11、R12各自独立地表示氢、任选被取代的C1-C6烷基、任选被取代的杂环基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的芳基或任选被取代的环烷基。
R6可以表示环，其选自苯基、噻唑基、吡啶基、吡咯烷基吡唑基、异吲哚基、异唑基和环烷基，其中该环未被取代或被一个或多个取代基，尤其一个或两个取代基取代，该取代基选自卤素(例如氟或氯)、氰基、氧代、硝基、-OR10、-SR10、-NR10R11、-CONR10R11、-NR10COR11、-NR10CONR11R12、-COR10、-C(O)OR10、-SO2R10、-SO2NR10R11、-NR10SO2R11、NR10SO2NR11R12、-NR10C(O)OR11、任选被取代的-C1-C6烷基、任选被取代的-C1-C6烷氧基、任选被取代的-C2-C6烯基、任选被取代的-C2-C6炔基、-Q2-R10、-Q2-NR10CONR11R12、-Q2-NR10R11、-Q2-COR10、-Q2-NR10COR11、-Q2-NR10C(O)OR11、-Q2-SO2R10，Q2-CONR10R11、-Q2-CO2R10、-Q2-SO2NR10R11、-Q2-NR10SO2R11和-Q2-NR10SO2NR11R12，其中所述的烷基、烷氧基、烯基或炔基任选被一个或多个取代基取代，该取代基选自卤素、羟基、巯基、氰基、氨基、硝基和SF5，其中Q2表示共价键、氧原子、硫原子、-SO-、-SO2-、-CO-、C1-C6亚烷基或任选被取代的C2-C6亚烯基，且R10、R11、R12各自独立地表示氢、任选被取代的C1-C6烷基、任选被取代的杂环基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的芳基或任选被取代的环烷基。
R6可以表示环，其选自苯基，噻唑基，吡啶基，吡咯烷基吡唑基，异吲哚基和异唑基，其中该环未被取代或被一个或多个取代基，尤其一个或两个取代基取代，该取代基选自卤素(例如氟或氯)、氰基、氧代、硝基、-OR10、-SR10、-NR10R11、-CONR10R11、-NR10COR11、-NR10CONR11R12、-COR10、-C(O)OR10、-SO2R10、-SO2NR10R11、-NR10SO2R11、NR10SO2NR11R12、-NR10C(O)OR11、任选被取代的-C1-C6烷基、任选被取代的-C1-C6烷氧基、任选被取代的-C2-C6烯基、任选被取代的-C2-C6炔基、-Q2-R10、-Q2-NR10CONR11R12、-Q2-NR10R11、-Q2-COR10、-Q2-NR10COR11、-Q2-NR10C(O)OR11、-Q2-SO2R10，Q2-CONR10R11、-Q2-CO2R10、-Q2-SO2NR10R11、-Q2-NR10SO2R11和-Q2-NR10SO2NR11R12，其中所述的烷基、烷氧基、烯基或炔基任选被一个或多个取代基取代，该取代基选自卤素、羟基、巯基、氰基、氨基、硝基和SF5，其中Q2表示共价键、氧原子、硫原子、-SO-、-SO2-、-CO-、C1-C6亚烷基或任选被取代的C2-C6亚烯基，且R10、R11、R12各自独立地表示氢、任选被取代的C1-C6烷基、任选被取代的杂环基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的芳基或任选被取代的环烷基。
R6可以表示环，其选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、十氢萘基、苯基、萘基、萘基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、呋喃基、吡咯基、唑基、噻唑基、吡唑基、四唑基、吲哚基、吲嗪基、异吲哚基、二氢吲哚基、嘌呤基、呋咱基、咪唑基、吲唑基、异噻唑基、异唑基、二唑基、四唑基、噻二唑基、苯并呋喃基、异苯并呋喃基、苯并噻吩基、异苯并噻吩基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、萘啶基、蝶啶基、吡嗪基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、咪唑并吡啶基、吡唑并吡啶基、噻唑并吡啶基、异二氢吲哚基、三嗪基、二氢吡啶基、二氢吡咯并吡啶基、苯并唑基、喹喔啉基、苯并吗啉基、四氢吡啶并吡嗪基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、氮杂环庚烷基、二氮杂环庚烷基、二氢呋喃基(例如2,3-二氢呋喃基、2,5-二氢呋喃基)、二氧杂环戊烷基、吗啉基、唑烷基、嗪烷基、二氢吲哚基、哌嗪基、四氢呋喃基、硫代吗啉基、二氢吡喃基(例如3,4-二氢吡喃基、3,6-二氢吡喃基)、高哌嗪基、二烷基、六氢嘧啶基、吡唑啉基、吡唑烷基、4H-喹嗪基、奎宁环基、四氢吡喃基、四氢吡啶基、四氢嘧啶基、四氢噻吩基、噻唑烷基、苯并吡喃基、四氢喹啉基和四氢异喹啉基、其中该环未被取代或被一个或多个(例如一、二或三个)取代基取代、该取代基选自卤素(例如、氟或氯)、氰基、C1-C4烷基(例如丙基、异丁基或叔丁基)或C1-C2烷基(例如甲基或乙基)、C1-C4烷氧基或C1-C2烷氧基(例如甲氧基)，其中所述的烷基和烷氧基可以任选被一个或多个氟取代，其中所述的烷基和烷氧基可以任选被一个或多个氟取代。
R6可以表示环、其选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、十氢萘基、苯基、萘基、萘基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、呋喃基、吡咯基、唑基、噻唑基、吡唑基、四唑基、吲哚基、吲嗪基、异吲哚基、二氢吲哚基、嘌呤基、呋咱基、咪唑基、吲唑基、异噻唑基、异唑基、二唑基、四唑基、噻二唑基、苯并呋喃基、异苯并呋喃基、苯并噻吩基、异苯并噻吩基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、萘啶基、蝶啶基、吡嗪基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、咪唑并吡啶基、吡唑并吡啶基、噻唑并吡啶基、异二氢吲哚基、三嗪基、二氢吡啶基、喹喔啉基、苯并吗啉基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、氮杂环庚烷基、二氮杂环庚烷基、二氢呋喃基(例如2,3-二氢呋喃基、2,5-二氢呋喃基)、二氧杂环戊烷基、吗啉基、唑烷基、嗪烷基、二氢吲哚基、异二氢吲哚基、哌嗪基、四氢呋喃基、硫代吗啉基、二氢吡喃基(例如3,4-二氢吡喃基、3,6-二氢吡喃基)、高哌嗪基、二烷基、六氢嘧啶基、吡唑啉基、吡唑烷基、4H-喹嗪基、奎宁环基、四氢吡喃基、四氢吡啶基、四氢嘧啶基、四氢噻吩基、噻唑烷基、苯并吡喃基、四氢喹啉基和四氢异喹啉基，其中该环未被取代或被一个或多个(例如一、二或三个)取代基取代，该取代基选自卤素(例如，氟或氯)、C1-C4烷基(例如丙基、异丁基或叔丁基)或C1-C2烷基(例如甲基或乙基)，其中所述的烷基可以任选被一个或多个氟取代，其中所述的烷基和烷氧基可以任选被一个或多个氟取代。
具体而言，R6可以选自苯基、噻唑基、吡啶基、吡咯烷基吡唑基、异吲哚基异唑基和环丙基，其中该环未被取代或被一个或多个(例如一、二或三个)取代基取代，该取代基选自卤素(例如，氟或氯)、氰基、C1-C4烷基(例如丙基、异丁基或叔丁基)或C1-C2烷基(例如甲基或乙基)、C1-C4烷氧基或C1-C2烷氧基(例如甲氧基)，其中所述的烷基和烷氧基可以任选被一个或多个氟取代。
例如，R6可以选自苯基、噻唑基、吡啶基、吡咯烷基吡唑基、异吲哚基和异唑基，其中该环未被取代或被一个或多个(例如一、二或三个)取代基取代，该取代基选自卤素(例如，氟或氯)、C1-C4烷基(例如丙基、异丁基或叔丁基)或C1-C2烷基(例如甲基或乙基)，其中所述的烷基可以任选被一个或多个氟取代。
本发明还涉及式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐，其中：
R1b、R1c、R1d和R1e各自独立地表示C1-C3烷基，其可以任选被一个或多个氟取代；
R1a和R1g各自独立地表示氢、氟或C1-C3烷基，其可以任选被一个或多个氟取代；
R1f是氢、氟、C1-C3烷基，其可以任选被一个或多个氟取代，或与R2一起形成5元杂环，其任选进一步被氟、氧代、氰基、羟基、氨基、C1-C6烷基或C1-C6烷氧基取代；
R2是氢或C1-C3烷基，或与R1f一起形成5元杂环，其任选进一步被氟、氧代、氰基、羟基、氨基、C1-C6烷基或C1-C6烷氧基取代；
X表示C(R3)(R4)，其中R3和R4各自独立地表示氢、氰基或C1-C3烷基，其可以任选被一个或多个卤素取代；
L是共价键、-C(O)-、-SO2-、-CONR5-、-CO-C1-C6亚烷基或-CO-C2-C6亚烯基，其中R5表示氢或甲基；
A表示5或6元单环杂芳基或芳基，其被一、二或三个-Q1-(R6)n取代，或9或10元双环杂芳基或芳基，其任选被一、二或三个-Q1-(R6)n取代，其中每个-Q1-(R6)n相同或不同；
n是0或1；
Q1、R6和n如本申请中所定义。
具体而言，Q1选自卤素(例如氟、氯或溴)、氰基、氧代、硝基、-OR7(例如羟基)、-SR7(例如硫氢基)、-NR7R8(例如氨基或N,N-二甲基氨基)、-CONR7R8(例如酰氨基)、-NR7COR8(N-乙酰基)、-NR7CONR8R9、-COR7(例如乙酰基)、-C(O)OR7(例如甲氧羰基或乙氧羰基)、-SO2R7(例如甲基磺酰基)、-SO2NR7R8(例如二甲基氨基磺酰基)、-NR7SO2R8、NR7SO2NR8R9、-NR7C(O)OR8、任选被取代的-C1-C4烷基(例如丙基、异丁基或叔丁基)、任选被取代的C1-C2烷基(例如甲基或乙基)、任选被取代的-C1-C6烷氧基、任选被取代的-C2-C6烯基、任选被取代的-C2-C6炔基、共价键、氧原子、硫原子、-SO-、-SO2-、-CO-、-C(O)O-、-CONR7-、-NR7-(例如甲基氨基)、-NR7CO-、-NR7CONR8-、-SO2NR7-、-NR7SO2-、-NR7SO2NR8-、-NR7C(O)O-、-NR7C(O)OR8-、任选被取代的C1-C4亚烷基(例如亚甲基或亚乙基)或任选被取代的-C2-C4亚烯基(例如乙烯基)，且R6是5或6元杂芳基、杂环基或芳基环，其任选被一个或两个取代基取代，该取代基独立地选自卤素、氰基、氧代、硝基、-OR10、-SR10、-NR10R11、-CONR10R11、-NR10COR11、-NR10CONR11R12、-COR10、-C(O)OR10、-SO2R10、-SO2NR10R11、-NR10SO2R11、NR10SO2NR11R12、-NR10C(O)OR11、任选被取代的-C1-C6烷基、任选被取代的-C1-C6烷氧基、任选被取代的-C2-C6烯基、任选被取代的-C2-C6炔基、-Q2-R10、-Q2-NR10CONR11R12、-Q2-NR10R11、-Q2-COR10、-Q2-NR10COR11、-Q2-NR10C(O)OR11、-Q2-SO2R10，Q2-CONR10R11、-Q2-CO2R10、-Q2-SO2NR10R11、-Q2-NR10SO2R11和-Q2-NR10SO2NR11R12，其中Q2表示共价键、氧原子、硫原子、-SO-、-SO2-、-CO-、C1-C6亚烷基或任选被取代的C2-C6亚烯基，且其中R10、R11、R12各自独立地表示氢或任选被取代的C1-C6烷基，其中任一烷基、烷氧基、烯基、炔基、亚烷基或亚烯基任选被一个或多个(例如一、二、三或四个)取代基取代，该取代基选自卤素、羟基、巯基、氰基、氨基、硝基和SF5。
本发明还涉及式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐，其中：
R1a、R1b、R1c、R1d、R1e和R1g各自是氢；
R1f是氢或与R2一起形成5元杂环，其任选进一步被一个取代基取代；
R2是氢或甲基或与R1f一起形成5元杂环，其任选被一个另外的取代基取代；
X表示C(R3)(R4)，其中R3表示氢并且R4表示氢、氰基或C1-C3烷基；
L是共价键、-C(O)-、-SO2-、-CONH-、-CO-C1-C3亚烷基，尤其-C(O)-、-CO-亚甲基或-CO-亚乙烯基；
A表示5或6元单环杂芳基或芳基，其被一个或两个-Q1-(R6)n取代，或9或10元双环杂芳基或芳基，其未被取代或被一个或两个-Q1-(R6)n取代；
每次出现的-Q1-(R6)n相同或不同，其中：
n是0或1；
Q1表示卤素，尤其氟或氯、氧代、氰基、-CONR7、-NR7COR8、C1-C3烷基(其任选被一个或多个氟取代，例如CF3)、-SO2NH-、C1-C3烷氧基例如甲氧基、共价键、氧原子或C1-C3亚烷基例如亚甲基；
R6表示3至6元杂环基、环烷基、杂芳基或芳基环，具体而言，R6表示苯基、噻唑基、吡啶基、吡咯烷基、吡唑基、异吲哚基、异唑基或环丙基，其中R6未被取代或被一个或多个取代基取代，该取代基选自卤素、氰基、C1-C3烷基例如甲基或C1-C3烷氧基，例如甲氧基；
R7和R8各自独立地表示氢或C1-C3烷基。
本发明还涉及式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐，其中：
R1a、R1b、R1c、R1d、R1e和R1g各自是氢；
R1f是氢或与R2一起形成5元杂环，其任选进一步被一个取代基取代；
R2是氢或甲基或与R1f一起形成5元杂环，其任选被一个另外的取代基取代；
X表示C(R3)(R4)，其中R3表示氢并且R4表示氢、氰基或C1-C3烷基；
L是共价键、-C(O)-、-SO2-、-CONH-、-CO-C1-C3亚烷基，尤其-CO-亚甲基，或-CO-亚乙烯基；
A表示5或6元单环杂芳基或芳基，其被一个或两个-Q1-(R6)n取代，或9或10元双环杂芳基或芳基，其未被取代或被一个或两个-Q1-(R6)n取代；
每次出现的-Q1-(R6)n相同或不同，其中：
n是0或1；
Q1表示卤素(尤其氟或氯)、氧代、氰基、-CONR7、-NR7COR8、C1-C3烷基(其任选被一个或多个氟，例如CF3)、-SO2NH-、C1-C3烷氧基例如甲氧基、共价键、氧原子或C1-C3亚烷基例如亚甲基；
R6表示5或6元杂环基、环烷基、杂芳基或芳基环，具体而言，R6表示苯基、噻唑基、吡啶基、吡咯烷基或吡唑基，其中R6未被取代或被一个或多个取代基取代，该取代基选自卤素或C1-C3烷基，例如，甲基；
R7和R8各自独立地表示氢或C1-C3烷基。
环A的实例包括如下所示的那些：
其中表示与分子其余部分的连接点，即经由L与胺氮连接，且其中所述的单环被一个或多个-Q1-(R6)n取代且其中所述的双环任选被一个或多个-Q1-(R6)n取代。没有显示与环氮原子连接的氢原子。本领域技术人员将明白，哪些环氮原子适合取代，且如果未被取代，所述氮可以与氢原子结合以完全其价，如果适当。
式(I)的新化合物的实例包括：
3-((喹啉-2-基氨基)甲基)吡咯烷-1-甲腈
3-(((6-氟苯并[d]噻唑-2-基)氨基)甲基)吡咯烷-1-甲腈
3-((异喹啉-1-基氨基)甲基)吡咯烷-1-甲腈
3-(((3-苯基吡啶-2-基)氨基)甲基)吡咯烷-1-甲腈
3-(((4-苯基吡啶-2-基)氨基)甲基)吡咯烷-1-甲腈
3-(((5-苯基吡啶-2-基)氨基)甲基)吡咯烷-1-甲腈
3-(((6-苯基吡啶-2-基)氨基)甲基)吡咯烷-1-甲腈
3-(((4-苯基嘧啶-2-基)氨基)甲基)吡咯烷-1-甲腈
(R)-3-(((5-苯基噻唑-2-基)氨基)甲基)吡咯烷-1-甲腈
(S)-3-(((5-苯基噻唑-2-基)氨基)甲基)吡咯烷-1-甲腈
3-(((6-(1H-吡唑-4-基)苯并[d]噻唑-2-基)氨基)甲基)吡咯烷-1-甲腈
(R)-3-(((7-(1H-吡唑-4-基)喹唑啉-2-基)氨基)甲基)吡咯烷-1-甲腈
3-(((3-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)甲基)吡咯烷-1-甲腈
3-(((4-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)甲基)吡咯烷-1-甲腈
3-(((4-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)-2-氟苯基)氨基)甲基)吡咯烷-1-甲腈
3-(((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)氨基)异喹啉-6-甲腈
3-(((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)氨基)-N-甲基异喹啉-6-甲酰胺
3-(((2-(异二氢吲哚-2-基)吡啶-4-基)氨基)甲基)吡咯烷-1-甲腈
(S)-3-(((4-苯基嘧啶-2-基)氨基)甲基)吡咯烷-1-甲腈
N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-2-苯基唑-5-甲酰胺
N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-3-苯基异唑-5-甲酰胺
N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-5-苯基-1H-吡唑-3-甲酰胺
N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-4-甲基-3-氧代-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]嗪-6-甲酰胺
N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-4-(吡啶-4-基)苯甲酰胺
N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-3-(邻甲苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺
N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-2-苯基噻唑-4-甲酰胺
N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-4-(吡咯烷-1-基)吡啶甲酰胺
N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-1-(2,4-二氯苄基)-1H-吲唑-3-甲酰胺
1-苄基-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-1H-吲唑-3-甲酰胺
N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-4-(N-苯基氨磺酰基)苯甲酰胺
N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-3-(2-氟苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺
(E)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-3-(2-氟-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-5-(4-氟苯基)烟酰胺
(S)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-3-氧代-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]嗪-6-甲酰胺
(R)-6-氯-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酰胺
(R)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)吡唑并[1,5-a]吡啶-2-甲酰胺
2-([1,1'-联苯]-4-基)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-N-甲基乙酰胺
N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-5-苯基唑-2-甲酰胺
N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酰胺
1-苄基-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺
1-(3-氯苯基)-3-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)脲
1-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-3-(2-氟-5-甲基苯基)脲
1-(3-苄基苯基)-3-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)脲
1-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-3-(2,4-二氯苯基)脲
1-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-3-(4-(三氟甲基)苯基)脲
N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-N-甲基-3-(2-甲基噻唑-4-基)苯磺酰胺
N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-N-甲基-4-((5-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯磺酰胺
3-(1-((6-(5-甲基异唑-4-基)苯并[d]噻唑-2-基)氨基)乙基)吡咯烷-1-甲腈
3-(1-((6-(1H-吡唑-4-基)苯并[d]噻唑-2-基)氨基)乙基)吡咯烷-1-甲腈
3-(1-(异喹啉-3-基氨基)乙基)吡咯烷-1-甲腈
3-((1-(1-氰基吡咯烷-3-基)乙基)氨基)异喹啉-6-甲腈
3-((苯并[d]噻唑-2-基氨基)(氰基)甲基)吡咯烷-1-甲腈
2-((1-(1-氰基吡咯烷-3-基)乙基)氨基)苯并[d]噻唑-6-甲腈
(3aR,6aS)-4-氧代-5-(5-苯基噻唑-2-基)六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-甲腈
(R)-3-(3-氯苯基)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)异唑-5-甲酰胺
(R)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酰胺
(R)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)异喹啉-3-甲酰胺
(R)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-5-苯基异唑-3-甲酰胺
(R)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-4-苯基吡啶甲酰胺
(R)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-5-苯基吡啶甲酰胺
(R)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-5-苯基噻唑-2-甲酰胺
(R)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-4-苯基噻唑-2-甲酰胺
(R)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-1-苯基-1H-吡唑-3-甲酰胺
(R)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-2-苯基-1H-咪唑-5-甲酰胺
(R)-7-氯-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酰胺
(R)-3-(2-氯苯基)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)异唑-5-甲酰胺
(R)-3-(4-氯苯基)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)异唑-5-甲酰胺
(R)-5-(3-氰基苯基)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-1,3,4-二唑-2-甲酰胺
(S)-5-(3-氰基苯基)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-1,3,4-二唑-2-甲酰胺
(R)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-1-苯基-1H-咪唑-4-甲酰胺
(R)-1-(3-氰基苯基)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-1H-咪唑-4-甲酰胺
(R)-1-(4-氰基苯基)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-1H-咪唑-4-甲酰胺
(R)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-1-(2-甲氧基苯基)-1H-咪唑-4-甲酰胺
(R)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-1-(3-甲氧基苯基)-1H-咪唑-4-甲酰胺
(R)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-6-(1H-吡唑-4-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酰胺
(R)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-6-(1H-吡唑-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酰胺
(R)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-7-环丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酰胺
(R)-1-苄基-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-1H-咪唑-4-甲酰胺
(R)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-1-(环丙基甲基)-1H-咪唑-4-甲酰胺
或其药学上可接受的盐。
应该注意的是，上面所列的化合物每个表示本发明的特定和独立方面。
根据本发明的又一方面，提供用于制备式(I)的化合物或其药学上可接受的盐的方法，该方法包括使式(II)的胺与化合物A-L-LG反应形成式(III)的化合物的步骤：
其中R1a、R1b、R1c、R1d、R1e、R1f、R1g、R2、A、X、L和m如别处所定义，PG胺保护基，且LG是适合的离去基团。所述的保护基可以是但不限于BOC。对本领域技术人员来说组合或调整这样的保护性化学基团是清楚的。离去基团可以是但不限于卤素。对本领域技术人员来说组合或调整这样的离去基团是清楚的。可以除去保护基以留下根据式(IV)的游离胺，然后可以用溴化氰处理它以形成根据式(I)的化合物：
其中R1a、R1b、R1c、R1d、R1e、R1f、R1g、R2、A、X、L和m如别处所定义。
根据本发明的又一方面，提供用于制备式(I)的化合物或其药学上可接受的盐的方法，该方法包括使式(IV)的胺与溴化氰反应形成N-CN化合物的步骤：
其中R1a、R1b、R1c、R1d、R1e、R1f、R1g、R2、A、X、L和m如别处所定义。
根据本发明的另一方面，提供包含本发明化合物的药物组合物。
本发明的药物组合物包含与任何药学上可接受的载体、助剂或载体组合的任何本发明的化合物。药学上可接受的载体的实例是本领域技术人员已知的，并且包括但不限于防腐剂，填充剂，崩解剂，润湿剂，乳化剂，悬浮剂，甜味剂，矫味剂，芳香剂，抗菌剂，抗真菌剂，润滑剂和分散剂，这取决于施用方式的性质和剂型。组合物可以是例如片剂，胶囊，粉剂，颗粒剂，酏剂，锭剂，栓剂，糖浆剂和包括悬液和溶液在内的液体制剂的形式。在本发明的上下文中，术语“药物组合物”是指包含活性剂并且另外包含一种或多种药学上可接受的载体的组合物。组合物还可以包含选自例如稀释剂，助剂，赋形剂，介质，防腐剂，填充剂，崩解剂，润湿剂，乳化剂，悬浮剂，甜味剂，矫味剂，芳香剂，抗菌剂，抗真菌剂，润滑剂和分散剂的成分，这取决于施用方式的性质和剂型。
本发明的化合物可以用于治疗涉及USP30抑制的障碍和疾病。
涉及线粒体功能障碍的状况
本发明的化合物可以用于治疗具有涉及线粒体功能障碍的要素的障碍或疾病，特别是与DUB活性相关的障碍或疾病。更具体地，障碍或疾病与USP30活性相关。
本申请中所述的化合物可以用于制备用于治疗涉及线粒体功能障碍的状况的药剂。
在本发明的另一方面，提供治疗或预防涉及线粒体功能障碍的状况的方法，该方法包括对被诊断为涉及线粒体功能障碍的状况的个体施用药学上有效量的本发明化合物或其药物组合物。
线粒体功能障碍是由线粒体的缺陷引起的，线粒体是除了红细胞以外身体的每个细胞中存在的特殊化隔室。当线粒体衰败时，在细胞内产生越来越少的能量，且随后发生细胞损伤乃至细胞死亡。如果该过程在体内自始至终重复，则发生这种情况的受试者的生命就会受到严重的损害。线粒体的疾病最常见于能量需求很强的器官，例如脑，心脏，肝脏，骨骼肌，肾脏以及内分泌和呼吸系统。
涉及线粒体功能障碍的状况可以选自涉及线粒体自噬缺陷的状况、涉及线粒体DNA突变的状况、涉及线粒体氧化应激的状况、涉及线粒体膜电位缺陷的状况、线粒体生物发生、涉及在线粒体形状或形态中的缺陷的状况以及涉及溶酶体储存缺陷的状况。
特别地，涉及线粒体功能障碍的状况可以选自神经变性疾病；多发性硬化(MS)、线粒体肌病、脑病、乳酸酸中毒和中风样发作(MELAS)综合征；Leber氏遗传性视神经病(LHON)；癌症；神经病，共济失调、视网膜炎色点-母系遗传性利氏综合征(NARP-MILS)；Danon病；糖尿病；糖尿病肾病；代谢紊乱；心力衰竭；导致心肌梗死的缺血性心脏病；精神病，例如精神分裂症；多发性硫酸酯酶缺乏症(MSD)；黏脂质累积病II(ML II)；黏脂质累积病III(ML III)；黏脂质累积病IV(ML IV)；GMl-神经节苷脂贮积病(GM1)；神经元蜡样脂-脂褐质沉积病(NCL1)；阿尔佩斯(Alpers)病；Barth综合征；β-氧化缺陷；肉碱-酰基-肉碱缺乏病；肉碱缺乏病；肌酸缺乏综合征；辅酶Q10缺乏；复合物I缺乏；复合物II缺乏；复合物III缺乏；复合物IV缺乏；复合物V缺乏；COX缺乏；慢性进行性外侧眼肌麻痹综合征(CPEO)；CPT I缺乏；CPT II缺乏；戊二酸尿症II型；基-塞二氏综合征；乳酸酸中毒；长链酰基CoA脱氢酶缺乏(LCHAD)；利氏病或综合征；致命性婴儿心肌病(LIC)；勒夫特病；戊二酸尿症II型；中链酰基CoA脱氢酶缺乏(MCAD)；肌阵挛型癫痫和蓬毛样红纤维素(MERRF)综合征；线粒体细胞病；线粒体退行性共济失调综合征；线粒体DNA消耗综合征；肌肉神经胃肠紊乱和脑病；Pearson综合征；丙酮酸脱氢酶缺乏；丙酮酸羧化酶缺乏；POLG突变；中/短3-羟基酰基-CoA脱氢酶(M/SCHAD)缺乏；以及极长链酰基-CoA脱氢酶(VLCAD)缺乏；以及认知功能和肌肉强度的年龄依赖性衰退。
涉及线粒体功能障碍的状况可以是CNS状况，例如神经变性疾病。
神经变性疾病包括但不限于帕金森病，阿尔茨海默病，肌萎缩性侧索硬化(ALS)，亨廷顿病，局部缺血，中风，路易体(Lewy)痴呆和额颞叶痴呆。
在一个具体的实施方案中，本发明的化合物可用于治疗帕金森病，包括但不限于与α-突触核蛋白、帕金蛋白和PINK1中突变相关的PD、其中帕金蛋白突变的常染色体隐性遗传性青少年帕金森病(AR-JP)。
当被用于治疗涉及线粒体功能障碍的状况时，本申请中所述的本发明的化合物或其药物组合物可与一种或多种另外的药剂组合。所述化合物可以与一种或多种另外的药剂组合，所该另外的药剂选自左旋多巴、多巴胺激动剂、单胺加氧酶(MAO)B抑制剂、儿茶酚O-甲基转移酶(COMT)抑制剂、抗胆碱能药、利鲁唑、金刚烷胺、胆碱酯酶抑制剂、美金刚、丁苯那嗪、抗精神病药、地西泮、氯硝西泮、抗抑郁药和抗惊厥药。
癌症
本发明的化合物还具有治疗癌症且更具体地治疗与DUB活性，尤其与USP30活性相关的癌症的用途。
本申请中所述的化合物还可以用于制备治疗癌症的药剂。在本发明的另一方面，提供治疗或预防癌症的方法，该方法包括对患有癌症的个体施用药学上有效量的本发明的化合物或其药物组合物。
本发明的化合物还具有治疗与线粒体功能障碍相关的癌症的用途。
在一个实施方案中，本发明的化合物具有治疗癌症的用途，所述的癌症中细胞凋亡途径失调，且更具体地，其中BCL-2家族蛋白突变或超表达或减量表达。
提及“癌症”或“肿瘤”包括，但不限于乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、肺癌、肾癌、胃癌、结肠癌、睾丸癌、头颈癌、胰腺癌、脑癌、黑素瘤、骨癌或组织器官的其它癌症以及血细胞碍，例如淋巴瘤和白血病。具体的癌症包括淋巴瘤、多发性骨髓瘤、结肠直肠癌和非小细胞肺癌。
当用于治疗癌症时，本申请中所述的化合物或其药物组合物可与一种或多种另外的药剂组合。所述的化合物可以与额外的抗肿瘤治疗剂组合，例如化学治疗药物或其它调节蛋白的抑制剂。在一个实施方案中，另外的抗肿瘤治疗剂是BH-3模拟物。在另一个实施方案中，BH-3模拟物可以选自但不限于ABT-737、ABT-199、ABT-263和奥巴克拉中的一种或多种。在另一个实施方案中，另外的抗肿瘤剂是化疗剂。化疗剂可以选自但不限于奥拉帕利，丝裂霉素C，顺铂，卡铂，奥沙利铂，电离辐射(IR)，喜树碱，伊立替康，托泊替康，替莫唑胺，紫杉烷，5-氟嘧啶类，吉西他滨和多柔比星。
剂型
为了治疗线粒体功能障碍，本发明的药物组合物可以被设计用于通过口服、肠胃外或粘膜途径施用，并且组合物的选择或具体形式取决于施用途径。因此，对于口服施用，组合物可以是例如片剂，锭剂，糖锭剂，薄膜，粉末，酏剂，糖浆，液体制剂包括分散液，悬浮液，乳剂，溶液或喷雾剂的液体制剂，扁囊剂，颗粒剂，胶囊的形式。为了施用于粘膜，组合物可以是喷雾剂，吸入剂，分散液，悬浮液，乳剂，溶液，凝胶，贴剂，薄膜，软膏，霜剂，洗剂，栓剂等的形式。对于肠胃外施用，组合物为液体制剂如溶液、分散液、乳剂或悬浮液的形式，包括脂质体组合物。
为了治疗CNS障碍，本发明的化合物必须具有通过血脑屏障的能力。因此，这类化合物具有进入患者的中枢神经系统的能力。或者，本发明的药物组合物可以通过使用本领域中已知的用于绕过血脑屏障的组合物和方法来绕过血脑屏障，或者可以直接注射到脑中。用于注射的适合区域包括大脑皮层，小脑，中脑，脑干，下丘脑，脊髓和心室组织，以及包括颈动脉体和肾上腺髓质的PNS区域。其它剂型包括用于口服递送的那些，包括但不限于片剂，糖锭剂，粉剂，酏剂，糖浆剂，液体制剂包括悬浮液，喷雾剂，吸入剂，片剂，锭剂，乳剂，溶液，扁囊剂，颗粒剂和胶囊。对于肠胃外施用，制剂包括无菌水、水-有机和有机溶液、悬浮液和乳剂。
为了治疗癌症，本发明的药物组合物可以以用于靶向癌症细胞的任何有效方式施用，例如任何以口服可接受的剂型口服，包括但不限于片剂，糖锭剂，粉剂，酏剂，糖浆剂，液体制剂，包括悬浮液，喷雾剂，吸入剂，片剂，锭剂，乳剂，溶液，扁囊剂，颗粒剂和胶囊剂。本发明的用于肠胃外施用的制剂包括无菌水溶液、水-有机溶液和有机溶液、悬浮液和乳剂。
这类剂型是根据药物制剂领域已知的技术制备的。当以喷雾剂或吸入剂的形式时，药物组合物可以经鼻施用。用于此目的的适合的制剂是本领域技术人员已知的。
本发明的药物组合物可以通过注射施用，并且可以是用于注射的无菌液体制剂的形式，包括脂质体制剂。本发明的药物组合物也可以是用于直肠施用的栓剂形式。将它们进行配制，使得药物组合物在室温下为固体，而在体温下为液体，以允许活性化合物释放。
剂量可以根据患者的要求，被治疗的状况的严重程度和所使用的化合物的不同而变化。针对特定情况的适当剂量确定在本领域技术人员的职权范围内。通常，以较小的剂量开始治疗，其量小于化合物的最佳剂量。此后，剂量以小增量增加，直至达到在这种情况下的最佳效果。
当然，化合物的有效剂量的量级会随被治疗的状况的严重程度的性质和特定化合物及其施用途径的不同而变化。适当剂量的选择在本领域普通技术人员的能力范围内，没有过多的负担。每日剂量范围约为每千克体重的人和非人类动物10微克至约100毫克，并且通常每剂量每千克体重约10微克至30毫克。上述剂量可以每天给予1-3次。
合成方法
本发明的化合物可以通过多种不同的合成路线制备。得到本发明的某些化合物的示例性路线如下所示。本发明的代表性化合物可以根据下面描述的通用合成方法合成，并且在下面的方案中更具体地进行举例说明。由于方案是举例说明，所以本发明不应被解释为受化学反应和所表达的条件的限制。方案中使用的各种原料的制备完全在本领域技术人员的技能范围内。本领域技术人员应当理解，在适当的情况下，方案中的各个转化可以以不同的顺序完成。以下方案描述了可以制备本发明的中间体和目标化合物的通用合成方法。可以使用根据通用方案制备的中间体和本领域技术人员已知的其它物质、化合物和试剂来合成其它代表性的化合物及其立体异构体、外消旋混合物、非对映异构体和对映体。所有这类化合物、立体异构体、外消旋混合物、非对映异构体及其对映体旨在包括在本发明的范围内。
通过液相色谱法-质谱法(LCMS)和/或1HNMR表征全部化合物。
缩写：
BINAP 2,2'-双(二苯基膦基)-1,1'-联萘
Boc 叔丁氧羰基
br 宽峰(NMR信号)
CDI 1,1-羰基二咪唑
d 双重峰(NMR信号)
dba 二亚苄基丙酮
DBU 1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯
DCM 二氯甲烷
DIPEA 二异丙基乙胺
DMA 二甲基乙酰胺
DMF N,N-二甲基甲酰胺
DMSO 二甲基亚砜
dppf 1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁
ES 电喷雾
EtOAc 乙酸乙酯
EtOH 乙醇
h 小时
Hal 卤素，例如F、Cl、Br、I
HATU 1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶3-氧六氟磷酸盐
m 多重峰(NMR信号)
MeCN 乙腈
Me-Dalphos 二(1-金刚烷基)-2-二甲基氨基苯基膦
MeOH 甲醇
MTBE 甲基叔丁基醚
NMP N-甲基-2-吡咯烷酮
PE 石油醚
rt 室温
Ruphos 2-二环己基膦基-2′,6′-二异丙氧基联苯
s 单峰(NMR信号)
t 三重峰(NMR信号)
T3P 丙基膦酸酐
TBD 1,5,7-三氮杂双环[4.4.0]十-5-烯
TEA 三乙胺
TFA 三氟乙酸
THF 四氢呋喃
TLC 薄层色谱法
TMA 三甲基铝
LCMS方法
实施例1 3-((喹啉-2-基氨基)甲基)吡咯烷-1-甲腈
步骤a.在rt在氮气下向3-(氨基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(0.2mmol)、2-氯喹啉(0.2mmol)和叔丁醇钠(0.6mmol)在甲苯(1ml)中的溶液中添加催化量的烯丙基钯和Me-Dalphos。在65℃搅拌反应混合物持续16h。减压下浓缩所得到的混合物。通过制备型TLC纯化所得到的残余物(PE：EtOAc 1：1)，产生3-((喹啉-2-基氨基)甲基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯。MS：ES+328.4。
步骤b.向叔丁基3-((喹啉-2-基氨基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯在EtOAc(1mL)中的溶液中添加EtOAc(1ml)中的4M HCl。在rt搅拌反应混合物持续2h。减压下浓缩所得到的混合物。残余物N-(吡咯烷-3-基甲基)-喹啉-2-胺未经进一步纯化被直接用于下一步骤。MS：ES+228.1。
步骤c.向N-(吡咯烷-3-基甲基)喹啉-2-胺在EtOH(2mL)中的溶液中添加溴化氰(0.2mmol)和NaHCO3(0.6mmol)。在rt搅拌反应混合物持续16h。减压下浓缩所得到的混合物。通过制备型反相HPLC纯化粗品(A：0.078％乙酸铵水溶液，B：MeCN)，得到标题化合物(1.5mg，0.005mmol)。LCMS：方法E，保留时间1.98分钟，MS：ES+254.1。
使用与针对实施例1所述的类似的程序合成了表1中的化合物。
表1
实施例9(R)-3-(((5-苯基噻唑-2-基)氨基)甲基)吡咯烷-1-甲腈
步骤a.在0℃向5-苯基噻唑-2-胺(10.0g，56.8mmol)在MeCN(200ml)中的溶液中添加CuBr2(15.2g，68.18mmol)且搅拌10分钟。在0℃将叔丁腈(8.10ml，68.2mmol)滴加到反应混合物中。在rt搅拌反应混合物持续2h。通过硅藻土hyflow过滤所得到的反应混合物。用MeCN(2x 100ml)洗涤硅藻土饼。减压下浓缩滤液且用水(100ml)洗涤。用EtOAc(3x 80ml)萃取所得到的混合物。收集合并的有机相，用Na2SO4干燥，过滤且减压下浓缩。通过柱色谱法(30％EtOAc的己烷溶液)纯化所得到的残余物，得到2-溴-5-苯基噻唑(2.00g，8.33mmol)。LCMS：方法B，4.78分钟，MS：ES+240.20；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.13(s，1H)，7.65-7.67(m，2H)，7.45-7.49(m，2H)，7.39-7.43(m，1H)。
步骤b.在rt向2-溴-5-苯基噻唑(0.30g，1.24mmol)在EtOH(5ml)中的溶液中添加(R)-3-(氨基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(0.274g，1.36mmol)。在100℃加热反应混合物持续120h。将所得到的反应混合物冷却至rt且减压下浓缩。通过柱色谱法(40％EtOAc的己烷溶液)纯化粗制残余物，得到(R)-3-(((5-苯基噻唑-2-基)氨基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(0.12g，0.33mmol)。LCMS：方法B，4.27分钟，MS：ES+360.43。
步骤c.在0℃向(R)-3-(((5-苯基噻唑-2-基)氨基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(0.11g，0.30mmol)在DCM(8ml)中的溶液中添加TFA(0.5ml)。在rt搅拌反应混合物持续1h。减压下浓缩所得到的反应混合物。使用DCM(2x 5ml)再蒸馏所获得的残余物。用乙醚研磨所获得的残余物(2x 5ml)，得到(R)-5-苯基-N-(吡咯烷-3-基甲基)噻唑-2-胺TFA盐(0.095g，0.25mmol)。该物质未经进一步纯化被直接用于下一步中。
步骤d.在0℃向(R)-5-苯基-N-(吡咯烷-3-基甲基)噻唑-2-胺TFA盐(0.09g，0.34mmol)在THF(10ml)中的溶液中添加K2CO3(0.143g，1.00mmol)。在0℃搅拌反应混合物持续10分钟。在0℃将溴化氰(0.044g，0.41mmol)添加到反应混合物中。在rt搅拌反应混合物持续30分钟。将所得到的反应混合物倾入水(20ml)且用EtOAc(2x 25ml)萃取。收集合并的有机相，用Na2SO4干燥，过滤且减压下浓缩。通过柱色谱法(70％EtOAc的己烷溶液)纯化所得到的残余物，得到标题化合物(0.038g，0.13mmol)。LCMS：方法B，3.37分钟，MS：ES+285.33；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 7.94(m，1H)，7.33-7.49(m，5H)，7.16-7.22(m，1H)，3.39-3.51(m，2H)，3.27-3.36(m，3H)，3.12-3.18(m，1H)，2.53-2.59(m，1H)，1.94-2.04(m，1H)，1.64-1.72(m，1H)。
实施例10(S)-3-(((5-苯基噻唑-2-基)氨基)甲基)吡咯烷-1-甲腈
通过与实施例9类似的程序，使用(S)-3-(氨基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯，合成了标题化合物。LCMS：方法B，3.40分钟，MS：ES+285.68；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 7.94(br t，J＝5.2Hz，1H)，7.47(s，1H)，7.42-7.44(m，2H)，7.32-7.35(m，2H)，7.17-7.21(m，1H)，3.42-3.49(m，2H)，3.34-3.39(m，1H)，3.26-3.29(m，2H)，3.13-3.17(m，1H)，2.53-2.59(m，1H)，1.95-2.03(m，1H)，1.62-1.71(m，1H)。
实施例11 3-(((6-(1H-吡唑-4-基)苯并[d]噻唑-2-基)氨基)甲基)吡咯烷-1-甲腈
步骤a.在rt向6-溴-2-氯-1,3-苯并噻唑(0.1g，0.40mmol)和3-(氨基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(0.08g，0.40mmol)在THF(2.5ml)中的溶液中添加TEA(0.11ml，0.80mmol)。在90℃加热反应混合物持续16h，然后冷却至室温且在减压下浓缩。通过柱色谱法(40-50％EtOAc的己烷溶液)纯化残余物，得到3-(((6-溴苯并[d]噻唑-2-基)氨基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(0.105g，0.25mmol)。LCMS：方法C，2.66分钟，MS：ES+412.30。
步骤b.在可用于微波的玻璃瓶中制备3-(((6-溴苯并[d]噻唑-2-基)氨基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(0.25g，0.60mmol)和4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吡唑(0.12g，0.60mmol)在DMF：水(9：1，5ml)中的溶液且用NaHCO3(0.105g，1.21mmol)处理。在rt将所得到的反应混合物脱气10分钟，然后添加Pd(dppf)Cl2(0.022g，0.03mmol)。使所得到的反应混合物经受微波加热，140℃持续1.5h。将所得到的混合物倾入水(100ml)且用EtOAc(3x 30ml)萃取。将合并的有机相用盐水溶液(2x 25ml)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤且减压下浓缩。通过柱色谱法(7-8％MeOH的DCM溶液)纯化残余物，得到3-(((6-(1H-吡唑-4-基)苯并[d]噻唑-2-基)氨基)-甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(0.12g，0.30mmol)。LCMS：方法C，1.98分钟，MS：ES+400.30。
步骤c.在0℃向3-(((6-(1H-吡唑-4-基)苯并[d]噻唑-2-基)氨基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(0.12g，0.30mmol)在DCM(3ml)中的溶液中添加TFA(1.2ml)。在rt搅拌反应混合物持续1h。减压下浓缩所得到的反应混合物，得到6-(1H-吡唑-4-基)-N-(吡咯烷-3-基甲基)苯并[d]噻唑-2-胺TFA盐(0.10g，0.24mmol)。该物质未经进一步纯化被直接用于下一步中。LCMS：方法C，1.37分钟，MS：ES+300.39。
步骤d.在0℃向6-(1H-吡唑-4-基)-N-(吡咯烷-3-基甲基)苯并[d]噻唑-2-胺TFA盐(0.10g，0.24mmol)在DMF(2.5ml)中的溶液中添加K2CO3(0.085g，0.60mmol)。在0℃将溴化氰(0.03g，0.29mmol)添加到反应混合物中。在10℃搅拌反应混合物持续45分钟。将所得到的反应混合物倾入冰冷水(40ml)且用EtOAc(3x 20ml)萃取。用盐水溶液(20ml)洗涤合并的有机相，用Na2SO4干燥，过滤且减压下浓缩。通过柱色谱法(3-6％MeOH的DCM溶液)纯化所得到的残余物，得到标题化合物(0.03g，0.09mmol)。LCMS：方法A，3.21分钟，MS：ES+324.96；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 12.86(s，1H)，8.11-8.13(m，2H)，7.88-7.92(m，2H)，7.47(dd，J＝8.40，1.60Hz，1H)，7.35(d，J＝8.40Hz，1H)，3.43-3.51(m，2H)，3.33-3.40(m，3H)，3.15-3.19(m，1H)，2.55-2.62(m，1H)，1.98-2.03(m，1H)，1.67-1.72(m，1H)。
实施例12(R)-3-(((7-(1H-吡唑-4-基)喹唑啉-2-基)氨基)甲基)吡咯烷-1-甲腈
步骤a.在rt向2-氟-4-溴苯甲醛(5.0g，24.63mmol)在DMA(50ml)中的溶液中添加碳酸胍(6.65g，36.94mmol)。在140℃加热反应混合物持续2h。将所得到的反应混合物倾入冰冷水(500ml)。过滤收集所得到的白色沉淀物，然后悬浮于2M HCl(150ml)。充分搅拌所得到的悬浮液获得浑浊的悬浮液，然后过滤除去未溶解的固体。收集透明的滤液且用乙醚洗涤(3x 50ml)。使用2M NaOH溶液(100ml)碱化所得到的水层。过滤收集所得到的白色沉淀物，用戊烷(3x 10ml)洗涤且真空下干燥，得到7-溴喹唑啉-2-胺(0.80g，3.57mmol)。LCMS：方法C，1.62分钟，MS：ES+224.11；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 9.13(s，1H)，7.75(d，J＝8.4Hz，1H)，7.59(d，J＝2.0Hz，1H)，7.36(dd，J＝8.4，2.0Hz，1H)，7.08(s，2H)。
步骤b.在rt向7-溴喹唑啉-2-胺(0.80g，3.57mmol)在THF(15ml)中的溶液中添加CuI(0.34g，1.70mmol)和CH2I2(0.94g，3.50mmol)。在rt将异戊腈(1.44ml，10.50mmol)滴加到反应混合物中。在80℃加热反应混合物持续4h。将所得到的反应混合物倾入水(100ml)且用EtOAc(3x 30ml)萃取。收集合并的有机相，通过硅藻土hyflow过滤。用Na2SO4干燥所得到的滤液，过滤且减压下浓缩。通过柱色谱法(15％EtOAc的己烷溶液)纯化所得到的残余物，得到7-溴-2-碘喹唑啉(0.34g，1.01mmol)。LCMS：方法C，2.25分钟，MS：ES+335.20；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 9.38(s，1H)，8.24(d，J＝2Hz，1H)，8.13(d，J＝8.8Hz，1H)，7.96(dd，J＝8.8，2Hz，1H)。
步骤c.在微波可用的玻璃瓶中制备7-溴-2-碘喹唑啉(0.33g，0.98mmol)和(R)-3-(氨基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(0.198g，0.98mmol)在NMP(10ml)中的溶液。在rt将DIPEA(0.34ml，1.96mmol)添加到反应混合物中。在70℃将玻璃瓶密封且经受微波照射持续30分钟。将所得到的反应混合物倾入盐水溶液(100ml)且用EtOAc(3x 20ml)萃取。收集合并的有机相，用Na2SO4干燥，过滤且减压下浓缩。通过柱色谱法(30％EtOAc的己烷溶液)纯化所得到的残余物，得到(R)-3-(((7-溴喹唑啉-2-基)氨基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(0.80g，定量)。LCMS：方法C，2.59分钟，MS：ES+407.50。
步骤d.在微波可用的玻璃瓶中制备(R)-3-(((7-溴喹唑啉-2-基)氨基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(0.75g，1.84mmol)和4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吡唑(0.39g，2.00mmol)在DMF：水(4：1，10ml)中的溶液。在rt将NaHCO3(0.30g，3.60mmol)添加到反应混合物中。在rt将混合物脱气10分钟，然后添加Pd(dppf)Cl2(0.065g，0.09mmol)。将所得到的反应混合物经受微波加热，150℃持续30分钟。将所得到的反应混合物倾入盐水溶液(100ml)且用EtOAc(3x 20ml)萃取。用Na2SO4干燥合并的有机相，过滤且减压下浓缩。通过柱色谱法(4％MeOH的DCM溶液)纯化所得到的残余物，得到(R)-3-(((7-(1H-吡唑-4-基)喹唑啉-2-基)氨基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(0.205g，0.52mmol)。LCMS：方法C，1.80分钟，MS：ES+395.65；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 13.10(s，1H)，9.00(s，1H)，8.44(s，1H)，8.12(s，1H)，7.75(d，J＝8.40Hz，1H)，7.70(s，1H)，7.53(dd，J＝8.40，1.60Hz，2H)，3.34-3.39(m，3H)，3.16-3.24(m，1H)，3.03-3.07(m，1H)，2.51-2.62(m，2H)，1.94-1.97(m，1H)，1.61-1.66(m，1H)，1.39(s，9H)。
步骤e，f.按照实施例9，步骤c，d中的程序合成了标题化合物。LCMS：方法A，3.23分钟，MS：ES+320.04；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 13.10(s，1H)，9.09(s，1H)，8.44(s，1H)，8.12(s，1H)，7.76(d，J＝8.40Hz，1H)，7.70(s，1H)，7.54(dd，J＝8.00，1.20Hz，2H)，3.44-3.50(m，2H)，3.36-3.40(m，3H)，3.20-3.24(m，1H)，2.61-2.67(m，1H)，1.95-2.02(m，1H)，1.70-1.76(m，1H)。
实施例13 3-(((3-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯
步骤a.在rt向1-溴-3-硝基苯(0.25g，1.23mmol)和1,3-二甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吡唑(0.33g，1.48mmol)在DMF：水(1：1；4ml)中的溶液中添加NaHCO3(0.319g，3.70mmol)。将混合物脱气15分钟，然后添加PdCl2(dppf)(0.09g，0.12mmol)。在100℃加热所得到的反应混合物持续2h。将所得到的混合物倾入水(150ml)且用EtOAc(3x 100ml)萃取。收集有机相，用Na2SO4干燥，过滤且减压下浓缩，得到1,3-二甲基-4-(3-硝基苯基)-1H-吡唑(0.28g，1.28mmol)。LCMS：方法C，2.12分钟，MS：ES+218.53。该粗制物质未纯化即被用于下一步骤中。
步骤b.在rt向1,3-二甲基-4-(3-硝基苯基)-1H-吡唑(0.28g，1.28mmol)在甲醇：THF(1：1；6ml)中的溶液中添加20％Pd(OH)2(50％水分，0.3g)。在rt用H2气吹扫反应混合物2h。通过硅藻土hyflow小心过滤所得到的反应混合物且减压下浓缩，得到3-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)苯胺(0.2g，1.06mmol)。LCMS：方法C，1.52分钟，MS：ES+188.39。该粗制物质未纯化即被用于下一步骤中。
步骤c.在rt向3-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)苯胺(0.2g，1.06mmol)和3-甲酰基吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(0.27g，1.39mmol)在DCM(5ml)中的溶液中添加TEA(0.13g，1.28mmol)。在70℃搅拌反应混合物16小时。在0℃将三乙酰氧硼氢化钠(0.45g，2.12mmol)添加到反应混合物中且在rt搅拌16h。将所得到的反应混合物倾入水(100ml)且用DCM(3x 100ml)萃取。用NaHCO3的饱和溶液(100ml)洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，过滤且减压下浓缩，得到3-(((3-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(0.3g，0.8mmol)。LCMS：方法C，2.38分钟，MS：ES+371.53
步骤d，e.按照实施例9，步骤c，d中的程序合成了标题化合物。LCMS：方法B，3.65分钟，MS：ES+296.38；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 7.77(s，1H)，7.06(t，J＝7.6Hz，1H)，6.57-6.60(m，2H)，6.44(dd，J＝1.6，8.4Hz，1H)，5.76(t，J＝11.2Hz，1H)，3.76(s，3H)，3.34-3.52(m，4H)，3.13-3.17(m，1H)，3.03(t，J＝12.8Hz，2H)，2.26(s,3H)，1.99-2.04(m，1H)，1.65-1.70(m，1H)。
实施例18 3-(((3-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯
步骤a.在rt向2-氯吡啶-4-胺(0.5g，3.90mmol)在甲苯(12ml)中的溶液中添加异二氢吲哚盐酸盐(0.91g，5.85mmol)、BINAP(0.24g，0.39mmol)和叔丁醇钾(2.07g，9.76mmol)。将混合物脱气10分钟，然后添加Pd2(dba)3(0.178g，0.19mmol)。将所得到的反应混合物在110℃持续4小时。将所得到的混合物倾入冷水(200ml)且与在相同规模上通过相同的方法制备的其它两批次合并。用DCM(3x 100ml)萃取所得到的混合物。收集有机相，用Na2SO4干燥，过滤且减压下浓缩。通过柱色谱法纯化所得到的残余物(3％MeOH的DCM溶液)，得到2-(异二氢吲哚-2-基)吡啶-4-胺(1.2g，5.67mmol)。LCMS：方法C，1.57分钟，MS：ES+212.29。
步骤b-d.按照实施例12，步骤c-e中的程序合成了标题化合物。LCMS：方法A，4.22分钟，MS：ES+320.10；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 7.67(d，J＝6Hz，1H)，7.38-7.40(m，2H)，7.29-7.32(m，2H)，6.37(t，J＝5.2Hz，1H)，5.98(dd，J＝1.6，5.6Hz，1H)，5.62(d，J＝1.6Hz，1H)，4.66(s，4H)，3.44-3.52(m，2H)，3.34-3.40(m，2H)，3.08-3.16(m，3H)，1.98-2.06(m，1H)，1.65-1.70(m，1H)。
实施例19(S)-3-(((4-苯基嘧啶-2-基)氨基)甲基)吡咯烷-1-甲腈
步骤a.在rt搅拌2,4-二氯嘧啶(1.00g，6.71mmol)，苯基硼酸(0.90g，7.38mmol)在1,4-二烷：水(8：2；15ml)中的溶液。将反应混合物脱气15分钟，然后添加Cs2CO3(6.56g，20.13mmol)和Pd(PPh3)4(0.39g，0.335mmol)。将所得到的反应混合物在110℃加热14h。将所得到的反应混合物冷却至rt且倾入饱和NaHCO3溶液(40ml)。用EtOAc(2x 25ml)萃取所获得的混合物。用盐水溶液(20ml)洗涤合并的有机相，用Na2SO4干燥，过滤且减压下浓缩。通过急骤色谱法(8％EtOAc的己烷溶液)纯化所得到的残余物，得到2-氯-4-苯基嘧啶(0.45g，2.37mmol)。LCMS：方法C，2.23分钟，MS：ES+191.57；1H NMR(400MHz、CDCl3)δppm 8.67(d，J＝5.2Hz，1H)，8.11-8.13(m，2H)，7.68(d，J＝5.6Hz，1H)，7.54-7.58(m，3H)。
步骤b-d.按照实施例9，步骤b-d中的程序，使用(S)-3-(氨基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯，合成了标题化合物。LCMS：方法A，4.20分钟，MS：ES+280.13；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.35-8.36(m，1H)，8.02-8.17(m，2H)，7.40-7.54(m，3H)，7.15-7.16(d，J＝4.8Hz，1H)，3.30-3.49(m，6H)，3.18-3.21(m，1H)，1.95-2.00(m，1H)，1.68-1.72(m，1H)。
实施例20 N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-2-苯基唑-5-甲酰胺
步骤a.在rt向2-苯基唑-5-甲酸(0.20g，1.06mmol)在THF(5ml)中的溶液中添加DIPEA(0.41g，3.17mmol)和T3P(50％在EtOAc中；1.00g，1.58mmol)且搅拌30分钟。用3-(氨基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(0.26g，1.32mmol)处理反应混合物且在rt搅拌3h。将所得到的反应混合物倾入饱和NaHCO3溶液(20ml)且用EtOAc(2x 10ml)萃取。收集合并的有机相且用10％柠檬酸溶液(5ml)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤且减压下浓缩，得到3-((2-苯基唑-5-甲酰氨基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(0.25g，0.67mmol)。LCMS：方法C，2.14分钟，MS：ES+372.33。
步骤b、c.按照实施例9，步骤c，d中的程序且通过急骤色谱法(60％EtOAc的己烷溶液)纯化，合成了标题化合物，得到标题化合物(0.050g，0.168mmol)。LCMS：方法B，3.33分钟，MS：ES+297.18；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.86(t，J＝5.6Hz，1H)，8.12-8.14(m，2H)，7.87(d J＝0.8Hz，1H)，7.58-7.61(m，3H)，3.25-3.48(m，6H)，3.16-3.20(m，2H)，1.91-2.01(m，1H)，1.66-1.73(m，1H)。
使用与针对实施例20所述的类似的程序合成了表3.1中的化合物。
表3.1
实施例34(S)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-3-氧代-3，4-二氢-2H-苯并[b][1，4]嗪-6-甲酰胺
通过与实施例20类似的程序合成了标题化合物。LCMS：方法B，2.80分钟，MS：ES+301.27；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 10.85(s，1H)，8.52(t，J＝5.6Hz 1H)，7.40-7.44(m，2H)，7.00(d，J＝8.0Hz，1H)，4.63(s，2H)，3.36-3.44(m，3H)，3.23-3.28(m，2H)，3.13-3.21(m，1H)，2.51-2.54(m，1H)，1.91-1.95(m，1H)，1.63-1.67(m，1H)。
实施例35(R)-6-氯-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)咪唑并[1，2-a]吡啶-2-甲酰胺
通过与实施例20类似的程序合成了标题化合物。LCMS：方法A，3.23分钟，MS：ES+303.94；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.88(m，1H)，8.72(t，J＝6.0Hz，1H)，8.33(s，1H)，7.64(d，J＝9.6Hz，1H)，7.41(dd，J＝2.0Hz，9.6Hz，1H)，3.39-3.46(m，2H)，3.26-3.31(m，2H),3.16-3.19(m，1H)，2.53-2.54(m，2H)，1.87-1.96(m，1H)，1.65-1.71(m，1H)。
实施例36(R)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)吡唑并[1,5-a]吡啶-2-甲酰胺
通过与实施例20类似的程序合成了标题化合物。LCMS：方法A，3.07分钟，MS：ES+270.09；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.70(t，J＝6.0Hz，1H)，8.67(dd，J＝0.8Hz，6.8Hz，1H)，7.77(d，J＝8.8Hz，1H)，7.27-7.32(m，1H)，7.02-7.05(m，1H)，6.99(s，1H)，3.40-3.46(m，2H)，3.28-3.32(m，2H)，3.17-3.20(m，1H)，2.52-2.55(m，2H)，1.89-1.97(m，1H)，1.64-1.72(m，1H)。
实施例55(R)-3-(3-氯苯基)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)异唑-5-甲酰胺
步骤a.在rt向3-(3-氯苯基)异唑-5-甲酸(CAS号100517-43-9；0.200g，0.894mmol)和(R)-3-(氨基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(CAS号199174-29-3；0.179g，0.894mmol)在THF(2ml)中的搅拌的溶液中添加HATU(0.510g，1.34mmol)和DIPEA(0.45ml，2.68mmol)。在rt搅拌反应混合物16h。将所得到的反应混合物用水(50ml)稀释且用EtOAc(2x 50ml)萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤且减压下浓缩。通过急骤柱色谱法(35％EtOAc的己烷溶液)纯化残余物，得到(R)-3-((3-(3-氯苯基)异唑-5-甲酰氨基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(0.250g，0.615mmol)。LCMS：方法C，2.312分钟，MS：ES+406.42
步骤b、c.按照实施例9，步骤c，d中所述的程序合成了标题化合物。LCMS：方法A，4.165分钟，MS：ES+331.15；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 9.21(t，J＝1.6Hz，1H)，8.00(t，J＝1.6Hz，1H)，7.90-7.93(m，1H)，7.73(s，1H)，7.56-7.64(m，2H)，3.39-3.46(m，2H)，3.35-3.38(m，1H)，3.30-3.33(m，3H)，3.15-3.28(m，1H)，1.85-2.01(m，1H)，1.62-1.71(m，1H)。
实施例37 2-([1,1'-联苯]-4-基)-N-甲基-N-(吡咯烷-3-基甲基)乙酰胺
步骤a.向1-叔丁氧羰基吡咯烷-3-甲酸(70mmol)在DCM(200ml)中的溶液中添加CDI(140mmol)。在0℃搅拌反应混合物20分钟。在rt将甲胺盐酸盐(84.5mmol)和DIPEA(210mmol)添加到反应混合物中。在rt搅拌反应混合物12h。将所得到的混合物倾入饱和NaHCO3溶液(120ml)且用EtOAc(2x 150mL)萃取。用1M HCl(40ml)洗涤有机层，用Na2SO4干燥，过滤且减压下浓缩。通过柱色谱法(SiO2，PE：EtOAc 50：1至5：1)纯化所得到的混合物，得到3-(甲基氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(33.0mmol)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.85(s，1H)，3.30-3.45(m，3H)，3.11-3.49(m，2H)，2.78-2.93(m，1H)，2.56(s，3H)，1.78–1.99(m，2H)，1.37(s，9H)。
步骤b.在0℃向3-(甲基氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(33.0mmol)在THF(75ml)中的溶液中添加BH3.THF(99.0mmol)。在0℃搅拌反应3h。通过添加MeOH 20mL，淬灭所得到的混合物。将所得到的混合物减压下浓缩，然后通过柱色谱法(SiO2，DCM：MeOH 100：0至10：1)纯化残余物，得到3-(甲基氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(12mmol)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ3.45-3.8(s，2H)，3.25-3.42(m，2H)，3.12-3.25(m，1H)，2.85-2.91(m，1H)，2.41-2.49(m，2H)，2.12-2.35(m，3H)，1.78-1.95(s，1H)，1.45–1.61(m，2H)，1.39(s，9H)。
步骤c.向2-([1，1′-联苯]-4-基)乙酸(0.2mmol)在DCM(1ml)中的溶液中添加HATU(0.2mmol)。在0℃搅拌反应混合物20分钟。在rt将3-((甲基氨基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(0.2mmol)和DIPEA(0.6mmol)添加到反应混合物中且搅拌16h。减压下浓缩所得到的混合物。通过制备型TLC纯化所得到的残余物(PE：EtOAc 1：2)，得到3-((2-([1，1′-联苯]-4-基)-N-甲基乙酰氨基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯。MS：ES+409.5。
步骤d，e.使用与针对实施例1，步骤b、c所述的类似的程序，由如上中间体合成了标题化合物，提供标题化合物(46.60mg，0.139mmol)。LCMS：方法E，2.90分钟，MS：ES+334.2。
实施例38 N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-5-苯基唑-2-甲酰胺
步骤a.在0℃向2-氨基-1-苯乙酮盐酸盐(0.50g，2.91mmol)在DCM(5ml)中的溶液中添加TEA(0.58g，5.83mmol)。在0℃搅拌反应混合物15分钟。在0℃将氯氧代乙酸乙酯(0.44g，3.21mmol)缓慢添加到反应混合物中。在rt搅拌反应混合物36h。将所得到的反应混合物倾入饱和NaHCO3溶液(10ml)且用DCM(2x 10ml)萃取。收集合并的有机相且用盐水(10ml)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤且减压下浓缩，得到2-氧代-2-((2-氧代-2-苯基乙基)氨基)乙酸乙基酯(0.58g，2.46mmol)。LCMS：方法C，1.79分钟，MS：ES+236.33。
步骤b.将2-氧代-2-((2-氧代-2-苯基乙基)氨基)乙酸乙基酯(0.58g，2.47mmol)在POCl3(5ml)中的溶液在105℃回流2h。减压下浓缩所得到的反应混合物。用饱和Na2CO3溶液(20ml)小心处理所得到的残余物且用DCM(2x 15ml)萃取混合物。收集合并的有机相且用盐水(10ml)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤且减压下浓缩，得到5-苯基唑-2-甲酸乙基酯(0.48g，2.211mmol)。LCMS：方法C，2.09分钟，MS：ES+218.18。
步骤c.在0℃向5-苯基唑-2-甲酸乙基酯(0.46g，2.12mmol)在THF(5ml)中的溶液中添加DIPEA(0.82g，6.35mmol)且搅拌15分钟。在0℃将3-(氨基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(0.53g，2.64mmol)添加到反应混合物中，接着在0℃缓慢添加TMA(2M在甲苯中；5.29ml，10.6mmol)。将所得到的反应混合物在70℃加热5小时。将所得到的反应混合物迅速倾入冰冷水(25ml)且通过硅藻土hyflow过滤。用EtOAc(3x 15ml)萃取滤液。收集合并的有机相且用盐水(10ml)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤且减压下浓缩，得到3-((5-苯基唑-2-甲酰氨基)甲基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(0.25g，0.673mmol)。LCMS：方法C，2.28分钟，MS：ES+372.4。
步骤d，e.使用与针对实施例9，步骤c，d所述的类似的程序，且通过急骤色谱法(35％-40％EtOAc的己烷溶液)纯化，由如上中间体合成了标题化合物。将所得到的粘稠残余物与戊烷：乙醚(2：1；2ml)研磨且干燥，得到标题化合物(0.013g，0.044mmol)。LCMS：方法B，3.49分钟，MS：ES+297.23；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 9.17(t，5.6Hz，1H)，7.92(s，1H)，7.83(d，J＝7.6Hz，2H)，7.53(t，J＝7.2Hz，2H)，7.43-7.47(m，1H)，3.41-3.46(m，2H)，3.34-3.38(m，2H)，3.27-3.30(m，2H)，3.16-3.20(m，1H)，1.91-1.99(m，1H)，1.65-1.70(m，1H)。
实施例66(R)-3-(2-氯苯基)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)异唑-5-甲酰胺
步骤a.在rt向2-氯苯甲醛(1.500g，10.67mmol)在MeOH(10ml)中的搅拌的溶液中添加TEA(3.23g，32.0mmol)。在rt将盐酸羟胺(0.889g，12.8mmol)分次添加到反应混合物中。在rt搅拌反应混合物4h。减压下浓缩所得到的混合物且用冰冷水(50ml)稀释所得到的残余物。过滤收集所得到的沉淀物且用急冷水(20ml)洗涤。真空下干燥所得到的固体物质，得到2-氯苯甲醛肟(1.250g 8.062mmol)。该物质未经任何进一步纯化被直接用于下一步骤中。LCMS：方法C，1.803分钟，MS：ES+156.24。
步骤b.在rt向丙酸甲酯(1.085g 12.90mmol)在水(10ml)中的搅拌的溶液中添加KCl(0.384g，5.16mmol)和2-氯苯甲醛肟(0.800g 5.16mmol)。在rt搅拌反应混合物30分钟。在rt将过一硫酸氢钾(2.376g，7.74mmol)添加到反应混合物中。在rt搅拌反应混合物4h。将所得到的混合物用水(25ml)稀释，且用DCM(2x 25ml)萃取。用盐水溶液(10ml)洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，过滤且减压下浓缩。通过急骤柱色谱法(5％EtOAc的己烷溶液)纯化所得到的残余物，得到3-(2-氯苯基)异唑-5-甲酸甲基酯(0.750g，3.164mmol)。LCMS：方法C，2.139分钟，MS：ES-236.00。
步骤c.在rt向3-(2-氯苯基)异唑-5-甲酸甲基酯(0.750g，3.16mmol)在THF：水(1：1；6ml)中的搅拌的溶液中添加LiOH.H2O(0.398g，9.49mmol)。在rt搅拌反应混合物1h。真空下浓缩所得到的反应混合物，用冰冷水(10ml)稀释且使用1M HCl溶液酸化。过滤收集所得到的沉淀物。高真空下干燥所得到的固体物质，得到3-(2-氯-苯基)异唑-5-甲酸(0.420g，1.88mmol)。该物质未经任何进一步纯化被直接用于下一步骤中。LCMS：方法C，1.475分钟，MS：ES-222.21。
步骤d.在0℃向3-(2-氯苯基)异唑-5-甲酸(0.220g，0.986mmol)和(R)-3-(氨基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(CAS号199174-29-3；0.197g，0.986mmol)在DCM(3ml)中的搅拌的溶液中添加吡啶(0.778g，0.986mmol)，接着在0℃滴加POCl3(0.226g，1.48mmol)。在0℃搅拌反应混合物30分钟。将所得到的混合物用冰冷NaHCO3溶液(30ml)稀释且用DCM(2x 20ml)萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤且减压下浓缩。通过急骤柱色谱法(1-2％MeOH的DCM溶液)纯化所得到的残余物，得到(R)-3-((3-(2-氯苯基)异唑-5-甲酰氨基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(0.180g，0.443mmol)。LCMS：方法C，2.179分钟，MS：ES-404.43。
步骤e，f.使用与针对实施例9，步骤c，d所述的类似的程序，由如上中间体合成了标题化合物。LCMS：方法A，3.979分钟，MS：ES+330.95；1H NMR(400MHz、CDCl3)δppm 7.73-7.75(m，1H)，7.53-7.56(m，1H)，7.44-7.48(m，1H)，7.39-7.43(m，2H)，6.88(br s，1H)，3.45-3.63(m，5H)，3.23-3.28(m，1H)，2.61-2.69(m，1H)，2.09-2.16(m，1H)，1.77-1.84(m，1H)。
实施例67(R)-3-(4-氯苯基)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)异唑-5-甲酰胺
通过与实施例66类似的程序合成了标题化合物。LCMS：方法A，4.200分钟，MS：ES+331.02；1H NMR(400MHz、CDCl3)δppm 7.73-7.75(m，1H)，7.53-7.56(m，1H)，7.44-7.48(m，1H)，7.39-7.43(m，2H)，6.88(br s，1H)，3.45-3.63(m，5H)，3.23-3.28(m，1H)，2.61-2.69(m，1H)，2.09-2.16(m，1H)，1.77-1.84(m，1H)。
实施例68(R)-5-(3-氰基苯基)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-1,3,4-二唑-2-甲酰胺
步骤a.在0℃向3-氰基苯甲酸甲酯(CAS号13531-48-1；4.000g，24.84mmol)在MeOH(40ml)中的搅拌的溶液中添加肼水合物(3.1ml，62.0mmol)。在rt搅拌反应混合物16h。将所得到的反应混合物真空下浓缩，用水(200ml)稀释且用DCM(2x 200ml)萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤且减压下浓缩。通过急骤柱色谱法(70％EtOAc的己烷溶液)纯化所得到的残余物，得到3-氰基苯甲酰肼(3.200g，19.87mmol)。LCMS：方法C，0.934分钟，MS：ES+162.36；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 9.99(s，1H)，8.21(s，1H)，8.13(d，J＝7.6Hz，1H)，8.00(d，J＝7.6Hz，1H)，7.69(t，J＝8.0Hz，1H)，4.58(s，2H)。
步骤b.在0℃向3-氰基苯甲酰肼(2.500g，15.52mmol)在DCM(50ml)中的搅拌的溶液中添加TEA(13.1ml，93.2mmol)。在0℃搅拌反应混合物持续5分钟，然后在0℃滴加氯氧代乙酸乙酯(3.8ml，34.2mmol)。在rt搅拌反应混合物2h。将所得到的反应混合物用水(200ml)稀释且用DCM(2x 200ml)萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤且减压下浓缩，得到2-(2-(3-氰基苯甲酰基)肼基)-2-氧代乙酸乙基酯(4.000g，15.32mmol)。该物质未经任何进一步纯化被直接用于下一步骤中。LCMS：方法C，1.405分钟，MS：ES-260.40。
步骤c.在0℃向2-(2-(3-氰基苯甲酰基)肼基)-2-氧代乙酸乙基酯(4.00g，15.32mmol)在DCM(50ml)中的搅拌的溶液中添加TEA(6.8ml，48.6mmol)。在0℃搅拌反应混合物5分钟，然后在0℃添加4-甲苯磺酰氯(4.60g，34.2mmol)。在rt搅拌反应混合物2h。将所得到的反应混合物用水(200ml)稀释且用DCM(2x 200ml)萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤且减压下浓缩。通过急骤柱色谱法(25％EtOAc的己烷溶液)纯化所得到的残余物，得到5-(3-氰基苯基)-1,3,4-二唑-2-甲酸乙基酯(2.20g，9.05mmol)。LCMS：方法C，1.738分钟，MS：ES+244.32。
步骤d.在0℃向5-(3-氰基苯基)-1,3,4-二唑-2-甲酸酯(0.280g，1.152mmol)和(R)-3-(氨基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(CAS号199174-29-3；0.345g，1.728mmol)在THF(2.5ml)中的搅拌的溶液中滴加TBD(0.313mg，2.304mmol)在THF(2.5ml)中的溶液。在rt搅拌反应混合物3h。将所得到的反应混合物用水(100ml)稀释且用EtOAc(2x 100ml)萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤且减压下浓缩。通过急骤柱色谱法(55％EtOAc的己烷溶液)纯化所得到的残余物，得到(R)-3-((5-(3-氰基苯基)-1,3,4-二唑-2-甲酰氨基)-甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(0.305g，0.768mmol)。LCMS：方法C，1.890分钟，MS：ES+398.50。
步骤e.在rt向(R)-3-((5-(3-氰基苯基)-1,3,4-二唑-2-甲酰氨基)-甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(0.305g，0.768mmol)在DCM(7ml)中的搅拌的溶液中添加TFA(0.91ml)。在rt搅拌反应混合物40分钟。减压下浓缩所得到的反应混合物。将所得到的残余物用DCM(3x 5ml)再蒸馏且在高真空下干燥，得到(R)-5-(3-氰基苯基)-N-(吡咯烷-3-基甲基)-1,3,4-二唑-2-甲酰胺TFA盐(0.290g，0.705mmol)。LCMS：方法C，1.345分钟，MS：ES+298.46。
步骤f.在rt向(R)-5-(3-氰基苯基)-N-(吡咯烷-3-基甲基)-1,3,4-二唑-2-甲酰胺TFA盐(0.290g，0.705mmol)在THF(7ml)中的溶液中添加K2CO3(0.292g，2.12mmol)。在rt搅拌反应混合物10分钟。在0℃将溴化氰(0.074g，0.705mmol)添加到反应混合物中。在rt搅拌反应混合物45分钟。将所得到的混合物倾入水(25ml)且过滤收集所得到的沉淀物且用水(25ml)洗涤。使用戊烷(2x 6ml)研磨所得到的固体物质且真空下干燥，得到标题化合物(0.160g，0.480mmol)。LCMS：方法A，2.965分钟，MS：ES+340.10[M+18+H+]；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 9.55(t，J＝6.0Hz，1H)，8.50(s，1H)，8.40(d，J＝8.0Hz，1H)，8.16(d，J＝8.0Hz，1H)，7.86(t，J＝6.0Hz，1H)，3.42-3.48(m，3H)，3.33-3.39(m，2H)，3.17-3.21(m，1H)，2.52-2.55(m，1H)，1.95-2.01(m，1H)，1.67-1.74(m，1H)。
实施例69(S)-5-(3-氰基苯基)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-1,3,4-二唑-2-甲酰胺
通过与实施例68类似的程序合成了标题化合物。LCMS：方法A，3.071分钟，MS：ES+340.10[M+18+H+]；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 9.55(t，J＝6.0Hz，1H)，8.50(s，1H)，8.40(d，J＝8.0Hz，1H)，8.16(d，J＝8.0Hz，1H)，7.86(t，J＝6.0Hz，1H)，3.42-3.48(m，3H)，3.33-3.39(m，2H)，3.17-3.21(m，1H)，2.52-2.55(m，1H)，1.95-2.01(m，1H)，1.67-1.74(m，1H)。
实施例70(R)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-1-苯基-1H-咪唑-4-甲酰胺
步骤a.在rt向甲基4-咪唑甲酸酯(CAS号17325-26-7；0.500g，3.97mmol)和1,10-菲咯啉(1.400g，7.94mmol)在DMSO(5ml)中的搅拌的溶液中添加在微波管中的碘苯(1.600g，7.94mmol)、Cs2CO3(3.800g，11.9mmol)和Cu2O(0.567g，3.97mmol)。在100℃在微波中加热反应混合物15分钟。将所得到的反应混合物冷却至rt且过滤。将所得到的滤液用水(60ml)稀释且用EtOAc(3x 60ml)萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤且减压下浓缩，得到1-苯基-1H-咪唑-4-甲酸甲基酯(0.450g，2.23mmol)。该物质未经任何进一步纯化被直接用于下一步骤中。LCMS：方法C，2.066分钟，MS：ES+203.00。
步骤b.在0℃向1-苯基-1H-咪唑-4-甲酸甲基酯(0.450g，2.23mmol)在THF：水(9：1；10ml)中的搅拌的溶液中分次添加NaOH(0.267g，6.68mmol)。在rt搅拌反应混合物16h。将所得到的混合物用冰冷水(60ml)稀释且使用1M HCl溶液酸化。将所得到的混合物用EtOAc(3x 60ml)萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤且减压下浓缩，得到1-苯基-1H-咪唑-4-甲酸(0.230g，1.22mmol)。该物质未经进一步纯化被直接用于下一步骤中。LCMS：方法C，1.357分钟，MS：ES+189.20。
步骤c-e.使用与针对实施例55所述的类似的程序，由如上中间体合成了标题化合物。LCMS：方法B，3.155分钟，MS：ES+296.43；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.40(s，1H)，8.37(s，1H)，8.25(s，1H)，7.73-7.75(m，2H)，7.52-7.56(m，2H)，7.41-7.43(m，1H)，3.37-3.44(m，4H)，3.24-3.28(m，2H)，3.15-3.19(m，1H)，1.89-1.94(m，1H)，1.64-1.69(m，1H)。
实施例71(R)-1-(3-氰基苯基)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-1H-咪唑-4-甲酰胺
步骤a.在密封管中向4-咪唑甲酸甲基酯(CAS号17325-26-7；1.000g，7.93mmol)和3-碘苄腈(CAS号69113-59-3；1.990g，8.72mmol)在DMSO(15ml)中的搅拌的溶液中添加的L-脯氨酸(0.180g，1.57mmol)，K2CO3(2.290g，16.65mmol)和CuI(0.154g，0.79mmol)。在90℃加热反应混合物16h。将所得到的反应混合物冷却至rt，用水(100ml)稀释且用EtOAc(3x 100ml)萃取。将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤且减压下浓缩。使用MTBE(3x 10)研磨粗制物质且真空下干燥所得到的物质，得到1-(3-氰基苯基)-1H-咪唑-4-甲酸甲基酯(0.400g，1.76mmol)。该物质未经任何进一步纯化被直接用于下一步骤中。LCMS：方法C，1.483分钟，MS：ES+228.36；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.64(s，1H)，8.51(s，1H)，8.38(s，1H)，8.15(dd，J＝7.6，1.6Hz，1H)，7.89(d，J＝8.0Hz，1H)，7.75(t，J＝8.0Hz，1H)，3.80(s，3H)。
步骤b.在rt向1-(3-氰基苯基)-1H-咪唑-4-甲酸甲基酯(0.400g，1.76mmol)在THF：水(9：1；10ml)中的溶液中分次添加NaOH(0.211g，5.18mmol)。在rt搅拌反应混合物2h。将所得到的混合物用水(30ml)稀释且用EtOAc(2x 50ml)萃取。使用1M HCl酸化水层且过滤收集所得到的沉淀物且用己烷(10ml)洗涤。将所得到的固体物质高真空下干燥，得到1-(3-氰基苯基)-1H-咪唑-4-甲酸(0.250g，1.173mmol)。该物质未经任何进一步纯化被直接用于下一步骤中。LCMS：方法C，1.343分钟，MS：ES+214.33。
步骤c-e.使用与针对实施例55所述的类似的程序，由如上中间体合成了标题化合物。LCMS：方法A，2.673分钟，MS：ES+321.10；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.50(s，1H)，8.37-8.43(m，3H)，8.14(dd，J＝8.8，1.6Hz，1H)，7.87(d，J＝8.8Hz，1H)，7.74(d，J＝8.0Hz，1H)，3.31-3.46(m，4H)，3.24-3.31(m，2H)，3.15-3.19(m，1H)，1.89-1.94(m，1H)，1.64-1.69(m，1H)。
实施例72(R)-1-(4-氰基苯基)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-1H-咪唑-4-甲酰胺
通过与实施例71类似的程序，合成了标题化合物。LCMS：方法A，2.693分钟，MS：ES+321.15；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.56(d，J＝1.6Hz，1H)，8.44-8.45(m，1H)，8.43(d，J＝1.2Hz，1H)，8.00-8.06(m，4H)，3.37-3.44(m，2H)，3.24-3.31(m，2H)，3.15-3.19(m，1H)，2.51-2.53(m，2H)，1.89-1.93(m，1H)，1.64-1.69(m，1H)。
实施例73(R)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-1-(2-甲氧基苯基)-1H-咪唑-4-甲酰胺
通过与实施例71类似的程序，合成了标题化合物。LCMS：方法A，2.963分钟，MS：ES+326.20；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.33(t，J＝6.0Hz，1H)，7.98(s，1H)，7.87(s，1H)，7.44-7.48(m，2H)，7.28(d，J＝8.0Hz，1H)，7.09(d，J＝7.6Hz，1H)，3.84(s，3H)，3.49-3.51(m，4H)，3.24-3.27(m，2H)，3.15-3.19(m，1H)，1.87-1.95(m，1H)，1.59-1.71(m，1H)。
实施例74(R)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-1-(3-甲氧基苯基)-1H-咪唑-4-甲酰胺
通过与实施例71类似的程序，合成了标题化合物。LCMS：方法B，3.202分钟，MS：ES+326.53；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.38(d，J＝1.2Hz，1H)，8.34-8.37(m，1H)，8.28(d，J＝1.2Hz，1H)，7.43(t，J＝8.0Hz，1H)，7.30-7.33(m，2H)，6.97(dd，J＝8.8，2.0Hz，1H)，3.85(s，3H)，3.35-3.44(m，4H)，3.25-3.28(m，2H)，3.15-3.19(m，1H)，1.89-1.94(m，1H)，1.65-1.70(m，1H)。
实施例39 N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酰胺
步骤a.在0℃向6-溴咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酸(CAS号749849-14-7；1.0g，4.14mmol)和3-(氨基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(0.99g，4.97mmol)在DMF(10ml)中的溶液中添加DIPEA(1.1ml，6.22mmol)和HATU(2.36g，6.22mmol)。在rt搅拌反应混合物2h。将所得到的反应混合物倾入水(200ml)且用EtOAc(4x 50ml)萃取。收集合并的有机相，用Na2SO4干燥，过滤且减压下浓缩。通过柱色谱法(2-3％MeOH的DCM溶液)纯化所得到的残余物，得到3-((6-溴咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酰氨基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(1.75g，4.13mmol)。LCMS：方法C，2.02分钟，MS：ES+423.32；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.94(s，1H)，8.64(t，J＝6.0Hz，1H)，8.30(s，1H)，7.58(d，J＝9.6Hz，1H)，7.47(dd，J＝9.6，1.6Hz，1H)，3.23-3.39(m，3H)，3.16-3.21(m，2H)，2.97-3.01(m，1H)，2.42-2.47(m，1H)，1.80-1.90(m，1H)，1.54-1.65(m，1H)，1.41(s，9H)。
步骤b.在rt向3-((6-溴咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酰氨基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(0.30g，0.70mmol)和1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吡唑(0.17g，0.85mmol)在1,4-二烷：水(9：1；8ml)中的溶液中添加K2CO3(0.195g，1.40mmol)。将反应混合物脱气10分钟，然后添加Pd(PPh3)4(0.04g，0.035mmol)。在100℃加热所得到的反应混合物16h。将所得到的反应混合物倾入水(150ml)且用EtOAc(3x 50ml)萃取。将合并的有机相用盐水溶液(2x25ml)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤且减压下浓缩。通过柱色谱法(2-3％MeOH的DCM溶液)纯化所得到的残余物，得到3-((6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酰氨基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(0.15g，0.35mmol)。LCMS：方法C，1.93分钟，MS：ES+425.75；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.83(s，1H)，8.57(t，J＝6.00Hz，1H)，8.25(s，1H)，8.18(s，1H)，7.88(s，1H)，7.57-7.62(m，2H)，3.89(s，3H)，3.29-3.39(m，3H)，3.17-3.21(m，2H)，2.98-3.02(m，1H)，2.42-2.47(m，1H)，1.84-1.87(m，1H)，1.54-1.61(m，1H)，1.39(s，9H)。
步骤c，d.使用与针对实施例9，步骤c，d所述的类似的程序，由如上中间体合成了标题化合物且通过柱色谱法(2-3％MeOH的DCM溶液)纯化，得到标题化合物(0.028g，0.08mmol)。LCMS：方法C，1.64分钟，MS：ES+350.74；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.83(s，1H)，8.64(t，J＝6.4Hz，1H)，8.26(s，1H)，8.19(s，1H)，7.88(s，1H)，7.57-7.62(m，2H)，3.89(s，3H)，3.37-3.46(m，3H)，3.27-3.33(m，2H)，3.16-3.20(m，1H)，2.51-2.55(m，1H)，1.88-1.94(m，1H)，1.64-1.72(m，1H)。
实施例75(R)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-6-(1H-吡唑-4-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酰胺
通过与实施例39类似的程序，合成了标题化合物。LCMS：方法A，2.148分钟，MS：ES+336.08；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 13.05(br s，1H)，8.87(s，1H)，8.64(t，J＝6.0Hz，1H)，8.25(s，1H)，8.11(br s，2H)，7.59-7.67(m，2H)，3.40-3.47(m，3H)，3.29-3.36(m，2H)，3.17-3.20(m，1H)，2.54-2.56(m，1H)，1.90-1.95(m，1H)，1.66-1.71(m，1H)。
实施例76(R)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-6-(1H-吡唑-3-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酰胺
通过与实施例39类似的程序，合成了标题化合物。LCMS：方法A，2.845分钟，MS：ES+336.01；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 13.02(s，1H)，9.02(s，1H)，8.64(t，J＝6.0Hz，1H)，8.34(s，1H)，7.80-7.84(m，1H)，7.47-7.61(m，2H)，6.72(s，1H)，3.36-3.42(m，3H)，3.27-3.33(m，2H)，3.14-3.17(m，1H)，2.54-2.56(m，1H)，1.87-1.91(m，1H)，1.63-1.69(m，1H)。
实施例77(R)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-7-环丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-甲酰胺
通过与实施例39类似的程序，合成了标题化合物。LCMS：方法B，2.675分钟，MS：ES+310.58；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.53(br s，1H)，8.41(d，J＝6.4Hz，1H)，8.21(s，1H)，7.25(s，1H)，6.62(d，J＝6.4Hz，1H)，3.32-3.37(m，2H)，3.22-3.26(m，2H)，3.14-3.16(m，1H)，2.49-2.53(m，2H)1.99-2.01(m，1H)，1.87-1.89(m，1H)，1.63-1.66(m，1H)，0.98-1.00(m，2H)，0.72-0.79(m，2H)。
实施例40 1-苄基-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-3-甲酰胺
步骤a.在rt向3-甲基-1H-吡唑-5-甲酸乙基酯(CAS号4027-57-0；1.50g，9.73mmol)在THF(20ml)中的溶液中添加KOH(0.65g，11.67mmol)。在rt搅拌反应混合物45分钟。在rt将苄基溴(1.16ml，9.73mmol)滴加到反应混合物。将所得到的反应混合物在70℃搅拌16h。然后将混合物倾入水(50ml)且用EtOAc(2x 50ml)萃取且将合并的有机相用Na2SO4干燥，过滤且减压下浓缩。通过柱色谱法(18％EtOAc的己烷溶液)纯化所得到的残余物，得到1-苄基-5-甲基-1H-吡唑-3-甲酸乙基酯(1.4g，5.734mmol)LCMS：方法C，2.27分钟，MS：ES+245.4。
步骤b.在rt向1-苄基-5-甲基-1H-吡唑-3-甲酸乙基酯(1.4g，5.73mmol)在THF：水(16ml：4ml)中的溶液中添加LiOH(1.20g，28.65mmol)。在50℃搅拌反应混合物16h。将所得到的反应混合物倾入水(50ml)且用乙酸乙酯(2x 100ml)萃取。使用HCl的1M水溶液(5ml)酸化水层且萃取到EtOAc(2x 50ml)中。用Na2SO4干燥合并的有机相，过滤且减压下浓缩，得到1-苄基-5-甲基-1H-吡唑-3-甲酸(1.10g，5.09mmol)。该物质未经进一步纯化被直接用于下一步中。LCMS：方法C，1.89分钟，MS：ES+217.29。
步骤c-e.使用与针对实施例20，步骤a-c所述的类似的程序，由如上中间体合成了标题化合物。LCMS：方法B，3.68分钟，MS：ES+324.6；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.29(t，J＝6Hz，1H)，7.26-7.37(m，3H)，7.11(d，J＝7.2Hz，2H)，6.47(s，1H)，5.36(s，2H)，3.29-3.43(m，3H)，3.20(t，J＝6.4Hz，2H)，3.12-3.16(m，1H)，2.42-2.46(m，1H)，2.21(s，3H)，1.85-1.93(m，1H)，1.59-1.68(m，1H)。
实施例78(R)-1-苄基-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-1H-咪唑-4-甲酰胺
步骤a.将叔丁氧双(二甲基氨基)甲烷(CAS号5815-08-7；3.500g，20.11mmol)和异氰基乙酸乙酯(CAS号2999-46-4；2.270g，20.11mmol)的混合物在rt搅拌2h。将反应混合物减压下浓缩且通过急骤柱色谱法(15％EtOAc的己烷溶液)纯化所得到的残余物，得到1-(二甲基氨基)-3-乙氧-N-次甲基-3-氧代丙-1-烯-2-胺(1.900g，11.24mmol)。LCMS：方法C，1.570分钟，MS：ES+169.43
步骤b.将1-(二甲基氨基)-3-乙氧-N-次甲基-3-氧代丙-1-烯-2-胺(0.500g，2.98mmol)和苄胺(1.500g，14.9mmol)的混合物在90℃加热2h。将所得到的反应混合物冷却至rt，用水(20ml)稀释且用EtOAc(3x 50ml)萃取。用盐水溶液(20ml)洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥，过滤且减压下浓缩，得到1-苄基-1H-咪唑-4-甲酸乙基酯(0.530g，2.30mmol)。该物质未经任何进一步纯化被直接用于下一步骤中。LCMS：方法C，1.580分钟，MS：ES+231.36
步骤c.在rt向1-苄基-1H-咪唑-4-甲酸乙基酯(0.350g，1.52mmol)和(R)-3-(氨基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(CAS号199174-29-3；0.365g，1.826mmol)在THF(5ml)中的搅拌的溶液中添加DIPEA(0.84ml，4.56mmol)。在rt将三甲基铝(2M在甲苯中；3.8ml，7.6mmol)滴加到反应混合物中，然后在70℃加热16h。将反应混合物冷却至rt，用水(20ml)和NH4Cl溶液(20ml)稀释。用EtOAc(3x 50ml)萃取所述的混合物且将合并的有机层用Na2SO4干燥，过滤且减压下浓缩。通过急骤柱色谱法(2％MeOH的DCM溶液)纯化所得到的残余物，得到(R)-3-((1-苄基-1H-咪唑-4-甲酰氨基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(0.410g，1.067mmol)。LCMS：方法C，1.405分钟，MS：ES+285.48[M-100]
步骤d，e.使用与针对实施例9，步骤c，d所述的类似的程序，由如上中间体合成了标题化合物。LCMS：方法A，2.789分钟，MS：ES+310.10；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.19(t，J＝6.0Hz，1H)，7.85(s，1H)，7.70(s，1H)，7.31-7.39(m，5H)，5.23(s，2H)，3.33-3.43(m，3H)，3.28-3.34(m，2H)，3.11-3.21(m，1H)，2.41-2.46(m，1H)，1.83-1.92(m，1H)，1.58-1.67(m，1H)。
实施例79(R)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-1-(环丙基甲基)-1H-咪唑-4-甲酰胺
通过与实施例78类似的程序，合成了标题化合物。LCMS：方法B，2.583分钟，MS：ES+274.48；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.16(s，1H)，7.73(s，2H)，3.84-3.86(m，2H)，3.32-3.40(m，3H)，3.15-3.22(m，3H)，2.49-2.50(m，1H)，1.87-1.90(m，1H)，1.62-1.70(m，1H)，1.18-1.22(m，1H)，0.50-0.60(m，2H)，0.34-0.40(m，2H)。
实施例41 1-(3-氯苯基)-3-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)脲
步骤a.向1-氯-3-异氰酰苯(0.2mmol)在DCM(1mL)中的溶液中添加3-(氨基甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(0.2mmol)和DIPEA(0.6mmol)。在rt搅拌反应混合物16h。将混合物减压下浓缩且通过制备型TLC(PE：EtOAc 1：2)纯化所得到的残余物，得到3-((3-(3-氯苯基)ureido)甲基)-吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯。MS：ES+354.8。
步骤b、c.使用与针对实施例1，步骤b、c所述的类似的程序，由如上中间体合成了标题化合物，提供了标题化合物(5.03mg，0.018mmol)。LCMS：方法E，保留时间2.56分钟，MS：ES+279.0。
使用与针对实施例41所述的类似的程序，合成了表4中的化合物。
表4
实施例46 N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-N-甲基-3-(2-甲基噻唑-4-基)-苯磺酰胺
步骤a，b.参见针对实施例37，步骤a，b所述的程序。
步骤c.向3-(2-甲基噻唑-4-基)苯-1-磺酰氯(0.2mmol)在DCM(1ml)中的溶液中添加3-((甲基氨基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(0.2mmol)和DIPEA(0.6mmol)。在rt搅拌反应混合物16h。将所得到的混合物减压下浓缩且通过制备型TLC(PE：EtOAc 1：2)纯化残余物，得到3-((N-甲基-3-(2-甲基噻唑-4-基)苯基磺酰氨基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯。MS：ES+452.6。
步骤d，e.使用与针对实施例1，步骤b、c所述的类似的程序，由如上中间体合成了标题化合物，提供了标题化合物(2.0mg，0.005mmol)。LCMS：方法E，保留时间2.82分钟，MS：ES+377.1。
实施例47 N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-N-甲基-4-((5-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)苯磺酰胺
通过与实施例46，步骤c-e类似的程序，合成了标题化合物。LCMS：方法E，3.11分钟，MS：ES+441.0。
实施例48 3-(1-((6-(5-甲基异唑-4-基)苯并[d]噻唑-2-基)氨基)乙基)吡咯烷-1-甲腈
步骤a.在rt向1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-3-甲酸(3.0g，13.94mmol)在DCM(70ml)中的搅拌的溶液中添加CDI(2.2g，13.94mmol)。在rt搅拌反应混合物1h。在rt添加N，O-二甲基羟胺HCl(2.4g，245.1mmol)。将所得到的混合物在rt搅拌16h。将反应混合物倾入水(300ml)且用DCM(2x 100ml)萃取。用Na2SO4干燥合并的有机相，过滤且减压下浓缩，得到3-(甲氧基(甲基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(4.0g，定量)。该物质未经进一步纯化被用于下一步骤中。LCMS：方法C，1.91分钟，MS：ES+259.31；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 3.69(s，3H)，3.44-3.50(m，3H)，3.19-3.28(m，2H)，3.11(s，3H)，1.94-2.08(m，1H)，1.86-1.91(m，1H)，1.40(s，9H)。
步骤b.在0℃在氮气下搅拌3-(甲氧基(甲基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(4.0g，15.50mmol)在THF(70ml)中的溶液。在0℃滴加乙醚(26ml，78mmol)中的3M CH3MgBr。在0℃搅拌反应混合物30分钟。将所得到的反应混合物倾入饱和氯化铵溶液(1L)且用EtOAc(2x 200ml)萃取。用Na2SO4干燥合并的有机相，过滤且减压下浓缩，得到3-乙酰基吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(3.0g，14.08mmol)。该物质未经进一步纯化被用于下一步骤中。LCMS：方法A，3.83分钟，MS：ES+157.89(M-56)；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 3.77-3.40(m，2H)，3.22-3.25(m，3H)，2.17(s，3H)，2.03-2.11(m，1H)，1.85-1.94(m，1H)，1.39(s，9H)。
步骤c.在0℃向3-乙酰基吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(0.5g，2.347mmol)和2-氨基-6-溴苯并噻唑(0.43g，1.88mmol)在THF(10ml)中的搅拌的溶液中添加异丙醇钛(IV)(3.33g，11.7mmol)。在rt搅拌反应混合物16h。在0℃将EtOH(4ml)和硼氢化钠(0.26g，7.04mmol)添加到反应混合物中。在80℃搅拌反应混合物8h。将所得到的反应混合物倾入水(100ml)且通过硅藻土hyflow过滤。将得到的滤液用EtOAc(2x 70ml)萃取。用Na2SO4干燥合并的有机相，过滤且减压下浓缩。通过急骤色谱法(25％EtOAc的己烷溶液)纯化所得到的粗制物质，得到3-(1-((6-溴苯并[d]噻唑-2-基)氨基)乙基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(0.18g，0.423mmol)。LCMS：方法A，5.57分钟，MS：ES+425.8，427.8。
步骤d.在rt在微波可用的瓶中搅拌3-(1-((6-溴苯并[d]噻唑-2-基)氨基)乙基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(0.15g，0.352mmol)、5-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)异唑(0.29g，1.41mmol)和NaHCO3(0.148g，1.76mmol)在DMF：水(4：1；5ml)中的溶液。将所述的混合物脱气30分钟，然后添加Pd(dppf)Cl2(0.025g，0.035mmol)且在微波中将反应混合物加热至90℃持续1h。将所得到的反应混合物倾入水(100ml)且用EtOAc(2x 50ml)萃取。用Na2SO4干燥合并的有机相，过滤且减压下浓缩。通过急骤色谱法(30％EtOAc的己烷溶液)纯化粗制物质，得到3-(1-((6-(5-甲基异唑-4-基)苯并[d]噻唑-2-基)氨基)乙基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(0.1g，0.233mmol)。LCMS：方法A，4.95分钟，MS：ES+429.10。
步骤e，f.使用与针对实施例1，步骤b、c所述的类似的程序，由上述中间体合成了标题化合物，为非对映体的混合物，提供了标题化合物，得到(0.03g，0.084mmol)。LCMS：方法A，4.10分钟，MS：ES+354.0；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.83(s，1H)，8.12(d，J＝8.4Hz，1H)，7.85(s，1H)，7.36-7.44(m，2H)，3.96-4.06(m，1H)，3.45-3.52(m，1H)，3.14-3.21(m，1H)，2.58(s，3H)，2.41-2.46(m，2H)，1.83-2.05(m，1H)，1.55-1.65(m，1H)，1.19(d，J＝6.4Hz，3H)。
实施例49 3-(1-((6-(1H-吡唑-4-基)苯并[d]噻唑-2-基)氨基)乙基)吡咯烷-1-甲腈
通过与实施例48类似的程序，合成了标题化合物。LCMS：方法A，3.32分钟，MS：ES+338.9；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 12.86(s，1H)，8.12(s，1H)，7.99(dd，J＝3，8.4Hz，1H)，7.91(t，J＝2Hz，1H)，7.88(s，1H)，7.45-7.48(m，1H)，7.33(dd，J＝3，8.4Hz，1H)，3.94-3.98(m，1H)，3.43-3.51(m，2H)，3.13-3.22(m，2H)，2.36-2.42(m，1H)，1.95-2.01(m，1H)，1.68-1.75(m，1H)，1.17-1.23(m，3H)。
实施例50 3-(1-(异喹啉-3-基氨基)乙基)吡咯烷-1-甲腈
通过与实施例48类似的程序，合成了标题化合物。LCMS：方法G，24.90分钟，25.00分钟，MS：ES+267.09；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.84(s，1H)，7.78(d，J＝8.4Hz，1H)，7.51-7.54(m，1H)，7.43-7.47(m，1H)，7.12-7.16(m，1H)，6.611(s，1H)，6.41(d，J＝8.8Hz，1H)，3.88-3.97(m，1H)，3.41-3.53(m，2H)，3.76-3.99(m，1H)，3.12-3.20(m，1H)，2.35-2.43(m，1H)，1.97-2.02(m，1H)，1.65-1.76(m，1H)，1.30-1.67(m，3H)。
实施例51 3-((1-(1-氰基吡咯烷-3-基)乙基)氨基)异喹啉-6-甲腈
步骤a.在0℃向1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-3-甲酸(3.00g，13.95mmol)在DCM(70ml)中的溶液中添加CDI(2.26g，13.95mmol)。在rt搅拌反应混合物1h。用N,O-二甲基羟胺HCl(2.03g，2.09mmol)处理反应混合物且搅拌12h。将所得到的反应混合物倾入水(50ml)且用DCM(3x 40ml)萃取。收集合并的有机相，用Na2SO4干燥，过滤且减压下浓缩，得到3-(甲氧基(甲基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(3.20g，12.40mmol)。该物质未经进一步纯化被直接用于下一步骤中。LCMS：方法C，1.90分钟，MS：ES+259.40。
步骤b.在0℃向3-(甲氧基(甲基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(3.20g，12.4mmol)在THF(40ml)中的溶液中添加CH3MgBr在乙醚(21.0ml，63mmol)中的3M溶液。在rt搅拌反应混合物2h。将反应混合物冷却至0℃且通过滴加水(50ml)接着添加EtOAc(50ml)猝灭。通过硅藻土hyflow过滤所得到的反应混合物且用EtOAc(3x 20ml)洗涤硅藻土床。用EtOAc(3x 70ml)萃取滤液。收集合并的有机相，用Na2SO4干燥，过滤且减压下浓缩。通过柱色谱法(5％MeOH的DCM溶液)纯化所得到的残余物，得到3-乙酰基吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(2.10g，9.84mmol)。LCMS：方法C，1.93分钟，MS：ES+214.30。
步骤c.在0℃向3-乙酰基吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(0.70g，3.20mmol)在MeOH(10ml)中的溶液中添加乙酸铵(0.91g，11.00mmol)。在0℃搅拌反应混合物持续1h。在0℃将NaCNBH3(0.60g，9.60mmol)分次添加到反应混合物中。在rt搅拌反应混合物16h。减压下浓缩所得到的反应混合物，用水(150ml)稀释且用EtOAc(2x 20ml)萃取。收集合并的有机相，用Na2SO4干燥，过滤且减压下浓缩，得到3-(1-氨基乙基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(0.47g，2.19mmol)，为非对映体的混合物。该物质未经进一步纯化被直接用于下一步中。LCMS：方法A，3.54&3.67分钟，MS：ES+215.10。
步骤d.向6-溴异喹啉-3-胺(0.80g，3.59mmol)在DMA(10ml)中的溶液中添加Zn(CN)2(2.09g，17.94mmol)和Pd(PPh3)4(1.24g，1.08mmol)。将所得到的反应混合物在90℃加热1h。将所得到的混合物倾入水(100ml)且用EtOAc(3x 100ml)萃取。用Na2SO4干燥合并的有机相，过滤且减压下浓缩。通过柱色谱法(28％EtOAc的己烷溶液)纯化所得到的残余物，得到3-氨基异喹啉-6-甲腈(0.57g，3.37mmol)。LCMS：方法C，1.58分钟，MS：ES+170.23；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.94(s，1H)，8.19(s，1H)，7.95(d，J＝8.40Hz，1H)，7.34(dd，J＝8.40，1.60Hz，1H)，6.67(s，1H)，6.34(s，2H)。
步骤e.在0℃将3-氨基异喹啉-6-甲腈(0.56g，3.31mmol)在浓HCl(3.2ml)中的溶液搅拌15分钟。在0℃将NaNO2(0.22g，3.31mmol)分次添加到反应混合物中且搅拌30分钟。将所得到的反应混合物倾入冰冷水(50ml)且用NaHCO3的饱和水溶液碱化。用EtOAc(3x60ml)萃取所得到的混合物。收集合并的有机相，用Na2SO4干燥，过滤且减压下浓缩。通过柱色谱法(8％EtOAc的己烷溶液)纯化所得到的残余物，得到3-氯异喹啉-6-甲腈(0.40g，2.11mmol)。LCMS：方法C，2.15分钟，MS：ES+189.04；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 9.39(s，1H)，8.63(s，1H)，8.39(d，J＝8.40Hz，1H)，8.17(s，1H)，8.02(dd，J＝8.80，1.60Hz，1H)。
步骤f.在rt向3-氯异喹啉-6-甲腈(0.25g，1.33mmol)和叔丁基3-(1-氨基乙基)吡咯烷-1-甲酸酯(0.42g，1.99mmol)在甲苯(5ml)中的溶液中添加t-BuOK(0.29g，2.66mmol)。将反应混合物脱气15分钟，然后在rt添加Pd2(dba)3(0.12g，0.13mmol)和Ruphos(0.06g，0.13mmol)。在100℃加热反应混合物16h。将所得到的反应混合物倾入水(50ml)且用EtOAc(3x 50ml)萃取。用盐水溶液(50ml)洗涤合并的有机相，用Na2SO4干燥，过滤且减压下浓缩。通过柱色谱法(18％EtOAc的己烷溶液)纯化所得到的残余物，得到3-(1-((6-氰基异喹啉-3-基)氨基)乙基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(0.135g，0.36mmol)。LCMS：方法C，2.58分钟，MS：ES+367.53。
步骤g，h.使用与针对实施例9，步骤c，d所述的类似的程序，由如上中间体合成了标题化合物，提供了(0.071g，0.24mmol)。LCMS：方法A，4.28分钟，MS：ES+292.17；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.98(d，J＝2.40Hz，1H)，8.16(s，1H)，7.96(dd，J＝8.40，2.80Hz，1H)，7.32-7.36(m，1H)，6.85(d，J＝8.80Hz，1H)，6.71(s，1H)，3.95-3.97(m，1H)，3.36-3.49(m，3H)，3.14-3.16(m，1H)，2.34-2.49(m，1H)，1.97-1.99(m，1H)，1.67-1.69(m，1H)，1.15(m，3H)。
实施例52 3-((苯并[d]噻唑-2-基氨基)(氰基)甲基)吡咯烷-1-甲腈
步骤a.将2-氨基苯并噻唑(0.2g，1.33mmol)、1-Boc-吡咯烷-3-甲醛(0.53g，2.67mmol)和Na2SO4(1.0g)在MeOH(15ml)中的混合物在rt搅拌24h。将乙酸(0.5ml)添加到反应混合物中且在rt搅拌另外24h。过滤反应混合物且蒸馏出过量的MeOH。将所得到的残余物溶于THF(5ml)且在rt添加高氯酸锂(0.028g，0.267mmol)。在0℃将氰化三甲基硅烷(0.263g，2.67mmol)添加到反应混合物中。在rt搅拌反应混合物5h。将另外的氰化三甲基硅烷(0.16g，1.60mmol)和苯酚(0.15g，1.60mmol)添加到反应混合物中且加热至回流持续16h。将所得到的反应混合物倾入饱和NaHCO3溶液(50ml)且用EtOAc(3x 15ml)萃取。用水(20ml)洗涤合并的有机相。将有机相分离，用Na2SO4干燥，过滤且减压下浓缩。通过急骤色谱法(20％EtOAc的己烷溶液)纯化所得到的残余物，得到3-((苯并[d]噻唑-2-基氨基)(氰基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(0.640g，定量)。MS：ES+359.25。
步骤b.在0℃向3-((苯并[d]噻唑-2-基氨基)(氰基)甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁基酯(0.32g，0.894mmol)在DCM(10ml)中的搅拌的溶液中添加TFA(0.68ml)。在rt搅拌反应混合物16h。减压下浓缩所得到的反应混合物。使用DCM(10ml)共沸蒸馏所得到的残余物，得到2-(苯并[d]噻唑-2-基氨基)-2-(吡咯烷-3-基)乙腈TFA盐(0.657g，定量)。该物质未经进一步传话备用借用与下一步骤中。LCMS：方法C，1.57分钟，1.66分钟，MS：ES+259.36。
步骤c.在-78℃向2-(苯并[d]噻唑-2-基氨基)-2-(吡咯烷-3-基)乙腈TFA盐(0.65g，1.74mmol)和K2CO3(0.48g，3.49mmol)在THF(10ml)中的溶液中添加溴化氰(0.28g，2.62mmol)。在-78℃将五滴TEA添加到反应混合物中至pH 6。在-78℃搅拌反应混合物。将所得到的反应混合物倾入水(20ml)且用EtOAc(3x 15ml)萃取。用Na2SO4干燥合并的有机相，过滤且减压下浓缩。通过制备型HPLC[流动相：(A)20mM乙酸铵水溶液(B)MeCN，柱：X Select Phenyl Hexyl 250x19mm，5μm，流速：16毫升/分钟]纯化所得到的残余物，得到3-((苯并[d]噻唑-2-基氨基)-(氰基)甲基)吡咯烷-1-甲腈(0.016g，0.056mmol)。LCMS：方法G，22.80分钟，22.97分钟，MS：ES+283.95；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.84(s，1H)，7.79(d，J＝8.0Hz，1H)，7.53(dd，J＝2.8Hz，8.0Hz，1H)，7.31(t，J＝8Hz，1H)，7.14(t，J＝7.6Hz，1H)，5.06-5.18(m，1H)，3.40-3.68(m，4H)，2.88-2.95(m，1H)，2.08-2.21(m，1H)，1.76-1.94(m，1H)。
实施例53 2-((1-(1-氰基吡咯烷-3-基)乙基)氨基)苯并[d]噻唑-6-甲腈
步骤a.在10℃向4-氨基苄腈(1.00g，8.47mmol)在乙酸(12ml)中的溶液中添加硫氰酸钾(1.00g，16.9mmol)。在rt搅拌反应混合物30分钟。在rt将溴(0.5ml，10.16mmol)在乙酸(3ml)中的溶液滴加到反应中。在rt搅拌反应混合物16h。减压下过滤收集所得到的固体沉淀物，用乙酸(10ml)洗涤且真空下干燥。将所得到的沉淀物悬浮于NH4OH的冰冷水溶液(10ml)中且在rt搅拌30分钟。减压下过滤收集所得到的固体沉淀物，真空下干燥，得到2-氨基苯并[d]噻唑-6-甲腈(0.70g，4.00mmol)。该物质未经进一步纯化被直接用于下一步骤中。LCMS：方法C，1.62分钟，MS：ES+176.13。
步骤b.在0℃向CuCl(0.13g，1.02mmol)在MeCN(4ml)中的溶液中添加叔丁基腈(0.24g，2.00mmol)。在0℃搅拌反应混合物10分钟，然后用2-氨基苯并[d]噻唑-6-甲腈(0.18g，1.02mmol)处理。将所得到的反应混合物在70℃加热1h。将所得到的反应混合物倾入水(50ml)且用EtOAc(3x 15ml)萃取。用Na2SO4干燥合并的有机相，过滤且减压下浓缩。将残余物用正戊烷(2x 5ml)研磨，得到2-氯-苯并[d]噻唑-6-甲腈(0.165g，0.84mmol)。该物质未经进一步纯化被直接用于下一步骤中。LCMS：方法C，2.27分钟，MS：ES+195；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.70(s，1H)，8.15(d，J＝8.40Hz，1H)，7.98(d，J＝8.40Hz，1H)。
步骤c-e.使用与针对实施例9，步骤b-d所述的类似的程序，由如上中间体合成了标题化合物。方法A，3.90分钟，MS：ES+298.1；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.58(d，J＝6.00Hz，1H)，8.20(s，1H)，7.62(d，J＝8.40Hz，1H)，7.45(dd，J＝8.40，2.80Hz，1H)，3.99-4.02(m，1H)，3.42-3.51(m，2H)，3.36-3.39(m，1H)，3.13-3.20(m，1H)，2.41-2.44(m，1H)，1.97-1.99(m，1H)，1.65-1.73(m，1H)，1.20(t，J＝8.00Hz，3H)。
实施例54(3aR,6aS)-4-氧代-5-(5-苯基噻唑-2-基)六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-甲腈
步骤a.在rt向2-溴-5-苯基噻唑(0.2g，0.83mmol)在1,4-二烷(6ml)中的溶液中添加(3aR,6aR)-4-氧代六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-甲酸叔丁基酯(0.17g，0.75mmol)。在rt将CuI(0.03g，0.16mmol)、K3PO4(0.71g，3.34mmol)和N,N-二甲基乙二胺(0.01g，0.16mmol)添加到反应混合物中。在100℃加热反应混合物4h。将所得到的反应混合物冷却至rt且倾入水(50ml)。用EtOAc(3x 20ml)萃取所得到的混合物。收集有机相，用Na2SO4干燥，过滤且减压下浓缩。通过使用正戊烷(2x 5ml)溶剂研磨，纯化所得到的残余物。将所得到的物质高真空下干燥，得到(3aR,6aS)-4-氧代-5-(5-苯基噻唑-2-基)六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-甲酸叔丁基酯(0.19g，0.49mmol)，LCMS：方法C，2.40分钟，MS：ES+386.33。
步骤b、c.使用与针对实施例9，步骤c，d所述的类似的程序，由如上中间体合成了标题化合物。LCMS：方法A，4.15分钟，MS：ES+310.93；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 7.97(s，1H)，7.65(d，J＝7.2Hz，2H)，7.43(t，J＝7.6Hz，2H)，7.33(t，J＝7.2Hz，1H)，4.16-4.21(m，1H)，4.01-4.04(m，1H)，3.62-3.71(m，3H)，3.55-3.56(m，1H)，3.44-3.48(m，1H)，3.21-3.25(m，1H)。
本发明的化合物的生物活性
缩写：
TAMRA 羧基四甲基罗丹明
PCR 聚合酶链反应
PBS 磷酸缓冲盐水
EDTA 乙二胺四乙酸
Tris 2-氨基-2-(羟基甲基)-1,3-丙二醇
NP-40 Nonidet P-40，辛基苯氧基聚乙氧基乙醇
BSA 牛血清白蛋白
PNS 外周神经系统
BH3 Bcl-2同源结构域3
PTEN 磷酸酶和张力蛋白同系物
体外USP30抑制试验
USP30生化动力学测定法。在黑色384孔板(小体积，Greiner 784076)中以21μl最终反应体积一式两份进行反应。用反应缓冲液(40mM Tris，pH7.5，0.005％吐温20，0.5mg/ml BSA，5mM–β-巯基乙醇)将USP30 CD(57-517，#64-0057-050 Ubiquigent)稀释至0、0.005、0.01、0.05、0.1和0.5微升/孔的相当量。针对最佳温度、pH、还原剂、盐、温育时间和洗涤剂，优化缓冲液。通过添加50nM的经由异肽键连接至泛素的TAMRA标记的肽作为荧光偏振底物，启动反应。将反应在室温温育并且每2min读数，持续120min。用Pherastar Plus(BMG Labtech)进行读数。λ激发540nm；λ发射590nm。
USP30生化IC50测定法
在96孔聚丙烯V型底板(Greiner#651201)中在50％DMSO中以终浓度的21倍(对于100μM终浓度而言为2100μM)制备稀释平板。典型8点稀释系列为100、30、10、3、1、0.3、0.1、0.03μM终浓度。在黑色384孔板(小体积，Greiner 784076)中以21μl最终反应体积一式两份进行反应。将1μl 50％DMSO或稀释的化合物加入所述平板中。用反应缓冲液(40mMTris，pH7.5，0.005％吐温20，0.5mg/ml BSA，5mM–β-巯基乙醇)将USP30稀释至0.05微升/孔的相当量，并且将10μl稀释的USP30加到化合物中。将酶和化合物在室温温育30min。通过添加50nM的经由异肽键连接至泛素的TAMRA标记的肽作为荧光偏振底物，启动反应。在添加底物和在室温2hr温育后即刻对反应进行读数。用Pherastar Plus(BMG Labtech)进行读数。λ激发540nm；λ发射590nm。
示例性化合物在USP30生化IC50测定法中的活性
范围：
A<0.1μM；
0.1<B<1μM；
1<C<10μM；
10<D<100μM