本申请是发明专利申请200880121225.5的分案申请，原申请申请日为2008年12月17日，名称为“间质性膀胱炎的治疗”。本发明涉及抗-ngf抗体在治疗或预防与间质性膀胱炎(interstitialcystitis)和/或痛性膀胱综合征(painfulbladdersyndrome)和/或膀胱疼痛综合征(bladderpainsyndrome)相关的疼痛和/或下泌尿道症状(luts)中的用途。
背景技术：
：间质性膀胱炎(ic)是一种来源未知的慢性膀胱疾病，其特征是疼痛(例如骨盆疼痛)症状和下泌尿道症状(luts)，例如增加的尿频/尿急。更近期以来，该术语已发展为包括伴随ic的痛性膀胱综合征(pbs)(macdiarmidsa等，revurol2007；9(1):9-16)或膀胱疼痛综合征(bps)(vandermerve等，europeanurology53(2008)60-67)，即ic/pbs/bps，集合描述这种症状复合情况。ic/pbs/bps的患病率(prevalencerate)为每100,000个女性中有67至230个具有临床确认疾病从，尽管该数字很可能比这更高，这是由于不足诊断(under-diagnosis)或通常误诊(mis-diagnosis)为子宫内膜异位症、再发性尿道感染(recurrenturinarytractinfection)、膀胱过动症(overactivebladder)或外阴痛(vulvodynia)(forrestjb等，clinicalcourier2006；24(3):1-8)。ic对生活质量具有显著影响，影响旅行、家庭关系和就业(sladed等，urol1997；49(5asuppl):10-3)，并且伴随着抑郁症状(rothrockne等，jurol2002；167:1763-1767)。针对ic，少有充分进行的、有安慰剂对照的、随机化的疗法试验，并且治疗通常由多式试错法(multimodaltrial-and-errorapproach)组成，如对interstitialcystitisdatabase研究中患者的一篇综述所证明(rovnere等，jurol2000；56:940-5)，其中报道了183种不同类型的治疗。没有一种病因学已被鉴定，并且其最可能是一种具有若干泌尿科发作的多因子过程，所述泌尿科发作引起上皮细胞功能障碍的自身永存(self-perpetuating)过程、c-神经纤维活化和肥大细胞的增殖，导致恶化的组织损伤、瘢痕形成和纤维化。炎症对c纤维的反复刺激和膀胱中感觉神经的上调最终导致永久性改变(中枢化)，引起痛觉过敏、慢性膀胱疼痛和排尿功能障碍(forrestjb等，clinicalcourier2006；24(3):1-8)。尽管对ic的基本原因没有达成一致，但是已有的数据导向下述推测：可能涉及上皮功能障碍、肥大细胞活化和神经原性炎症三种病理生理机制(nazifo等，urol2007；69(suppl4a):24-33)。持续需要针对间质性膀胱炎和/或痛性膀胱综合征和/或膀胱疼痛综合征的疼痛和/或下泌尿道症状而言提供新颖、有效的治疗，但没有不良影响或目前可获得的疗法的局限疗效。已报道在患有间质性膀胱炎的患者中测试了重组人抗-ngf(神经生长因子)抗体(dimitrakov,等，j.urology.vol171(4),supplement,363(2004))。尽管该研究的目的是“在大量先前治疗中失败的、具有显著神经损伤和神经性疼痛组件的一组ic患者中”评价效率和安全性，但是仅使用泌尿神经损伤标记物水平报道了对神经损伤的影响。需要注意到，其未报道在治疗病症的疼痛和/或下泌尿道症状中的功效。之前有报道称抗-ngf抗体e3在疼痛的治疗中有用，所述疼痛包括风湿性关节炎疼痛、骨关节炎疼痛和手术后疼痛(见例如wo2004/058184)。然而，考虑到间质性膀胱炎的病因学和对该病症机制的了解不足，不能够容易地预测到抗-ngf抗体(例如抗体e3)可以被用于治疗与间质性膀胱炎和/或痛性膀胱综合征和/或膀胱疼痛综合征相关的疼痛和/或下泌尿道症状(luts)。技术实现要素：在本发明的一个方面中提供了用于治疗或预防与间质性膀胱炎和/或痛性膀胱综合征和/或膀胱疼痛综合征相关的疼痛和/或下泌尿道症状(luts)的方法，所述方法包括施用有效量的抗-ngf拮抗剂抗体。在一个实施方式中，所述抗体：(a)以小于约2nm的kd结合ngf；(b)以约100pm或更小的ic50抑制小鼠e13.5三叉神经神经元的人ngf-依赖型存活，其中所述ic50在存在约15pm人ngf时测量；和/或(c)以约10pm或更小的ic50抑制小鼠e13.5三叉神经神经元的人ngf-依赖型存活，其中所述ic50在存在约1.5pmngf时测量。与间质性膀胱炎和/或痛性膀胱综合征和/或膀胱疼痛综合征相关的疼痛包括下腹部(骨盆)疼痛；膀胱疼痛；耻骨上疼痛；阴道疼痛；阴茎、睾丸、阴囊和会阴疼痛；尿道疼痛；性交障碍(dyspareneuria)；当膀胱充满时可能提高的疼痛、压力或不适。下泌尿道症状包括三组泌尿症状，其可定义为储尿(刺激性)症状、排尿(阻塞性)症状及排尿后症状。储尿症状包括尿急、尿频、夜尿、急迫性尿失禁及压力性尿失禁，这些与膀胱过动症(oab)及良性前列腺增生(bph)相关。排尿症状包括尿无力(hesitancy)、排尿不顺(poorflow)、排尿断断续续(intermittency)、用力排尿(straining)及排尿困难(dysuria)。排尿后症状包含尿末滴沥(terminaldribbling)、排尿后滴尿(post-voiddribbling)及残尿感(senseofincompleteemptying)。膀胱过动症(oab)定义为尿急(含或不含急迫性尿失禁)，通常会伴随有尿频和夜尿[abrams等.,neurourologyandurodynamics21:167-178(2002)]。oab在男性及女性中的流行程度相近，美国人口中有大约16％患有此症状[stewart等,prevalenceofoveractivebladderintheunitedstates:resultsfromthenobleprogram；abstractpresentedatthe2ndinternationalconsultationonincontinence,july2001,paris,france]。术语“潮湿oab(obdwet)”及“干燥oab(obddry)”分别描述患有或未患有尿失禁的oab患者。之前，oab的主要症状被认为是尿失禁。然而，随着新术语的出现，这对大量未失禁的患者(即干燥oab患者)明显是无意义的。因此，来自liberman等[‘healthrelatedqualityoflifeamongadultswithsymptomsofoveractivebladder:resultsfromauscommunity-basedsurvey’；urology57(6),1044-1050,2001]的2001年的研究检验了所有oab症状对以社区为基础的美国人口样本的生活品质的影响。该研究阐明，与对照比较时，患有oab而没有任何明显漏尿的个体具有受损的生活品质。bph是一种慢性进行性疾病，其会导致例如急性尿滞留、再发性泌尿道感染、膀胱结石和肾脏机能障碍的并发症。在男性中，与bph相关的luts的流行程度及平均严重性会随着年龄增加而增加。bph导致前列腺体积增加、造成尿道及膀胱出口阻塞和膀胱功能的继发性改变。该效应可由储尿(刺激性)及排尿(阻塞性)症状二者表现。根据本发明已经显示，抗-ngf拮抗剂抗体能够抑制或阻断与间质性膀胱炎和/或痛性膀胱综合征和/或膀胱疼痛综合征相关的疼痛和/或下泌尿道症状(luts)。在一些实施方式中，在施用抗-ngf拮抗剂抗体后约24小时内，疼痛和/或下泌尿道综合征得到缓解。在一些实施方式中，在施用抗-ngf拮抗剂抗体后约4天内，疼痛和/或下泌尿道症状得到缓解。在一些实施方式中，在观察到个体病症改善的指征之前或无所述指征时，疼痛和/或下泌尿道症状得到缓解。在本发明的又一方面中，提供了用于治疗或预防与间质性膀胱炎和/或痛性膀胱综合征和/或膀胱疼痛综合征相关的疼痛和/或下泌尿道症状(luts)的方法，所述方法包括施用有效量的包含下述重链可变区的抗-ngf抗体，所述重链可变区包含：(a)seqidno:3中所示的cdr1区；(b)seqidno:4中所示的cdr2区；和(c)seqidno:5中所示的cdr3区。在本发明的另一方面中提供了用于治疗或预防与间质性膀胱炎和/或痛性膀胱综合征和/或膀胱疼痛综合征相关的疼痛和/或下泌尿道症状(luts)的方法，所述方法包括施用有效量的包含下述轻链可变区的抗-ngf抗体，所述轻链可变区包含：(a)seqidno:6中所示的cdr1区；(b)seqidno:7中所示的cdr2区；和(c)seqidno:8中所示的cdr3区。抗-ngf拮抗剂抗体可还包含下述重链可变区，所述重链可变区包含：(a)seqidno:3中所示的cdr1区；(b)seqidno:4中所示的cdr2区；和(c)seqidno:5中所示的cdr3区。抗-ngf抗体可包含下述重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含与seqidno.1的氨基酸序列至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列，所述轻链可变区包含与seqidno.2的氨基酸序列至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列，其中所述抗体特异性结合ngf。抗-ngf抗体的重链可变区和/或轻链可变区可包含一个或多个各自的框架突变。在一个方面中，框架突变可以用互补的鼠框架残基代替人框架残基。突变可在重链可变区中包含v71k取代。抗-ngf拮抗剂抗体可包含下述重链可变区和/或可包含下述轻链可变区，所述重链可变区包含seqidno:1的氨基酸序列，所述轻链可变区包含seqidno:2的氨基酸序列。抗-ngf拮抗剂抗体可以是包含seqidnos:1和2中所述氨基酸序列的抗体。抗-ngf拮抗剂抗体可以是包含seqidnos:16和17中所示氨基酸序列的抗体。抗-ngf拮抗剂抗体可包含下述重链和轻链，所述重链包含与seqidnos:16的氨基酸序列至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列，所述轻链包含与seqidnos:17的氨基酸序列至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列，其中所述抗体特异性结合ngf。抗-ngf拮抗剂抗体可与本文定义的抗-ngf拮抗剂抗体竞争ngf结合。抗-ngf拮抗剂抗体可与包含下述重链可变区和轻链可变区的抗体竞争ngf结合，所述重链可变区包含seqidno:1的氨基酸序列，所述轻链可变区包含seqidno:2的氨基酸序列。抗-ngf拮抗剂抗体可以是人源化的。抗体可以是特异性结合人和啮齿类ngf的抗体e3。抗体e3描述于wo2004/058184中，其内容通过引用整体并入本文。e3的重链和轻链可变区的氨基酸序列分别展示于seqidno.1和2(wo2004/058184的图1a和1b)中。抗体e3的cdr部分(包括chothia和kabatcdr)图示于wo2004/058184的图1a和1b中。下文还展示了e3重链和轻链和各个扩大的cdr的氨基酸序列(见下文“抗体序列”)。抗体e3高度有效地隔离ngf并防止其与其受体相互作用。e3及其鼠前体抗体911已显示在病理学疼痛(包括关节炎、癌症疼痛和手术后疼痛)的非临床动物模型中是有效的镇痛药。在另一方面中，抗体包含抗体e3的片段或区域(在本文中可互换地称作“e3”)。在一个实施方式中，片段是wo2004/058184的图1b和本文seqidno.17中所示的抗体e3的轻链。在另一个实施方式中，片段是wo2004/058184的图1a和本文seqidno.16中所示的抗体e3的重链。在另一实施方式中，片段含有来自抗体e3轻链和/或重链的一个或多个可变区。还在另一实施方式中，片段含有来自分别展示于wo2004/058184的图1a和1b和本文seqidnos.17和16中的抗体e3轻链和/或重链的一个或多个cdr。在另一方面中，抗体包含由保藏号为atccno.pta-4893或atccno.pta-4894的宿主细胞生产的多核苷酸编码的轻链。在另一方面中，抗体包含由保藏号为atccno.pta-4895的宿主细胞生产的多核苷酸编码的重链。在另一方面中，抗体包含(a)由保藏号为atccno.pta-4894或atccno.pta-4893的宿主细胞生产的多核苷酸编码的轻链；和(b)由保藏号为atccno.pta-4895的宿主细胞生产的多核苷酸编码的重链(本文中为了便利，将保藏的宿主细胞生产的多核苷酸称作具有atccnospta-4894、pta-4893和pta-4895的保藏号)。在另一方面中，抗体包含由保藏号为atccno.pta-4894或atccno.pta-4893的宿主细胞生产的多核苷酸编码的轻链的轻链可变区。在另一方面中，抗体包含由保藏号为atccno.pta-4895的宿主细胞生产的多核苷酸编码的重链的重链可变区。在另一方面中，抗体包含(a)由保藏号为atccno.pta-4894或atccno.pta-4893的宿主细胞生产的多核苷酸编码的轻链的轻链可变区，和(b)由保藏号为atccno.pta-4895的宿主细胞生产的多核苷酸编码的重链的重链可变区。还在另一方面中，抗体包含(a)由保藏号为atccno.pta-4894的宿主细胞生产的多核苷酸编码的一个或多个cdr；和/或(b)由保藏号为atccno.pta-4895的宿主细胞生产的多核苷酸编码的重链。在一些实施方式中，抗体可以是全长抗体，其可以是igg2亚类的。抗体可包含人重链igg2a恒定区。在一些实施方式中，抗体包含人轻链κ恒定区。在一些实施方式中，抗体包含经修饰的恒定区，例如免疫惰性的恒定区，例如其不引发补体介导的裂解，或者不刺激抗体-依赖型细胞介导的细胞毒性(adcc)。在其它一些实施方式中，恒定区如eur.j.immunol.(1999)29:2613-2624；pctwo9958572中所述被修饰。抗体可包含含有a330p331到s330s331的突变的人重链igg2a恒定区(氨基酸编号参照野生型igg2a序列)。在一些实施方式中，抗体可以是抗体片段，例如fab或fab’2片段，或是单链抗体。在另一方面中，抗体包含任何以下内容中的一个或多个：a)seqidnos.1-8中所示的e3抗体的一个或多个cdr(wo2004/058184的图1a和1b)；b)来自seqidno.1和5中所示的抗体e3的重链的cdrh3(wo2004/058184的图1a)；c)来自seqidno.2和8中所示的抗体e3的轻链的cdrl3(wo2004/058184的图1b)；d)来自seqidno.2、6-8中所示的抗体e3的轻链的三个cdr(wo2004/058184的图1b)；e)来自seqidnos.1、3-5中所示的抗体e3的重链的三个cdr(wo2004/058184的图1a)；和f)来自seqidnos.1-8中所示的抗体e3的轻链的三个cdr和重链的三个cdr(wo2004/058184的图1a和1b)。在另一方面中，抗体可包含以下内容中的一个或多个：a)来自seqidnos.1-8中所示的抗体e3的一个或多个(一个、两个、三个、四个、五个或六个)cdr(wo2004/058184的图1a和1b)；b)来自seqidnos.1和5中所示抗体e3的重链的cdrh3的cdr(wo2004/058184的图1a)；和/或c)来自seqidnos.2和8中所示的抗体e3的轻链的cdrl3的cdr(wo2004/058184的图1b)。在一些实施方式中，cdr可以是kabatcdr、chothiacdr或kabat与chothiacdr的组合(在本文中称作“扩大”或“合并”的cdr)。在一些实施方式中，多肽包含本文所述任何cdr构型(包括组合、变异等)。在一个方面中，抗体包含含有seqidno:9的重链可变区，其中i34为s、l、v、a或i；并且n35被n、t或s取代。在本文中为了便利，本文上下文或涉及氨基酸时“被取代”或“是”是指给定位置上的氨基酸的选择。显然，取代或选择可以是本文seqid中所示的氨基酸。在另一方面中，抗体包含含有seqidno:10的重链可变区，其中m50是m、i、g、q、s或l；a62是a或s；且l63是l或v。在另一方面中，抗体包含含有seqidno:11的重链可变区，其中y100是y、l或r；其中y101是y或w；其中g103是g、a或s；其中t104是t或s；其中s105是s、a或t；其中y106是y、r、t或m；其中y107是y或f；其中f108是f或w；其中d109是d、n或g；并且其中y110是y、k、s、r或t。在另一方面中，抗体包含含有seqidno:11的重链可变区，其中y100是y、l或r；其中y101是y或w；其中g103是g、a或s；其中t104是t或s；其中s105是s、a或t；其中y106是y、r、t或m；其中y107是y或f；其中f108是f或w；其中d109是s、a、c、g、d、n、t或g；并且其中y110是任何氨基酸。在另一方面中，抗体包含含有seqidno:11的重链可变区，其中g98是g、s、a、c、v、n、d或t；其中g99是g、s、a、c、v、n、d或t；其中y100是y、l或r；其中y101是y或w；其中g103是g、a或s；其中t104是t或s；其中s105是s、a或t；其中y106是y、r、t或m；其中y107是y或f；其中f108是f或w；其中d109是s、a、c、g、d、n、t或g；并且其中y110是任何氨基酸。在另一方面中，抗体包含含有seqidno:12的轻链可变区，其中s26是s或f；d28是d、s、a或y；并且h32是h、n或q。在另一方面中，抗体包含含有seqidno:13的轻链可变区，其中i51是i、t、v或a；并且s56是s或t。在另一方面中，抗体包含含有seqidno:14的轻链可变区，其中s91是s或e；k92是k、h、r或s；并且其中y96是y或r。在另一方面中，抗体包含含有seqidno:14的轻链可变区，其中s91是s或e；k92是任何氨基酸；t93是任何氨基酸；并且其中y96是y或r。在一个方面中，抗体包含seqidno:9中所示氨基酸序列，其中i34是s、l、v、a或i；并且n35是n、t或s。在另一方面中，抗体包含seqidno:10中所示氨基酸序列，其中m50是m、i、g、q、s或l；a62是a或s；并且l63是l或v。在另一方面中，抗体包含seqidno:11中所示氨基酸序列，其中y100是y、l或r；其中y101是y或w；其中g103是g、a或s；其中t104是t或s；其中s105是s、a或t；其中y106是y、r、t或m；其中y107是y或f；其中f108是f或w；其中d109是d、n或g；并且其中y110是y、k、s、r或t。在另一方面中，抗体包含seqidno:11中所示氨基酸序列，其中y100是y、l或r；其中y101是y或w；其中g103是g、a或s；其中t104是t或s；其中s105是s、a或t；其中y106是y、r、t或m；其中y107是y或f；其中f108是f或w；其中d109是s、a、c、g、d、n、t或g；并且其中y110是任何氨基酸。在另一方面中，抗体包含seqidno:11中所示氨基酸序列，其中g98是g、s、a、c、v、n、d或t；其中g99是g、s、a、c、v、n、d或t；其中y100是y、l或r；其中y101是y或w；其中g103是g、a或s；其中t104是t或s；其中s105是s、a或t；其中y106是y、r、t或m；其中y107是y或f；其中f108是f或w；其中d109是s、a、c、g、d、n、t或g；并且其中y110是任何氨基酸。在另一方面中，抗体包含seqidno:12中所示氨基酸序列，其中s26是s或f；d28是d、s、a或y；并且h32是h、n或q。在另一方面中，抗体包含seqidno:13中所示氨基酸序列，其中i51是i、t、v或a；并且s56是s或t。在另一方面中，抗体包含seqidno:14中所示氨基酸序列，其中s91是s或e；k92是k、h、r或s；并且其中y96是y或r。在另一方面中，抗体包含seqidno:14中所示氨基酸序列，其中s91是s或e；k92是任何氨基酸；t93是任何氨基酸；并且其中y96是y或r。在另一方面中，抗体包含含有以下的重链可变区：seqidno:9的cdr1区，其中i34是s、l、v、a或i；并且n35是n、t或s；seqidno:10的cdr2区，其中m50是m、i、g、q、s或l；a62是a或s；并且l63是l或v；和seqidno:11的cdr3区，其中y100是y、l或r；其中y101是y或w；其中g103是g、a或s；其中t104是t或s；其中s105是s、a或t；其中y106是y、r、t或m；其中y107是y或f；其中f108是f或w；其中d109是d、n或g；其中y110是y、k、s、r或t。在一些实施方式中，重链可变区包含seqidno:11的cdr3区，其中y100是y、l或r；其中y101是y或w；其中g103是g、a或s；其中t104是t或s；其中s105是s、a或t；其中y106是y、r、t或m；其中y107是y或f；其中f108是f或w；其中d109是s、a、c、g、d、n、t或g；其中y110是任何氨基酸。在其它一些实施方式中，重链可变区包含seqidno:11的cdr3区，其中g98是g、s、a、c、v、n、d或t；其中g99是g、s、a、c、v、n、d或t；其中y100是y、l或r；其中y101是y或w；其中g103是g、a或s；其中t104是t或s；其中s105是s、a或t；其中y106是y、r、t或m；其中y107是y或f；其中f108是f或w；其中d109是s、a、c、g、d、n、t或g；并且其中y110是任何氨基酸。在一些实施方式中，抗体还包含抗体轻链可变区。在另一方面中，抗体包含含有以下的轻链可变区：seqidno:12的cdr1区，其中s26是s或f；d28是d、s、a或y；并且h32是h、n或q；seqidno:13的cdr2区，其中i51是i、t、v或a；并且s56是s或t；和seqidno:14的cdr3区，其中s91是s或e；k92是k、h、r或s；并且其中y96是y或r。在一些实施方式中，轻链可变区包含seqidno:14的cdr3区，其中s91是s或e；k92是任何氨基酸；t93是任何氨基酸；并且其中y96是y或r。在一些实施方式中，抗体还包含抗体重链。在另一方面中，抗体包含(a)包含以下的重链可变区：seqidno:9的cdr1区，其中i34是s、l、v、a或i；并且n35是n、t或s；seqidno:10的cdr2区，其中m50是m、i、g、q、s或l；a62是a或s；并且l63是l或v；和seqidno:11的cdr3区，其中y100是y、l或r；其中y101是y或w；其中g103是g、a或s；其中t104是t或s；其中s105是s、a或t；其中y106是y、r、t或m；其中y107是y或f；其中f108是f或w；其中d109是d、n或g；其中y110是y、k、s、r或t；和(b)包含以下的轻链可变区：seqidno:12的cdr1区，其中s26是s或f；d28是d、s、a或y；并且h32是h、n或q；seqidno:13的cdr2区，其中i51是i、t、v或a；并且s56是s或t；和seqidno:14的cdr3区，其中s91是s或e；k92是k、h、r或s；并且其中y96是y或r。在一些实施方式中，轻链可变区包含seqidno:14的cdr3区，其中s91是s或e；k92是任何氨基酸；t93是任何氨基酸；并且其中y96是y或r。在一些实施方式中，重链可变区包含seqidno:11的cdr3，其中y100是y、l或r；其中y101是y或w；其中g103是g、a或s；其中t104是t或s；其中s105是s、a或t；其中y106是y、r、t或m；其中y107是y或f；其中f108是f或w；其中d109是s、a、c、g、d、n、t或g；其中y110是任何氨基酸。在其它一些实施方式中，重链可变区包含seqidno:11的cdr3区，其中g98是g、s、a、c、v、n、d或t；其中g99是g、s、a、c、v、n、d或t；其中y100是y、l或r；其中y101是y或w；其中g103是g、a或s；其中t104是t或s；其中s105是s、a或t；其中y106是y、r、t或m；其中y107是y或f；其中f108是f或w；其中d109是s、a、c、g、d、n、t或g；并且其中y110是任何氨基酸。在一些实施方式中，抗体还包含抗体轻链。在另一方面中，抗体包含：seqidno:9中所示氨基酸序列，其中i34是s、l、v、a或i；并且n35是n、t或s；seqidno:10中所示氨基酸序列，其中m50是m、i、g、q、s或l；a62是a或s；并且l63是l或v；和seqidno:11中所示氨基酸序列，其中y100是y、l或r；其中y101是y或w；其中g103是g、a或s；其中t104是t或s；其中s105是s、a或t；其中y106是y、r、t或m；其中y107是y或f；其中f108是f或w；其中d109是d、n或g；其中y110是y、k、s、r或t。在一些实施方式中，抗体包含seqidno:11中所示氨基酸序列，其中y100是y、l或r；并且其中y101是y或w；其中g103是g、a或s；其中t104是t或s；其中s105是s、a或t；其中y106是y、r、t或m；其中y107是y或f；其中f108是f或w；其中d109是s、a、c、g、d、n、t或g；并且其中y110是任何氨基酸。在其它一些实施方式中，多肽包含seqidno:11中所示氨基酸序列，其中g98是g、s、a、c、v、n、d或t；其中g99是g、s、a、c、v、n、d或t；其中y100是y、l或r；其中y101是y或w；其中g103是g、a或s；其中t104是t或s；其中s105是s、a或t；其中y106是y、r、t或m；其中y107是y或f；其中f108是f或w；其中d109是s、a、c、g、d、n、t或g；并且其中y110是任何氨基酸。在一些实施方式中，抗体还包含抗体轻链可变区。在另一方面中，抗体包含：seqidno:12中所示氨基酸序列，其中s26是s或f；d28是d、s、a或y；并且h32是h、n或q；seqidno:13中所示氨基酸序列，其中i51是i、t、v或a；并且s56是s或t；和seqidno:14中所示氨基酸序列，其中s91是s或e；k92是k、h、r或s；并且其中y96是y或r。在一些实施方式中，抗体包含seqidno:14中所示氨基酸序列，其中s91是s或e；k92是任何氨基酸；t93是任何氨基酸；并且其中y96是y或r。在一些实施方式中，抗体还包含抗体重链可变区。在另一方面中，抗体包含(a)seqidno:9中所示氨基酸序列，其中i34是s、l、v、a或i；并且n35是n、t或s；seqidno:10中所示氨基酸序列，其中m50是m、i、g、q、s或l；a62是a或s；并且l63是l或v；和seqidno:11中所示氨基酸序列，其中y100是y、l或r；其中y101是y或w；其中g103是g、a或s；其中t104是t或s；其中s105是s、a或t；其中y106是y、r、t或m；其中y107是y或f；其中f108是f或w；其中d109是d、n或g；并且其中y110是y、k、s、r或t；和(b)seqidno:12中所示氨基酸序列，其中s26是s或f；d28是d、s、a或y；并且h32是h、n或q；seqidno:13中所示氨基酸序列，其中i51是i、t、v或a；并且s56是s或t；和seqidno:14中所示氨基酸序列，其中s91是s或e；k92是k、h、r或s；并且其中y96是y或r。在一些实施方式中，抗体包含seqidno:14中所示氨基酸序列，其中s91是s或e；k92是任何氨基酸；t93是任何氨基酸；并且其中y96是y或r。在一些实施方式中，抗体包含seqidno:11中所示氨基酸序列，其中y100是y、l或r；其中y101是y或w；其中g103是g、a或s；其中t104是t或s；其中s105是s、a或t；其中y106是y、r、t或m；其中y107是y或f；其中f108是f或w；其中d109是s、a、c、g、d、n、t或g；其中y110是任何氨基酸。在其它一些实施方式中，多肽包含seqidno:11中所示氨基酸序列，其中g98是g、s、a、c、v、n、d或t；其中g99是g、s、a、c、v、n、d或t；其中y100是y、l或r；其中y101是y或w；其中g103是g、a或s；其中t104是t或s；其中s105是s、a或t；其中y106是y、r、t或m；其中y107是y或f；其中f108是f或w；其中d109是s、a、c、g、d、n、t或g；并且其中y110是任何氨基酸。在一些实施方式中，抗体还包含抗体轻链可变区。在另一方面中，抗体包含含有以下的重链可变区：(a)seqidno:9的cdr1区，其中i34是s、l、v、a或i；并且n35被n、t或s取代；(b)seqidno:10的cdr2区，其中m50是i、g、q、s或l；a62是a或s；并且l63是l或v；和(c)seqidno:11的cdr3区，其中y100是y、l或r；其中y101是y或w；其中g103是g、a或s；其中t104是t或s；其中s105是s、a或t；其中y106是y、r、t或m；其中y107是y或f；其中f108是f或w；其中d109是d、n或g；并且其中y110是y、k、s、r或t；其中抗体结合ngf。在另一方面中，抗体包含含有以下的轻链可变区：(a)seqidno:12的cdr1区，其中s26是s或f；d28是d、s、a或y；并且h32是h、n或q；(b)seqidno:13的cdr2区，其中i51是i、t、v或a；并且s56是s或t；和(c)seqidno:14的cdr3区，其中k92是k、h、r或s；并且其中y96是y或r；其中抗体结合ngf。在另一方面中，抗体包含(a)含有以下的重链可变区：(i)seqidno:9的cdr1区，其中i34被s、l、v、a或i取代；并且n35被n、t或s取代；(ii)seqidno:10的cdr2区，其中m50是i、g、q、s或l；a62是a或s；并且l63是l或v；和(iii)seqidno:11的cdr3区，其中y100是y、l或r；其中y101是y或w；其中g103是g、a或s；其中t104是t或s；其中s105是s、a或t；其中y106是y、r、t或m；其中y107是y或f；其中f108是f或w；其中d109是d、n或g；其中y110是y、k、s、r或t；和(b)包含以下的轻链可变区：(i)seqidno:12的cdr1区，其中s26是s或f；d28是d、s、a或y；并且h32是h、n或q；(ii)seqidno:13的cdr2区，其中i51是i、t、v或a；并且s56是s或t；和(iii)seqidno:14的cdr3区，其中s91是s或e；k92是k、h、r或s；并且其中y96是y或r；其中抗体结合ngf。除非另有说明，一个位置中氨基酸的选择(例如取代)与任何其它位置中氨基酸的选择无关地进行选择。在一些实施方式中，抗体包含本文所述任何cdr构型(包括组合、变异等)。从本文的描述中可以看出，本文使用的可变区编号是顺序编号。本领域技术人员容易理解，存在大量抗体编号系统(例如kabat编号和chothia编号)，以及如何将顺序编号转化为另一编号系统，例如kabat编号或chothia编号。在另一方面中，抗体包含选自seqidno:46或50的氨基酸序列(例如cdr3序列)。还在其它一些实施方式中，抗体还包含一个或多个seqidnos:3、4、5、6、7和8中所示氨基酸序列。还在其它一些实施方式中，抗体还包含seqidnos:9、10、11、12、13、14和15中所示氨基酸序列中的一条或多条。在另一方面中，抗体包含选自以下的氨基酸序列(例如cdr区，例如cdrh1和/或cdrh2区)：(a)seqidnos:28和/或29；(b)seqidnos:30和/或31；(c)seqidnos:32和/或33；(d)seqidnos:34和/或35；(e)seqidnos:36和/或37；(f)seqidnos:38和/或39；和(g)seqidnos:40和41。在一些实施方式中，抗体包含选自seqidnos:28、30、32、34、36、38和40的氨基酸序列(例如cdrh1区)。在一些实施方式中，抗体包含选自seqidnos:29、31、33、35、37、39和41的氨基酸序列(例如cdrh2区)。还在其它一些实施方式中，抗体还包含seqidnos:3、4、5、6、7和8中所示氨基酸序列中的一条或多条。还在其它一些实施方式中，抗体还包含seqidnos:9、10、11、12、13、14和15中所示氨基酸序列中的一条或多条。在另一方面中，抗体包含选自以下的氨基酸序列(例如cdr区，例如cdrl1和/或cdrl2区)：(a)seqidnos:18和/或19；(b)seqidnos:20和/或21；和(c)seqidnos:22和/或23。在一些实施方式中，多肽包含选自seqidnos:18、20和22的氨基酸序列(例如cdrl1区)。在一些实施方式中，抗体包含选自seqidnos:19、21和23的氨基酸序列(例如cdrl2区)。还在其它一些实施方式中，抗体还包含seqidnos:3、4、5、6、7、8中所示氨基酸序列中的一条或多条。还在其它一些实施方式中，抗体还包含seqidnos:9、10、11、12、13、14和15中所示氨基酸序列中的一条或多条。在另一方面中，抗体包含选自以下的氨基酸序列(例如cdr区，如cdrl3和/或cdrh3区)：(a)seqidnos:51和/或52；(b)seqidnos:55和/或56；(c)seqidnos:57和/或58；(c)seqidnos:59和/或60；(d)seqidnos:61和/或62；(e)seqidnos:63和/或64。在一些实施方式中，抗体包含选自seqidnos:51、55、57、59、61和63的氨基酸序列(例如cdrl3区)。在一些实施方式中，抗体包含选自seqidnos:52、56、58、60、62和64的氨基酸序列(例如cdrh3区)。还在其它一些实施方式中，抗体还包含seqidnos:18、19、30和31中所示氨基酸序列中的一条或多条。还在其它一些实施方式中，抗体还包含seqidnos:3、4、5、6、7和8中所示氨基酸序列中的一条或多条。还在其它一些实施方式中，抗体还包含seqidnos:9、10、11、12、13、14和15中所示氨基酸序列中的一条或多条。在另一方面中，抗体可包含：(a)含有以下的重链可变区：(i)seqidno:30的cdr1区；(ii)包含seqidno:31序列的cdr2区；(iii)选自由seqidno:11、56、58、60、62和64组成的组的cdr3区；和(b)含有以下的轻链可变区：(i)seqidno:18的cdr1区；(ii)seqidno:19的cdr2区；(iii)选自由seqidno:14、55、57、59、61和63组成的组的cdr3区。在另一方面中，抗体包含seqidnos:61、63、18、19、30和31中所示氨基酸序列中的一条或多条(例如cdr区)。在另一方面中，抗体可选自本领域已知的抗-ngf抗体，例如wo2005019266(包括抗体4d4、14d10、6g9、7h2、14f11和4g6)或wo2006131951(包括抗体hu-αd11)中所述抗体。抗体可与ngf(尤其是人ngf)上相同的表位结合，作为本领域已知的抗-ngf抗体，例如wo2005019266(包括抗体4d4、14d10、6g9、7h2、14f11和4g6)或wo2006131951(包括抗体hu-αd11)中所述的抗体或本文定义的抗体，和/或可与这类抗体竞争结合ngf。在一些实施方式中，切割本文所述任何抗-ngf抗体重链的c-端赖氨酸。在多种情况下，抗-ngf抗体的重链和轻链可任选地包含信号序列。在一个方面中，抗体是以高亲和性结合ngf(例如人ngf)的抗-ngf拮抗剂抗体。在一些实施方式中，高亲和性是(a)以小于约2nm(例如约1nm、800pm、600pm、400pm、200pm、100pm、90pm、80pm、70pm、60pm、50pm、40pm、30pm、20pm、10pm、5pm中任一或更小)的kd和/或比约6x10-5s-1更慢的koff结合ngf；和/或(b)(在存在约15pmngf时)以约200pm、150pm、100pm、80pm、60pm、40pm、20pm、10pm中任一或更小的ic50抑制(降低和/或阻断)小鼠e13.5三叉神经神经元的人ngf-依赖型存活；和/或(c)(在存在约1.5pmngf时)以约50pm、40pm、30pm、10pm、20pm、10pm、5pm、2pm、1pm中任一或更小的ic50抑制(减少和/或阻断)小鼠e13.5三叉神经神经元的人ngf-依赖型存活；和/或(d)(在存在约15pmngf时)以约150pm、125pm、100pm、80pm、60pm、40pm、30pm、20pm、10pm、5pm中任一或更小的ic50抑制(减少和/或阻断)小鼠e13.5三叉神经神经元的大鼠ngf-依赖型存活；和/或(e)(在存在约1.5pmngf时)以约30pm、25pm、20pm、15pm、10pm、5pm、4pm、3pm、2pm、1pm中任一或更小的ic50抑制(减少和/或阻断)小鼠e13.5三叉神经神经元的大鼠ngf-依赖型存活；和/或(f)和/或以比trka受体更高的亲和性结合ngf。在另一方面中，抗体(a)以小于约2nm(例如约1nm、800pm、600pm、400pm、200pm、100pm、90pm、80pm、70pm、60pm、50pm、40pm、30pm、20pm、10pm、5pm中任一或更小)的kd和/或比约6x10-5s-1更慢的koff结合ngf(例如人ngf)；和/或(b)(在存在约15pmngf时)以约200pm、150pm、100pm、80pm、60pm、40pm、20pm、10pm中任一或更小的ic50抑制小鼠e13.5三叉神经神经元的人ngf-依赖型存活；和/或(c)(在存在约1.5pmngf时)以约50pm、40pm、30pm、10pm、20pm、10pm、5pm、2pm、1pm任一或更小的ic50抑制小鼠e13.5三叉神经神经元的人ngf-依赖型存活；和/或以高于trka受体的亲和性结合ngf。在一些实施方式中，抗体(a)以小于约2nm的kd结合ngf；和/或(b)以约100pm或更小的ic50抑制小鼠e13.5三叉神经神经元的人ngf-依赖型存活，其中在存在约15pmngf时测量所述ic50；和/或(c)以约10pm或更小的ic50抑制小鼠e13.5三叉神经神经元的人ngf-依赖型存活，其中在存在约1.5pmngf时测量所述ic50，其中在存在约15pmngf时测量所述ic50。在一些实施方式中，抗体(a)以小于约100pm的kd结合ngf；和/或(b)以约20pm或更小的ic50抑制小鼠e13.5三叉神经神经元的人ngf-依赖型存活，其中在存在约15pmngf时测量所述ic50；和/或(c)以约2pm或更小的ic50抑制小鼠e13.5三叉神经神经元的人ngf-依赖型存活，其中在存在约1.5pmngf时测量所述ic50。在一些实施方式中，上述抗体是经分离的。在一些实施方式中，所述抗体是基本经纯化的。还在其它一些实施方式中，抗体是经亲和性成熟的。在一些实施方式中，抗体包含人框架序列。还在其它一些实施方式中，抗体包含一个或多个非人框架残基。在一些实施方式中，抗体以2nm或更小的kd结合ngf(例如人ngf)。在一些实施方式中，抗体相对于非人氨基酸序列(例如可变区序列，例如cdr序列，例如框架序列)而言包含一个或多个(例如2、3、4、5、6、7、8或更多)人氨基酸取代。在一些实施方式中，抗体相对于亲本多肽氨基酸序列(例如抗体911的氨基酸序列，例如seqidnos9-14中任一或更多)包含至少1个、至少2个或更多，例如至少3、4、5、6或更多个氨基酸取代。在一些实施方式中，相对于亲本抗体(例如mab911)的亲和性而言，抗体的结合亲和性被改变(在一些实施方式中被提高)。还在其它一些实施方式中，抗体的结合亲和性比ngf(例如人ngf)的trka受体的亲合力更低。在一些实施方式中，抗体是人抗体。在其它一些实施方式中，抗体是人源化抗体。还在其它一些实施方式中，抗体是单克隆抗体。在一些实施方式中，抗体是经亲和性成熟的抗体。本发明利用包含下述多核苷酸的多核苷酸(包括经分离的多核苷酸)，所述多核苷酸编码上文实施方式中任何抗体。在另一方面中，本发明提供了包含下述多核苷酸的经分离的多核苷酸，所述多核苷酸编码抗体e3(在本文中可互换地称作“e3”)的片段或区域。在一个实施方式中，片段是wo2004/058184的图1b中所示抗体e3的轻链。在另一实施方式中，片段是wo2004/058184的图1a中所示抗体e3的重链。还在另一实施方式中，片段含有来自抗体e3轻链和/或重链的一个或多个可变区。还在另一实施方式中，片段含有来自wo2004/058184的图1a和1b中所示抗体e3的轻链和/或重链的一个或多个互补性决定区(cdr)。在另一方面中，本发明是包含编码抗体e3的多核苷酸的经分离的多核苷酸。在一些实施方式中，多核苷酸包含wo2004/058184的图2和3中所示任一多核苷酸或二者。在另一方面中，本发明利用下述经分离的多核苷酸，所述多核苷酸编码具有保藏号atccno.pta-4893或atccno.pta-4894的e3轻链。在另一方面中，本发明是经分离的多核苷酸，其编码具有保藏号atccno.pta-4895的e3重链。还在另一方面中，经分离的多核苷酸包含(a)具有保藏号atccno.pta-4893或pta-4894的多核苷酸编码的可变区，和(b)具有保藏号atccno.pta-4895的多核苷酸编码的可变区。在另一方面中，经分离的多核苷酸包含(a)具有保藏号atccno.pta-4893或pta-4894的多核苷酸编码的一个或多个cdr；和/或(b)具有保藏号atccno.pta-4895的多核苷酸编码的一个或多个cdr。在另一方面中，本发明利用编码本文所述任何抗体(包括抗体片段)或多肽的多核苷酸。在另一方面中，本发明利用包含本文公开的任何多核苷酸的载体(包括表达载体和克隆载体)和宿主细胞。在另一方面中，本发明利用下述宿主细胞，所述宿主细胞包含编码e3轻链的多核苷酸和编码e3重链的多核苷酸，其中编码e3轻链的多核苷酸具有保藏号atccno.pta-4893和/或atccno.pta-4894，编码e3重链的多核苷酸具有保藏号atccno.pta-4895。在一些实施方式中，宿主细胞包含下述多核苷酸，所述多核苷酸含有：(a)具有保藏号atccno.pta-4893或pta-4894的多核苷酸编码的可变区，和/或(b)具有保藏号atccno.pta-4895的多核苷酸编码的可变区。在一些实施方式中，宿主细胞包含编码以下的多核苷酸：(a)具有保藏号atccno.pta-4893或pta-4894的多核苷酸编码的一个或多个cdr；和/或(b)具有保藏号atccno.pta-4895的多核苷酸编码的一个或多个cdr。在一些实施方式中，宿主细胞是哺乳动物细胞。在另一方面中，本发明提供了用于治疗或预防与间质性膀胱炎和/或痛性膀胱综合征和/或膀胱疼痛综合征相关的疼痛和/或下泌尿道症状(luts)的抗-ngf拮抗剂抗体。抗-ngf拮抗剂抗体可如本文所述。本发明的另一方面提供了抗-ngf拮抗剂抗体在制造下述药物中的用途，所述药物用于治疗或预防与间质性膀胱炎和/或痛性膀胱综合征和/或膀胱疼痛综合征相关的疼痛和/或下泌尿道症状(luts)。抗-ngf拮抗剂抗体可如本文所述。在另一方面中，本发明是用于治疗或预防与间质性膀胱炎和/或痛性膀胱综合征和/或膀胱疼痛综合征相关的疼痛和/或下泌尿道症状(luts)的药物组合物，其包含本文所述的任何多肽(包括抗体，例如抗体e3)、多核苷酸或载体，例如包含抗体e3或抗体e3片段和可药用赋形剂的药物组合物。在另一方面中，本发明提供了包含本文所述任一种或多种组合物的试剂盒和组合物。这些试剂盒可用于本文所述的任何方法，所述试剂盒通常在合适的包装中并与适当的说明书一起提供。本发明还提供了描述用于本文所述任何用途的任何组合物和试剂盒，无论在上下文中是作为药物的用途和/或用于制造药物的用途。本发明的每个方面优选的特征如经适当变动(mutatismutandis)，则等同地适用于每个其它方面。发明详述本文公开的本发明提供了通过施用治疗有效量的抗-ngf拮抗剂抗体，在个体中治疗或预防与间质性膀胱炎和/或痛性膀胱综合征和/或膀胱疼痛综合征相关的疼痛和/或下泌尿道症状(luts)的方法。本文公开的本发明还提供了用于治疗或预防与间质性膀胱炎和/或痛性膀胱综合征和/或膀胱疼痛综合征相关的疼痛和/或下泌尿道症状(luts)的抗-ngf拮抗剂抗体。还提供了抗-ngf拮抗剂抗体用于制造药物的用途，所述药物用于治疗或预防与间质性膀胱炎和/或痛性膀胱综合征和/或膀胱疼痛综合征相关的疼痛和/或下泌尿道症状(luts)。本文公开的本发明提供了以高亲和性结合ngf(例如人ngf)的抗-ngf拮抗剂抗体的用途。在一些实施方式中，本发明利用结合ngf的人源化抗体e3。本发明还利用结合ngf的e3多肽(包括抗体)，和编码e3抗体和/或多肽的多核苷酸。本发明还提供了结合ngf的、来自于e3的抗体和多肽的用途。一般技术除非另有说明，本发明的实施会施用分子生物学(包括重组技术)、微生物学、细胞生物学、生物化学和免疫学的常规技术，其属于本领域技术范围内。这类技术在文献中详尽解释，例如molecularcloning:alaboratorymanual,secondedition(sambrook等，1989)coldspringharborpress；oligonucleotidesynthesis(m.j.gait编,1984)；methodsinmolecularbiology,humanapress；cellbiology:alaboratorynotebook(j.e.cellis编,1998)academicpress；animalcellculture(r.i.freshney编,1987)；introductiontocellandtissueculture(j.p.matherandp.e.roberts,1998)plenumpress；cellandtissueculture:laboratoryprocedures(a.doyle,j.b.griffiths,andd.g.newell编,1993-1998)j.wileyandsons；methodsinenzymology(academicpress,inc.)；handbookofexperimentalimmunology(d.m.weirandc.c.blackwell编)；genetransfervectorsformammaliancells(j.m.millerandm.p.calos编,1987)；currentprotocolsinmolecularbiology(f.m.ausubel等，eds.,1987)；pcr:thepolymerasechainreaction,(mullis等，eds.,1994)；currentprotocolsinimmunology(j.e.coligan等，eds.,1991)；shortprotocolsinmolecularbiology(wileyandsons,1999)；immunobiology(c.a.janewayandp.travers,1997)；antibodies(p.finch,1997)；antibodies:apracticalapproach(d.catty.编,irlpress,1988-1989)；monoclonalantibodies:apracticalapproach(p.shepherdandc.dean编,oxforduniversitypress,2000)；usingantibodies:alaboratorymanual(e.harlowandd.lane(coldspringharborlaboratorypress,1999)；theantibodies(m.zanettiandj.d.capra编,harwoodacademicpublishers,1995)；和cancer:principlesandpracticeofoncology(v.t.devita等编,j.b.lippincottcompany,1993)。定义“抗体”是能够通过位于免疫球蛋白分子可变区中的至少一个抗原识别位点与靶标(例如碳水化合物、多核苷酸、脂质、多肽等)特异性结合的免疫球蛋白分子。在本文中使用时，该术语不仅包括完整的多克隆或单克隆抗体，而且也包括其片段(例如fab、fab’、f(ab’)2、fv、dab)、单链抗体(scfv)、其突变体、嵌合抗体、双抗体、包含抗体部分的融合蛋白，和包含抗原识别位点的免疫球蛋白分子的任何其它经修饰的表型。抗体包括任何种类的抗体，例如igg、iga或igm(或其亚类)，并且抗体不必须是任何具体的种类。根据其重链恒定结构域的抗体氨基酸序列，可以将免疫球蛋白指定为不同的种类。存在五种主要的免疫球蛋白类别：iga、igd、ige、igg和igm，其中若干种可以被进一步分成亚类(同种型)，例如igg1、igg2、igg3、igg4、iga1和iga2。对应于不同种类免疫球蛋白的重链恒定结构域分别被称作α、δ、ε、γ和μ。不同种类免疫球蛋白的亚基结构和三维构象是公知的。抗体的“可变区”是指单独或组合的抗体轻链可变区或抗体重链可变区。重链和轻链可变区各自由通过三个互补性决定区(cdr，也称作高变区)连接的四个框架区(fr)组成。每条链中的cdr通过fr与来自其它链的cdr近距离结合在一起，有助于形成抗体的抗原结合位点。存在至少两种确定cdr的技术：(1)基于跨物种序列变异性的途径(即kabat等，sequencesofproteinsofimmunologicalinterest,(第5版，1991,nationalinstitutesofhealth,bethesdamd))；和(2)基于抗原-抗体复合物的晶体学研究的途径(chothia等，(1989)nature342:877；al-lazikani等(1997)j.molec.biol.273:927-948))。在本文中使用时，cdr可表示通过任一途径或通过两种途径的组合定义的cdr。抗体的“恒定区”是指单独或组合的抗体轻链的恒定区或抗体重链的恒定区。“fv”是含有完整的抗原识别和结合位点的抗体片段。在双-链fv物类中，该区域由紧密、非共价结合的一条重链可变结构域和一条轻链可变结构域的二聚体组成。在单链fv物类中，一条重链可变结构域和一条轻链可变结构域可以通过柔性(flexible)的肽连接子共价连接，使得轻链和重链可以结合成与双链fv物类中类似的二聚体结构。每个可变结构域的三个cdr在该构型中相互作用，在vh-vl二聚体的表面上定义了抗原结合特异性。然而，即便单个可变的结构域(或者仅包含抗原特异性的3个cdr的一半fv)也具有识别和结合抗原的能力，尽管通常比整个结合位点的亲和性更低。fab片段还含有轻链的恒定结构域和重链的第一恒定结构域(ch1)。fab'片段与fab片段的区别在于在重链ch1结构域的羧基端添加了少量残基，包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸。f(ab)2片段是包含通过铰链区二硫键连接的两个fab片段的二价片段。单链抗体(scfc)是其中vl和vh区通过合成的连接子配对形成单价分子的抗体，所述合成的连接子使得它们被制成单个蛋白质链(bird等science,242:423-426(1988)和huston等，proc.natl.acad.sci.usa,85:5879-5883(1988))。双抗体(diabodies)是二价的双特异性抗体，其中vh和vl结构域在单一的多肽链上表达，但是使用过短的连接子，使得相同链上两个结构域之间不能配对，从而强迫结构域与另一条链的互补结构域配对，并产生两个抗原结合位点。抗体可具有一个或多个结合位点。如果存在多于一个结合位点，则所述结合位点可以彼此相同或不同。例如，天然存在的免疫球蛋白具有两个相同的结合位点，单链抗体或fab片段具有一个结合位点，而“双特异性”或“双功能”抗体(双抗体)具有两个不同的结合位点。“经分离的抗体”是下述抗体，所述抗体(1)不与在天然状态下伴随它的天然结合的组分(包括其它天然结合的抗体)结合，(2)不含来自相同物种的其它蛋白质，(3)由来自不同物种的细胞表达或(4)天然不存在。“单克隆抗体”是指均匀的抗体群体，其中单克隆抗体由涉及抗原选择性结合的氨基酸(天然存在或非天然存在)组成。单克隆抗体的群体是高度特异性的，指向单一的抗原位点。术语“单克隆抗体”不仅包括完整的单克隆抗体和全长单克隆抗体，而且包括其片段(例如fab、fab’、f(ab’)2、fv)、单链(scfv)、其突变体、包含抗体部分的融合蛋白，和免疫球蛋白分子的任何其它经修饰的构型，所述构型包含具有所需特异性和结合抗原能力的抗原识别位点。其不旨在限制抗体的来源或者制造抗体的方式(例如通过杂交瘤、噬菌体选择、重组表达、转基因动物等)。在本文中使用时，“人抗体”表示下述抗体，所述抗体具有对应于人生产的抗体的氨基酸序列，和/或使用本领域已知或本文公开的用于制造人抗体的任何技术制造。人抗体的这一定义包括包含至少一种人重链多肽或至少一种人轻链多肽的抗体。一个这样的例子是包含鼠轻链和人重链多肽的抗体。人抗体可以使用本领域已知的多种技术生产。在一些实施方式中，人抗体选自噬菌体文库，其中所述噬菌体文库表达人抗体(vaughan等，1996,naturebiotechnology,14:309-314；sheets等，1998,pnas,(usa)95:6157-6162；hoogenboomandwinter,1991,j.mol.biol.,227:381；marks等，1991,j.mol.biol.,222:581)。人抗体也可以通过将人免疫球蛋白基因座引入转基因动物(例如小鼠)中来制造，所述转基因动物中内源免疫球蛋白基因被部分或完全灭活。该途径描述于美国专利nos.5,545,807；5,545,806；5,569,825；5,625,126；5,633,425；和5,661,016中。或者，可以通过使下述人b淋巴细胞不死化(immortalizing)来制备人抗体，所述人b淋巴细胞生产针对靶抗原的抗体，这类b淋巴细胞可从个体中回收或已被体外免疫。见例如cole等，monoclonalantibodiesandcancertherapy,alanr.liss,p.77(1985)；boerner等，1991,j.immunol.,147(1):86-95；和美国专利no.5,750,373。“嵌合抗体”是指下述抗体，其中重链和轻链氨基酸序列各自的一部分与来自具体物种或属于具体种类的抗体中相应的序列同源，而链的剩余区段与另一链中相应的序列同源。典型地，在这些嵌合抗体中，轻链和重链的可变区均模拟来自于一种哺乳动物物种的抗体的可变区，而恒定部分与来自于另一物种的抗体的序列同源。这种嵌合形式的一个明显的优点是，例如可变区可使用容易从非人宿主生物获得的b细胞或杂交瘤，便利地源于目前已知的来源，与源于例如人细胞制备物的恒定区组合。虽然可变区具有易于制备的优点并且特异性不受其来源影响，但是与来自非人来源的恒定区相比，抗体被注射时人的恒定区更不可能引发来自人受试者的免疫应答。然而，该定义不限于这一具体例子。“功能fc区”具有天然序列fc区的至少一种效应物功能。示范性的“效应物功能”包括c1q结合；补体依赖型细胞毒性(cdc)；fc受体结合；抗体依赖型细胞介导的细胞毒性(adcc)；吞噬作用；细胞表面受体(例如b细胞受体；bcr)的下调等等。这类效应物功能通常需要fc区与结合结构域(例如抗体可变区)结合，并可使用本领域已知用于评价这类抗体效应物功能的多种实验来评价。“天然序列fc区”包含与自然中存在的fc区氨基酸序列相同的氨基酸序列。“变体fc区”包含下述氨基酸序列，所述氨基酸序列与天然序列fc区通过至少一个氨基酸修饰而不同，但是保留天然序列fc区的至少一种效应物功能。优选地，变体fc区与天然序列fc区相比或与亲本多肽的fc区相比具有至少一个氨基酸取代，例如在天然序列fc区中或亲本多肽的fc区中从约一个到约10个氨基酸取代，优选地从约1个到约5个氨基酸取代。本文的变体fc区会优选地与天然序列fc区和/或亲本多他的fc区具有至少约80％的序列同一性，和最优选地至少约90％的序列同一性，更优选地至少约95％的序列同一性。在本文中使用时，“抗体依赖型细胞介导的细胞毒性”和“adcc”是指细胞介导的下述反应，其中表达fc受体(fcrs)的非特异性细胞毒性细胞(例如天然杀伤(nk)细胞、中性粒细胞和巨噬细胞)识别靶细胞上结合的抗体，随后引起靶细胞的裂解。可以使用体外adcc实验，例如美国专利号5,500,362或5,821,337中所述实验，评价感兴趣的分子的adcc活性。适用于这类实验的效应物细胞包括外周血单核细胞(pbmc)和nk细胞。或者，或另外，可以体内评价感兴趣的分子的adcc活性，例如在动物模型，如clynes等，1998,pnas(usa),95:652-656中公开的动物模型中评价。在本文中使用时，“fc受体”和“fcr”描述结合抗体fc区的受体。优选的fcr是天然序列人fcr。另外，优选的fcr是结合igg抗体的fcr(γ受体)，并且包括fcγri、fcγrii和fcγriii亚类的受体，包括这些受体的等位基因变体和替代性剪切的形式。fcγrii受体包括fcγriia(“活化受体”)和fcγriib(“抑制受体”)，它们具有主要在其细胞质结构域中有差异的相似氨基酸序列。fcr综述于ravetchandkinet,1991,ann.rev.immunol.,9:457-92；capel等，1994,immunomethods,4:25-34；和dehaas等，1995,j.lab.clin.med.,126:330-41中。“fcr”还包括新生儿受体fcrn，其负责将母体igg转移至胎儿(guyer等，1976,j.immunol.,117:587；和kim等，1994,j.immunol.,24:249)。“补体依赖型细胞毒性”和“cdc”是指在存在补体时靶标的裂解。通过补体系统第一组分(c1q)对与同种抗原络合的分子(例如抗体)的结合，起始补体活化通路。为了评价补体活化，可进行例如如gazzano-santoro等，j.immunol.methods,202:163(1996)中所述的cdc实验。在本文中使用时，术语“e3”、“3e”和“抗体e3”可互换地使用，其表示分别包含seqidno:1和seqidno:2(wo2004/058184的图1a和1b)中所示重链和轻链可变区的氨基酸序列的抗体。抗体e3的cdr部分(包括chothia和kabatcdr)图示于wo2004/058184的图1a和1b中。wo2004/058184的图2和图3展示了分别编码分别包含图1a和1b中所示重链和轻链可变区的重链和轻链的多核苷酸。e3的产生和表征描述于wo2004/058184的实施例中，其整体内容通过引用并入本文。e3伴随着不同的生物功能，包括但不限于能够结合ngf和抑制ngf生物活性和/或ngf信号转导介导的下游通路；和能够抑制小鼠e13.5三叉神经神经元的ngf-依赖型存活。如本文中所讨论的，用于本发明的抗体可具有这些特征中的任一种或多种。在一些实施方式中，术语“e3”是指以下多核苷酸编码的免疫球蛋白：(a)编码e3轻链的保藏号为atccno.pta-4893或atccno.pta-4894的多核苷酸，和(b)编码e3重链的保藏号为atccno.pta-4895的多核苷酸。在本文中使用时，抗体的“免疫特异性”结合是指发生在抗体的抗原结合位点与抗体所识别的特异性抗原之间的抗原特异性结合相互作用(即elisa或其它免疫测定中抗体与蛋白质反应，并且不与无关的蛋白质可检测地反应)。与抗体或多肽“特异性结合”或“优先结合”(在本文中可互换使用)的表位是本领域公知的术语，测定这类特异性结合或优先结合的方法也是本领域公知的。如果与替代性的细胞或物质相比，分子与具体的细胞或物质反应或结合得更频繁、更迅速、具有更大持续时间和/或具有更大亲和性，则称所述分子显示“特异性结合”或“优先结合”。如果与其它物质的结合相比，抗体以更大的亲和性、亲合力、更容易和/或以更大的持续时间结合，则抗体“特异性结合”或“优先结合”靶标。例如，特异性或优先结合ngf表位的抗体是下述抗体，与其它ngf表位或非ngf表位的结合相比，所述抗体以更大的亲和性、亲合力、更容易和/或以更大的持续时间结合所述表位。通过阅读该定义还应理解，例如特异性或优先结合第一靶标的抗体(或片段或表位)可与第二靶标特异性或优先结合，或者不与第二靶标特异性或优先结合。同样，“特异性结合”或“优先结合”不必须要求(尽管可包括)排他性结合。通常但非必须，提到结合表示优先结合。术语“多肽”、“寡肽”、“肽”和“蛋白质”在本文中可互换使用，它们表示任何长度的氨基酸的聚合物。聚合物可以是线性或分支的，其可包含经修饰的氨基酸，并且可以被非氨基酸中断。所述术语还包括天然或通过干预被修饰的氨基酸聚合物；例如，二硫键形成、糖基化、脂质化、乙酰化、磷酸化或任何其它操作或修饰，例如与标签组分缀合。还包括在所述定义内的是例如含有一个或多个氨基酸类似物(包括例如非天然氨基酸等)以及本领域已知的其它修饰的多肽。应当理解，因为本发明的多肽以抗体为基础，所以多肽可以作为单链或结合的链而存在。在本文中可互换使用的“多核苷酸”或“核酸”是指任何长度的核苷酸的聚合物，并且包括dna和rna。核苷酸可以是脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、经修饰的核苷酸或碱基、和/或它们的类似物，或可以被dna或rna聚合酶掺入聚合物中的任何底物。多核苷酸可包含经修饰的核苷酸，例如甲基化的核苷酸及其类似物。存在对核苷酸结构的修饰时，它们可以在聚合物装配之前或之后赋予。核苷酸序列可以被非核苷酸组分中断。多核苷酸可在聚合后被进一步修饰，例如通过与标签组分缀合来修饰。其它类型的修饰包括例如“加帽(caps)”，用类似物取代一个或多个天然存在的核苷酸，核苷酸间修饰，例如具有不带电键(例如磷酸甲酯、磷酸三酯、磷酸酰胺化物、氨基甲酸酯等等)和带电键(例如硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯等等)的多核苷酸、含有悬突片段例如蛋白质(例如核酸酶、毒素、抗体、信号肽、多聚-l-赖氨酸等等)的多核苷酸、带有插入剂(吖啶、补骨脂素(psoralen))的多核苷酸、带有螯合剂(例如金属、放射性金属、硼、氧化金属等等)的多核苷酸、带有烷基化剂的多核苷酸、带有经修饰的键的多核苷酸(例如α端基异构核酸等等)，以及未经修饰的多核苷酸形式。另外，通常存在于糖中的任何羟基可以例如被磷酸酯基、磷酸基替换，被标准保护基保护，或被活化来制备与其它核苷酸的其它键，或可以与固体支持物缀合。可以将5'和3'端oh磷酸化或用1到20个碳原子的胺或有机帽化(capping)基团片段取代。其它羟基也可以被衍生为标准保护基。多核苷酸也可以含有本领域普遍已知的核糖或脱氧核糖的类似形式，包括例如2’--o-甲基-、2’-o-烯丙基、2’-氟-或2’-叠氮基-核糖、碳环糖类似物、α-端基异构糖、差向异构糖(epimericsugar)例如阿拉伯糖、木糖或来苏糖、吡喃糖、呋喃糖、景天庚酮糖、非环状类似物和脱碱基核苷类似物例如甲基核糖核苷。可以用替代性连接基团代替一个或多个磷酸二酯键。这些替代性链接基团包括但不限于下述实施方式，其中磷酸酯被p(o)s(“硫代酯(thioate)”)、p(s)s(“二硫代酯(dithioate)”)、“(o)nr2(“酰胺化物(amidate)”)、p(o)r、p(o)or’、co或ch2(“formacetal”)替换，其中每个r或r’独立地为h或任选地含有醚(-o-)键、芳基、链烯基、环烷基、环烯基或araldyl的取代或未经取代的烷基(1-20c)。多核苷酸中所有键不必须相同。前文的描述适用于本文涉及的所有多核苷酸，包括rna和dna。术语“同一性”是指两条氨基酸序列或两条核酸序列之间的“同一性”百分比。通常通过针对最佳比对的目的(例如为了与第二序列最佳比对，可在第一序列中引入缺口)比对序列并比较相应位置上的氨基酸残基或核苷酸，来测定同一性百分比。“最佳比对”是得到最高同一性百分比的两条序列的比对。通过比较序列中相同氨基酸残基或核苷酸的数量来确定同一性百分比(即同一性％＝相同位置的数量/位置总数x100)。可以使用本领域技术人员已知的数学算法完成两条序列之间同一性百分比的测定。用于比较两条序列的数学算法的一个例子是如中karlin和altschul(1993)proc.natl.acad.sci.usa90:5873-5877修饰的karlin和altschul(1990)proc.natl.acad.sci.usa87:2264-2268的算法。altschul,等(1990)j.mol.biol.215:403-410的nblast和xblast程序整合了这样的算法。可以用nblast程序、评分＝100、词长＝12运行blast核苷酸搜索，以获得与本发明的核酸分子同源的核苷酸序列。可以用xblast程序、评分＝50、词长＝3来运行blast蛋白质搜索，以获得与本发明的蛋白质分子同源的氨基酸序列。为了就比较的目的获得有缺口的比对，可以如altschul等，(1997)nucliecacidsres.25:3389-3402中所述利用gappedblast。或者，可以使用psi-blast进行检测分子(id.)之间远距离关系(distantrelationships)的迭代搜索。使用blast、gappedblast和psi-blast程序时，可以使用各个程序(例如xblast和nblast)的默认参数。见http://www.ncbi.nlm.nih.gov。用于比较序列的数学算法的另一例子是myers和miller,cabios(1989)的算法。属于gcg序列算法软件包一部分的align程序(2.0版)整合了这样的算法。本领域已知的序列分析的其它算法包括如torellisandrobotti(1994)comput.appl.biosci.,10:3-5中所述的advance和adam；和pearson和lipman(1988)proc.natl.acad.sci.85:2444-8中所述的fasta。在fasta中，ktup是设定搜索灵敏度和速度的控制选项。在本文中使用时，术语“神经生长因子”和“ngf”是指神经生长因子及其保持ngf至少部分生物活性的变体。在本文中使用时，ngf包括所有哺乳动物物种的天然序列ngf，包括人、犬、猫、马或牛。“ngf受体”是指与ngf结合或被ngf活化的多肽。ngf受体包括任何哺乳动物物种的trka受体和p75受体，所述哺乳动物包括但不限于人、犬、猫、马、灵长类或牛。在本文中使用时，“抗-ngf拮抗剂抗体”(可互换地称作“抗-ngf抗体”)是指能够结合ngf并抑制ngf生物活性和/或ngf信号转导介导的下游通路的抗体。抗-ngf拮抗剂抗体包括阻断、拮抗、阻抑或降低(包括显著地阻断、拮抗、阻抑或降低)ngf生物活性的抗体，包括ngf信号转导介导的下游通路，例如受体结合和/或对ngf的细胞应答的引发。就本发明的目的而言，应当明确地理解术语“抗-ngf拮抗剂抗体”包括所有前文鉴别的术语、标题和功能状态和特征，藉此ngf自身、ngf生物活性(包括但不限于其介导任何手术后疼痛的能力)、或生物活性的后果以任何有意义的程度被大量无效、降低或中和。在一些实施方式中，抗-ngf拮抗剂抗体结合ngf并阻止ngf二聚体化和/或结合ngf受体(例如p75和/或trka)。在其它一些实施方式中，抗-ngf抗体结合ngf并阻止trka受体二聚体化和/或trka自磷酸化。本文中提供了抗-ngf拮抗剂抗体的例子。ngf的“生物活性”通常是指结合ngf受体和/或活化ngf受体信号转导通路的能力。生物活性包括但不限于以下任一种或多种：结合ngf受体(例如p75和/或trka)的能力；促进trka受体二聚体化和/或自磷酸化的能力；活化ngf受体信号转导通路的能力；促进细胞分化、增殖、存活、生长和细胞生理学的其它改变的能力，所述改变包括(在神经元的情况下，包括外周和中枢神经元)神经元形态、突触发生、突触功能、神经递质和/或神经肽释放和损伤后再生的改变；促进小鼠e13.5三叉神经神经元存活的能力；和介导与间质性膀胱炎和/或痛性膀胱综合征和/或膀胱疼痛综合征相关的疼痛和/或下泌尿道症状的能力。在本文中使用时，“基本纯净”是指至少50％纯净(即不含污染物)、更优选地至少90％纯净、更优选地至少95％纯净、更优选地至少98％纯净、更优选地至少99％纯净的材料。“宿主细胞”包括个体细胞或细胞培养物，其可以是或者曾经是用于整合多核苷酸插入物的载体的受体。宿主细胞包括单个宿主细胞的后代，并且所述后代由于天然、偶然或故意的突变而不必须与原始的亲本细胞(在形态上或基因组dna互补体上)完全相同。宿主细胞包括用本发明的多核苷酸体内转染的细胞。在本文中使用时，“治疗”是获得有益或期望的临床结果的途径。就本发明的目的而言，有益或期望的临床结果包括但不限于以下一种或多种：改善或减轻与间质性膀胱炎和/或痛性膀胱综合征和/或膀胱疼痛综合征相关的疼痛和/或下泌尿道症状的任一方面。就本发明的目的而言，有益或期望的临床结果包括但不限于以下一种或多种：包括减轻与间质性膀胱炎和/或痛性膀胱综合征和/或膀胱疼痛综合征相关的疼痛和/或下泌尿道症状(包括疼痛的任一方面)的严重性、使其减轻(例如缩短疼痛时间、降低疼痛敏感度或感觉)。药物、化合物或药物组合物的“有效量”是足以实现有益或期望结果的量，所述结果包括临床结果，例如疼痛感觉的减轻或降低。可以在一次或多次施用中施用有效量。就本发明的目的而言，药物、化合物或药物组合物的有效量是足以对与间质性膀胱炎和/或痛性膀胱综合征和/或膀胱疼痛综合征相关的疼痛或下泌尿道症状进行治疗、减轻、降低其强度和/或预防的量。在一些实施方式中，“有效量”可降低静止时的疼痛(静止痛)或机械诱导的疼痛(包括运动后疼痛)或二者，并且可以在疼痛刺激之前、期间或之后施用。如临床语境中所理解的，有效量的药物、化合物或药物组合物可与另一药物、化合物或药物组合物组合实施，或不与它们组合实施。因此，“有效量”可以在施用一种或多种治疗剂的上下文中考虑，如果与一种或多种其它试剂组合时可实现期望的结果，则单一试剂可以被认为以有效量给予。“降低”与间质性膀胱炎和/或痛性膀胱综合征和/或膀胱疼痛综合征相关的间质性膀胱炎和/或痛性膀胱综合征和/或膀胱疼痛综合征的“发病率”表示降低严重性(其可包括降低对其它药物和/或通常用于该病症的疗法的需要和/或(例如暴露)量，所述药物包括例如麻醉剂)、持续时间和/或频率(包括例如在个体中延迟或提高疼痛时间)之任何。如本领域技术人员所理解的，个体在它们对治疗的应答方面可不同，例如，“在个体中降低与间质性膀胱炎和/或痛性膀胱综合征和/或膀胱疼痛综合征相关的疼痛和/或下泌尿道症状的发病率的方法”反应基于下述合理预期来施用抗-ngf拮抗剂抗体，所述预期是这种施用可能引起所述具体个体中发病率的降低。“改善”与间质性膀胱炎和/或痛性膀胱综合征和/或膀胱疼痛综合征相关的疼痛和/或下泌尿道症状表示与不施用抗-ngf拮抗剂抗体时相比，与间质性膀胱炎和/或痛性膀胱综合征和/或膀胱疼痛综合征相关的疼痛和/或下泌尿道症状的一种或多种症状减轻或改良。“改善”还包括缩短或降低症状的持续时间。“减轻”与间质性膀胱炎和/或痛性膀胱综合征和/或膀胱疼痛综合征相关的疼痛和/或下泌尿道症状表示在个体或个体群体中缩小疼痛和/或下泌尿道症状的一个或多个不期望的临床表现的程度。在本文中使用时，“延迟”疼痛的发生表示延迟、妨碍、减缓、延缓、稳定和/或推迟与间质性膀胱炎和/或痛性膀胱综合征和/或膀胱疼痛综合征相关的疼痛和/或下泌尿道症状的进展。该延迟可以具有变化的时间长度，取决于被治疗的疾病史和/或个体。如本领域技术人员所明白的，足够或显著的延迟可有效地包括预防，因为个体不发生疼痛。“延迟”症状发生的方法是与不使用所述方法时相比，降低在给定时间框中发生症状的可能性，和/或降低给定时间框中症状的程度。这类比较典型地以临床研究为基础，所述临床研究使用统计学显著数量的受试者。在本文中使用时，“疼痛”是指任何病因学的疼痛，包括急性和慢性疼痛，和具有炎症成分的任何疼痛。在本文中使用时，“疼痛”包括伤害感受(nociception)和疼痛感觉，并且可以使用疼痛评分和本领域公知的其它方法客观和主观地评价疼痛。如本领域所公知的，疼痛可以是原发或继发的疼痛。在本文中使用时，“与间质性膀胱炎和/或痛性膀胱综合征和/或膀胱疼痛综合征相关的疼痛”是指下腹部(骨盆)疼痛；膀胱疼痛；耻骨上疼痛；阴道疼痛；阴茎、睾丸、阴囊和会阴疼痛；尿道疼痛；性交障碍；当膀胱充满时可能提高的疼痛、压力或不适。在本文中使用时，“与间质性膀胱炎和/或痛性膀胱综合征和/或膀胱疼痛综合征相关的下泌尿道症状”是指三组泌尿症状，其可定义为储尿(刺激性)症状、排尿(阻塞性)症状及排尿后症状。储尿症状包括尿急、尿频、夜尿、急迫性尿失禁及压力性尿失禁，这些与膀胱过动症(oab)及良性前列腺增生(bph)相关。排尿症状包括尿无力、排尿不顺、排尿断断续续、用力排尿及排尿困难。排尿后症状包含尿末滴沥、排尿后滴尿及残尿感。“膀胱过动症(oab)”定义为尿急(含或不含急迫性尿失禁)，通常会伴随有尿频和夜尿[abrams等.,neurourologyandurodynamics21:167-178(2002)]。oab在男性及女性中的流行程度相近，且美国人口中有大约16％患有此症状[stewart等,prevalenceofoveractivebladderintheunitedstates:resultsfromthenobleprogram；abstractpresentedatthe2ndinternationalconsultationonincontinence,july2001,paris,france]。术语“潮湿oab(obdwet)”及“干燥oab(obddry)”分别描述患有或未患有尿失禁的oab患者。之前，oab的主要症状被认为是尿失禁。然而，随着新术语的出现，这对大量未失禁的患者(即干燥oab患者)明显是无意义的。因此，来自liberman等[‘healthrelatedqualityoflifeamongadultswithsymptomsofoveractivebladder:resultsfromauscommunity-basedsurvey’；urology57(6),1044-1050,2001]的2001年的研究检验了所有oab症状对以社区为基础的美国人口样本的生活品质的影响。该研究阐明，与对照比较时，患有oab而没有任何明显漏尿的个体具有受损的生活品质。“bph”是一种慢性进行性疾病，其会导致例如急性尿滞留、再发性泌尿道感染、膀胱结石和肾脏机能障碍的并发症。在男性中，与bph相关的luts的流行程度及平均严重性会随着年龄增加而增加。bph导致前列腺体积增加、造成尿道及膀胱出口阻塞和膀胱功能的继发性改变。该效应可由储尿(刺激性)及排尿(阻塞性)症状二者表现。“生物样品”包括从个体获得的多种样品类型，并可用于诊断或监测实验中。该定义包括生物来源的血和其它液体样品，例如活检标本或阻止培养物或来自其中的细胞，及其后代。该定义还包括在获得后以任何方式操作的样品，所述操作例如用试剂处理、增溶、或富集某些组分例如蛋白质或多核苷酸、或为了切片的目的包埋于半固体或固体基质中。术语“生物样品”包括临床样品，还包括培养物中的细胞、细胞上清液、细胞裂解物、血清、血浆、生物流体(biologicalfluid)和组织样品。“个体”或“受试者”是脊椎动物，优选哺乳动物，更优选为人。哺乳动物包括但不限于农场动物(例如牛)、运动动物、宠物(例如猫、狗和马)、灵长类、小鼠和大鼠。在本文中使用时，“载体”表示能够在宿主细胞中递送(优选表达)一个或多个感兴趣的基因或序列的构建体。载体的例子包括但不限于病毒载体、裸dna或rna表达载体、质粒、粘粒或噬菌体载体、与阳离子缩合剂(cationiccondensingagent)结合的dna或rna表达载体、封装在脂质体中的dna或rna表达载体，和某些真核细胞例如生产者细胞(producercell)。在本文中使用时，“表达控制序列”表示指导核酸转录的核酸序列。表达控制序列可以是启动子(例如组成型或诱导型启动子)或增强子。表达控制序列与要转录的核酸序列可操作地连接。在本文中使用时，“可药用载剂”包括与活性成分组合时允许活性成分保留生物活性并且不与受试者的免疫系统反应到材料。例子包括但不限于任何标准药物载剂，例如磷酸盐缓冲的盐水溶液、水、乳液例如油/水乳液，和多种类型的润湿剂(wettingagent)。用于气雾剂或肠胃外施用的优选的稀释剂是磷酸盐缓冲的盐水或正常(0.9％)盐水。通过公知的常规方法(见例如remington'spharmaceuticalsciences，第18版，a.gennaro编,mackpublishingco.,easton,pa,1990；和remington,thescienceandpracticeofpharmacy，第20版，mackpublishing,2000)配制包含这类载剂的组合物。在本文中使用时，术语“koff”旨在表示抗体从抗体-抗原相互作用中解离的关闭速率常数(offrateconstant)。在本文中使用时，术语“kon”旨在表示具体抗体-抗原相互作用的开启速率(on-rate)或结合速率(associationrate)。在本文中使用时，术语“kd”旨在表示抗体-抗原相互作用的解离常数，其得自koff与kon的比例，并表述为摩尔浓度(m)。可以使用本领域公知的方法测定抗体的kd值。测定抗体kd值的一种方法是使用表面等离子体共振，典型地使用生物传感器系统，如系统。使用抗-ngf拮抗剂抗体治疗或预防与间质性膀胱炎和/或痛性膀胱综合征和/或膀胱疼痛综合征相关的疼痛和/或下泌尿道症状的方法本发明提供了在个体(包括人以及非人的哺乳动物)中治疗或预防与间质性膀胱炎和/或痛性膀胱综合征和/或膀胱疼痛综合征相关的疼痛和/或下泌尿道症状的方法。因此，在一个方面中，本发明提供了在个体中治疗或预防与间质性膀胱炎和/或痛性膀胱综合征和/或膀胱疼痛综合征相关的疼痛和/或下泌尿道症状的方法，包括施用有效量的抗-ngf拮抗剂抗体。本文中描述了合适的抗-ngf拮抗剂抗体。在另一个方面中，本发明提供了在个体中降低与间质性膀胱炎和/或痛性膀胱综合征和/或膀胱疼痛综合征相关的疼痛和/或下泌尿道症状的发病率、使其改善、抑制、减轻和/或延迟其发生的方法。因此，在一些实施方式中，在患有间质性膀胱炎和/或痛性膀胱综合征和/或膀胱疼痛综合征的个体中，在发生与间质性膀胱炎和/或痛性膀胱综合征和/或膀胱疼痛综合征相关的疼痛和/或下泌尿道症状之前施用抗-ngf拮抗剂抗体。可以通过任何合适的途径对个体施用抗-ngf拮抗剂抗体。不同施用途径的例子在本文中描述。在一些实施方式中，抗-ngf拮抗剂抗体每周一次、每两周一次、每三周一次、每四周一次、每五周一次、每六周一次、每七周一次、每八周一次、每九周一次、每十周一次、每十五周一次、每二十周一次、每二十五周一次、或每二十六周一次地施用。在一些实施方式中，抗-ngf拮抗剂抗体每个月一次、每两个月一次、每三个月一次、每四个月一次、每五个月一次或每六个月一次地施用。疼痛缓解或下泌尿道症状的缓解可以通过缓解时程(timecourse)来表征。因此，在一些实施方式中，在施用抗-ngf拮抗剂抗体后约24小时内观察到缓解。在其它一些实施方式中，在施用抗-ngf拮抗剂抗体后约36、48、60、72小时或4天内观察到缓解。在一些实施方式中，疼痛和/或下泌尿道症状的频率和/或强度减小，和/或疾病患者的生活品质提高。在一些实施方式中，在单剂量的抗-ngf拮抗剂抗体后，提供的疼痛缓解的持续时间至少约7天，至少约14天，至少约21天，至少约28天，至少约35天，至少约42天，至少约49天，至少约56天，至少约63天，至少约70天，至少约77天，至少约84天，至少约180天，或更久。疼痛缓解或下泌尿道症状缓解可以通过疼痛数字评价量表(painnumericalratingscale,nrs)的改变、o’leary-sant间质性膀胱炎症状指数(icsi)的改变、o’leary-sant间质性膀胱炎问题指数(icpi)的改变、pelvicpainandurgency/frequency(puf)症状评分的改变和/或排尿变量(例如排尿频率、夜尿频率、失禁发作频率、每次排尿排泄的平均体积、平均间质性膀胱炎疼痛严重性、泌尿急性发作、平均睡眠扰动评分、与性行为疼痛评分相关的平均疼痛评分、全局应答评价、报告治疗影响评价的专利(patentreportingtreatmentimpactassessment)、治疗失败、生物标记物、安全性端点(safetyendpoint)和/或药物代谢动力学度量)的改变来表征。生物标记物可包括ngf、糖蛋白-51(gp-51)、抗增殖因子(apf)和hb-表皮生长因子(hb-egf)等等。用于本发明方法(涉及与间质性膀胱炎和/或痛性膀胱综合征和/或膀胱疼痛综合征相关的疼痛和/或下泌尿道症状)中的示范性抗-ngf抗体是抗-ngf拮抗剂抗体，其表示阻断、阻抑或降低(包括显著阻断、阻抑或降低)ngf生物活性的任何抗体，所述生物活性包括ngf信号转导介导的下游通路，例如受体结合和/或对ngf的细胞应答的引发。术语“拮抗剂”暗示没有特定机制的生物活动(无论是什么)，并被认为明确地包含和包括与ngf的所有可能的药理学、生理学和生物化学相互作用及其后果，其可以通过多种不同的和化学上相异的组合物实现。就本发明的目的而言，应当明确地理解，术语“拮抗剂”包括所有前文鉴别的术语、标题和功能状态和特征，藉此ngf自身、ngf生物活性(包括但不限于其介导任何手术后疼痛的能力)、或生物活性的后果以任何有意义的程度被大量无效、降低或中和。在一些实施方式中，抗-ngf拮抗剂抗体结合ngf(与之物理相互作用)、结合ngf受体(例如trka受体和/或p75受体)、和/或降低(阻碍和/或阻断)下游ngf受体信号转导。在一些实施方式中，抗-ngf拮抗剂抗体结合ngf(例如hngf)并且不显著地与相关的神经营养蛋白例如nt-3、nt4/5、和/或bdnf结合。在一些实施方式中，抗-ngf拮抗剂抗体不伴随着不良的免疫应答。还在其它一些实施方式中，抗-ngf抗体被人源化(例如本文所述的抗体e3)。在一些实施方式中，抗-ngf抗体是抗体e3(如本文所述)。在其它一些实施方式中，抗-ngf抗体包含抗体e3的一个或多个cdr(例如1、2、3、4、5个，或在一些实施方式中来自e3的所有6个cdr)。在其它一些实施方式中，抗体是人的。还在其它一些实施方式中，抗-ngf抗体包含seqidno.1(wo2004/058184的图1)中所示重链可变区的氨基酸序列和/或seqidno:2(wo2004/058184的图1b)中所示轻链可变区的氨基酸序列。还在其它一些实施方式中，抗体包含经修饰的恒定区，例如免疫惰性的恒定区，例如其不引发补体介导的裂解，或者不刺激抗体依赖型细胞介导的细胞毒性(adcc)。在其它一些实施方式中，恒定区如eur.j.immunol.(1999)29:2613-2624；pctwo9958752中所述被修饰。用于本发明方法中的抗体通过以下任何(一种或多种)特征来表征：(a)能够结合ngf；(b)能够降低和/或抑制ngf生物活性和/或ngf信号转导介导的下游通路；(c)能够降低和/或抑制小鼠e13.5三叉神经神经元的ngf-依赖型存活；(d)与nt3、nt4/5和/或bdnf无任何显著的交叉反应性；(e)能够治疗和/或预防与间质性膀胱炎和/或痛性膀胱综合征和/或膀胱疼痛综合征相关的疼痛和/或下泌尿道症状；(f)能够提高ngf的清除率；(g)能够降低或抑制trka受体的活化，如例如使用激酶受体活化测定(kira)所检测的(见美国专利no.6,027,927)。就本发明的目的而言，抗体以抑制ngf和/或ngf信号转导功能介导的下游通路的方式，与ngf反应。在一些实施方式中，抗-ngf拮抗剂抗体识别人ngf。还在其它一些实施方式中，抗-ngf拮抗剂抗体特异性结合人ngf。在一些实施方式中，抗-ngf拮抗剂抗体不与相关的神经营养蛋白例如nt-3、nt4/5和/或bdnf显著结合。还在其它一些实施方式中，抗-ngf抗体能够结合ngf并有效抑制ngf与其trka和/或p75受体的体内结合和/或有效抑制ngf活化其trka和/或p75受体。还在其它一些实施方式中，抗-ngf拮抗剂抗体是单克隆抗体。还在其它一些实施方式中，抗-ngf抗体被人源化(例如本文所述的抗体e3)。在一些实施方式中，抗-ngf抗体是人的。见例如wo2005/019266，其描述了抗体4d4、14d10、6g9、7h2、14f11和4g6。在一些实施方式中，抗体是识别人ngf上一个或多个表位的人抗体。在另一实施方式中，抗体是识别人ngf上一个或多个表位的小鼠或大鼠抗体。在另一实施方式中，抗体识别选自下组的ngf上的一个或多个表位，所述组由灵长类、犬、猫、马和牛组成。还在其它一些实施方式中，抗-ngf拮抗剂抗体与选自以下任一个或多个的抗体结合基本相同的ngf表位：mab911、mab912和mab938(见hongo,等，hybridoma19:215-227(2000))；本文定义的抗体(例如抗体e3)；和/或wo20050019266中所述抗体(包括抗体4d4、14d10、6g9、7h2、14f11和4g6)或wo2006131951中所述抗体(包括抗体hu-αd11)。在其它一些实施方式中，抗体与mab911结合相同的表位。在另一实施方式中，抗体包含免疫惰性(例如不引发补体介导的裂解或者抗体依赖型细胞介导的细胞毒性(adcc))的恒定区。可以使用美国专利no.5,500,362中公开的方法评价adcc活性。在一些实施方式中，恒定区如eur.j.immunol.(1999)29:2613-2624；pctwo9958752中所述被修饰。在一些实施方式中，抗-ngf拮抗剂抗体是称作“e3”的人源化小鼠抗-ngf单克隆抗体，本文所述任何e3相关抗体，或其任何片段。下文概括了与亲本鼠抗-ngf单克隆抗体911相比以高亲合力和缓慢的解离动力学结合人ngf的抗体e3的结合特性。e3以约50倍于亲本小鼠抗体911的结合亲和性结合人ngf。抗体kdkoffkon911(fab)3.7nm9x10-5s-12.2x104m-1s-1e3(fab)0.07nm<4x10-5s-16x105m-1s-1e3抗体和相关抗体还显示强大的拮抗人ngf的能力，如通过wo2004/058184的实施例2和3中所述体外实验所评价的，所述wo2004/058184的内容通过引用并入本文。例如，抗体e3在存在15pm人ngf时以约21pm的ic50，在存在1.5pm的人ngf时以约1.2pm的ic50拮抗小鼠e13三叉神经神经元的ngf-依赖型存活。因此，在另一方面中，可以通过以下进一步鉴定和表征本发明的抗体和多肽：(h)以低解离动力学(在一些实施方式中以小于约2nm的kd和/或比约6x10-5s-1更慢的koff)与人ngf高亲和性结合；和/或(i)能够在约15pmngf(在一些实施方式中为人ngf)下以约100pm或更小的ic50和/或在约1.5pmngf下以约20pm或更小的ic50抑制(阻断)小鼠e13.5三叉神经神经元的ngf-依赖型存活。可用于本发明中的抗体可包括单克隆抗体、多克隆抗体、抗体片段(例如fab、fab’、f(ab’)2、fv、fc等等)、嵌合抗体、双特异性抗体、杂缀合物抗体(heteroconjugateantibody)、单链(scfv)、其突变体、包含抗体部分的融合蛋白、人源化抗体、人抗体，和包含具有所需特异性的抗原识别位点的免疫球蛋白分子的任何其它经修饰的构型，包括抗体的糖基化变体、抗体的氨基酸序列变体、和共价修饰的抗体。抗体可以是鼠、大鼠、人或任何其它来源(包括嵌合抗体或人源化抗体)。在一些实施方式中，本发明利用包含下述轻链的抗体，所述轻链由保藏号为atccno.pta-4893或atccno.pta-4894的宿主细胞生产的多核苷酸编码。在另一方面中，抗体包含下述重链，所述重链由保藏号为atccno.pta-4895的宿主细胞生产的多核苷酸编码。本发明还利用e3的多种配制物和等同的抗体片段(例如fab、fab’、f(ab’)2、fv、fc等等)、单链(scfv)、其突变体、包含抗体部分的融合蛋白，和包含具有所需特异性的抗原(ngf)识别位点的e3的任何其它经修饰的构型。通过上文所述任何(一种或多种)标准来鉴定和表征e3的等同抗体，包括e3的抗体和多肽片段(其可以是或不是抗体)，和包含e3多肽片段的多肽。因此，本发明利用以下任何，或包含以下任何的组合物(包括药物组合物)：(a)抗体e3；(b)抗体e3的片段或区域；(c)seqidno.17(wo2004/058184的图1b)中所示抗体e3的轻链；(c)seqidno.16(wo2004/058184的图1a)中所示抗体e3的重链；(d)来自抗体e3轻链和/或重链的一个或多个可变区；(e)seqidnos.3-8(wo2004/058184的图1a和1b)中所示抗体e3的一个或多个cdr(1、2、3、4、5或6个cdr)；(f)来自seqidno.5(wo2004/058184的图1a)中所示抗体e3重链的cdrh3；(g)来自seqidno.8(wo2004/058184的图1b)中所示抗体e3轻链的cdrl3；(h)来自seqidnos.6-8(wo2004/058184的图1b)中所示抗体e3轻链的三个cdr；(i)来自seqidno.3-5(wo2004/058184的图1a)中所示抗体e3重链的三个cdr；(j)来自seqidnos3-8(wo2004/058184的图1a和1b)中所示抗体e3轻链的三个cdr和重链的三个cdr；和(k)包含(b)到(j)中任一项的抗体。抗体e3的cdr部分(包括chothia和kabatcdr)图示于wo2004/058184的图1a和1b中，并且由以下氨基酸序列组成：(a)重链cdr1("cdrh1")gfsligydln(seqidno:3)；(b)重链cdr2("cdrh2")iiwgdgttdynsavks(seqidno:4)；(c)重链cdr3("cdrh3")ggywyatsyyfdy(seqidno:5)；(d)轻链cdr1("cdrl1")rasqsisnnln(seqidno:6)；(e)轻链cdr2("cdrl2")ytsrfhs(seqidno:7)；和(f)轻链cdr3("cdrl3")qqehtlpyt(seqidno:8)。确定cdr区是本领域的公知技术。应当理解在一些实施方式中，cdr可以是kabat和chothiacdr的组合(也称作“合并的cdr”或“扩大的cdr”)。在一些实施方式中，cdr包括kabatcdr。在其它一些实施方式中，cdr是chothiacdr。在一些实施方式中，抗体包含至少一个cdr与e3的至少一个cdr、至少两个、至少三个、至少四个、至少5个cdr基本同源(或在一些实施方式中与e3的所有6个cdr基本同源，或源于e3)。其它一些实施方式包括具有至少2、3、4、5或6个cdr与e3的至少2、3、4、5或6个cdr基本同源或者源于e3。就本发明的目的而言，应当理解结合特异性和/或总体活性(其可以在治疗和/或预防疼痛或抑制e13.5小鼠三叉神经神经元的ngf-依赖型存活方面)通常保留，尽管与e3相比活性程度可变化(可能更大或更小)。在一些实施方式中，抗体可包含具有以下任何的e3的氨基酸序列：e3序列的至少5个连续氨基酸、至少8个连续氨基酸、至少约10个连续氨基酸、至少约15个连续氨基酸、至少约20个连续氨基酸、至少约25个连续氨基酸、至少约30个连续氨基酸，其中至少3个氨基酸来自e3的可变区。mab911的扩大的cdr序列展示于wo2004/058184的图1a和1b中，和本文的seqidnos:9-14中。在一些实施方式中，可变区来自e3的轻链。在另一实施方式中，可变区来自e3的重链。在另一实施方式中，5个(或更多)连续氨基酸来自seqidnos3-8(wo2004/058184的图1a或1b)中所示e3的互补性决定区(cdr)。在另一实施方式中，抗体包含具有以下任何的e3的氨基酸序列：e3序列的至少5个连续氨基酸、至少8个连续氨基酸、至少约10个连续氨基酸、至少约15个连续氨基酸、至少约20个连续氨基酸、至少约25个连续氨基酸、至少约30个连续氨基酸，其中e3序列包含以下任一个或多个：cdrh1的氨基酸残基l29、cdrh2的i50、cdrh3的w101和/或cdrh3的a103；和/或cdrl1的氨基酸残基s28、cdrl1的n32、cdrl2的t51、cdrl3的91e和/或cdrl3的h92。如本文公开内容中明确的，使用顺序氨基酸编号规划(sequentialaminoacidnumberingscheme)来表示可变区中的氨基酸残基(也就是说，每个可变区中的氨基酸残基顺序编号)。如本领域所公知的，比较两个抗体或多肽例如e3抗体和e3变体(或怀疑为e3变体的多肽)时kabat和/或chothia编号系统是有用的。本领域公知需要时(例如用于在e3和另一多肽之间进行比较时)如何将顺序编号转化为chothia和/或kabat编号。wo2004/058184的图23展示了使用顺序、chothia和kabat编号来编号的e3可变区。另外，为了便于比较，通常认为框架残基通常(但不总是)具有大致相同的残基数量。然而，cdr的尺寸可以变化(即其可能具有一个或多个氨基酸残基的插入和/或缺失)。比较e3抗体和候选e3变体(例如在cdr区的情况下来自比要比对的抗体e3更长的候选序列)时，可遵循以下步骤(尽管其它方法是本领域已知的)。将候选抗体序列与e3抗体重链和轻链可变区比对。比对可以手动进行，或者使用普遍接受的计算机程序通过计算机进行。可以通过使用大部分fab序列共有的一些氨基酸残基来简化比对。例如，轻链和重链各自典型地具有两个半胱氨酸，其通常存在于保守的位置上。应当理解候选变体抗体的氨基酸序列可以更长(即具有插入的氨基酸残基)或更短(具有缺失的氨基酸残基)。可以对残基编号添加后缀，来表明额外残基的插入，例如残基34abc。对于与e3序列比对例如残基33和35但是在它们之间没有残基与残基35比对的候选序列而言，残基35单纯地不指定给一个残基。在另一途径中，普遍公知比较不同长度的cdr时可以在结构等同(例如抗原-抗体复合物中相同的位置)的氨基酸之间进行比较。例如，chothia编号(al-lazikani等，上文)通常(但不是在所有情况下)在结构正确的位置上进行插入和缺失。结构等同物也可以使用x-射线晶体学或双突变周期分析来演绎或证明(见pons等，(1999)prot.sci.8:958-968)。就kd而言，抗-ngf抗体对ngf(例如hngf)的亲合力可以是约0.10到约0.80nm，约0.15到约0.75nm和约0.18到约0.72nm。在一些实施方式中，kd为约2pm、约5pm、约10pm、约15pm、约20pm、约40pm，或大于约40pm。在一些实施方式中，kd在约2pm和22pm之间。在其它一些实施方式中，kd小于约10nm、约5nm、约4nm、约3.5nm、约3nm、约2.5nm、约2nm、约1.5nm、约1nm、约900pm、约800pm、约700pm、约600pm、约500pm、约400pm、约300pm、约200pm、约150pm、约100pm、约90pm、约80pm、约70pm、约60pm、约50pm、约40pm、约30pm、约10pm、约5pm。在一些实施方式中，kd为约10nm。在其它一些实施方式中，kd小于约10nm。在其它一些实施方式中，kd为约0.1nm或约0.07nm。在其它一些实施方式中，kd小于约0.1nm或小于约0.07nm。在其它一些实施方式中，kd是约10nm、约5nm、约4nm、约3.5nm、约3nm、约2.5nm、约2nm、约1.5nm、约1nm、约900pm、约800pm、约700pm、约600pm、约500pm、约400pm、约300pm、约200pm、约150pm、约100pm、约90pm、约80pm、约70pm、约60pm、约50pm、约40pm、约30pm、约10pm之任一到约2pm、约5pm、约10pm、约15pm、约20pm或约40pm之任一。在一些实施方式中，kd是约10nm、约5nm、约4nm、约3.5nm、约3nm、约2.5nm、约2nm、约1.5nm、约1nm、约900pm、约800pm、约700pm、约600pm、约500pm、约400pm、约300pm、约200pm、约150pm、约100pm、约90pm、约80pm、约70pm、约60pm、约50pm、约40pm、约30pm、约10pm之任一。还在其它一些实施方式中，kd是约2pm、约5pm、约10pm、约15pm、约20pm、约40pm，或大于约40pm。可以使用本领域公知的方法测定抗体对ngf的亲合力。测定抗体对ngf的亲合力的一种方式是通过测量抗体单功能fab片段的亲合力来实现。为了获得单功能fab片段，可以用木瓜蛋白酶切割或重组表达抗体(例如igg)。可以通过表面等离子体共振(blacore3000tm表面等离子体共振(spr)系统，biacore,inc,piscawaynj)来测定抗体的抗-ngffab片段的亲合力。可以根据制造商的说明，用n-乙基-n'-(3-二甲氨基丙基)-碳化二亚胺盐酸盐(edc)和n-羟基琥珀酰亚胺(nhs)活化cm5芯片。可以将人ngf(或任何其它ngf)稀释进10mm乙酸钠ph4.0中，并以0.005mg/ml的浓度注射在活化的芯片上。使用跨越个体芯片通道的可变的流动时间，实现两种抗原密度范围：对详细的动力学研究而言100-200个应答单位(ru)，对筛选实验而言500-600ru。用乙醇胺封闭芯片。再生研究显示pierce洗脱缓冲液(产品编号21004,piercebiotechnology,rockford,il)和4mnacl(2:1)的混合物有效地去除了结合的fab，同时将芯片上hngf的活性保持超过200次注射。所有的biacore实验使用hbs-ep缓冲液(0.01mhepes,ph7.4,0.15nacl,3mmedta,0.005％表面活性剂p29)作为运行缓冲液。将经纯化的fab样品的系列稀释液(0.1-10x评价的kd)以100μl/分钟注射1分钟，并允许至多2小时的解离时间。使用已知浓度(通过氨基酸分析测定)的fab作为标准，通过elisa和/或sds-page电泳测定fab蛋白质的浓度。通过使用biaevaluation程序将数据与1:1langmuir结合模型(karlsson,r.roos,h.fagerstam,l.petersson,b.(1994).methodsenzymology6.99-110)拟合，同时获得动力学结合速率(kon)和解离速率(koff)。平衡解离常数(kd)值被计算为koff/kon。该方案适用于测定抗体与任何ngf的亲合力，所述ngf包括人ngf、另一脊椎动物(在一些实施方式中为哺乳动物)的ngf(例如小鼠ngf、大鼠ngf、灵长类ngf)，还适用于与其它神经营养蛋白例如相关的神经营养蛋白nt3、nt4/5和/或bdnf一起使用。在一些实施方式中，抗体结合人ngf，并且不显著结合来自另外的脊椎动物物种(在一些实施方式中为哺乳动物)的ngf。在一些实施方式中，抗体结合人ngf以及一种或多种来自另外的脊椎动物(在一些实施方式中为哺乳动物)的ngf。还在其它一些实施方式中，抗体结合ngf并且不与其它神经营养蛋白显著地交叉反应(例如相关的神经营养蛋白nt3、nt4/5和/或bdnf)。在一些实施方式中，抗体结合ngf以及至少一种其它神经营养蛋白。在一些实施方式中，抗体结合哺乳动物物种例如马或狗的ngf，但是不与来自另外的哺乳动物物种的ngf显著结合。表位可以是连续或不连续的。在一些实施方式中，抗体与选自以下的抗体结合基本相同的人ngf表位：如hongo等，hybridoma,19:215-227(2000)中所述的mab911、mab912和mab938；和本文所述的抗体(例如抗体e3)；和/或wo2005019266中所述抗体(包括抗体4d4、14d10、6g9、7h2、14f11和4g6)或wo2006131951中所述抗体(包括抗体hu-αd11)，其整体内容通过引用并入本文。在另一实施方式中，抗体与mab911结合相同的hngf表位。还在另一实施方式中，抗体与mab909结合基本相同的表位。hongo等，上文。例如，表位可包含以下一种或多种：hngf可变区1(氨基酸23-35)中残基k32、k34和e35；hngf可变区3(氨基酸81-88)中残基f79和t81；可变区4内残基h84和k88；hngf的可变区5(氨基酸94-98)和c-端(氨基酸111-118)之间的残基103；hngf前-可变区1(氨基酸10-23)中残基e11；hngf可变区2(氨基酸40-49)和hngf可变区3(氨基酸59-66)之间的y52；hngfc-端中的残基l112和s113；hngf的可变区3中的残基r59和r69；或hngf的前-可变区1中的残基v18、v20和g23。另外，表位可包含一个或多个可变区1、可变区3、可变区4、可变区5、n-端区、和/或hngf的c-端。还在另一实施方式中，抗体显著地降低hngf的残基r103的溶剂可达性(accessibility)。应当理解，尽管上述表位涉及人ngf，但是本领域常规技术人员能够将人ngf的结构与其它物种的ngf比对，并且很可能鉴定这些表位的复本。在一些实施方式中，用于本发明中的抗体可以约200pm、150pm、100pm、80pm、60pm、40pm、20pm、10pm之任一或更小的ic50(在存在约15pmngf时)抑制(降低和/或阻断)小鼠e13.5三叉神经神经元的人ngf-依赖型存活。在一些实施方式中，本发明的抗体或肽可以约50pm、40pm、30pm、10pm、20pm、10pm、5pm、2pm、1pm之任一或更小的ic50(在存在约1.5pmngf时)抑制(降低和/或阻断)小鼠e13.5三叉神经神经元的人ngf-依赖型存活。在一些实施方式中，本发明的抗体或肽可以约150pm、125pm、100pm、80pm、60pm、40pm、30pm、20pm、10pm、5pm之任一或更小的ic50(在存在约15pmngf时)抑制(降低和/或阻断)小鼠e13.5三叉神经神经元的大鼠ngf-依赖型存活。在一些实施方式中，抗体可以约30pm、25pm、20pm、15pm、10pm、5pm、4pm、3pm、2pm、1pm之任一或更小的ic50(在存在约1.5pmngf时)抑制(降低和/或阻断)小鼠e13.5三叉神经神经元的大鼠ngf-依赖型存活。测量小鼠e13三叉神经神经元的ngf-依赖型存活的方法是本领域已知的，并描述于例如wo2004/058184的实施例2中。鉴定抗-ngf拮抗剂抗体可以使用本领域已知的方法鉴定或表征用于本发明中的抗-ngf拮抗剂抗体，其中检测和/或测量ngf生物活性的降低、改善或中和。可以使用pctwo04/065560中描述的方法。可以使用另一方法，例如美国专利nos.5,766,863和5,891,650中描述的激酶受体活化(kira)实验来鉴定抗-ngf剂。该elisa-型实验适用于通过测量受体蛋白酪氨酸激酶(下文称作“rptk”)例如trka受体的激酶结构域的自磷酸化作用来定性或定量测量激酶活化，以及适用于鉴定和表征选择的rptk例如trka的潜在拮抗剂。实验的第一阶段涉及激酶受体例如trka受体的激酶结构域的磷酸化，其中受体存在于真核细胞的细胞膜中。受体可以是内源受体，或者可以将编码受体的核酸或受体构建体转化进细胞中。典型地，用基本均质的这类细胞的种群(通常为哺乳动物细胞系)涂覆第一固相(例如第一测定板的孔)，使得细胞与固相粘附。通常细胞是粘附的，并因此天然地与第一固相粘附。如果使用“受体构建体”，则其通常包含激酶受体和标记多肽的融合物。标记多肽被实验的elisa部分中的捕获剂(通常是捕获抗体)识别。然后与ngf一起向具有粘附细胞的孔中添加分析物例如候选ngf拮抗剂(包括抗-ngf拮抗剂抗体)，使得酪氨酸激酶受体(例如trka受体)暴露于ngf和分析物(或与它们接触)。该实验使得能够鉴定通过其配体ngf抑制trka活化的拮抗剂(包括抗体)。暴露于ngf和分析物后，使用裂解缓冲液(其中具有溶解洗涤剂)和轻柔搅动使粘附细胞溶解，从而释放细胞裂解物，所述细胞裂解物可以直接进行实验的elisa部分而不需要浓缩或澄清细胞裂解物。随后对藉此制备的细胞裂解物进行实验的elisa阶段。作为elisa阶段中的第一个步骤，用捕获剂(通常为捕获抗体)涂覆第二固相(通常是elisa微量滴定板的孔)，所述捕获剂特异性结合酪氨酸激酶受体，或者在受体构建体的情况下特异性结合标记多肽。进行第二固相的涂覆，使得捕获剂与第二固相粘附。捕获剂通常是单克隆抗体，但是如本文实施例中所述，也可以使用多克隆抗体。然后将细胞裂解物暴露于粘附捕获剂或与之接触，使得受体或受体构建体与第二固相粘附(或在其中被捕获)。然后进行洗涤步骤，从而去除未结合的细胞裂解物，留下捕获的受体或受体构建体。然后将粘附或捕获的受体或受体构建体暴露于抗-磷酸酪氨酸抗体或与之接触，所述抗体识别酪氨酸激酶受体中磷酸化的酪氨酸残基。在一些实施方式中，抗-磷酸酪氨酸抗体与下述酶(直接或间接)缀合，所述酶催化非放射性彩色试剂的颜色改变。因此，可以通过随后试剂的颜色改变来测量受体的磷酸化。酶可与抗-磷酸酪氨酸抗体直接结合，或者缀合分子(例如生物素)可与抗-磷酸酪氨酸抗体缀合并且酶可随后通过缀合分子与抗-磷酸酪氨酸抗体结合。最后，例如通过彩色试剂的颜色改变来测量抗-磷酸酪氨酸抗体与捕获的受体或受体构建体的结合。也可以通过将候选试剂与ngf孵育并监测一种或多种以下特征来鉴定抗-ngf拮抗剂抗体：(a)与ngf结合并抑制ngf生物活性或ngf信号转导功能介导的下游通路；(b)抑制、阻断或降低ngf受体活化(包括trka二聚体化和/或自磷酸化)；(c)提高ngf的清除率；(d)治疗或预防与间质性膀胱炎和/或痛性膀胱综合征和/或膀胱疼痛综合征相关的疼痛和/或下泌尿道症状的任何方面；(e)抑制(降低)ngf合成、生产或释放。在一些实施方式中，通过将候选试剂与ngf孵育并监测ngf的结合和/或伴随的生物活性的减少或中和，来鉴定ngf拮抗剂(例如抗-ngf拮抗剂抗体)。可以用经纯化的ngf多肽，或用天然表达或被转染为表达ngf多肽的细胞进行结合实验。在一些实施方式中，结合实验是竞争性结合实验，其中评价候选试剂(例如抗体)与已知抗-ngf拮抗剂抗体竞争ngf结合的能力。实验可以以多种方式进行，包括elisa方式。在其它一些实施方式中，通过将候选试剂与ngf孵育并监测结合和伴随的对trka受体二聚体化和/或自磷酸化的抑制来鉴定ngf拮抗剂(例如抗-ngf拮抗剂抗体)。在初始鉴定后，可以通过已知用于测试靶向生物活性的生物测定法来进一步证实和精制候选抗-ngf拮抗剂抗体的活性。或者可以使用生物测定法来直接筛选候选者。例如，ngf促进应答细胞中大量形态学可识别的改变。这些包括但不限于，促进pc12细胞的分化和增强来自这些细胞的神经炎的生长(greene等，procnatlacadsciusa.73(7):2424-8,1976)，促进神经突从应答性感受和交感神经节的外植体向外生长(levi-montalcini,r.andangeletti,p.nervegrowthfactor.physiol.rev.48:534-569,1968)和促进ngf依赖型神经元例如胚胎背根神经节、三叉神经神经节或交感神经节神经元的存活(例如chun&patterson,dev.biol.75:705-711,(1977)；buchman&davies,development118:989-1001(1993))。因此，抑制ngf生物活性的实验需要与ngf加分析物一起培养ngf应答细胞，所述分析物例如为候选ngf拮抗剂(包括抗-ngf拮抗剂抗体)。在适当的时间后，可以测定细胞应答(细胞分化、神经突向外生长或细胞存活)。也可以在如hongo等，hybridoma19:215-227(2000)所述的胚胎大鼠背根神经节存活生物测定中，通过监测候选试剂抑制ngf介导的存活的能力，来评价候选ngf拮抗剂抗体阻断或中和ngf生物活性的能力。可以通过本领域已知的步骤制造用于本发明中的抗体，所述步骤中的一些阐述于wo2004/058184的实施例中。可以通过蛋白水解或抗体的其它降解，通过如wo2004/058184中所述的重组方法(即单个或融合的多肽)，或通过化学合成来生产抗体。便利地通过化学合成制造抗体的多肽，特别是至多约50个氨基酸的较短多肽。化学合成的方法是本领域已知的，并可商业获得。例如，可以使用固相方法，通过自动化多肽合成仪生产e3抗体。还见美国专利nos.5,807,715；4,816,567；和6,331,415。也可以使用已知的合成蛋白质化学，包括涉及交联剂的合成蛋白质化学，体外制备嵌合和杂合的抗体。例如，可以使用二硫键取代反应或者通过形成硫醚键来构建免疫毒素。用于这一目的的合适试剂的例子包括iminothiolate和甲基-4-mercaptobutyrimidate。在另一种备选方案中，可以使用本领域公知的步骤重组制造抗体。在一些实施方式中，将包含编码抗体e3可变和轻链区的序列的多核苷酸克隆进载体中，用于在宿主细胞(例如cho细胞)中表达或繁殖。在另一实施方式中，将wo2004/058184的图2和3中所示多核苷酸序列克隆进一个或多个载体中，用于表达或繁殖。编码感兴趣的抗体的序列可以保持在宿主细胞中的载体中，并且所述宿主细胞可随后被扩展和冷冻用于将来使用。本文中进一步描述了载体(包括表达载体)和宿主细胞。用于在植物或奶中重组表达抗体的方法已公开。见例如peeters等，(2001)vaccine19:2756；lonberg,n.andd.huszar(1995)int.rev.immunol13:65；和pollock等，(1999)jimmunolmethods231:147。制造抗体衍生物(例如人源化、单链等等)的方法是本领域已知的。本发明还包括本发明抗体(例如e3)的单链可变区片段(“scfv”)。通过使用短连接肽连接轻和/或重链可变区来制造单链可变区片段。bird等，(1988)science242:423-426。连接肽的一个例子是(ggggs)3(seqidno:15)，其在一个可变区的羧基端和其它可变区的氨基端之间桥接约3.5nm。其它序列的连接子已描述和使用(bird等，(1988))。连接子可随后被修饰为另外的功能，例如附着药物或与固体支持物附着。可以重组或合成地生产单链变体。为了合成生产scfv，可以向合适的宿主细胞中引入含有编码scfv的多核苷酸的合适质粒，所述宿主细胞为真核(例如酵母、植物、昆虫或哺乳动物细胞)或原核(例如e.coli)。可以通过常规操作例如连接多核苷酸来制造编码感兴趣的scfv的多核苷酸。可以使用本领域已知的标准蛋白质纯化技术分离得到的scfv。还包括其它形式的单链抗体，例如双抗体。双抗体是二价的、双特异性的抗体，其中vh和vl结构域在单一多肽链上表达，但是使用过短而不允许相同链上两个结构域之间配对的连接子，从而强迫所述结构域与另一链的互补结构域配对，并产生两个抗原结合位点(见例如holliger,p.,等，(1993)proc.natl.acadsci.usa90:6444-6448；poljak,r.j.,等，(1994)structure2:1121-1123)。抗体可以是双特异性抗体——对至少两种不同抗原具有结合特异性的单克隆抗体。可以使用本文公开的抗体制造双特异性抗体。用于制造双特异性抗体的方法是本领域已知的(见例如suresh等，1986,methodsinenzymology121:210)。传统上，双特异性抗体的重组生产是以两条重链-轻链对的共同表达为基础中，其中两条重链具有不同的特异性(millstein和cuello,1983,nature305,537-539)根据制造双特异性抗体的一种途径，将具有期望的结合特异性(抗体-抗原结合位点)的抗体可变结构域与免疫球蛋白恒定结构域序列融合。融合优选地与包含至少部分铰链ch2和ch3区的免疫球蛋白重链恒定区进行。优选含有轻链结合必需位点的第一重链恒定区(ch1)存在于至少一种融合物中。将编码免疫球蛋白重链融合物和(需要时)免疫球蛋白轻链的dna插入单独的表达载体中，并共同转染进合适的宿主生物中。在构建中使用不等比例的三种多肽链提供最佳结果的实施方式中，这在调节三种多肽片段的相互比例中提供了巨大的灵活性。然而，当至少两种多肽链以等比例表达得到高产量时，或比例不具有具体重要性时，可能将两种或所有三种多肽链的编码序列插入一个表达载体中。在一种途径中，双特异性抗体由杂种免疫球蛋白重链组成，其在一条臂上具有第一结合特异性，并且在另一条臂上具有杂种免疫球蛋白重链-轻链对(提供第二结合特异性)。该不对称的结构(仅在双特异性分子一半中具有免疫球蛋白轻链)便于将期望的双特异性化合物与不想要的免疫球蛋白链组合中隔离。该途径描述于1994年3月3日公开的pct公开no.wo94/04690中。包含两种共价接合的抗体的杂缀合物抗体也在本发明的范围内。这类抗体已被用于将免疫系统细胞靶向至不想要的细胞(美国专利no.4,676,980)，和用于治疗hiv感染(pct申请公开nos.wo91/00360和wo92/200373；ep03089)。可以使用任何便利的交联方法制造杂缀合物抗体。合适的交联剂和技术是本领域公知的，并且描述于美国专利no.4,676,980中。抗体可以是例如如本领域已知和本文所述的人源化抗体。本发明包括对抗体e3的修饰，包括不显著影响它们特性的功能等同的抗体，和具有增强或降低的活性的变体。多肽的修饰是本领域中的常规实践，并进一步在实施例中例证。经修饰的多肽的例子包括下述多肽，所述多肽具有不显著有害地改变功能活性的氨基酸残基取代(包括保守取代)、一个或多个氨基酸缺失或添加，或使用化学类似物。在本文中使用时，多肽“变体”是下述多肽，其与天然蛋白质差异为一个或多个取代、缺失、添加和/或插入，使得多肽的免疫反应性不被大量减小。也就是说，变体特异性结合抗原的能力相对于天然蛋白质可以被增强或不变，或者相对于天然蛋白质可以被减小少于50％，优选地少于20％。多肽变体优选地与经鉴定的多肽显示至少约80％、更优选地至少约90％、最优选地至少约95％的同一性(如本文所述测定)。可以通过向抗体dna中引入合适的核苷酸改变或者通过肽合成来制备抗体的氨基酸序列变体。这类变体包括例如从本文所述的seqidno:1或2的氨基酸序列中缺失和/或插入和/或取代残基。制造缺失、插入和取代的任何组合以实现最终构建体，条件是最终构建体具有期望的特征。氨基酸改变也可以改变抗体的翻译后过程，例如改变糖基化位点的数量或位置。用于鉴定抗体中属于诱变或修饰的优选位置的某些残基或区域的一种有用方法称作“丙氨酸扫描诱变”，并由cunningham和wells,1989,science,244:1081-1085描述。鉴定残基或目标残基组(例如带电的残基如arg、asp、his、lys和glu)，并用中性或带负电的氨基酸(最优选丙氨酸或多聚丙氨酸)替换，来影响氨基酸与抗原的相互作用。然后通过在取代位点上或对取代位点引入进一步或其它的变体，来精制对取代展示功能灵敏度的这些氨基酸位置。因此，预先确定了用于引入氨基酸序列变异的位点时，不需要预先确定突变自身的性质。例如，为了分析给定位点上突变的表现，在靶密码子或区域中进行ala扫描诱变或随机诱变，并针对期望的活性筛选表达的抗体变体。也可以使用如本文所述的文库筛选诱变，来鉴定抗体中适用于诱变或修饰的位置。氨基酸序列插入包括氨基端和/或羧基端融合物，其长度范围从一个残基到含有一百或更多残基的多肽，还包括单个或多个氨基酸残基的序列内插入物。末端插入物的例子包括具有n-端甲硫氨酰(methionyl)残基的抗体或与表位标签融合的抗体。抗体分子的其它插入变体包括下述酶和多肽与抗体的n-端或c-端的融合物，所述酶和多肽提高抗体的血清半衰期。取代变体在抗体分子中去除至少一个氨基酸残基并在该处插入不同的残基。对取代诱变而言最感兴趣的位点包括高变区，但是也考虑fr改变。保守取代展示于表1中题目“保守取代”下。如果这类取代导致生物活性的改变，则可以引入更重大的改变并筛选产物，所述改变在表1中命名为“示范性取代”或如下文关于氨基酸种类所进一步描述的。表1：氨基酸取代抗体生物特性的重大修饰通过选择下述取代来完成，所述取代对以下的影响显著不同：(a)维持取代区域中多肽主链的结构，例如片层或螺旋构型，(b)维持分子在靶位点处的疏水性或电荷，或(c)侧链的松密度(bulk)。天然存在的残基根据常见的侧链特性被分为多组：(1)疏水的：正亮氨酸、met、ala、val、leu、ile；(2)中性亲水的：cys、ser、thr；(3)酸性的：asp、glu；(4)碱性的：asn、gln、his、lys、arg；(5)影响链方向性的残基：gly、pro；和(6)芳香族的：trp、tyr、phe。通过将这些种类之一的成员更换为另一种类来制造非保守性取代。任何不涉及维持抗体正确构型的半胱氨酸残基也可以被取代，通常被取代为丝氨酸，从而改进分子的氧化稳定性并防止异常交联。相反，可以对抗体添加半胱氨酸键来改善其稳定性，尤其是当抗体是抗体片段如fv片段时。氨基酸修饰的范围可以从改变或修饰一个或多个氨基酸到完全重新设计区域例如可变区。可变区中的改变可改变亲合力和/或特异性。在一些实施方式中，在cdr区中制造不多于一到五个保守的氨基酸取代。在其它一些实施方式中，在cdr3结构域中制造不多于一个到三个保守的氨基酸取代。还在其它一些实施方式中，cdr结构域是cdrh3和/或cdrl3。修饰还包括糖基化和非糖基化的多肽，以及具有其它翻译后修饰(例如用不同的糖糖基化、乙酰化和磷酸化)的多肽。抗体在恒定区中保守的位置上被糖基化(jefferis和lund,1997,chem.immunol.65:111-128；wright和morrison,1997,tibtech15:26-32)。免疫球蛋白的寡糖侧链影响蛋白质的功能(boyd等，1996,mol.immunol.32:1311-1318；wittwe和howard,1990,biochem.29:4175-4180)和糖蛋白部分之间的分子内相互作用，这可影响糖蛋白的构象和展示的三维表面(hefferis和lund，上文；wyss和wagner,1996,currentopin.biotech.7:409-416)。寡糖也可以基于特异性识别结构，发挥将给定的糖蛋白靶向至某些分子的作用。还报道了抗体的糖基化影响抗体-依赖型细胞毒性(adcc)。具体地，报道了下述cho细胞具有改善的adcc活性(umana等，1999,maturebiotech.17:176-180)，所述cho细胞具有四环素调节的β(1,4)-n-乙酰葡糖氨基转移酶iii(gntiii)的表达，所述酶是催化二等分glcnac形成的糖基转移酶。抗体的糖基化典型地是n-连接或o-连接的。n-连接的是指碳水化合物部件与天冬氨酸残基的侧链结合。三肽序列天冬氨酸-x-丝氨酸和天冬氨酸-x-苏氨酸(其中x是除脯氨酸之外的任何氨基酸)是碳水化合物部件与天冬氨酸侧链酶促结合的识别序列。因此，多肽中这些三肽序列任一的存在产生潜在的糖基化位点。o-连接的糖基化是指n-乙酰半乳糖胺、半乳糖或木糖之一的糖与羟基氨基酸结合，所述羟基氨基酸最常见的是丝氨酸或苏氨酸，尽管也可以使用5-羟基脯氨酸或5-羟基赖氨酸。对抗体添加糖基化位点便利地通过改变氨基酸序列来完成，使其含有一个或多个上述三肽序列(对n-连接的糖基化位点而言)。也可以通过对原始抗体序列添加或取代为一个或多个丝氨酸或苏氨酸残基来制造改变(对o-连接的糖基化位点而言)。也可以改变抗体的糖基化模式而不改变根本的核苷酸序列。糖基化很大程度上取决于用于表达抗体的宿主细胞。因为用于表达作为潜在疗法的重组糖蛋白(例如抗体)的细胞类型很少是天然细胞，所以可以期望抗体糖基化模式的变异(见例如hse等，1997,j.biol.chem.272:9062-9070)。除了宿主细胞的选择以外，在抗体的重组生产期间影响糖基化的因素包括生长模式、培养基配制、培养密度、氧合作用、ph、纯化流程等等。已提出多种方法来改变具体宿主生物中实现的糖基化模式，包括引入或过表达涉及寡糖生产的某些酶(美国专利号5,047,335；5,510,261和5,278,299)。糖基化或某些类型的糖基化可以从糖蛋白上酶促去除，例如使用内切糖苷酶h(endoh)来去除。另外，重组宿主细胞可以被遗传工程改造为在加工某些类型的多糖时有缺陷。这些技术和相似的技术是本领域公知的。其它修饰方法包括使用本领域已知的偶联技术，包括但不限于酶促手段、氧化取代和螯合。修饰可以被用于例如结合用于免疫测定法的标签。经修饰的e3多肽使用本领域确定的步骤制造，并可使用本领域已知的标准实验筛选，其中一些描述于下文和实施例中。其它抗体修饰包括如1999年11月18日公开的pct公开no.wo99/58572中所述经修饰的抗体。除了指向靶分子的结合结构域以外，这些抗体包含效应物结构域，其具有与人免疫球蛋白重链的恒定结构域的全部或部分基本同源的氨基酸序列。这些抗体能够结合靶分子而不引发显著的补体依赖型裂解，或细胞介导的靶标破坏。在一些实施方式中，效应物结构域能够显著结合fcrn和/或fcγriib。这些典型地基于源于两个或更多人免疫球蛋白重链ch2结构域的嵌合结构域。以这种方式修饰的抗体尤其适用于慢性抗体疗法，以避免炎症和常规抗体疗法的其它不良反应。本发明还利用包含一个或多个来自本发明抗体或多肽的片段或区域的融合蛋白。在一些实施方式中，提供下述融合多肽，所述融合多肽包含seqidno.2(wo2004/058184的图1b)中所示可变轻链区的至少10个连续氨基酸和/或seqidno.1(wo2004/058184的图1a)的可变重链区的至少10个氨基酸。在另一实施方式中，融合多肽包含e3轻链可变区和/或重链可变区，如seqidnos.1和2(wo2004/058184的图1a和1b)中所示。在另一实施方式中，融合多肽包含一个或多个e3的cdr。还在其它一些实施方式中，融合多肽包含抗体e3的cdrh3和/或cdrl3。在另一实施方式中，融合多肽包含cdrh1的氨基酸残基l29、cdrh2的i50、cdrh3的w101和/或cdrh3的a103；和/或cdrl1的氨基酸残基s28、cdrl1的n32、cdrl2的t51、cdrl3的91e和/或cdrl3的h92。就本发明的目的而言，e3融合蛋白含有一个或多个e3抗体，和天然分子中不与之结合的另一氨基酸序列，例如异源序列或来自另一区域的同源序列。示范性异源序列包括但不限于“标签”，例如flag标签或6his标签。标签是本领域公知的。可以通过本领域已知的方法，例如合成或重组地创建e3融合多肽。典型地，使用本文所述的重组方法通过制备表达编码e3融合蛋白的多核苷酸来制造所述e3融合蛋白，尽管也可以通过本领域已知的其他手段(包括例如化学合成)来制备。可以使用本领域已知的方法来测试本发明抗体和多肽的下述能力，例如结合ngf；降低或抑制ngf生物活性；降低和/或阻断e13.5小鼠三叉神经神经元的ngf-诱导的存活，所述方法中的一些描述于wo2004/058184的实施例中，尤其是wo2004/058184的实施例2和3中。本发明还利用下述组合物(包括药物组合物)和试剂盒，其包含抗体e3，并且如本公开所明确的，包含本文所述任何或所有抗体和/或多肽。这类组合物和试剂盒可用于在个体中治疗和/或预防与间质性膀胱炎和/或痛性膀胱综合征和/或膀胱疼痛综合征相关的一种或多种疼痛和/或下泌尿道症状。多核苷酸、载体和宿主细胞本发明还提供了经分离的、编码本发明抗体和多肽(包括包含wo2004058184的图1a和1b中所示轻链和重链可变区的多肽序列的抗体)的多核苷酸，和用于本发明方法中的、包含所述多核苷酸的载体和宿主细胞。因此，多核苷酸(或组合物，包括药物组合物)可包括编码以下任何的多核苷酸：(a)抗体e3；(b)抗体e3的片段或区域；(c)seqidno.17(wo2004/058184的图1b)中所示抗体e3的轻链；(d)seqidno.16(wo2004/058184的图1a)中所示抗体e3的重链；(e)来自抗体e3轻链和/或重链的一个或多个可变区；(f)seqidnos.3-8(wo2004/058184的图1a和1b)中所示抗体e3的一个或多个cdr(1、2、3、4、5或6个cdr)；(g)来自seqidno.5(wo2004/058184的图1a)中所示抗体e3重链的cdrh3；(h)来自seqidno.8(wo2004/058184的图1b)中所示抗体e3轻链的cdrl3；(i)来自seqidnos.6-8(wo2004/058184的图1b)中所示抗体e3轻链的三个cdr；(j)来自seqidno.3-5(wo2004/058184的图1a)中所示抗体e3重链的三个cdr；(k)来自seqidnos3-8(wo2004/058184的图1a和1b)中所示抗体e3轻链的三个cdr和重链的三个cdr；或(l)包含(b)到(k)中任一项的抗体。在一些实施方式中，多核苷酸包含seqidnos.76和77(wo2004/058184的图2和3)中所示多核苷酸之一或二者。在另一方面中，本发明利用了保藏号为atccno.pta-4893或atccno.pta-4894的、编码e3轻链的经分离的多核苷酸。在另一方面中，本发明利用了保藏号为atccno.pta-4895的、编码e3重链的茎分离的多核苷酸。还在另一方面中，本发明利用了包含以下的经分离的多核苷酸：(a)由保藏号为atccno.pta-4894的多核苷酸编码的可变区和(b)由保藏号为atccno.pta-4895的多核苷酸编码的可变区。在另一方面中，本发明利用了包含以下的经分离的多核苷酸：(a)一个或多个由保藏号为atccno.pta-4894的多核苷酸编码的cdr；和/或(b)一个或多个由保藏号为atccno.pta-4895的多核苷酸编码的cdr。atcc登录号nos.pta-4893、pta-4894和pta-4895下的保藏描述于wo2004/058184中，所述wo2004/058184的内容整体并入本文。可以通过本领域已知的步骤制造编码本文所述任何抗体(包括抗体片段)和多肽的多核苷酸。在另一方面中，本发明提供了用于治疗或预防与间质性膀胱炎和/或痛性膀胱综合征和/或膀胱疼痛综合征相关的疼痛和/或下泌尿道症状的、包含任何本发明多核苷酸的组合物(例如药物组合物)。在一些实施方式中，组合物包含含有编码本文所述e3抗体的多核苷酸的表达载体。在其它一些实施方式中，组合物包含含有编码本文所述任何抗体或多肽的多核苷酸的表达载体。还在其它一些实施方式中，组合物包含wo2004/058184的图2和3中所示多核苷酸任一或二者。表达载体和多核苷酸组合物的施用在本文中进一步描述。在另一方面中，本发明提供了制造用于下述方法中的任何本文所述多核苷酸的方法，所述方法用于治疗或预防与间质性膀胱炎和/或痛性膀胱综合征和/或膀胱疼痛综合征相关的疼痛和/或下泌尿道症状。与任何这类序列互补的多核苷酸也包括在本发明内。多核苷酸可以是单链(编码链或反义链)或双链的，并且可以是dna(基因组、cdna或合成的)或rna分子。rna分子包括含有内含子并以一对一的方式对应于dna分子的hnrna分子，和不含内含子的mrna分子。本发明多核苷酸中可存在，但不必须存在其它编码或非编码的序列，并且多核苷酸可以但不必须与其它分子和/或支持材料连接。多核苷酸可包含天然序列(即编码抗体或其部分的内源序列)，或可包含这样的序列的变体。多核苷酸变体含有一个或多个取代、添加、缺失和/或插入，使得所编码的多肽的免疫反应性相对于天然免疫反应性分子而言不减小。通常可以如本文所述评价对编码的多肽的免疫反应性的影响。变体优选地与编码天然抗体或其部分的多核苷酸序列展示至少约70％的同一性、更优选地至少约80％的同一性，最优选地至少约90％的同一性。如果如下文所述针对最大对应性比对时两条序列中的核苷酸或氨基酸序列相同，则称两条多核苷酸或多肽序列是“相同的”。两条序列之间的比较典型地如下进行：通过在比较窗口上比较序列来鉴定和比较局部区域的序列相似性。在本文中使用时，“比较窗口”是指至少约20个、通常30到约75个、40到约50个连续位置的区段，在其中可以在两条序列最佳排列后将一条序列与具有相同连续位置数的参照序列比较。可以使用lasergene生物信息学软件套装(dnastar,inc.,madison,wi)中的megalign程序，使用默认参数进行用于比较的最佳序列比对。该程序植入以下参考文献中所述的若干比对方案：dayhoff,m.o.(1978)amodelofevolutionarychangeinproteins-matricesfordetectingdistantrelationships.indayhoff,m.o.(ed.)atlasofproteinsequenceandstructure,nationalbiomedicalresearchfoundation,washingtondc第5卷,suppl.3,第345-358页；heinj.,1990,unifiedapproachtoalignmentandphylogenes第626-645页methodsinenzymologyvol.183,academicpress,inc.,sandiego,ca；higgins,d.g.andsharp,p.m.,1989,cabios5:151-153；myers,e.w.andmullerw.,1988,cabios4:11-17；robinson,e.d.,1971,comb.theor.11:105；santou,n.,nes,m.,1987,mol.biol.evol.4:406-425；sneath,p.h.a.andsokal,r.r.,1973,numericaltaxonomytheprinciplesandpracticeofnumericaltaxonomy,freemanpress,sanfrancisco,ca；wilbur,w.j.和lipman,d.j.,1983,proc.natl.acad.sci.usa80:726-730。优选地，“序列同一性百分比”通过在至少20个位置的比较窗口上比较两条最佳比对的序列来测定，其中比较窗口中的多核苷酸或多肽序列部分与用于两条序列最佳比对的参照序列(其不包含添加或缺失)相比，可包含20％或更少、通常5％到15％、或10％到12％的添加或缺失(即缺口)。所述百分比如下计算：测定两条序列中存在相同核酸碱基或氨基酸残基的位置数量得到匹配位置数，用匹配位置数除以参照序列中位置总数(即窗口大小)，并将结果乘以100，得到序列同一性百分比。变体也可以，或替代性地，与天然基因或其部分或互补体基本同源。这类多核苷酸变体能够在中度严格条件下与天然存在的编码天然抗体的dna序列(或其互补序列)杂交。合适的“中度严格条件”包括在5xssc、0.5％sds、1.0mmedta(ph8.0)溶液中预洗涤；在50℃-65℃、5xssc中杂交过夜；然后在65℃下20分钟洗涤两次，每次使用含0.1％sds的2x、0.5x和0.2xssc。在本文中使用时，“高度严格条件”或“高严格度条件”是：(1)使用低离子强度和高温用于洗涤，例如50℃下0.015m氯化钠/0.0015m柠檬酸钠/0.1％十二烷基硫酸钠；(2)在杂交期间使用变性剂例如甲酰胺，例如在42℃下使用含0.1％牛血清白蛋白的50％(v/v)甲酰胺/0.1％ficoll/0.1％聚乙烯吡咯烷酮/含750mm氯化钠、75mm柠檬酸钠的50mmph6.5的磷酸钠缓冲液；或(3)在42℃下使用50％甲酰胺、5xssc(0.75mnacl、0.075m柠檬酸钠)、50mm磷酸钠(ph6.8)、0.1％焦磷酸钠、5xdenhardt’s溶液、经超声处理的鲑鱼精子dna(50μg/ml)、0.1％sds和10％硫酸葡聚糖，在42℃下于0.2xssc(氯化钠/柠檬酸钠)和55℃下于50％甲酰胺中洗涤，之后在55℃下进行由含edta的0.1xssc组成的高严格度洗涤。需要调节因素如离子强度等等时，技术人员应当知道如何调节温度、离子强度等等。本领域技术人员应当知道，由于遗传密码子的结果，存在编码本文所述多肽的许多核苷酸序列。这些多核苷酸中的一些具有与任何天然基因的核苷酸序列最小的同源性。然而，由于密码子使用差异而变化的多核苷酸是本发明特别考虑的。另外，包含本文提供的多核苷酸序列的基因的等位基因在本发明的范围内。等位基因是由于一个或多个突变(例如核苷酸的缺失、添加和/或取代)而被改变的内源基因。得到的mrna和蛋白质可能，但不必须具有改变的结构或功能。等位基因可以使用标准技术(例如杂交、扩增和/或数据库序列比较)鉴定。可以使用化学合成、重组方法或pcr获得用于本发明中的多核苷酸。化学多核苷酸合成方法是本领域公知的，并且不需要在本文中详细描述。本领域技术人员能够使用本文提供的序列和商业dna合成仪生产期望的dna序列。为了使用重组方法制备多核苷酸，可以将包含期望序列的多核苷酸插入合适的载体中，并接着将所述载体引入合适的宿主细胞中用于复制和扩增，如本文所进一步讨论的。可以通过本领域已知的任何手段将多核苷酸插入宿主细胞中。通过直接摄取、胞吞作用、转染、f-交配或电穿孔引入外源多核苷酸来转化细胞。一旦被引入，外源多核苷酸可以作为不整合的载体(例如质体)维持在细胞中，或者被整合进宿主细胞基因组中。可以通过本领域公知的方法从宿主细胞中分离藉此扩增的多核苷酸。见例如sambrook等，(1989)。或者，pcr允许复制dna序列。pcr技术是本领域公知的，并描述于美国专利nos.4,683,195、4,800,159、4,754,065和4,683,202以及pcr:thepolymerasechainreaction,mullis等编,birkauswerpress,boston(1994)中。可以通过使用合适载体中经分离的dna并将其插入合适的宿主细胞中来获得rna。当细胞复制并将dna转录成为rna时，可随后使用本领域技术人员公知的方法，例如sambrook等，(1989)中公开的方法分离rna。合适的克隆载体可以根据标准技术构建，或者可选自本领域中可获得的大量克隆载体。尽管选择的克隆载体可根据要使用的宿主细胞而变化，但是有用的克隆载体通常应当具有自我复制的能力，可具有具体限制性内切核酸酶的单个靶标，和/或可带有下述标记物的基因，所述标记物可用于选择含有所述载体的克隆。合适的例子包括质粒和细菌病毒，例如puc18、puc19、bluescript(例如pbssk+)及其衍生物、mp18、mp19、pbr322、pmb9、cole1、pcr1、rp4、噬菌体dna和穿梭载体例如psa3和pat28。这些和许多其它克隆载体可得自商业供应者例如biorad、strategene和invitrogen。表达载体通常是可复制的多核苷酸构建体，其含有根据本发明的多核苷酸。这暗示了表达载体必须在宿主细胞中可复制，或者作为附加体，或者作为染色体dna的整体部分。合适的表达载体包括但不限于质粒、病毒载体(包括腺病毒、腺伴随病毒、逆转录病毒)、粘粒和pct公开no.wo87/04462中公开的表达载体。载体组成可通常包括但不限于以下一个或多个：信号序列；复制起点；一个或多个标记物基因；合适的转录控制元件(例如启动子、增强子和终止子)。为了表达(即翻译)，通常也需要一个或多个翻译控制元件，例如核糖体结合位点、翻译起点和终止密码子。含有感兴趣的多核苷酸的载体可以通过大量合适手段中任何引入宿主细胞中，所述手段包括电穿孔，使用氯化钙、氯化铷、磷酸钙、deae-葡聚糖或其它物质的转染；微粒轰击；脂质转染；和注射(例如当载体是感染性物质如牛痘病毒时)。引入载体或多核苷酸的选择通常取决于宿主细胞的特性。本发明还利用包含本文所述任何多核苷酸的宿主细胞。为了分离编码感兴趣的抗体、多肽或蛋白质的基因的目的，可以使用能够过表达异源dna的任何宿主细胞。哺乳动物宿主细胞的非限制性例子包括但不限于cos、hela和cho细胞。还见pct公开no.wo87/04462。合适的非哺乳动物宿主细胞包括原核生物(例如e.coli或b.subtillis)和酵母(例如s.cerevisae、s.pombe；或k.lactis)。优选地，宿主细胞以5倍于、更优选地10倍于、进一步更优选地20倍于宿主细胞中(如果存在的话)相应感兴趣的内源抗体或蛋白质的水平表达cdna。通过免疫测定法或facs，针对对ngf的特异性结合筛选宿主细胞。能够鉴定过表达感兴趣的抗体或蛋白质的细胞。用于本发明方法中的组合物用于本发明方法中的组合物(与间质性膀胱炎和/或痛性膀胱综合征和/或膀胱疼痛综合征相关的疼痛和/或下泌尿道症状有关)包括有效量的抗-ngf拮抗剂抗体，在一些实施方式中还包括可药用的赋形剂。这类组合物的例子以及如何配制也描述于本文中。在一些实施方式中，抗-ngf拮抗剂抗体结合ngf并且不与相关的神经营养蛋白(例如nt3、nt4/5和/或bdnf)显著地交叉反应。在一些实施方式中，抗-ngf拮抗剂抗体不与不利的免疫应答相关。在其它一些实施方式中，抗-ngf抗体识别人ngf。在一些实施方式中，抗-ngf抗体是人的。还在其它一些实施方式中，抗-ngf抗体被人源化(例如本文所述抗体e3)。还在其它一些实施方式中，抗-ngf抗体包含不引发不想要或不期望的免疫应答的恒定区，所述免疫应答例如为抗体介导的裂解或adcc。在其它一些实施方式中，抗-ngf抗体包含抗体e3的一个或多个cdr(例如1、2、3、4、5或者在一些实施方式中所有6个来自e3的cdr)。应当理解组合物可包含多于一种ngf拮抗剂。例如，组合物可包含一种ngf拮抗剂的多于一个成员(例如识别ngf不同表位的抗-ngf抗体的混合物)，以及不同种类ngf拮抗剂的多个成员(例如抗-ngf抗体和ngf抑制性化合物)。其它示范性组合物包括识别相同表位的多于一种抗-ngf抗体，结合不同ngf表位的不同种类的抗-ngf抗体，或不同的ngf抑制性化合物。本发明中使用的组合物可包含多于一种可药用载剂、赋形剂或稳定剂(remington:thescienceandpracticeofpharmacy，第20版，(2000)lippincottwilliams和wilkins编k.e.hoover.)，其为冻干配制物或水性溶液的形式。可药用赋形剂在下文进一步描述。抗-ngf拮抗剂抗体及其组合物也可以与发挥增强和/或补充药剂有效性作用的其它药剂组合使用，例如与疼痛和/或下泌尿道症状的治疗或预防中使用的药剂组合物使用。抗-ngf拮抗剂抗体可以与一种或多种这类药剂同时、先后或独立地组合使用。抗-ngf抗体可以与一种或多种其它药物组合(或作为其任何组合)施用。抗-ngf抗体可与另一药理学活性化合物，或与两种或更多其它药理学活性组合物有用地组合，用于治疗与间质性膀胱炎和/或痛性膀胱综合征和/或膀胱疼痛综合征相关的疼痛和/或下泌尿道症状(luts)。例如，如上文定义的抗-ngf抗体可以与选自以下的一种或多种药剂同时、先后或独立地组合施用：·阿片类镇静剂，如吗啡、海洛因、氢吗啡酮、羟吗啡酮、左啡诺、左洛啡烷、美沙酮、哌替啶、芬太尼、可卡因、可待因、双氢可待因、羟考酮、氢可酮、右丙氧芬、纳美芬、纳洛芬、纳洛酮、纳曲酮、丁丙诺啡、布托啡诺、纳布啡或喷他佐辛；·非类固醇抗炎药(nsaid)，如阿司匹林、双氯芬酸、二氟尼柳(diflusinal)、依托度酸、芬布芬、非诺洛芬、氟苯柳、氟比洛芬、布洛芬、吲哚美辛、酮洛芬、酮咯酸、甲氯芬那酸、甲芬那酸、美洛昔康、萘丁美酮、萘普生、尼美舒利、硝基氟吡洛芬、奥沙拉秦、奥沙普秦、奥沙普秦、吡罗昔康、柳氮磺吡啶、舒林酸、托美丁或佐美酸；·巴比妥酸盐镇静药，如异戊巴比妥、阿普比妥、仲丁巴比妥、布他比妥(butabital)、甲苯比妥、美沙比妥、美索比妥、戊巴比妥、碘芬布酸、司可巴比妥、他布比妥、theamylal或硫喷妥钠；·具有镇静作用的苯并二氮卓类，如氯氮卓、氯卓酸钾、地西泮、氟西泮、劳拉西泮、奥沙西泮、替马西泮或三唑仑；·具有镇静作用的h1拮抗剂，如苯海拉明、美吡拉敏、异丙嗪、氯苯那敏或氯环力嗪；·镇静剂，如格鲁米特、甲丙氨酯、甲喹酮或氯醛比林；·骨骼肌松弛剂，如巴氯芬、卡立普多、氯唑沙宗、环苯扎林、美索巴莫或orphrenadine；·nmda受体拮抗剂，如右美沙芬((+)-3-羟基-n-甲基吗啉)或其代谢物右啡烷((+)-3-羟基-n-甲基吗啉)、氯胺酮、美金刚、吡咯喹啉醌(pyrroloquinolinequinine)、顺式-4-(膦酰基甲基)-2-哌啶甲酸、布地品、en-3231(一种吗啡与右美沙芬的组合制剂)、托吡酯、neramexane或perzinfotel，包括nr2b拮抗剂如艾芬地尔、traxoprodil或(–)-(r)-6-{2-[4-(3-氟苯基)-4-羟基-1-哌啶基]-1-羟乙基-3,4-二氢-2(1h)-喹啉酮；·α-肾上腺能药，如多沙唑嗪、坦洛新、可乐定、胍法辛、dexmetatomidine、莫达非尼、特拉唑嗪、吲哚拉明、阿夫唑嗪、silodosin或4-氨基-6,7-二甲氧基-2-(5-甲烷-磺酰胺-1,2,3,4-四氢异喹啉-2-基)-5-(2-吡啶基)喹唑啉；哌唑嗪·三环抗抑郁剂，如地昔帕明、丙米嗪、阿米替林或去甲替林；·抗惊厥剂，如卡马西平、拉莫三嗪、托吡酯(topiratmate)或丙戊酸盐；·速激肽(nk)拮抗剂，特别是nk-3、nk-2或nk-1拮抗剂，如(αr,9r)-7-[3,5-双(三氟甲基)苄基]-8,9,10,11-四氢-9-甲基-5-(4-甲苯基)-7h-[1,4]diazocino[2,1-g][1,7]-萘啶-6-13-二酮(tak-637)、5-[[(2r,3s)-2-[(1r)-1-[3,5-双(三氟甲基)苯基]乙氧基-3-(4-氟苯基)-4-吗啉基]-甲基]-1,2-二氢-3h-1,2,4-三唑-3-酮(mk-869)、阿瑞吡坦(aprepitant)、拉奈匹坦、达匹坦或3-[[2-甲氧基-5-(三氟甲氧基)苯基]-甲氨基]-2-苯基哌啶(2s,3s)；·毒蕈碱拮抗剂，如奥昔布宁、托特罗定、fesoterodine、5-羟甲基托特罗定、丙哌维林、曲司氯铵、达非那新、solifenacin、替米维林和异丙托铵；·cox-2选择性抑制剂，如塞来考昔、罗非考昔、帕瑞考昔、伐地考昔、地拉考昔、艾托考昔或罗美昔布(lumiracoxib)；·煤焦油镇痛药，特别是扑热息痛/对乙酰氨基酚；·精神安定药，如氟哌利多、氯丙嗪、氟哌啶醇、奋乃静、硫利达嗪、美索达嗪、三氟拉嗪、氟奋乃静、氯氮平、奥氮平、利培酮、齐拉西酮、喹硫平、舍吲哚、阿立哌唑、索奈哌唑、布南色林、伊潘立酮、哌罗匹隆、雷氯必利、佐替平、bifeprunox、阿莫沙平、lurasidone、氨磺必利、balaperidone、palindore、依利色林、奥沙奈坦、利莫那班、meclinertant、或沙立佐坦；·香草酸受体激动剂(如resinferatoxin)或拮抗剂(如capsazepine)；·β-肾上腺素能药如普萘洛尔；·局部麻醉剂如美西律；·皮质类固醇如地塞米松；·5-ht受体激动剂或拮抗剂(如苯噻啶)，特别是5-ht1b/1d激动剂如依来曲坦、舒马曲坦、那拉曲坦、佐米曲坦或利扎曲坦；·5-ht2a受体拮抗剂，如r(+)-α-(2,3-二甲氧基-苯基)-1-[2-(4-氟苯基乙基)]-4-哌啶甲醇(mdl-100907)；·胆碱能(烟碱)镇痛药，如ispronicline(tc-1734)、(e)-n-甲基-4-(3-吡啶基)-3-丁烯-1-胺(rjr-2403)、(r)-5-(2-氮杂环丁烷基甲氧基)-2-氯吡啶(abt-594)或尼古丁；·曲马多(商标)；·pde-5抑制剂，如5-[2-乙氧基-5-(4-甲基-1-哌嗪基-磺酰基)苯基]-1-甲基-3-正丙基-1,6-二氢-7h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(西地那非)、(6r,12ar)-2,3,6,7,12,12a-六氢-2-甲基-6-(3,4-亚甲二氧苯基)-哌嗪基[2',1':6,1]-吡啶并[3,4-b]吲哚-1,4-二酮(ic-351或tadalafil)、2-[2-yyj-5-(4-乙基-哌嗪-1-基-1-磺酰基)-苯基]-5-甲基-7-丙基-3h-咪唑并[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-酮(伐地那非)、5-(5-乙酰基-2-丁氧基-3-吡啶基)-3-乙基-2-(1-乙基-3-氮杂环丁烷基)-2,6-二氢-7h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮、5-(5-乙酰基-2-丙氧基-3-吡啶基)-3-乙基-2-(1-异丙基-3-氮杂环丁烷基)-2,6-二氢-7h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮、5-[2-乙氧基-5-(4-乙基哌嗪-1-基磺酰基)嘧啶-3-基]-3-乙基-2-[2-甲氧基乙基]-2,6-二氢-7h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮、4-[(3-氯-4-甲氧基苄基)氨基]-2-[(2s)-2-(羟甲基)吡咯烷-1-基]-n-(嘧啶-2-基甲基)嘧啶-5-羧酰胺、3-(1-甲基-7-氧代-3-丙基-6,7-二氢-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)-n-[2-(1-甲基吡咯啉-2-基)乙基]-4-丙氧基苯磺酰胺；·α-2-δ配体，如加巴喷丁、普加巴林、3-甲基加巴喷丁、(1α,3α,5α)(3-氨甲基-二环[3.2.0]七-3-基)-乙酸、(3s,5r)-3-氨甲基-5-甲基庚酸、(3s,5r)-3-氨基-5-甲基庚酸、(3s,5r)-3-氨基-5-甲基辛酸、(2s,4s)-4-(3-氯苯氧基)脯氨酸、(2s,4s)-4-(3-氟苄基)-脯氨酸、[(1r,5r,6s)-6-(氨甲基)二环[3.2.0]七-6-基]乙酸、3-(1-氨甲基-环己基甲基)-4h-[1,2,4]噁二唑-5-酮、c-[1-(1h-四唑-5-基甲基)-环庚基]-甲胺、(3s,4s)-(1-氨甲基-3,4-二甲基-环戊基)-乙酸、(3s,5r)-3-氨基-5-甲基-壬酸、(3r,4r,5r)-3-氨基-4,5-二甲基庚酸和(3r,4r,5r)-3-氨基-4,5-二甲基庚酸；(3s,5r)-3-氨甲基-5-甲基辛酸；·大麻素；·代谢型谷氨酸亚型1受体(mglur1)拮抗剂；·血清素重摄取抑制剂，如舍曲林、舍曲林代谢物去甲舍曲林、氟西汀、诺氟西汀(氟西汀去甲基代谢物)、氟伏沙明、帕罗西汀、西酞普兰、西酞普兰代谢物去甲西酞普兰、依他普仑、d,l-芬氟拉明、非莫西汀、伊福西汀、cyanodothiepin、利托西汀、达泊西汀、奈法唑酮、西文氯胺和曲唑酮；·去甲肾上腺素(降肾上腺素；)重摄取抑制剂，如马普替林、洛非帕明、mirtazepine、羟丙替林、非唑拉明、托莫西汀、米安色林、安非他酮(buproprion)、安非他酮代谢物羟基安非他酮(hydroxybuproprion)、诺米芬辛和维洛沙秦特别是选择性去甲肾上腺素重摄取抑制剂，如瑞波西汀，特别是(s,s)-瑞波西汀；·血清素-去甲肾上腺素重摄取双重抑制剂，如文拉法辛、文拉法辛代谢物o-去甲文拉法辛、氯米帕明、氯米帕明代谢物去甲氯米帕明、度洛西汀、米那普仑和丙米嗪；·诱导型一氧化氮合酶(inos)抑制剂，例如s-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-l-高半胱氨酸、s-[2-[(1-亚氨基乙基)-氨基]乙基]-4,4-二氧代-l-半胱氨酸、s-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-l-半胱氨酸、(2s,5z)-2-氨基-2-甲基-7-[(1-亚氨基乙基)氨基]-5-庚烯酸、2-[[(1r,3s)-3-氨基-4-羟基-1-(5-噻唑基)-丁基]硫代]-5-氯-3-吡啶腈；2-[[(1r,3s)-3-氨基-4-羟基-1-(5-噻唑基)丁基]硫代]-4-氯苄腈、(2s,4r)-2-氨基-4-[[2-氯-5-(三氟甲基)苯基]硫代]-5-噻唑丁醇、2-[[(1r,3s)-3-氨基-4-羟基-1-(5-噻唑基)丁基]硫代]-6-(三氟甲基)-3吡啶腈、2-[[(1r,3s)-3-氨基-4-羟基-1-(5-噻唑基)丁基]硫代]-5-氯苄腈、n-[4-[2-(3-氯苄基氨基)乙基]苯基]噻吩-2-羧酸脒(carboxamidine)、或胍基乙基二硫化物；·乙酰胆碱酯酶抑制剂，例如多奈哌齐；·前列腺素e2亚型4(ep4)拮抗剂如n-[({2-[4-(2-乙基-4,6-二甲基-1h-咪唑[4,5-c]吡啶-1-基)苯基]乙基}氨基)-羰基]-4-甲基苯磺酰胺或4-[(1s)-1-({[5-氯-2-(3-氟苯氧基)吡啶-3-基]羰基}氨基)乙基]苯甲酸；·白细胞三烯b4拮抗剂；例如1-(3-联苯-4-基甲基-4-羟基-色满-7-基)-环戊烷羧酸(cp-105696)、5-[2-(2-羧乙基)-3-[6-(4-甲氧基苯基)-5e-己烯基]氧苯氧基]-戊酸(ono-4057)或dpc-11870，·5-脂氧合酶抑制剂，如齐留通、6-[(3-氟-5-[4-甲氧基-3,4,5,6-四氢-2h-吡喃-4-基])苯氧基-甲基]-1-甲基-2-喹诺酮(zd-2138)、或2,3,5-三甲基-6-(3-吡啶基甲基),1,4-苯醌(cv-6504)；·钠通道阻断剂，如利多卡因；或布比卡因(bupivicaine)·5-ht3拮抗剂，如昂丹司琼；·糖胺聚糖层替代物和消炎药，例如戊聚糖多硫酸盐(elmiron–trademark)；·β-3拮抗剂，如ym-178(米拉贝隆(mirabegron)或2-氨基-n-[4-[2-[[(2r)-2-羟基-2-苯乙基]氨基]乙基]苯基]-4-噻唑乙酰胺)、索拉贝隆(solabegron)、kuc-7483(利托贝隆(ritobegron)或2-[4-[2-[[(1s,2r)-2-羟基-2-(4-羟苯基)-1-甲基乙基]氨基]乙基]-2,5-二甲基苯氧基]-乙酸)或ak-134；·抗-组胺，如羟嗪；·h2-拮抗剂，如西米替丁；或雷尼替丁·硝酸银；·类固醇；·多柔比星；·硫酸软骨素；·色甘酸二钠(disodiumchromoglycate)；·奥昔氯生(clorpactin–商标)；和·免疫抑制药，如环孢霉素及其可药用盐和溶剂合物。施用抗-ngf拮抗剂抗体可以通过任何合适的途径对个体(例如与间质性膀胱炎和/或痛性膀胱综合征和/或膀胱疼痛综合征相关的疼痛和/或下泌尿道症状)施用抗-ngf拮抗剂抗体。本领域技术人员应当明白，本文所述例子不旨在限制，而是阐述可获得的技术。因此，在一些实施方式中，根据已知方法将抗-ngf拮抗剂抗体施用给个体，所述方法例如为静脉内施用，例如作为巨丸剂或通过在一段时间中连续输注，通过肌内、腹膜内、脑脊髓内、皮下、关节内、舌下、滑膜内，通过吹入、椎管内、口、吸入、经皮或局部途径施用。施用可以是全身性的，例如静脉内施用，或者是局部的。可商业获得的针对液体配制物的雾化器，包括喷射雾化器(jetnebulizer)和超声雾化器(ultrasonicnebulizer)可用于施用。液体配制物可以被直接雾化，并且可以在重建后将冻干粉末雾化。或者，抗-ngf拮抗剂抗体可以使用碳氟化合物(fluorocarbon)配制物和测定剂量(metereddose)的吸入器雾化，或者作为冻干和经研磨的粉末被吸入。在一个实施方式中，抗-ngf拮抗剂抗体通过位点特异性或定向局部递送技术被施用。位点特异性或定向局部递送技术的例子包括抗-ngf拮抗剂抗体的多种可植入的补给来源，或者局部递送导管如输注导管、留置导管(indwellingcatheter)或针状导管、合成移植物、外膜封皮(adventitialwrap)、分流器和支架，或其它可植入的设备、位点特异性载剂、直接注射或直接应用。见例如pct公开no.wo00/53211和美国专利no.5,981,568。可以使用以下用于施用：抗体例如e3或其片段(例如fab、fab’、f(ab’)2、fv、fc等等)，例如单链(scfv)，其突变体，包含抗体部分的融合蛋白，和包含具有所需特异性的抗原ngf识别位点的任何其它经修饰的构型。在一些实施方式中，抗-ngf拮抗剂抗体可以单独施用。在一些实施方式中，抗-ngf拮抗剂抗体和可药用赋形剂可以处于多种配制物中。可药用赋形剂是本领域已知的，并且是有助于药理学有效物质施用的相对惰性的物质。例如，赋形剂可以赋予形状或稠度，或发挥稀释剂的作用。合适的赋形剂包括但不限于稳定剂、润湿剂和乳化剂、用于改变渗量(osmolarity)的盐、封装剂、缓冲液和皮肤穿透增强剂。用于肠胃外和非注射药物递送的赋形剂公开于remington,thescienceandpracticeofpharmacy20thed.mackpublishing(2000)中。在一些实施方式中，这些药剂被配制用于注射施用(例如腹膜内、静脉内、皮下、肌内等等)。因此，这些药剂可与可药用运载体例如盐水、ringer’s溶液、右旋糖溶液等等组合。具体的给药方案(即剂量、时间和重复)应取决于具体的个体和个体的医疗史。抗-ngf抗体可以使用任何合适的方法施用，包括通过注射(例如腹膜内、静脉内、皮下、肌内等等)施用。抗-ngf抗体也可以通过吸入施用，或通过其它施用形式(例如口、粘膜、舌下)施用，如本文所述。通常，为了施用抗-ngf抗体，初始候选剂量可以为约2mg/kg。在一个优选的实施方式中，要施用的抗体浓度的范围可从约0.1到约200mg/ml。优选地，抗体的浓度为约0.5mg/ml、约1mg/ml、约2mg/ml、约3mg/ml、约4mg/ml、约5mg/ml、约6mg/ml、约7mg/ml、约8mg/ml、约9mg/ml、约10mg/ml、约11mg/ml、约12mg/ml、约13mg/ml、约14mg/ml、约15mg/ml、约16mg/ml、约17mg/ml、约18mg/ml、约19mg/ml、约20mg/ml、约21mg/ml、约22mg/ml、约23mg/ml、约24mg/ml、约25mg/ml、约26mg/ml、约27mg/ml、约28mg/ml、约29mg/ml、约30mg/ml、约31mg/ml、约32mg/ml、约33mg/ml、约34mg/ml、约35mg/ml、约36mg/ml、约37mg/ml、约38mg/ml、约39mg/ml、约40mg/ml、约41mg/ml、约42mg/ml、约43mg/ml、约44mg/ml、约45mg/ml、约46mg/ml、约47mg/ml、约48mg/ml、约49mg/ml、约50mg/ml、约51mg/ml、约52mg/ml、约53mg/ml、约54mg/ml、约55mg/ml、约56mg/ml、约57mg/ml、约58mg/ml、约59mg/ml、约60mg/ml、约70mg/ml、约80mg/ml、约90mg/ml、约100mg/ml或约110mg/ml。最优选地，抗体的浓度选自由以下组成的组：约2mg/ml、约2.5mg/ml、约5mg/ml、约10mg/ml、约20mg/ml、约22mg/ml和约50mg/ml。在一些实施方式中，抗-ngf抗体的施用模式包括每周一次、每2周一次、每3周一次、每4周一次，每5周一次、每6周一次、每7周一次、每8周一次、每9周一次、每10周一次、每15周一次、每20周一次、每25周一次或更久地施用一剂。在一些实施方式中，抗体每1个月、每2个月、每3个月、每4个月、每5个月、每6个月或更久施用一次。最优选地，抗-ngf抗体每8周施用一次。可以通过常规技术和实验监测该疗法的进展。给药方案(包括使用的ngf拮抗剂)可随时间变化。在一些实施方式中，剂量的体积小于或等于约20ml、约15ml、约10ml、约5ml、约2.5ml、约1.5ml、约1.0ml、约0.75ml、约0.5ml、约0.25ml或约0.01ml。在一些实施方式中，剂量的体积为约20ml、约19ml、约18ml、约17ml、约16ml、约15ml、约14ml、约13ml、约12ml、约11ml、约10ml、约9ml、约8ml、约7ml、约6ml、约5ml、约4ml、约3ml、约2ml或约1ml。或者约20.5ml、约19.5ml、约18.5ml、约17.5ml、约16.5ml、约15.5ml、约14.5ml、约13.5ml、约12.5ml、约11.5ml、约10.5ml、约9.5ml、约8.5ml、约7.5ml、约6.5ml、约5.5ml、约4.5ml、约3.5ml、约2.5ml、约1.5ml或约0.5。或者约900μl、约800μl、约700μl、约600μl、约500μl、约400μl、约300μl、约200μl或约100μl，或者约950μl、约850μl、约750μl、约650μl、约550μl、约450μl、约350μl、约250μl、约150μl或约50μl。最优选地，剂量体积小于或等于约2.5ml。根据一种优选的实施方式，剂量含有少于或等于约0.5mg、约1mg、约2mg、约3mg、约4mg、约5mg、约6mg、约7mg、约8mg、约9mg、约10mg、约11mg、约12mg、约13mg、约14mg、约15mg、约16mg、约17mg、约18mg、约19mg、约20mg、约21mg、约22mg、约23mg、约24mg、约25mg、约26mg、约27mg、约28mg、约29mg、约30mg、约31mg、约32mg、约33mg、约34mg、约35mg、约36mg、约37mg、约38mg、约39mg、约40mg、约41mg、约42mg、约43mg、约44mg、约45mg、约46mg、约47mg、约48mg、约49mg、约50mg、约51mg、约52mg、约53mg、约54mg、约55mg、约56mg、约57mg、约58mg、约59mg、约60mg、约70mg、约80mg、约90mg、约100mg或约110mg抗体。最优选地，剂量含有少于或等于约50mg抗体。根据一个优选的实施方式，剂量含有的抗体量为约1μg/kg、约10μg/kg、约20μg/kg、约50μg/kg、约100μg/kg、约200μg/kg、约500μg/kg、约1mg/kg、约2mg/kg、约3mg/kg、约4mg/kg、约5mg/kg、约6mg/kg、约7mg/kg、约8mg/kg、约9mg/kg、约10mg/kg或约11mg/kg(要施用所述剂量的哺乳动物的质量)。对在若干天或更长时间中重复施用而言，根据条件维持治疗，直至期望的症状阻抑发生，或直至达到了降低疼痛的足够治疗水平。在一个实施方式中，给药方案可包括施用约2mg/kg的初始剂量，然后是每周维持约1mg/kg抗-ngf抗体的每周维持剂量，或然后是每隔一周约1mg/kg的维持剂量。然而，其它给药方案可以是有用的，取决于医生希望实现的药物代谢动力学衰变模式。例如在一些实施方式中，考虑一周一次到四次的给药。甚至可以使用更不频繁的给药。就本发明的目的而言，抗-ngf拮抗剂抗体的合适剂量应取决于使用的抗体(或其组合物)，要治疗的疼痛或下泌尿道症状的类型和严重性，药剂被施用是为了预防还是治疗的目的，先前的治疗，患者的临床病史和对药剂的应答，和护理大夫(attendingphysician)的判断力。典型地，临床医师(clinician)会施用抗-ngf拮抗剂抗体，直至达到实现期望结果的剂量。剂量和/或频率可随着治疗过程而变化。经验的考虑(例如半衰期)通常会有助于确定剂量。例如，与人免疫系统相容的抗体(例如人源化抗体或完全人抗体)可用于延长抗体的半衰期并防止抗体被宿主免疫系统攻击。施用频率可以随治疗过程测定和调整，并且通常(但不必须)以疼痛的治疗和/或阻抑和/或改善和/或延迟为基础。或者，抗-ngf拮抗剂抗体的持久连续释放配制物可以是适当的。用于实现持久释放的多种配制物和设备是本领域已知的。在一些个体中，可能需要多于一次给药。施用频率可以随治疗过程确定和调整。例如，可以基于要治疗的疼痛和/或下泌尿道症状的类型和严重性、药剂被施用是为了预防还是治疗的目的、先前的治疗、患者的临床病史和对药剂的应答、和护理大夫的判断力来确定或调整施用频率。典型地，临床医师会施用抗-ngf拮抗剂抗体(例如e3)，直至达到实现期望结果的剂量。在一些情况下，e3抗体的持久连续释放配制物可以是适当的。用于实现持久释放的多种配制物和设备是本领域已知的。在一个实施方式中，可在给予一次或多次ngf拮抗剂施用的个体中凭经验确定抗-ngf拮抗剂抗体的剂量。给予个体递增剂量的抗-ngf拮抗剂抗体。为了评价抗-ngf拮抗剂抗体的效力，可以监测疼痛或下泌尿道症状的指示剂，例如疼痛数字评价量表(nrs)的改变、o’leary-sant间质性膀胱炎症状指数(icsi)的改变、o’leary-sant间质性膀胱炎问题指数(icpi)的改变、pelvicpainandurgency/frequency(puf)症状评分的改变和/或排尿变量(包括排尿频率、夜尿频率、失禁发作频率、每次排尿排泄的平均体积、平均间质性膀胱炎疼痛严重性、泌尿急性发作、平均睡眠扰动评分、与性行为疼痛评分相关的平均疼痛评分、全局应答评价、报告治疗影响评价的专利、治疗失败、生物标记物、安全性端点和/或药物代谢动力学度量)的改变。生物标记物可包括ngf、糖蛋白-51(gp-51)、抗增殖因子(apf)和hb-表皮生长因子(hb-egf)等等。根据本发明方法的抗-ngf拮抗剂抗体的施用可以是连续或间断的，取决于例如受体的生理学状况、施用的目的是治疗还是预防，和熟练医师已知的其它因素。抗-ngf拮抗剂抗体的施用可以在预选择的时间段中是基本连续的，或者可以是一系列间隔的剂量，例如在发生与间质性膀胱炎和/或痛性膀胱综合征和/或膀胱疼痛综合征相关的疼痛和/或下泌尿道症状之前、期间或之后；在发生与间质性膀胱炎和/或痛性膀胱综合征和/或膀胱疼痛综合征相关的疼痛和/或下泌尿道症状之前；期间；之前和之后；期间和之后；之前和期间；或之前、期间和之后。通过将具有期望纯度的抗体与任选的可药用载剂、赋形剂或稳定剂(remington,thescienceandpracticeofpharmacy20thed.mackpublishing(2000))以冻干配制物或水性溶液的形式混合，来制备用于储存的根据本发明使用的抗-ngf拮抗剂抗体的治疗性配制物。在一些实施方式中，可存在多于一种抗-ngf拮抗剂抗体。可存在至少一种、至少两种、至少三种、至少四种、至少物种不同的或更多的抗-ngf拮抗剂抗体。通常，这些抗-ngf拮抗剂抗体具有不会不利影响彼此的互补活性。ngf拮抗剂也可以与其它药剂组合使用，所述其它药剂发挥增强和/或补充药剂有效性的作用。可药用载剂包括任何和所有生理学相容的溶剂、分散介质、涂层、抗菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等等。典型地，载剂适用于静脉、肌内、皮下、肠胃外、脊柱或表皮施用(例如通过注射或输注)。取决于施用的途径，活性化合物(即抗体、其抗原结合片段、免疫缀合物或双特异性分子)可以包覆在材料中，保护化合物免受酸和可能使化合物失活的其它天然条件的作用。可接受的载剂、赋形剂或稳定剂在使用的剂量和浓度下对受体是无毒的，并且可包含缓冲液，例如磷酸、柠檬酸、乙酸和其它有机酸(包括氨基酸)缓冲液；盐例如氯化钠；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(例如十八烷基二甲基苄基氯化铵；氯化六羟己铵；苯扎氯铵(benzalkoniumchloride)；苯乙铵氯化物；苯酚、丁醇或苯甲醇；对羟基苯甲酸烷基酯，例如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(小于约10个残基)多肽；蛋白质，例如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水聚合物例如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸例如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂例如edta；糖例如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；形成盐的反荷离子(counter-ion)例如钠；金属络合物(例如zn-蛋白质络合物)；和/或非离子表面活性剂，例如聚山梨酯、tweentm、pluronicstm或聚乙二醇(peg)。在某些实施方式中，本公开的抗体可以中性形式(包括两性离子形式)存在，或作为带正电或带负电的物类存在。在一些情况下，抗体可与反荷离子络合，形成可药用的盐。因此，本公开的药物化合物可包括一种或多种可药用盐。“可药用盐”是指保持亲本化合物(例如抗体)期望的生物活性并且不引起不期望的毒理学作用的盐(见例如berge,s.m.,等，(1977)j.pharm.sci.66:1-19)。例如，术语“可药用盐”包括包含一个或多个抗体和一个或多个反荷离子的络合物，其中所述反荷离子衍生自可药用的无机和有机酸和碱。这类盐的例子包括酸加成盐和碱加成盐。酸加成盐包括衍生自无毒无机酸(例如盐酸、硝酸、磷酸、硫酸、氢溴酸、氢碘酸、亚磷酸等等)以及来自于无毒有机酸(例如脂肪族单羧酸和二羧酸、苯基取代的链烷酸、羟基链烷酸、芳香族酸、脂肪族和芳香族磺酸等等)的酸加成盐。碱加成盐包括衍生自碱土金属(例如钠、钾、镁、钙等等)以及衍生自无毒有机胺(n,n'-二苄乙烯二胺、n-甲基葡糖胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、普鲁卡因等等)的碱加成盐。另外，可药用的无机碱包括金属离子。金属离子包括但不限于，适当的碱金属盐、碱土金属盐和其它生理学可接受的金属离子。衍生自无机碱的盐包括铝、铵、钙、钴、镍、钼、钒、锰、铬、硒、锡、铜、三价铁、二价铁、锂、镁、三价锰盐、二价锰、钾、铷、钠和锌，并且为它们通常的原子价。本公开的抗体的可药用的酸加成盐可以从以下酸制备，所述酸包括但不限于甲酸、乙酸、乙酰氨基苯甲酸、脂肪酸、抗坏血酸、硼酸、丙酸、苯甲酸、樟脑酸、碳酸、环己基氨基酸(cyclamicacid)、去氢胆酸、丙二酸(malonicacid)、依地酸(edeticacid)、乙基硫酸(ethylsulfuricacid)、芬地柞酸(fendizoicacid)、偏磷酸、琥珀酸、乙醇酸(glycolicacid)、葡萄糖酸(gluconicacid)、乳酸、酒石酸、鞣酸、柠檬酸、硝酸、抗坏血酸、葡糖醛酸、马来酸(maleicacid)、叶酸、反丁烯二酸、丙酸、丙酮酸(pyruvicacid)、天冬氨酸(asparticacid)、谷氨酸、苯甲酸、盐酸、氢溴酸、氢碘酸、赖氨酸、异柠檬酸(isocitricacid)、三氟乙酸、扑酸(pamoicacid)、丙酸、邻氨基苯甲酸、甲磺酸(mesylicacid)、乳清酸、草酸、草酰乙酸、油酸、硬脂酸、水杨酸、氨基水杨酸、硅酸、对羟基苯甲酸、烟酸、苯乙酸、苦杏仁酸、双羟萘酸(embonicacid)、磺酸、甲磺酸、磷酸、膦酸、乙磺酸(ethanesulfonicacid)、乙二磺酸、铵酸、苯磺酸、泛酸、萘磺酸、甲苯磺酸、2-羟基乙磺酸、对氨基苯磺酸、硫酸、硝酸、亚硝酸、硫酸单价基酯酸、环己基氨基磺酸、β-羟基丁酸、甘氨酸、双甘氨肽酸(glycylglycineacid)、谷氨酸、二甲胂酸(cacodylateacid)、二氨基己酸、樟脑磺酸、葡萄糖酸、硫氰酸、酮戊二酸、吡哆醛5-磷酸、氯苯氧乙酸、十一烷酸、n-乙酰基-l-天冬氨酸、粘酸和半乳糖醛酸。可药用的有机碱包括三甲胺、二乙胺、n,n'-二苄乙烯二胺、氯普鲁卡因、胆碱、二苄胺、二乙醇胺、乙二胺、葡甲胺(n-甲基葡糖胺)、普鲁卡因、环状胺、季铵阳离子、精氨酸、甜菜碱、咖啡因、氯咪唑、2-乙氨基乙醇、2-二乙氨基乙醇、2-二甲氨基乙醇、乙二胺、丁胺、乙醇胺、乙二胺、n-乙基吗啉、n-乙基哌啶、乙基葡萄糖胺、葡糖胺、葡萄糖胺、组氨酸、海巴明(hydrabamine)、咪唑、异丙胺、甲基葡糖胺、吗啉、哌嗪、吡啶、吡哆醇、钕、哌啶、聚胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三丙胺、三乙醇胺、氨丁三醇、甲胺、牛磺酸、胆酸盐、6-氨基-2-甲基-2-庚醇、2-氨基-2-甲基-1,3-丙二醇、2-氨基-2-甲基-1-丙醇、脂肪族单羧酸和二羧酸酸、苯基取代的链烷酸、羟基链烷酸、芳香族酸、脂肪族和芳香族磺酸、锶、tricine、肼、苯基环己胺、2-(n-吗啉)乙磺酸、双(2-羟乙基)氨基-三(羟甲基)甲烷、n-(2-乙酰氨基)-2-氨基乙磺酸、1,4-哌嗪二乙磺酸、3-吗啉代-2-羟基丙磺酸、1,3双[三(羟甲基)甲基氨基]丙烷、4-吗啉丙磺酸、4-(2-羟乙基)哌嗪-1-乙磺酸、2-[(2-羟基-1,1-双(羟甲基)乙基)氨基]乙磺酸、n,n-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸、4-(n-吗啉代)丁磺酸、3-(n,n-双[2-羟乙基]氨基)-2-羟基丙磺酸、2-羟基-3-[三(羟甲基)甲氨基]-1-丙磺酸、4-(2-羟乙基)哌嗪-1-(2-羟基丙磺酸)、哌嗪-1,4-双(2-羟基丙磺酸)二水合物、4-(2-羟乙基)-1-哌嗪丙磺酸、n,n-双(2-羟乙基)甘氨酸、n-(2-羟乙基)哌嗪-n′-(4-丁磺酸)、n-[三(羟甲基)甲基]-3-氨基丙磺酸、n-三(羟甲基)甲基-4-氨基丁磺酸、n-(1,1-二甲基-2-羟乙基)-3-氨基-2-羟基丙磺酸、2-(环己氨基)乙磺酸、3-(环己氨基)-2-羟基-1-丙磺酸、3-(环己氨基)-1-丙磺酸、n-(2-乙酰氨基)亚氨二乙酸、4-(环己氨基)-1-丁磺酸、n-[三(羟甲基)甲基]甘氨酸、2-氨基-2-(羟甲基)-1,3-丙二醇和氨丁三醇。其它配制物包括本领域已知的递送形式，包括但不限于载剂例如脂质体。见例如mahato等，(1997)pharm.res.14:853-859。脂质体制备物包括但不限于细胞转染剂(cytofectin)、多层囊泡和单层囊泡。含有抗体-ngf拮抗剂抗体的脂质体通过本领域已知的、例如epstein,等，proc.natl.acad.sci.usa82:3688(1985)；hwang,等，proc.natlacad.sci.usa77:4030(1980)；和美国专利nos.4,485,045和4,544,545中描述的方法制备。具有增强的循环时间的脂质体公开于美国专利no.5,013,556中。尤其有用的脂质体可以通过反相蒸发方法，使用包含磷脂酰胆碱、胆固醇和peg-衍生的磷脂酰乙醇胺(peg-pe)产生。脂质体通过具有确定孔径的滤器排除，得到具有期望直径的脂质体。活性成分也可以包埋在胶体药物递送系统(例如脂质体、白蛋白微球、微乳液、超微颗粒和超微囊)中，或巨乳液(macroemulsion)中，或例如通过凝聚技术或通过界面聚合制备的微囊剂中，例如分别为羟甲基纤维素或明胶-微囊和聚-(甲基丙烯酸甲酯)微囊。这类技术公开于remington,thescienceandpracticeofpharmacy20thed.mackpublishing(2000)中。可以制备持久释放制备物。持久释放制备物的合适例子包括含有拮抗剂(例如抗体)的固体疏水聚合物的半渗透性基质，所述基质是有形状的物品例如膜或微囊的形式。持久释放基质的例子包括聚酯、水胶体(例如聚(2-羟乙基-甲基丙烯酸酯)或聚(乙烯醇))、聚乳酸(美国专利no.3,773,919)、l-谷氨酸和7乙基-l-谷氨酸的共聚物、不可降解的乙烯-醋酸乙烯酯(ethylene-vinylacetate)、可降解的乳酸-乙醇酸共聚物例如luprondepottm(由乳酸-乙醇酸共聚物和醋酸亮丙瑞林组成的可注射微球)、蔗糖乙酸异丁酸酯(sucroseacetateisobutyrate)和聚-d-(-)-3-羟基丁酸。要用于体内施用的配制物应当是无菌的。这可通过例如滤过无菌滤膜来容易地实现。治疗性抗-ngf拮抗剂抗体组合物通常被置于具有无菌入口的容器中，所述容器例如为具有可被皮下注射针穿透的塞子的静脉内溶液袋或管。治疗性组合物可以用本领域已知的医疗装置施用。例如，本公开的治疗性组合物可以用无针皮下注射装置，例如美国专利nos.5,399,163；5,383,851；5,312,335；5,064,413；4,941,880；4,790,824；或4,596,556中公开的装置来施用。在本公开中有用的公知植入物和模块的例子包括：美国专利no.4,487,603，其公开了用于以控制的速率分散药物的可植入的微型输注泵；美国专利no.4,486,194，其公开了用于通过皮肤施用药物的治疗装置；美国专利no.4,447,233，其公开了用于以精确的输注速率递送药物的药物输注泵；美国专利no.4,447,224，其公开了用于连续药物递送的变流可植入输注设备；美国专利no.4,439,196，其公开了具有多腔室的渗透药物递送系统；和美国专利no.4,475,196，其公开了渗透药物递送系统。许多其它这类植入物、递送系统和模块是本领域技术人员已知的。根据本发明的组合物可以是用于口、肠胃外或直肠施用，或通过吸入或吹入施用的单位剂型，例如片剂、烷基、胶囊剂、粉末、颗粒、溶液或悬浮液、或栓剂。为了制备固体组合物例如片剂，将主要的活性成分与药物载剂(例如为常规制片成分，例如玉米淀粉、乳糖、蔗糖、山梨糖醇、滑石、硬脂酸、硬脂酸镁、磷酸氢钙或胶)和其它药物稀释剂(例如水)混合，形成含有本发明化合物或其无毒可药用盐的均匀混合物的固体预配制组合物。称这些预配制组合物是均匀的时，表示活性成分均一地分散于组合物各处，使得组合物可以被容易地细分为等同的有效单位剂型，例如片剂、烷基和胶囊。然后将固体预配制物组合物细分为含从0.1到约500mg本发明活性成分的上述类型的单位剂型。新颖组合物的片剂或烷基可以被涂覆或以其它方式复合，提供给予延长作用的优点的剂量。例如，片剂或烷基可包含内部剂量成分和外部剂量成分，后者是在前者之上的包封形式。两种成分可以通过肠溶层(entericlayer)隔开，所述肠溶层在胃中发挥抗崩解的作用，并允许内部组分完整进入十二指肠或被延迟释放。这类肠溶层或涂层可以使用多种材料，这类材料包括大量聚合酸和聚合酸与这类材料例如紫胶、鲸蜡醇和醋酸纤维素的混合物。合适的表面活性剂尤其包括非离子试剂，例如聚氧乙烯山梨聚糖(例如tweentm20、40、60、80或85)和其它山梨聚糖(例如spantm20、40、60、80或85)。具有表面活性剂的组合物应便利地包含0.05％和5％的表面活性剂，并且可以在0.1％和2.5％之间。应当明白，需要时可以添加其它成分，例如甘露醇或其它可药用的运载体。合适的乳液可以使用可商业获得的脂肪乳液例如intralipidtm、liposyntm、infonutroltm、lipofundintm和lipiphysantm制备。活性成分可溶于预混合的乳液组合物中，或者其可溶于油(例如大豆油、红花油、棉籽油、芝麻油、玉米油或杏仁油)和将磷脂(例如卵磷脂、大豆磷脂或大豆卵磷脂)与水混合后形成的乳液中。应当明白，可以添加其它成分如甘油或葡萄糖来调节乳液的张度(tonicity)。合适的乳液典型地会含有至多20％的油，例如5％和20％之间的油。脂肪乳液可包含0.1和1.0.1m、尤其是0.1和0.5.1m之间的脂肪微滴，并具有5.5到8.0范围中的ph。乳液组合物可以是通过将抗ngf抗体与intralipidtm或其成分(大豆油、卵磷脂、甘油和水)混合来制备的乳液组合物。用于吸入或吹入的组合物包括可药用的水性或有机溶剂或其混合物中的溶液和悬浮液，和粉末。液体或固体组合物可含有如上文公开的合适的可药用赋形剂。在一些实施方式中，组合物通过口或鼻呼吸途径施用来达到局部或全身性作用。可以通过使用气体来雾化优选地无菌的可药用溶剂中的组合物。雾化的溶液可以从雾化装置中直接呼吸，或者可以将雾化装置与面具、帐幕(tent)或间断性负压呼吸机结合。可以由以适当方式递送配制物的装置施用(优选口或鼻施用)溶液、悬浮液或粉末组合物。可以通过本领域公知的方法评价治疗效力。编码本发明任何抗体或多肽(例如抗体e3)的多核苷酸也可以用于在期望的细胞中递送和表达本发明的任何抗体或多肽(例如抗体e3)。显然，可以使用表达载体指导e3抗体或多肽的表达。表达载体可以通过本领域已知的任何手段施用，例如腹膜内、静脉内、肌内、皮下、椎管内、心室内、口、肠内、肠胃外、鼻内、皮、舌下或通过吸入施用。例如，表达载体的施用包括局部或全身性施用，包括注射、口施用、粒子枪或导管施用，和局部施用。本领域技术人员熟悉表达载体的施用，以获得外源蛋白质的体内表达。见例如美国专利nos.6,436,908；6,413,942；和6,376,471。也可以使用包含编码本发明任何抗体或多肽(例如抗体e3)的多核苷酸的治疗性组合物的定向递送。受体介导的dna递送技术描述于例如findeis等，trendsbiotechnol.(1993)11:202；chiou等，genetherapeutics:methodsandapplicationsofdirectgenetransfer(j.a.wolff编)(1994)；wu等，j.biol.chem.(1988)263:621；wu等，j.biol.chem.(1994)269:542；zenke等，proc.natl.acad.sci.(usa)(1990)87:3655；wu等，j.biol.chem.(1991)266:338中。对基因治疗方案中的局部施用而言，包含多核苷酸的治疗性组合物在约100ng到约200ngdna的范围内施用。在基因治疗方案中也可以使用约500ng到约50mg、约1μg到约2mg、约5μg到约500μg和约20μg到约100μgdna的浓度范围。可以使用基因递送运载体递送本发明的治疗性多核苷酸和多肽。基因递送运载体可以是病毒或非病毒的起源(通常见jolly,cancergenetherapy(1994)1:51；kimura,humangenetherapy(1994)5:845；connelly,humangenetherapy(1995)1:185；和kaplitt,naturegenetics(1994)6:148)。这类编码序列的表达可以使用内源哺乳动物启动子或异源启动子诱导。编码序列的表达可以是组成型或调节型的。用于递送期望的多核苷酸并在期望的细胞中表达的基于病毒的载体是本领域公知的。示范性的基于病毒的运载体包括但不限于重组的逆转录病毒(见例如pct公开nos.wo90/07936；wo94/03622；wo93/25698；wo93/25234；wo93/11230；wo93/10218；wo91/02805；美国专利nos.5,219,740；4,777,127；gb专利no.2,200,651；和ep专利no.0345242)，基于α病毒的载体(例如sindbis病毒载体、semliki森林病毒(atccvr-67；atccvr-1247)、rossriver病毒(atccvr-373；atccvr-1246)和venezuelan马脑炎病毒(atccvr-923；atccvr-1250；atccvr1249；atccvr-532))，和腺伴随病毒(aav)载体(见例如pct公开nos.wo94/12649,wo93/03769；wo93/19191；wo94/28938；wo95/11984和wo95/00655)。也可以使用如curiel,hum.genether.(1992)3:147中所述与杀伤的腺病毒连接的dna的施用。也可以使用非病毒递送运载体和方法，包括但不限于，单独的与杀伤的腺病毒连接或不连接的聚阳离子聚结的dna(见例如curiel,hum.genether.(1992)3:147)；与配体连接的dna(见例如wu,j.biol.chem.(1989)264:16985)；真核细胞递送运载体细胞(见例如美国专利no.5,814,482；pct公开nos.wo95/07994；wo96/17072；wo95/30763；和wo97/42338)，和核电荷中和或与细胞膜融合。也可以使用裸dna。示范性的裸dna引入方法描述于pct公开no.wo90/11092和美国专利no.5,580,859中。可发挥基因递送运载体作用的脂质体描述于美国专利no.5,422,120；pct公开nos.wo95/13796；wo94/23697；wo91/14445；和ep专利no.0524968中。额外的途径描述于philip,mol.cellbiol.(1994)14:2411和woffendin,proc.natl.acad.sci.(1994)91:1581中。诊断方法和用途本文所述抗体也可以被用于检测、诊断和监测与间质性膀胱炎和/或痛性膀胱综合征和/或膀胱疼痛综合征相关的疼痛和/或下泌尿道症状，其伴随着改变或异常的ngf表达，在一些实施方式中，(相对于正常样品)提高或降低的ngf表达，和/或不适当的表达，例如在通常缺乏ngf表达的组织和/或细胞中存在表达，或在通常具有ngf表达的组织或细胞中不存在ngf表达。在一些实施方式中，在下述样品中检测ngf表达，所述样品来自怀疑患有与间质性膀胱炎和/或痛性膀胱综合征和/或膀胱疼痛综合征相关的疼痛和/或下泌尿道症状的个体。因此，在一些实施方式中，本发明提供了下述方法，所述方法包括将怀疑具有改变或异常ngf表达的个体的标本(样品)与本发明的抗体或多肽接触，并确定ngf水平是否与对照或比较标本的ngf水平不同。在其它一些实施方式中，本发明提供了下述方法，所述方法包括接触个体的标本(样品)并测定ngf表达水平。在一些实施方式中，怀疑个体具有与间质性膀胱炎和/或痛性膀胱综合征和/或膀胱疼痛综合征相关的疼痛和/或下泌尿道症状。对诊断应用而言，抗体典型地应用可检测部件标记，所述可检测部件包括但不限于放射性同位素、荧光标签和多种酶-底物标签。将标签与抗体缀合的方法是本领域已知的。在本发明的其它一些实施方式中，本发明的抗体不需要被标记，并且可以使用与本发明抗体结合的经标记的抗体对其进行检测。本发明的抗体可在任何已知的实验方法例如竞争性结合实验、直接和间接三明治实验和免疫沉淀实验中使用。zola,monoclonalantibodies:amanualoftechniques,pp.147-158(crcpress,inc.1987)。抗体也可以用于体内诊断实验，例如用于体内成像。通常用放射性核素(例如111in、99tc、14c、131i、125i或3h)标记抗体，使得可以使用免疫闪烁成像术(immunoscintiography)定位感兴趣的细胞或组织。也可以按照本领域公知的技术，在病理学中使用抗体作为染色试剂。对本文所述的所有方法而言，抗-ngf拮抗剂抗体也包括包含一种或多种这些试剂的组合物。这些组合物可还包含本领域公知的合适的赋形剂，例如可药用赋形剂，包括缓冲液。本发明可单独使用，或与其它常规治疗方法组合使用。用于检测和/或治疗的包含抗-ngf拮抗剂抗体的试剂盒本发明还提供了包含用于检测和/或治疗的抗体的试剂盒。因此，在一些实施方式中，试剂盒包含抗体e3。在一些实施方式中，试剂盒包含本文所述任何抗体或多肽。在其它一些实施方式中，试剂盒可被用于本文所述的任何方法，包括例如治疗患有与间质性膀胱炎和/或痛性膀胱综合征和/或膀胱疼痛综合征相关的疼痛和/或下泌尿道症状的个体。本发明的试剂盒有合适的包装，并可任选地提供额外的组分，例如缓冲液和在本文所述任何方法中使用抗体的说明书。在一些实施方式中，试剂盒包含用于治疗疼痛或下泌尿道症状的说明书。在一些实施方式中，试剂盒包含本文所述的抗-ngf拮抗剂抗体，和用于在个体中治疗和/或预防与间质性膀胱炎和/或痛性膀胱综合征和/或膀胱疼痛综合征相关的疼痛和/或下泌尿道症状的说明书。在一些实施方式中，抗-ngf拮抗剂抗体是抗体e3。在另一方面中，本发明提供了下述试剂盒，其包含如本文所述编码e3多肽的多核苷酸。在一些实施方式中，所述试剂盒还包含在本文所述任何方法中使用所述多核苷酸的说明书。提供以下的实施例来阐述而非限制本发明。引用wo2004/058184中的实施例来阐述用于本发明中的抗体。wo2004/058184的完整内容通过引用并入本文。实施例实施例1：小鼠拮抗剂抗-ngf抗体911的人源化和亲和性成熟(affinitymaturation)a.一般方法该实施例中使用以下一般方法。文库的产生如kay等(1996),phagedisplayofpeptidesandproteins:alaboratorymanual,sandiego,academicpress(见第277-291页)中所述，用简并寡核苷酸通过pcr盒诱变(pcrcassettemutagenesis)产生文库。使用掺杂密码子(dopingcodon)nnk将一个氨基酸位置随机化为包含20种可能的氨基酸。为了将一个氨基酸位置随机化为仅包含具有特定性质的一亚类氨基酸，如balint等，(1993)gene137(1):109-18)中所述使用掺杂密码子。如innis等，(1990)pcrprotocols:aguidetomethodsandapplications(见第177-183页)中所述，使用重组pcr进行定点诱变。小规模fab制备为了筛选fab文库，优化96孔板中的小规模表达。从用fab文库转化的e.coli开始，挑取菌落来接种母板(masterplate)(琼脂lb+氨苄西林(50μg/ml)+2％葡萄糖)和工作板(2ml/孔，96孔/板，含1.5mllb+氨苄西林(50μg/ml)+2％葡萄糖)。将两种平板在30℃下培养8-12小时。将母板储存于4℃，将来自工作板的细胞在5000rpm下离心并重悬于1mllb+氨苄西林(50μg/ml)+1mmiptg中，诱导fab表达。30℃下5小时的表达时间后通过离心收获细胞，然后重悬于500μl缓冲液hbs-ep(100mmhepes缓冲液ph7.4，150mmnacl，0.005％p20，3mmedta)中。通过冷冻(-80℃)然后在37℃下融化的一个循环，来获得hbs-ep重悬细胞的裂解。将细胞裂解物在5000rpm下离心30分钟，使细胞碎片与含有fab的上清液隔离。然后将上清液注射进biacore等离子体共振设施中，获得每种fab的亲和性信息。从母板上复苏表达fab的克隆来测序dna，并用于如下文所述的大规模fab生产与详细表征。大规模fab制备为了获得详细的动力学参数，从大培养物中表达和纯化fab。用5ml过夜培养物接种含有200mloflb+ampicillin(50μg/ml)+2％葡萄糖的三角瓶，所述过夜培养物来自选择的表达fab的e.coli克隆。将克隆在30℃孵育直至获得1.0的od550nm，然后通过将培养基替换为200mllb+氨苄西林(50μg/ml)+1mmiptg来诱导。在30℃下5小时的表达时间后，通过离心使细胞沉淀，然后重悬于10mlpbs(ph8)中。通过两个冷冻/融化(分别在-80℃和37℃下)循环获得细胞的裂解。将细胞裂解物的上清液上样在用pbs,ph8平衡的ni-ntasuperflowsepharose(qiagen,valencia.ca)柱上，然后用5倍柱体积的pbs,ph8洗涤。用pbs(ph8)+300mm咪唑将个体fab洗脱在不同的级分中。将含有fab的级分合并并在pbs中透析，然后在亲和性表征之前通过elisa定量。全长抗体制备为了表达全长抗体，将重链和轻链可变区克隆进两种表达载体(轻链使用eb.911.e3或eb.pur.911.3e，重链使用db.911.3e；在本文描述)中，并使用lipofectamine转染进hek293细胞中用于瞬时表达。使用标准方法使用a蛋白纯化抗体。biacore实验使用blacore3000tm表面等离子体共振(spr)系统(biacore,inc,piscawaynj)测定抗-ngffab和单克隆抗体的亲和性。根据供应商的说明，用n-乙基-n'-(3-二甲氨基丙基)-碳化二亚胺盐酸盐(edc)和n-羟基琥珀酰亚胺(nhs)活化cm5芯片。将人ngf稀释进10mm乙酸钠ph4.0中，并以0.005mg/ml的浓度注射在活化的芯片上。使用跨越个体芯片通道的可变的流动时间，实现两种抗原密度范围：对详细的动力学研究而言100-200个应答单位(ru)，对筛选实验而言500-600ru。用乙醇胺封闭芯片。再生研究显示pierce洗脱缓冲液(产品编号21004,piercebiotechnology,rockford,il)和4mnacl(2:1)的混合物有效地去除了结合的fab，同时将芯片上hngf的活性保持超过200次注射。所有的biacore实验使用hbs-ep缓冲液(0.01mhepes,ph7.4,0.15nacl,3mmedta,0.005％surfactantp29)作为运行缓冲液。筛选实验优化筛选biacore实验来测定来自文库的fab克隆的亲和性。以50μl/min将小培养物裂解物的上清液注射2分钟。使用10到15分钟的解离时间，使用biaevaluation软件测定单一指数解离速率(koff)。注射与用于创建文库的模板(克隆8l2-6d5,koff1x10-3s-1)显示相同范围内koff速率的样品，并允许至多45分钟的解离时间来获得更好的koff值。显示改进(更慢)的koff值的克隆被大规模表达，并对经纯化的蛋白质测定完全动力学参数kon和koff。实验能够检测约2倍或更大的亲和性的差异。亲和性测定实验将经纯化的fab样品的系列稀释液(0.1-10x评价的kd)以100μl/分钟注射1分钟，并允许至多2小时的解离时间。使用已知浓度(通过氨基酸分析测定)的fab作为标准，通过elisa和/或sds-page电泳测定fab蛋白质的浓度。通过使用biaevaluation程序将数据与1:1langmuir结合模型(karlsson,r.roos,h.fagerstam,l.petersson,b.(1994).methodsenzymology6.99-110)拟合，同时获得动力学结合速率(kon)和解离速率(koff)。平衡解离常数(kd)值被计算为koff/kon。b.小鼠拮抗剂抗-ngf抗体911的人源化和亲和性成熟选择小鼠拮抗剂抗-ngf抗体911(见hongo等，(2000)hybridoma19(3):215-227)用于人源化和亲和性成熟。mab911以高亲和性与人和大鼠ngf结合，并显示与神经营养蛋白nt3、nt4/5或bdnf无显著的交叉反应性。见hongo，同前。如上文所述使用biacore分析测定经木瓜蛋白酶切割的小鼠mab911的fab片段的亲和性。经木瓜蛋白酶切割的小鼠mab911的fab片段以约10nm的kd结合人ngf。如下在若干步骤中进行人源化和亲和性成熟：(1)制备cdr-移植的模板。将抗体911的轻链扩大的cdr(即包含kabat和chothiacdr区二者)移植进带有jk2的人种系受体序列o8中，并将抗体911的重链扩大的cdr移植进带有jh4的人种系受体序列vh4-59中。人种系受体序列的氨基酸序列展示于wo2004/058184的图1a和1b中。氨基酸编号是连续的。使用上文标注的蛋白质框架，针对下述合成的基因设计dna序列，所述合成的基因编码具有鼠cdr的人框架。这些人源化的重链和轻链可变区分别被称作hvh和hvl。针对e.coli和仓鼠的使用优化密码子。使用带有针对每条链的两个短侧翼引物、蔓延hvl和hvh全长的若干重叠寡核苷酸(长度69-90个碱基)，基本如prodromou等，(1992)proteineng5(8):827-9中所述通过递归pcr(recursivepcr)独立地合成这两个基因。凝胶纯化得到的长度正确的dna片段，然后克隆进e.coli双顺反子表达质粒(氨苄西林抗性)中。与barbas(2001)phagedisplay:alaboratorymanual,coldspringharbor,ny,coldspringharborlaboratorypress(seevectorpcomb3x,atpg2.10)中所述相似，抗体的表达处于iptg诱导型lacz启动子的控制下，然而，修饰包括以下的额外结构域的添加和表达：人κ清凉恒定结构域(见genbank登录号caa09181)和igg2a人免疫球蛋白的chi恒定结构域(genbank登录号p01859)。wo2004/058184的图1a和1b中还展示了名为8l2-4d5的cdr-移植的抗体(也称作“模板”)可变区的氨基酸序列。如上文所述使用biacore分析测定8l2-4d5的亲和性。8l2-4d5以约38nm的kd结合人ngf。(2)向框架序列中引入点突变。使用如innis等，(1995)pcrstrategies,sandiego,academicpress中所述的重组pcr定点诱变，向cdr-移植的重链中引入v71k取代。该取代用相应的小鼠框架残基替换人框架残基。得到的抗体被称作8l2-6d5，并且8l2-6d5的重链可变区的氨基酸序列展示于wo2004/058184的图1a中。如上文所述使用biacore分析测定8l2-6d5的亲和性。8l2-6d5的fab片段以约15nm的kd结合人ngf。选择8l2-6d5作为亲和性成熟的模板。(3)cdrsl1、l2、h1和h2的人源化和亲和性成熟。对cdrsl1、l2、h1和h2进行人源化和亲和性成熟。以chothia结构为基础，鉴定cdrsl1、l2、h1和h2中对cdr的结构并非关键性的氨基酸位置(见al-lazikani等(1997)j.mol.biol.273(4):927-48)；并如下对它们进行随机化。用简并寡核苷酸如kay等，(1996),phagedisplayofpeptidesandproteins:alaboratorymanual,sandiego,academicpress中所述，使用如balint等，(1993)gene137(1):109-18)中所述的掺杂密码子，制备含有表2中所示轻链突变或重链突变的两个文库，分别为经移植的(小鼠)cdrl3或cdrh3。通常，以抗体911轻链和重链氨基酸序列与人种系抗体序列的比对为基础，将氨基酸残基改变为在人抗体中更常见的残基。野生型(未经取代的)氨基酸残基也存在于文库中，例外是cdrh2残基50的甲硫氨酸，其中野生型甲硫氨酸不存在于文库中。对甲硫氨酸残基进行氧化；因此期望该残基的替换改善得到的抗体的稳定性。如上文所述将fabs的文库与人ch1和cκ区一起克隆进载体pcomb3x中。表2：1.重链h1/h2文库：cdr-h1将i34改变为f、l、v、s、p、t、a或i将n35改变为n、t、s或ycdr-h2将m50改变为所有20种天然氨基酸将a62改变为a或s将l63改变为l或v2.轻链l1/l2文库cdr-l1将s26改变为s、a、v或f将d28改变为d、a、s或y将h32改变为h、n、k、d、e、q或ycdr-l2将y50改变为y、d、a或s将i51改变为i、t、a或v将f54改变为f或l将s56改变为s和t对亲和筛选实验而言，使每个文库与相应的cdr-移植的轻链或重链进一步配对(例如使h1/h2文库与cdr-移植的轻链配对)，表达抗体，并根据制造商的说明和如上文所述使用biacore表面等离子体共振(spr)系统(biacore,inc.piscataway,nj)筛选个体克隆对人ngf的亲和性。测定koff、kon和kd。以koff速率为基础对抗体克隆分级，因为通常大部分亲和性变化在koff速率中展现，还因为koff速率与抗体浓度无关。测定结合的克隆的序列，并将结合的克隆的序列展示于表3中。表3：在h1/h2或l1/l2文库克隆的亲和性筛选后结合的克隆的l1和l2氨基酸序列、h1和h2氨基酸序列和动力学数据。粗体的aa如上文所示被随机化*使用kon4e4m-1s-1计算的kd**为了便利，本文中使用的“e”表示“x10”。因此，4e4可互换地表示4x104。含有以下取代的cdr保持结合：cdr-h1i34：s、l、v、i和a结合。n35：n、t和s结合。cdr-h2m50：m、i、g、q、s、l结合。a62：a和s结合。l63：l和v结合。cdr-l1s26：s和f结合。d28：d、s、a、y结合。h32：h、n、q结合。cdr-l2y50：y结合。i51：i、t、v、a，结合。f54：f结合s56：s和t结合通常以亲合力为基础选择含有以下取代的cdr，并合并成称作h19-l129的单个克隆：cdr-h1：i34l；n35n(无改变)cdr-h2：m50i；a62a(无改变)；l63vcdr-l1：s26s(无改变)；d28s；h32ncdr-l2：y50y(无改变)；i51t；f54f(无改变)；s56s(无改变)将这些突变合并(通过pcr扩增h和l链，用限制性酶切割pcr产物和载体prn8，并进行3片段连接)成一个称作h19-l129的克隆，所述克隆也包含经移植的h3和l3cdr。wo2004/058184的图1a和1b中展示了h19-l129的重链和轻链可变区的序列，表4展示了cdrsl1、l2、h1和h2的氨基酸序列。如本文所述使用biacore分析测定时，h19-l129以约1nm的kd结合ngf。表4：cdrsh1、h2、l1和l2的氨基酸序列，和合并的克隆h19-l129的动力学数据。*使用kon4e4m-1s-1计算的kd(4)h3和l3cdr的亲和性成熟。分两步进行h3和l3cdr的亲和性成熟。首先，在称作“文库扫描诱变”的过程中，将h3和l3中的每个氨基酸残基个别地进行预筛选，从而鉴定下述氨基酸位置，所述位置上的突变导致提高的对人ngf的亲合力。以文库筛选诱变(也称作“小文库随机化分析”)的结果为基础，选择h3和l3中氨基酸位置的亚组用于制备亲和性成熟文库，并如本文所述使用biacore分析筛选亲和性成熟文库对人ngf的亲和性。应当理解这些技术可普遍适用。(a)文库筛选诱变针对导致对人ngf的亲合力提高的取代，对h3和l3cdr中的每个氨基酸位置个别地进行预筛选。在任何给定位置上导致改进的结合、相同的结合、更差的结合或不结合的氨基酸取代的频率提供了与下述位置相关的信息，所述位置是cdr中可以被改变为许多不同氨基酸(包括所有20种氨基酸)的位置和cdr中不能被改变或者仅能被改变为少数氨基酸的位置。还鉴定了导致提高的亲合力的氨基酸取代。以该筛选的结果为基础，选择cdrh3和l3中氨基酸位置的亚组来制备亲和性成熟文库。制备个体fab文库，其中l3和h3cdr的每个氨基酸被随机化为所有20种氨基酸，一次一种，得到若干(轻链5个文库，重链13个文库)小文库，每个文库在每个氨基酸位置上具有约20种氨基酸可能性的复杂度。在所有的情况下，文库中存在固有(即未改变)的氨基酸。用如kay等，(1996),phagedisplayofpeptidesandproteins：alaboratorymanual,sandiego,academicpress中所述的简并寡核苷酸，通过pcr盒诱变制备文库，使用掺杂密码子nnk将一个氨基酸位置随机化为包含20种可能的氨基酸。8l2-6d5(cdr移植的抗体，具有框架突变v71k)发挥文库构建的模板作用，因为cdr移植的抗体的低亲和性允许在筛选期间更容易检测h3和l3突变体中的亲和性差异。因此，每个文库成员含有具有一个氨基酸取代cdr3(h3或者l3)和5个嫁接的cdr。如本文所述使用biacore分析筛选来自每个小文库的20-80个克隆。在biacore芯片的一个通道中通过biacore分析样品对ngf的亲合力，同时在感受器芯片的另一个通道中通过与五-his标签抗体的结合分析fab的存在，检测重链c端的his标签。使用koff来分类，将表达蛋白质的克隆归类为具有相同的亲和性、更差的亲和性、更好的亲和性或不结合。该分析的结果展示于表5中。表5.基于koff将表达蛋白质的克隆归类为具有相同的亲和性、更差的亲和性、更好的亲和性或不结合。测定了具有改进的亲和性的所有克隆的序列，揭示了导致提高的亲和性的氨基酸取代的频率和身份。另外，从每个文库中选择少数保持与8l2-6d5克隆相似亲和性的克隆，从而确定给定位置上允许的氨基酸序列取代，尽管所述取代不必须提高亲合力。该分析的结果概括于表6中。表6.*使用kon4e4m-1s-1计算的kd若干突变导致提高的亲合力。至少以下突变导致与8l2-6d5模板相比显著提高的亲合力：(h_y101w(cdr序列ggywygtsyyfdy(seqidno:46))；h_s105a(cdr序列ggyyygtayyfdy(seqidno:47))；h_s105t(cdr序列ggyyygttyyfdy(seqidno:48))；h_g103a(cdr序列ggyyyatsyyfdy(seqidno:49)；和l_s91e(cdr序列qqektlpyt(seqidno:50))。使用该实验的结果指导用于产生亲和性成熟文库的氨基酸位置的选择。所述实验也提供了与任何给定位置上导致改进的结合、相同结合、更差结合或不结合的氨基酸取代频率有关的信息，如表5中所示。所述信息允许鉴定cdr中不能被改变为许多不同氨基酸(包括所有20种氨基酸)的位置，和cdr中能够被改变为少数氨基酸或非常少数氨基酸(在一些实施方式中不能被改变)的位置。这些结果还阐述了提高了亲合力的氨基酸取代。(b)亲和性成熟接着，使用小文库随机化分析(上文)的结果选择残基，来生产用于h3和l3cdr亲和性成熟的h3和l3文库。选择cdrh3的残基y101和g103和cdrl3的残基s91和k92，来生产用于h3和l3cdr亲和性成熟的h3和l3文库。所述文库在cdr-移植的克隆8l2-6d5中同时合并了h3和l3中的突变，在h19-l129的背景中单独合并了h3和l3中的突变，并且具有80个不同克隆的多样性。表7展示了被选择用于取代的氨基酸残基，和在每个位置上被取代的氨基酸。表7.选择用于取代的h3和l3中的氨基酸残基和在每个位置上被取代的氨基酸cdr-h3:y101被改变为y和w、c。(注意包括c是因为在一个简并的寡核苷酸中使用密码子trs也产生密码子c)。g103被改变为a、p、scdr-l3:s91被改变为e。k92被改变为所有二十种氨基酸。a、r、k和h结合。每种多肽被表达为fab，并根据制造商说明和上文所述使用biacore分析针对每个文库筛选96个个体克隆对人ngf的亲和性。所述分析的结果展示于表8中。表8.*使用kon4e4m-1s-1计算的kd以亲合力为基础，选择最好的克隆——e3(可互换地称作"3e")和3c进行进一步表征。e3包含以下cdr取代：cdr-h3：y101w、g103a；和cdr-l3：s91e、k92h，其合并成为单个克隆，所述克隆还包括以下的l1、l2、h1和h2突变：cdr-h1：i34l；cdr-h2：m50i；l63v；cdr-l1：d28s；h32n；cdr-l2：i51t。seqidnos.1和2中展示了e3重链和轻链可变区的序列(也见wo2004/058184的图1a和1b)。3c包含以下的cdr取代：cdr-l3：s91e；k92r；cdrh3：y101w；g103a，其合并成为单个克隆，所述克隆还含有针对克隆3e描述的l1、l2、h1和h2突变。将3e和3c序列克隆进用于生产fab和全长抗体的哺乳动物表达载体中，在hek293细胞中表达，并使用ni-nta或a蛋白色谱法纯化。通过氨基酸分析精密地定量纯的蛋白质。根据制造商说明和上文所述，使用biacore分析测量fabse3和3c对人ngf的亲合力，例外之处是在芯片上使用100rungf以防止再结合作用。简言之，将若干浓度的抗体(fab)耗时2分钟注射在上面固定了100ru人ngf的cm5芯片上，并允许其解离1800秒。分析小鼠抗体911(fab)作为对照。根据制造商的说明，使用biaevaluation软件分析数据。抗体e3和911的分析结果展示于wo2004/058184的图9和10中。e3以约0.07nm的kd(和约6.0e5m-1s-1的kon和约4.2e-5s-1的koff)结合人ngf。3c以约0.35nm的kd(约1.4e-5的koff)结合人ngf。相反，小鼠抗体911以3.7nm的kd，8.4x10-5s-1的koff和2.2x104ms-1的kon结合ngf。基于高亲合力选择抗体e3(可互换地称作3e)进行进一步分析。为了测试e3预防ngf与ngf受体trka和p75相互作用的能力，将2.5nm人ngf与0到50nm抗体e3(fab)预混合并孵育一小时。孵育后以10ul/分钟的速度将样品注射在含260rup75(通道2)和600rutrka(通道3)的biacorecm5芯片上，并测定结合百分比。所述分析的结果展示于wo2004/058184的图11中。提高的fabe3浓度阻断ngf与p75和trka二者的相互作用，如降低的信号(以ru为单位测量)所示，表明fabe3阻断了人ngf与trka和p75二者的相互作用。当抗体e3(fab)浓度等于ngf浓度(约2.5nmngf浓度)时，未观察到ngf结合(如零信号所示)。ngf浓度等于抗体3e浓度时发生零百分比的ngf-受体结合的事实表明，2.5nmngf至少是e3对ngf且处于平衡下的kd的十倍。实施例2：使用小鼠e13.5三叉神经神经元存活实验评价抗-ngf抗体的ngf-阻断能力通过测量抗体抑制体外小鼠e13.5三叉神经神经元的ngf-依赖型存活的能力，来评价fabe3或全长抗体e3阻断ngf活性的能力。三叉神经神经节由支配颜面区的表皮感觉神经元组成。小鼠e13.5三叉神经神经元的存活是评价抗-ngf拮抗剂抗体的ngf-阻断活性的灵敏实验，因为ngf是支持这些神经元存活所需要的。例如，在饱和浓度的ngf下，培养48小时后存活接近100％。相反，在没有ngf时48小时后神经元存活少于5％。如下进行存活实验：通过co2吸入使时间匹配的(time-mated)怀孕的swisswebster雌性小鼠安乐死。取出子宫角(uterinehorn)，将胚胎阶段e13.5的胚胎取出并断头。使用电解质锐化的钨针(electrolyticallysharpenedtungstenneedle)切开三叉神经神经节。然后对所述神经节进行胰蛋白酶消化、机械分离并以每孔200-300个细胞的密度涂布于用多聚-l-鸟氨酸和层粘连蛋白覆盖的96孔板中确定的、无血清的培养基中。通过向三叉神经神经元中添加多种剂量的抗-ngf抗体mab911(fab)、8l2-6d5；h19-l129；e3和3c；和以下浓度的人或大鼠ngf：0.4ng/ml(～15pm；该浓度代表对存活而言ngf的饱和浓度)和0.04ng/ml(～1.5pm；该浓度在ic50左右)，评价抗-ngffab或抗体的阻断活性。培养48小时后，如下对细胞施加在biomekfx液体操作工作站(beckmancoulter)上进行的自动化免疫细胞化学方案：使用4％甲醛、5％蔗糖和pbs固定；使用pbs中0.3％tritonx-100透化；使用pbs中5％正常山羊血清、0.11％bsa阻断非特异性结合位点；并用一级和二级抗体先后孵育，来检测神经元。一级抗体是针对一种确定的神经元表型标记物——蛋白质基因产物89.5(pgp9.5,chemicon)的兔多克隆抗体。二级抗体是alexafluor488山羊抗-兔(molecularprobes)，其与核染料hoechst33342(molecularprobes)一起标记培养物中存在的所有细胞的核。在discovery-i/genii图像仪(universalimagingcorporation)上进行图像获取和图像分析。在针对alexafluor488和hoechst33342的两个波长上自动获得图像，使用核染色作为图像仪的基于图像的自动对焦系统的参照点，因为核染色存在于所有孔中。选择适当的物镜和每孔中成像位点数来覆盖每个孔的整个表面。设置自动化成像分析，在48小时后基于用抗-pgp9.5抗体的特异性染色来计数每个孔中存在的神经元数。对图像小心地取阈值并应用基于形态学和荧光强度的选择性滤镜，得到精确的每孔神经元计数。该实验的结果证明fabe3以高亲合力阻断ngf活性。结果展示于wo2004/058184的图4-6中，和表9中。wo2004/058184的图4是展示存在不同浓度人和大鼠ngf时e13.5神经元的ngf-依赖型存活的图片。wo2004/058184的图5是比较存在0.04ng/ml人ngf(约1.5pm；展示于下图中)或0.4ng/ml人ngf(约15pm；展示于上图中)时多种fab的ngf阻断效应的图片。1.5pmngf在促进存活的ngf的ec50左右，而15pm代表ngf的饱和浓度。如上文所述评价多种fabe3；鼠911fab；和fabh19-l129与fab8l2-6d5浓度下e13.5小鼠三叉神经神经元的存活。在每个ngf浓度下针对每种fab计算ic50(以pm计)，并展示于表9中。fabe3在存在15pm人ngf时以约21pm的ic50、在存在1.5pm人ngf时以约1.2pm的ic50有力地阻断人ngf-依赖型三叉神经神经元存活。fabs3c和h19-l129也有力地阻断人ngf-依赖型三叉神经神经元存活。图6是比较存在0.04ng/ml大鼠ngf(约1.5pm；展示于下图中)或0.4ng/ml大鼠ngf(约15pm；展示于上图中)时多种fab的ngf阻断效应的图片。1.5pmngf在ec50左右，而15pm代表ngf的饱和浓度。如上文所述评价多种fabe3；鼠911fab；和fabh19-l129与fab8l2-6d5浓度下e13.5小鼠三叉神经神经元的存活。在每个ngf浓度下针对每种fab计算ec50(以pm计)，并展示于表9中。fabe3在存在15pm大鼠ngf时以约31.6pm的ic50、在存在1.5pm大鼠ngf时以约1.3pm的ic50有力地阻断人ngf-依赖型三叉神经神经元存活。fabs3c和h19-l129也有力地阻断大鼠ngf-依赖型三叉神经神经元存活。表9:在不同的实验中，我们比较了全长抗体e3和fab3e在存在0.4ng/ml(饱和浓度)人ngf时抑制e13.5神经元的ngf-依赖型存活的能力。分析结果展示于wo2004/058184的图10中。将全长抗体和fac的浓度标准化为ngf结合位点的数量(fab具有一个结合位点，全长抗体具有两个结合位点)时，全长抗体e3和fab3e展示了相似水平的ngf-依赖型存活抑制。这些结果证明不存在归因于全长抗体与ngf二聚体结合的亲合力效应。在另一实验中，我们比较了多种浓度(20、4、0.8、0.16、0.032、0.0064、0.00128和0.0nm)的抗体e3、抗体911和trka受体免疫粘合素(由与免疫球蛋白fc结构域ch2-ch3融合的ngf受体trka的细胞外结构域组成)在存在0.4ng/ml(饱和条件)时抑制e13.5神经元的ngf-依赖型存活的能力。这些结果展示于wo2004/058184的图11中。这些结果证明抗体e3比抗体911或trka免疫粘合素任一更好地阻断ngf。实施例3：使用小鼠三叉神经和结节神经元存活实验评价抗-ngf抗体e3的特异性通过测量在存在饱和浓度的ngf、ngf-相关神经营养蛋白nt3或ngf-无关的神经营养因子——巨噬细胞刺激蛋白(msp)时，抗体抑制小鼠e17/18三叉神经神经元体外存活的能力，来评价抗体e3特异性阻断ngf活性的能力。小鼠e17/18三叉神经神经元的存活是评价抗-ngf拮抗剂抗体的ngf-阻断活性的一种灵敏实验，因为在比支持e13.5tg神经元存活所需ngf水平更高的浓度下支持这些神经元的存活需要ngf。这些神经元的存活还由nt3或msp支持；因此，这些神经元的存活还是评价抗-ngf拮抗剂抗体是否也阻断了nt3或msp的一种灵敏实验。还通过测量在存在饱和浓度的bdnf或nt4/5时抗体抑制小鼠结节e17神经元存活的能力，来评价抗体e3特异性阻断ngf活性的能力。结节神经元的存活由bdnf或nt4/5支持；因此，这些神经元的存活是评价抗-ngf拮抗剂抗体的bdnf或nt4/5-阻断能力的一种灵敏实验。如下进行存活实验：通过co2吸入使时间匹配的怀孕的swisswebster雌性小鼠安乐死。取出子宫角，将胚胎(胚胎第17或18天)取出并断头。切下并清洁三叉神经和结节神经节。然后对所述神经节进行胰蛋白酶消化、机械分离并以每孔200-300个细胞的密度涂布于用多聚-l-鸟氨酸和层粘连蛋白覆盖的96孔板(greiner)中确定的、无血清的培养基中。e17/18三叉神经神经元在不添加神经营养因子(阴性对照)或存在饱和浓度人ngf(400pm和15pm)(阳性对照)；nt3(400pm)；或msp(600pm)时培养。建立包含多种浓度e3和911fab和全长抗体的一式两份的培养物。指出每个结合位点的fab和全长抗体的浓度(例如全长抗体含有两个结合位点，而fab含有一个结合位点)。在不存在添加的神经营养因子(阴性对照)或存在饱和浓度bdnf(400pm)(阳性对照)或nt4/5(400pm)或ngf无关的生长因子ilf(白细胞介素抑制因子)时培养e17结节。使用高浓度的神经营养蛋白，因为该实验的目的是测试抗体的特异性。建立包含多种浓度，添加和不添加抗体e3和911的一式两份的培养物。培养48小时后，使用相差显微镜，通过手动计数查明每种条件下每孔中存活的神经元总数。这些实验的结果证明e3和911抗体完全阻断ngf对e18三叉神经神经元的存活促进作用。相反，e3和911抗体对nt3或msp促进的三叉神经神经元存活或bdnf或nt4/5或lif促进的结节神经元的存活没有影响。这些结果证明，抗体e3对ngf具有选择性特异性，并且在1000-到10,000-倍于ngf阻断有效浓度的浓度下，这些抗体和其它ngf相关的神经营养蛋白(nt3、nt4/5、bdnf)之间未检测到相互作用。另外，这些结果证明，添加抗体或fabe3后，在ngf-依赖型神经元的补充ngf的培养物中观察到的神经元死亡归因于这些抗体和ngf之间的特异性相互作用，而不是归因于普遍的毒效应。还测试了小鼠抗-ngf拮抗剂抗体911，并观察到类似的结果。注意由于使用了高浓度的神经营养蛋白，所以抗体e3和911均非常接近它们的滴定条件(titrationconditions)并预期以相似的水平结合ngf，因为在这些条件下这些抗体对ngf的亲合力的差异较不明显。这些实验的结果展示于wo2004/058184的图12、13、14和15中。数据显示对每个实验而言，48小时后培养物中相对于阳性对照中观察的存活(例如分别为存在饱和ngf浓度时培养的三叉神经元的100％存活，和存在饱和bdnf浓度时培养的结节神经元的100％存活)的平均存活百分比(均值±标准误，对每个数据点而言n＝3)。wo2004/058184的图12-13是下述图片，其展示即便在高达200nm的抗体浓度下，抗-ngf拮抗剂抗体e3或fabe3也不抑制nt3和msp促进的存活。相反，20nm的抗体e3或fab3e和fab911完全阻断ngf-介导的存活。还检测了小鼠抗-ngf拮抗剂抗体911，并观察到相似的结果。特别地，wo2004/058184的图12是下述图片，其展示在不添加神经营养蛋白(称作“对照”)、添加400pmngf(称作“ngf-400pm”)、10nmnt3(称作“nt3-10nm”)或600pmmsp(称作“msp-600pm”)时，多种浓度(20nm、2nm或0.2nm)的e3fab(在图中称作“3e”)和小鼠抗体911fab对e18三叉神经神经元存活的影响的比较。wo2004/058184的图13是下述图片，其展示不添加神经营养蛋白(称作“无因子”)、添加400pmngf(称作“ngf-400pm”)、10nmnt3(称作“nt3-10nm”)或600pmmsp(称作“msp-600pm”)时，多种浓度(200nm和80nm)的e3fab和全长抗体和小鼠抗体911全长抗体和fab对e17三叉神经神经元存活的影响的比较。wo2004/058184的图14-15展示了抗-ngf拮抗剂抗体e3或fabe3不抑制bdnf、nt4/5或lif促进的e17结节神经元的存活。还测试了小鼠抗-ngf拮抗剂抗体911，并观察到相似的结果。特别地，wo2004/058184的图14是下述图片，其展示了不添加神经营养蛋白(称作“无因子”)、添加400pmbdnf(称作“bdnf-400pm”)、400pmnt4/5(称作“nt4/5-400pm”)或2.5nmlif(称作“lip-2.5nm”)时，多种浓度(200nm或80nm)的全长抗体e3(在图中称作“3e”)、fabe3、全长抗体911或fab911对e17结节神经元存活的影响的比较。wo2004/058184的图15是下述图片，其展示了不添加神经营养蛋白(称作“对照”)、添加400pmbdnf(称作“bdnf-400pm”)、400pmnt4/5(称作“nt4/5-400pm”)或2.5nmlif(称作“lip-2.5nm”)时，多种浓度(200nm、20nm、2nm)的fabe3(在图中称作“3e”)或fab911对e17结节神经元存活的影响的比较。实施例4：制备哺乳动物表达载体并在哺乳动物细胞中表达抗体e3设计并构建用于在哺乳动物细胞中表达抗体e3的三种哺乳动物表达载体。载体db.911.3e是包含e3抗体重链可变区和人igg2a恒定区的表达载体，并且适用于重链的瞬时表达或稳定表达。db.911.3e由对应于以下区域的核苷酸序列组成：鼠巨细胞病毒启动子区(核苷酸1-612)；合成内含子(核苷酸619-1507)；dhfr编码区(核苷酸707-1267)；人生长激素信号肽(核苷酸1525-1602)；抗体3e重链可变区(核苷酸1603-1965)；人重链igg2a恒定区，其含有a330p331到s330s331的突变(氨基酸编号参照野生型igg2a序列；见eur.j.immunol.(1999)29:2613-2624)；sv40晚多聚腺苷酸化信号(核苷酸2974-3217)；sv40增强子区(核苷酸3218-3463)；噬菌体f1区(核苷酸3551-4006)和β内酰胺酶(ampr)编码区(核苷酸4443-5300)。db.911.3e在2003年1月8日保藏于atcc，并被指定了atcc登录号no.pta-4895。载体eb.911.3e是包含e3抗体轻链可变区和人κ链恒定区的表达载体，并且适用于轻链的瞬时表达。eb.911.3e由对应于以下区域的核苷酸序列组成：鼠巨细胞病毒启动子区(核苷酸1-612)；人ef-1内含子(核苷酸619-1142)；人生长激素信号肽(核苷酸1173-1150)；抗体e3轻链可变区(核苷酸1251-1571)；人κ链恒定区(核苷酸1572-1892)；sv40晚多聚腺苷酸化信号(核苷酸1910-2153)；sv40增强子区(核苷酸2154-2399)；噬菌体f1区(核苷酸2487-2942)和β内酰胺酶(ampr)编码区(核苷酸3379-4236)。eb.911.3e在2003年1月8日保藏于atcc，并被指定了atcc登录号no.pta-4893。载体eb.pur.911.3e是包含e3抗体轻链可变区和人κ链恒定区的表达载体，并且适用于轻链的稳定表达。eb.pur.911.3e由对应于以下区域的核苷酸序列组成：鼠巨细胞病毒启动子区(核苷酸1-612)；人ef-1内含子(核苷酸619-1758)；pac基因(嘌呤霉素r)编码区(核苷酸739-1235)；人hsp705'utr区(核苷酸1771-1973)；人生长激素信号肽(核苷酸1985-2062)；抗体e3轻链可变区(核苷酸2063-2383)；人κ链恒定区(核苷酸2384-2704)；sv40晚多聚腺苷酸化信号(核苷酸2722-2965)；sv40增强子区(核苷酸2966-3211)；噬菌体f1区(核苷酸3299-3654)和β内酰胺酶(ampr)编码区(核苷酸4191-5048)。eb.pur.911.e3在2003年1月8日保藏于atcc，并被指定了atcc登录号no.pta-4894。如下进行瞬时细胞表达：用25ug每种质粒(即一种含有重链的质粒和一种含有轻链的质粒)瞬时共转染150mm盘中的cho和hek293t细胞。根据制造商说明将dna与100ullipofectamine2000(invitrogen)混合。允许dna-脂质复合物与细胞在不含血清或抗生素的dmem/f12培养基中接触5小时。该孵育后，为了表达将培养基改变为不含任何添加剂的opti-mem(invitrogen)，孵育两天。用随后的培养基取代将含有抗体的细胞上清液连续收获至多四次。使用mapselecta蛋白树脂(amershambiosciences17-5199-02)，通过亲和性色谱纯化上清液。抗体与0.3m甘氨酸、ph8下0.6mnacl缓冲液中的蛋白a树脂结合，然后用ph3的0.1m柠檬酸缓冲液洗脱。立即用ph8.0的1mtris缓冲液中和含有抗体的级分。然后在pbs中透析和浓缩抗体级分。实施例5–临床研究用抗-ngf拮抗剂抗体e3治疗临床诊断为间质性膀胱炎的患者，以正是抗-ngf抗体抗体e3在治疗一种或多种与间质性膀胱炎和/或痛性膀胱炎和/或膀胱疼痛综合征相关的疼痛和下泌尿道症状中的安全性和效力。要治疗的患者可患有中度到严重的间质性膀胱炎，如治疗前筛选中通过至少18的骨盆疼痛和尿急/尿频(puf–parsons等，urology2002；60:573-578))评分和至少8的o’leary-sant间质性膀胱炎症状指数(icsi–o’leary等，urology1997；49(suppl5a):58-63)评分所定义。要满足其它的包括标准(inclusioncriteria)。不满足所有包括标准或满足一个或多个排除标准(exclusioncriteria)的患者应当被认为筛选失败，并且不会被随机化进该研究中。评价治疗与间质性膀胱炎和/或痛性膀胱综合征和/或膀胱疼痛综合征相关的疼痛和下泌尿道症状中，与安慰剂相比通过输注的单一剂量抗体的效力。以200μg/kg的剂量对患者静脉内施用e3抗体。除了效力以外，还评价了与安慰剂相比治疗效果的登记；间质性膀胱炎的生物标记物对抗体治疗的应答；和治疗应答速率，以及其它测量结果。生物标记物包括ngf、糖蛋白-51(gp-51)、抗增殖因子(apf)和hb-表皮生长因子(hb-egf)等等。在静脉内输注单剂量e3抗体后6周分析一级端点(primaryendpoint)。给药后2、10和16周的评价被包括在内作为二级端点(secondaryendpont)。一级端点应当是11-点疼痛数字评价量表(ncs)中的改变。使用o’leary-sant间质性膀胱炎症状指数(icsi)评分作为二级端点。其它二级端点包括o’leary-sant间质性膀胱炎问题指数(icpi-o’leary等，urology1997；49(suppl5a):58-63)，icsi加icpi，骨盆疼痛和尿急/尿频(puf)，平均日常疼痛，由患者在研究期间记录的排尿日记变量，包括排尿频率、夜尿频率、失禁发作频率、每次排尿排泄的平均体积、平均间质性膀胱炎疼痛严重性、泌尿急性发作、平均睡眠扰动评分、与性行为疼痛评分相关的平均疼痛评分、全局应答评价、报告治疗影响评价的专利(patentreportingtreatmentimpactassessment)、治疗失败、生物标记物、安全性端点(safetyendpoint)和/或药物代谢动力学度量。生物标记物可包括ngf、糖蛋白-51(gp-51)、抗增殖因子(apf)和hb-表皮生长因子(hb-egf)以及其它。以下数据来自于下述进行中的临床试验的中期分析，所述试验利用上述方案评价患有间质性膀胱炎/痛性膀胱综合征/膀胱疼痛综合征(ic/pbs/bps)的患者中e3抗体的安全性和效力。在中期分析中使用来自24个患者的数据。在疼痛nrs和icsi评分中均观察到清楚的改善(降低)。在接受e3抗体的患者中观察到的改善比在接受安慰剂的患者中观察到的更大。这些数据对下述事实提供了支持：e3抗体可有效治疗与ic/pbs/bps相关的疼痛和其它下泌尿道综合征(luts)。然而，最终的研究结果需要评价。使用11点(0–10)数字评价量表(nrs)。该量表是经确认的，并且广泛用于评价目的在于缓解疼痛的治疗。间质性膀胱炎症状指数(icsi)用范围从0到20的评分评价全局ic症状严重性。其以涉及与ic/pbs/bps相关的疼痛和luts的4个问题为基础。这些问题包括在之前4周中对白天和夜晚尿频、尿急和膀胱疼痛严重性的测量。生物材料的保藏以下材料已保藏在美国典型培养物保藏中心(americantypeculturecollection(atcc),10801universityboulevard,manassas,virginia,美国)：涉及这些保藏的细节可见wo2004058184，其内容通过引用整体并入本文。抗体序列重链可变区(kabatcdr带有下划线；chothiacdr为粗体和斜体)qvqlqesgpglvkpsetlsltctvsgfsliwirqppgkglewigrvtiskdtsknqfslklssvtaadtavyycarwgqgtlvtvs(seqidno:1)轻链可变区(kabatcdr带有下划线；chothiacdr为粗体和斜体)diqmtqspsslsasvgdrvtitcwyqqkpgkapklliygvpsrfsgsgsgtdftftisslqpediatyycfgqgtkleikrt(seqidno:2)e3重链扩大的cdrscdrh1:gfsligydln(seqidno:3)cdrh2:iiwgdgttdynsavks(seqidno:4)cdrh3:ggywyatsyyfdy(seqidno:5)e3轻链扩大的cdrscdrl1:rasqsisnnln(seqidno:6)cdrl2:ytsrfhs(seqidno:7)cdrl3:qqehtlpyt(seqidno:8)小鼠单克隆抗体911扩大的cdrs911重链扩大的cdrscdrh1:gfsligydin(seqidno:9)cdrh2:miwgdgttdynsalks(seqidno:10)cdrh3:ggyyygtsyyfdy(seqidno:11)911重链扩大的cdrscdrl1:rasqdisnhln(seqidno:12)cdrl2:yisrfhs(seqidno:13)cdrl3:qqsktlpyt(seqidno:14)e3重链氨基酸序列(全长)qvqlqesgpglvkpsetlsltctvsgfsligydlnwirqppgkglewigiiwgdgttdynsavksrvtiskdtsknqfslklssvtaadtavyycarggywyatsyyfdywgqgtlvtvssastkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssnfgtqtytcnvdhkpsntkvdktverkccvecppcpappvagpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstfrvvsvltvvhqdwlngkeykckvsnkglpssiektisktkgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppmldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk(seqidno:16)3e轻链氨基酸序列(全长抗体)diqmtqspsslsasvgdrvtitcrasqsisnnlnwyqqkpgkapklliyytsrfhsgvpsrfsgsgsgtdftftisslqpediatyycqqehtlpytfgqgtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec(seqidno:17)3e重链核苷酸序列(全长抗体)caggtgcagctgcaggagtctggcccaggactggtgaagccttccgagaccctgtccctcacctgcactgtctctgggttctcacttatcggctatgatcttaactggatccgacagcctccagggaagggactggagtggattgggattatctggggtgatggaaccacagactataattcagctgtcaaatcccgcgtcaccatctcaaaagacacctccaagaaccagttctccctgaagctgagctctgtgaccgccgcggacacggccgtgtattactgtgcgagaggaggttattggtacgccactagctactactttgactactggggccagggcaccctggtcaccgtctcctcagcctccaccaagggcccatctgtcttcccactggccccatgctcccgcagcacctccgagagcacagccgccctgggctgcctggtcaaggactacttcccagaacctgtgaccgtgtcctggaactctggcgctctgaccagcggcgtgcacaccttcccagctgtcctgcagtcctcaggtctctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccatccagcaacttcggcacccagacctacacctgcaacgtagatcacaagccaagcaacaccaaggtcgacaagaccgtggagagaaagtgttgtgtggagtgtccaccttgtccagcccctccagtggccggaccatccgtgttcctgttccctccaaagccaaaggacaccctgatgatctccagaaccccagaggtgacctgtgtggtggtggacgtgtcccacgaggacccagaggtgcagttcaactggtatgtggacggagtggaggtgcacaacgccaagaccaagccaagagaggagcagttcaactccaccttcagagtggtgagcgtgctgaccgtggtgcaccaggactggctgaacggaaaggagtataagtgtaaggtgtccaacaagggactgccatccagcatcgagaagaccatctccaagaccaagggacagccaagagagccacaggtgtataccctgccaccatccagagaggagatgaccaagaaccaggtgtccctgacctgtctggtgaagggattctatccatccgacatcgccgtggagtgggagtccaacggacagccagagaacaactataagaccacccctccaatgctggactccgacggatccttcttcctgtattccaagctgaccgtggacaagtccagatggcagcagggaaacgtgttctcttgttccgtgatgcacgaggccctgcacaaccactatacccagaagagcctgtccctgtctccaggaaagtaa(seqidno:65)3e中链可变区核苷酸序列caggtgcagctgcaggagtctggcccaggactggtgaagccttccgagaccctgtccctcacctgcactgtctctgggttctcacttatcggctatgatcttaactggatccgacagcctccagggaagggactggagtggattgggattatctggggtgatggaaccacagactataattcagctgtcaaatcccgcgtcaccatctcaaaagacacctccaagaaccagttctccctgaagctgagctctgtgaccgccgcggacacggccgtgtattactgtgcgagaggaggttattggtacgccactagctactactttgactactggggccagggcaccctggtcaccgtctcctca(seqidno:66)3e轻链核苷酸序列(全长抗体)gatatccagatgacacagtccccatcctccctgtctgcctctgtgggtgaccgcgtcaccatcacctgccgcgcatctcagtccattagcaataatctgaactggtatcagcagaagccaggcaaagccccaaaactcctgatctactacacctcacgcttccactcaggtgtcccatcacgcttcagtggcagtggctctggtacagatttcaccttcaccattagcagcctgcaaccagaagatattgccacttattactgccaacaggagcatacccttccatataccttcggtcaaggcaccaagctggagatcaaacgcactgtggctgcaccatctgtcttcatctttcctccatctgatgagcagttgaaatccggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatccacgcgaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatccggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgaccctgagcaaagcagactacgagaaacacmaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagttctccagtcacaaagagcttcaaccgcggtgagtgctaa(seqidno:67)3e轻链可变区核苷酸序列gatatccagatgacacagtccccatcctccctgtctgcctctgtgggtgaccgcgtcaccatcacctgccgcgcatctcagtccattagcaataatctgaactggtatcagcagaagccaggcaaagccccaaaactcctgatctactacacctcacgcttccactcaggtgtcccatcacgcttcagtggcagtggctctggtacagatttcaccttcaccattagcagcctgcaaccagaagatattgccacttattactgccaacaggagcatacccttccatataccttcggtcaaggcaccaagctggagatcaaacgc(seqidno:68)上述序列和本文所述其它序列在附带的序列表中提供。序列表自由文本(freetext)附带的序列表中名为seqidnos.1-8、15-68、70-72、74-77的序列具有自由文本“合成构建体”。应当理解本文所述的实施例和实施方式仅用于阐述的目的，多种修饰或改变以它们为基础被提示给本领域的技术人员，并且应包括在本申请的精神和范围内。序列表<120>间质性膀胱炎的治疗<130>pc33649<160>77<170>fastseqforwindowsversion4.0<210>1<211>120<212>prt<213>人工序列<220><223>合成构建体<400>1glnvalglnleuglngluserglyproglyleuvallysproserglu151015thrleuserleuthrcysthrvalserglypheserleuileglytyr202530aspleuasntrpileargglnproproglylysglyleuglutrpile354045glyileiletrpglyaspglythrthrasptyrasnseralavallys505560serargvalthrileserlysaspthrserlysasnglnpheserleu65707580lysleuserservalthralaalaaspthralavaltyrtyrcysala859095argglyglytyrtrptyralathrsertyrtyrpheasptyrtrpgly100105110glnglythrleuvalthrvalser115120<210>2<211>109<212>prt<213>人工序列<220><223>合成构建体<400>2aspileglnmetthrglnserproserserleuseralaservalgly151015aspargvalthrilethrcysargalaserglnserileserasnasn202530leuasntrptyrglnglnlysproglylysalaprolysleuleuile354045tyrtyrthrserargphehisserglyvalproserargphesergly505560serglyserglythraspphethrphethrileserserleuglnpro65707580gluaspilealathrtyrtyrcysglnglngluhisthrleuprotyr859095thrpheglyglnglythrlysleugluilelysargthr100105<210>3<211>10<212>prt<213>人工序列<220><223>合成构建体<400>3glypheserleuileglytyraspleuasn1510<210>4<211>16<212>prt<213>人工序列<220><223>合成构建体<400>4ileiletrpglyaspglythrthrasptyrasnseralavallysser151015<210>5<211>13<212>prt<213>人工序列<220><223>合成构建体<400>5glyglytyrtrptyralathrsertyrtyrpheasptyr1510<210>6<211>11<212>prt<213>人工序列<220><223>合成构建体<400>6argalaserglnserileserasnasnleuasn1510<210>7<211>7<212>prt<213>人工序列<220><223>合成构建体<400>7tyrthrserargphehisser15<210>8<211>9<212>prt<213>人工序列<220><223>合成构建体<400>8glnglngluhisthrleuprotyrthr15<210>9<211>10<212>prt<213>musmusculus<400>9glypheserleuileglytyraspileasn1510<210>10<211>16<212>prt<213>musmusculus<400>10metiletrpglyaspglythrthrasptyrasnseralaleulysser151015<210>11<211>13<212>prt<213>musmusculus<400>11glyglytyrtyrtyrglythrsertyrtyrpheasptyr1510<210>12<211>11<212>prt<213>musmusculus<400>12argalaserglnaspileserasnhisleuasn1510<210>13<211>7<212>prt<213>musmusculus<400>13tyrileserargphehisser15<210>14<211>9<212>prt<213>musmusculus<400>14glnglnserlysthrleuprotyrthr15<210>15<211>15<212>prt<213>人工序列<220><223>合成构建体<400>15glyglyglyglyserglyglyglyglyserglyglyglyglyser151015<210>16<211>447<212>prt<213>人工序列<220><223>合成构建体<400>16glnvalglnleuglngluserglyproglyleuvallysproserglu151015thrleuserleuthrcysthrvalserglypheserleuileglytyr202530aspleuasntrpileargglnproproglylysglyleuglutrpile354045glyileiletrpglyaspglythrthrasptyrasnseralavallys505560serargvalthrileserlysaspthrserlysasnglnpheserleu65707580lysleuserservalthralaalaaspthralavaltyrtyrcysala859095argglyglytyrtrptyralathrsertyrtyrpheasptyrtrpgly100105110glnglythrleuvalthrvalserseralaserthrlysglyproser115120125valpheproleualaprocysserargserthrsergluserthrala130135140alaleuglycysleuvallysasptyrpheprogluprovalthrval145150155160sertrpasnserglyalaleuthrserglyvalhisthrpheproala165170175valleuglnserserglyleutyrserleuserservalvalthrval180185190proserserasnpheglythrglnthrtyrthrcysasnvalasphis195200205lysproserasnthrlysvalasplysthrvalgluarglyscyscys210215220valglucysproprocysproalaproprovalalaglyproserval225230235240pheleupheproprolysprolysaspthrleumetileserargthr245250255progluvalthrcysvalvalvalaspvalserhisgluaspproglu260265270valglnpheasntrptyrvalaspglyvalgluvalhisasnalalys275280285thrlysproargglugluglnpheasnserthrpheargvalvalser290295300valleuthrvalvalhisglnasptrpleuasnglylysglutyrlys305310315320cyslysvalserasnlysglyleuproserserileglulysthrile325330335serlysthrlysglyglnproarggluproglnvaltyrthrleupro340345350proserarggluglumetthrlysasnglnvalserleuthrcysleu355360365vallysglyphetyrproseraspilealavalglutrpgluserasn370375380glyglnprogluasnasntyrlysthrthrproprometleuaspser385390395400aspglyserphepheleutyrserlysleuthrvalasplysserarg405410415trpglnglnglyasnvalphesercysservalmethisglualaleu420425430hisasnhistyrthrglnlysserleuserleuserproglylys435440445<210>17<211>214<212>prt<213>人工序列<220><223>合成构建体<400>17aspileglnmetthrglnserproserserleuseralaservalgly151015aspargvalthrilethrcysargalaserglnserileserasnasn202530leuasntrptyrglnglnlysproglylysalaprolysleuleuile354045tyrtyrthrserargphehisserglyvalproserargphesergly505560serglyserglythraspphethrphethrileserserleuglnpro65707580gluaspilealathrtyrtyrcysglnglngluhisthrleuprotyr859095thrpheglyglnglythrlysleugluilelysargthrvalalaala100105110proservalpheilepheproproseraspgluglnleulyssergly115120125thralaservalvalcysleuleuasnasnphetyrproarggluala130135140lysvalglntrplysvalaspasnalaleuglnserglyasnsergln145150155160gluservalthrgluglnaspserlysaspserthrtyrserleuser165170175serthrleuthrleuserlysalaasptyrglulyshislysvaltyr180185190alacysgluvalthrhisglnglyleuserserprovalthrlysser195200205pheasnargglyglucys210<210>18<211>11<212>prt<213>人工序列<220><223>合成构建体<400>18argalaserglnserileserasnasnleuasn1510<210>19<211>7<212>prt<213>人工序列<220><223>合成构建体<400>19tyrthrserargphehisser15<210>20<211>11<212>prt<213>人工序列<220><223>合成构建体<400>20argalaserglntyrileserasnhisleuasn1510<210>21<211>7<212>prt<213>人工序列<220><223>合成构建体<400>21tyrthrserargphehisser15<210>22<211>11<212>prt<213>人工序列<220><223>合成构建体<400>22argalaserglnserileserasnglnleuasn1510<210>23<211>7<212>prt<213>人工序列<220><223>合成构建体<400>23tyrvalserargphehisser15<210>24<211>11<212>prt<213>人工序列<220><223>合成构建体<400>24argalapheglnalaileserasnglnleuasn1510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