一种片段法固液结合制备替度鲁肽的方法与流程

文档序号:12399363阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种片段法固液结合制备替度鲁肽的方法,其特征在于,包括如下步骤:

(a)液相条件下合成所需短肽片段:Fmoc-His(Trt)-Gly-OH,Fmoc-Asp(OtBu)-Gly-OH,Fmoc-Ser(tBu)-Phe-OH,Fmoc-Glu(OtBu)-Met-OH,Fmoc-Thr(tBu)-Ile-Leu-OH,Fmoc-Asn(Trt)-Leu-Ala-Ala-OH,Fmoc-Asp(OtBu)-Phe-Ile-OH,Fmoc-Trp(Boc)-Leu-Ile-OH,Fmoc-Lys(Boc)-Ile-OH;

(b)以Wang Resin或CTC树脂为固相载体,在偶联剂存在下,依次与Fmoc-Asp(OtBu)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Lys(Boc)-Ile-OH,Fmoc-Thr(tBu)-OH,Fmoc-Gln(Trt)-OH,Fmoc-Trp(Boc)-Leu-Ile-OH,Fmoc-Asn(Trt)-OH,Fmoc-Asp(OtBu)-Phe-Ile-OH,Fmoc-Arg(Pbf)-OH,Fmoc-Asn(Trt)-Leu-Ala-Ala-OH,Fmoc-Asp(OtBu)-OH,Fmoc-Thr(tBu)-Ile-Leu-OH,Fmoc-Asn(Trt)-OH,Fmoc-Glu(OtBu)-Met-OH,Fmoc-Asp(OtBu)-OH,Fmoc-Ser(tBu)-OH,Fmoc-Ser(tBu)-Phe-OH,Fmoc-Asp(OtBu)-Gly-OH,Fmoc-His(Trt)-Gly-OH偶联,得侧链保护的替度鲁肽肽树脂,其结构如下:

Fmoc-His(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Gly-Ser(tBu)-Phe-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Ile-Leu-Asp(OtBu)-Asn(Trt)-Leu-Ala-Ala-Arg(Pbf)-Asp(OtBu)-Phe-Ile-Asn(Trt)-Trp(Boc)-Leu-Ile-Gln(OtBu)-Thr(tBu)-Lys(Boc)-Ile-Thr(tBu)-Asp(OtBu)-Resin;

(c)替度鲁肽肽树脂经过裂解,纯化,冻干得到替度鲁肽精肽。

2.根据权利要求1所述的一种以片段法固液结合制备替度鲁肽的方法,其特征在于,步骤(a)中,

所述的Fmoc-His(Trt)-Gly-OH的制备方法为:首先将Fmoc-His(Trt)-OH和HOSu在DCC条件下生成Fmoc-His(Trt)-OSu,然后将生成的Fmoc-His(Trt)-OSu和H-Gly-OH在碱A条件下生成Fmoc-His(Trt)-Gly-OH;

所述的Fmoc-Asp(OtBu)-Gly-OH的制备方法为:首先将Fmoc-Asp(OtBu)-OH和HOSu在DCC条件下生成Fmoc-Asp(OtBu)-OSu,然后将生成的Fmoc-Asp(OtBu)-OSu和H-Gly-OH在碱A条件下生成Fmoc-Asp(OtBu)-Gly-OH;

所述的Fmoc-Ser(tBu)-Phe-OH的制备方法为:首先将Fmoc-Ser(tBu)-OH和HOSu在DCC条件下生成Fmoc-Ser(tBu)-OSu,然后将生成的Fmoc-Ser(tBu)-OSu和H-Phe-OH在碱A条件下生成Fmoc-Ser(tBu)-Phe-OH;

所述的Fmoc-Glu(OtBu)-Met-OH的制备方法为:首先将Fmoc-Glu(OtBu)-OH和HOSu在DCC条件下生成Fmoc-Glu(OtBu)-OSu,然后将生成的Fmoc-Glu(OtBu)-OSu和H-Met-OH在碱A条件下生成Fmoc-Glu(OtBu)-Met-OH;

所述的Fmoc-Thr(tBu)-Ile-Leu-OH的制备方法为:首先将Fmoc-Thr(tBu)-OH和HOSu在DCC条件下生成Fmoc-Thr(tBu)-OSu,然后将生成的Fmoc-Thr(tBu)-OSu和H-Ile-OH在碱A条件下生成Fmoc-Thr(tBu)-Ile-OH,Fmoc-Thr(tBu)-Ile-OH和HOSu在DCC条件下生成Fmoc-Thr(tBu)-Ile-OSu,最后将生成的Fmoc-Thr(tBu)-Ile-OSu和H-Leu-OH在碱A条件下生成Fmoc-Thr(tBu)-Ile-Leu-OH;

所述的Fmoc-Asn(Trt)-Leu-Ala-Ala-OH的制备方法为:首先将Fmoc-Asn(Trt)-OH和HOSu在DCC条件下生成Fmoc-Asn(Trt)-OSu,然后将生成的Fmoc-Asn(Trt)-OSu和H-Leu-OH在碱A条件下生成Fmoc-Asn(Trt)-Leu-OH,Fmoc-Asn(Trt)-Leu-OH和HOSu在DCC条件下生成Fmoc-Asn(Trt)-Leu-OSu,Fmoc-Asn(Trt)-Leu-OSu和H-Ala-OH在碱A条件下生成Fmoc-Asn(Trt)-Leu-Ala-OH,Fmoc-Asn(Trt)-Leu-Ala-OH和HOSu在DCC条件下生成Fmoc-Asn(Trt)-Leu-Ala-OSu,Fmoc-Asn(Trt)-Leu-Ala-OSu和H-Ala-OH在碱A条件下生成Fmoc-Asn(Trt)-Leu-Ala-Ala-OH;

所述的Fmoc-Asp(OtBu)-Phe-Ile-OH的制备方法为:首先将Fmoc-Asp(OtBu)-OH和HOSu在DCC条件下生成Fmoc-Asp(OtBu)-OSu,然后将生成的Fmoc-Asp(OtBu)-OSu和H-Phe-OH在碱A条件下生成Fmoc-Asp(OtBu)-Phe-OH,Fmoc-Asp(OtBu)-Phe-OH和HOSu在DCC条件下生成Fmoc-Asp(OtBu)-Phe-OSu,Fmoc-Asp(OtBu)-Phe-OSu和H-Ile-OH在碱A条件下生成Fmoc-Asp(OtBu)-Phe-Ile-OH;

所述的Fmoc-Trp(Boc)-Leu-Ile-OH的制备方法为:首先将Fmoc-Trp(Boc)-OH和HOSu在DCC条件下生成Fmoc-Trp(Boc)-OSu,然后将生成的Fmoc-Trp(Boc)-OSu和H-Leu-OH在碱A条件下生成Fmoc-Trp(Boc)-Leu-OH,Fmoc-Trp(Boc)-Leu-OH和HOSu在DCC条件下生成Fmoc-Trp(Boc)-Leu-OSu,Fmoc-Trp(Boc)-Leu-OSu和H-Ile-OH在碱A条件下生成Fmoc-Trp(Boc)-Leu-Ile-OH;

所述的Fmoc-Lys(Boc)-Ile-OH的制备方法为:首先将Fmoc-Lys(Boc)-OH和HOSu在DCC条件下生成Fmoc-Lys(Boc)-OSu,然后将生成的Fmoc-Lys(Boc)-OSu和H-Ile-OH在碱A条件下生成Fmoc-Lys(Boc)-Ile-OH。

3.根据权利要求2所述的一种以片段法固液结合制备替度鲁肽的方法,其特征在于,步骤(a)中,所述的碱A为碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸氢钾、碳酸钾中的一种。有机溶剂B为四氢呋喃、二氧六环、丙酮、乙腈中的一种或几种。

4.根据权利要求1所述的一种以片段法固液结合制备替度鲁肽的方法,其特征在于,步骤(b)中,以Fmoc-Lys(Boc)-Ile-OH投料偶联30~31位,以Fmoc-Trp(Boc)-Leu-Ile-OH投料偶联25~27,以Fmoc-Asp(OtBu)-Phe-Ile-OH投料偶联21~23位,以Fmoc-Asn(Trt)-Leu-Ala-Ala-OH投料偶联16~19位,以Fmoc-Thr(tBu)-Ile-Leu-OH投料偶联12~14位,以Fmoc-Glu(OtBu)-Met-OH投料偶联9~10位,以Fmoc-Ser(tBu)-Phe-OH投料偶联5~6位,以Fmoc-Asp(OtBu)-Gly-OH投料偶联3~4位,以Fmoc-His(Trt)-Gly-OH投料偶联1~2位。

5.根据权利要求1所述的一种以片段法固液结合制备替度鲁肽的方法,其特征在于,步骤(b)中,Fmoc-Lys(Boc)-Ile-OH,Fmoc-Trp(Boc)-Leu-Ile-OH,Fmoc-Asp(OtBu)-Phe-Ile-OH,Fmoc-Asn(Trt)-Leu-Ala-Ala-OH,Fmoc-Thr(tBu)-Ile-Leu-OH,Fmoc-Glu(OtBu)-Met-OH,Fmoc-Ser(tBu)-Phe-OH,Fmoc-Asp(OtBu)-Gly-OH,Fmoc-His(Trt)-Gly-OH的摩尔投料比为树脂的3~5倍,其余单个氨基酸的摩尔投料比为树脂的2~3倍。

6.根据权利要求1所述的一种以片段法固液结合制备替度鲁肽的方法,其特征在于,步骤(b)中,所述的Wang Resin或CTC Resin初始替代度为0.3~0.5mmol/g,改造后树脂替代度为0.25~0.45mmol/g。

7.根据权利要求1所述的一种以片段法固液结合制备替度鲁肽的方法,其特征在于,改造后树脂优选替代度为0.30~0.35mmol/g。

8.根据权利要求1所述的一种以片段法固液结合制备替度鲁肽的方法,其特征在于,步骤(b)中,所述的偶联剂为HOBt/DIC,HOAt/DIC,HOBt/HBTU/DIEA,HOAt/HATU/DIEA,PyBOP/DIEA,TBTU/DIEA中的一种或几种。

9.根据权利要求1所述的一种以片段法固液结合制备替度鲁肽的方法,其特征在于,步骤(c)中,所述的裂解试剂为加入体积比1-5%清除剂的TFA溶液,所述清除剂为苯甲醚、苯甲硫醚、乙二硫醇、苯酚、水、中的一种或几种。

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