本发明涉及提取技术领域，特别涉及一种具有增强免疫作用的薏苡多糖及其制备方法与应用。
背景技术：
薏苡是禾本科薏苡属草本植物，其干燥成熟的种仁为薏苡仁或称薏仁。薏苡的营养和药用价值极高，是一种药食同源的作物。我国福建、河北、贵州、广西、台湾等地均有大规模薏苡种植。薏苡中的功能成分研究多关注薏苡仁酯和薏苡素，它们具有抗癌、降血糖等活性。除前两者外，薏苡中还含有约5％-8％的多糖组分，也具备较大的开发潜力。
超声技术是近年来在食品加工领域应用较为广泛的一种新技术。经过超声处理后，物料的结构发生改变，功能特性也随着改变。多项研究表明，多种植物多糖经超声处理后，其空间结构发生改变，生物活性得到改善。目前，关于薏苡多糖免疫活性的研究已有报道，但基于超声改性技术提高薏苡多糖生物活性的研究报道较少。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题是提供一种具有增强免疫作用的薏苡多糖及其制备方法，其能使薏苡多糖的免疫作用显著增强。
本发明所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的：
一种具有增强免疫作用的薏苡多糖的制备方法，包括以下步骤：将薏苡仁粉碎、70％乙醇脱脂、蒸馏水提取、过滤浓缩提取液、三氯甲烷和正丁醇除蛋白、超声改性，最后冷冻干燥得薏苡多糖。
优选地，上述技术方案中，详细包括以下步骤：
1)脱脂：将薏苡仁粉碎，过60目筛，加入8倍体积的70％的乙醇，搅拌提取，收集滤渣；
2)提取：将步骤1)得到的滤渣干燥，加入6-8倍体积的蒸馏水，搅拌提取，得提取液；
3)浓缩：将步骤2)得到的提取液离心过滤，再将滤液旋蒸浓缩，得浓缩液；
4)除蛋白：向步骤3)得到的浓缩液中加入5倍体积的Sevag试剂，震荡分层离心，除去蛋白质后，旋蒸除去Sevag试剂；
5)改性：将步骤4)处理后的浓缩液放入冰水浴中，置于超声清洗器内超声，超声处理后的浓缩液冷冻干燥，得薏苡多糖。
优选地，上述技术方案中，所述步骤1)脱脂的条件为：在55℃水浴中搅拌提取2次，每次4小时，弃上清液，收集滤渣。
优选地，上述技术方案中，所述步骤2)提取的条件为：在90-95℃水浴中搅拌提取2次，每次3-5小时，得提取液。
优选地，上述技术方案中，所述步骤3)浓缩的条件为：将提取液于3500rpm下离心10min过滤，合并两次滤液，在温度55℃，真空度0.1Mpa条件下旋蒸浓缩。
优选地，上述技术方案中，所述步骤4)除蛋白过程具体为：向浓缩液中加入5倍体积的Sevag试剂，震荡分层离心，弃去下层有机相和中间层，取上层溶液重复3-4次，直至中间层无白色沉淀，于55℃、0.1Mpa真空度下旋蒸，至溶液无刺激性气味。
优选地，上述技术方案中，所述Sevag试剂为三氯甲烷与正丁醇按照体积比4:1混合而成。
优选地，上述技术方案中，所述步骤5)的超声条件为：超声功率300-600W，超声处理1-3次，每次20-40min。
一种根据上述具有增强免疫作用的薏苡多糖的制备方法制备得到的薏苡多糖。
一种根据上述具有增强免疫作用的薏苡多糖的制备方法制备得到的薏苡多糖在制备具有增强免疫力的产品中的应用。
本发明上述技术方案，具有如下有益效果：
本发明能够快速高效地制备具有增强免疫效果的薏苡多糖。细胞培养实验证明，超声处理后的薏苡多糖较未超声处理的多糖免疫效果显著增强。而本发明未超声处理的薏苡多糖的免疫效果明显优于常规方法制备的薏苡多糖。
具体实施方式
下面对本发明的具体实施例进行详细描述，以便于进一步理解本发明。
以下实施例中所有使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
以下实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可通过商业途径获得。
实施例1
一种具有增强免疫作用的薏苡多糖，其制备方法如下：
(1)薏苡仁粉碎，过60目筛，取200g置于锥形瓶中，加入70％的乙醇1600mL，在55℃水浴中搅拌提取2次，每次4小时；
(2)合并两次滤渣，加入1200mL蒸馏水，于90℃水浴中搅拌提取2次，每次5小时；
(3)合并两次滤液，旋转蒸发浓缩，旋蒸温度55℃，真空度0.1Mpa，浓缩到200mL；
(4)在浓缩液中加入Sevag试剂(三氯甲烷:正丁醇＝4:1)1000mL，震荡20min，静置5min后，于3500rpm离心10min，弃去下层和中间层物质，重复3-4次，直至中间层无白色沉淀。
(5)旋蒸除去溶液中残留的Sevag试剂，旋蒸温度55℃，真空度0.1Mpa，浓缩到120mL；
(6)将浓缩液放入冰水浴中，置于超声清洗器内，于超声功率300W下超声处理3次，每次20min，浓缩液冷冻干燥，即得薏苡多糖。
实施例2
一种具有增强免疫作用的薏苡多糖，其制备方法如下：
(1)薏苡仁粉碎，过60目筛，取400g置于锥形瓶中，加入70％的乙醇3200mL，在55℃水浴中搅拌提取两次，每次4小时；
(2)合并两次滤渣，加入2400mL蒸馏水，于95℃水浴中搅拌提取2次，每次3小时；
(3)合并两次滤液，旋转蒸发浓缩，旋蒸温度55℃，真空度0.1Mpa，浓缩到400mL；
(4)在浓缩液中加入Sevag试剂(三氯甲烷:正丁醇＝4:1)2000mL，震荡20min，静置5min后，于3500rpm离心，弃去下层和中间层物质，重复3-4次，直至中间层无白色沉淀。
(5)旋蒸除去溶液中残留的有机试剂，旋蒸温度55℃，真空度0.1Mpa，浓缩到250mL；
(6)将浓缩液放入冰水浴中，置于超声清洗器内，于超声功率600W下超声处理1次，时间40min，浓缩液冷冻干燥，即得薏苡多糖。
实施例3
一种具有增强免疫作用的薏苡多糖，其制备方法如下：
(1)薏苡仁粉碎，过60目筛，取300g置于锥形瓶中，加入70％的乙醇2400mL，在55℃水浴中搅拌提取2次，每次4小时；
(2)合并两次滤渣，加入2100mL蒸馏水，于93℃水浴中搅拌提取2次，每次4小时；
(3)合并两次滤液，旋转蒸发浓缩，旋蒸温度55℃，真空度0.1Mpa，浓缩到300mL；
(4)在浓缩液中加入Sevag试剂(三氯甲烷:正丁醇＝4:1)1500mL，震荡20min，静置5min后，于3500rpm离心，弃去下层和中间层物质，重复3-4次，直至中间层无白色沉淀。
(5)旋蒸除去溶液中残留的有机试剂，旋蒸温度55℃，真空度0.1Mpa，浓缩到200mL；
(6)将浓缩液放入冰水浴中，置于超声清洗器内，于超声功率450W下超声处理2次，每次30min，浓缩液冷冻干燥，即得薏苡多糖。
对比例1未超声处理的薏苡多糖
一种具有增强免疫作用的薏苡多糖，其制备方法如下：
(1)薏苡仁粉碎，过60目筛，取300g置于锥形瓶中，加入70％的乙醇2400mL，在55℃水浴中搅拌提取2次，每次4小时；
(2)合并两次滤渣，加入2100mL蒸馏水，于93℃水浴中搅拌提取2次，每次4小时；
(3)合并两次滤液，旋转蒸发浓缩，旋蒸温度55℃，真空度0.1Mpa，浓缩到300mL；
(4)在浓缩液中加入Sevag试剂(三氯甲烷:正丁醇＝4:1)1500mL，震荡20min，静置5min后，于3500rpm离心，弃去下层和中间层物质，重复3-4次，直至中间层无白色沉淀。
(5)旋蒸除去溶液中残留的有机试剂，旋蒸温度55℃，真空度0.1Mpa，浓缩到200mL，浓缩液冷冻干燥，即得薏苡多糖。
对比例2常规方法制备薏苡多糖
一种具有增强免疫作用的薏苡多糖，其制备方法如下：
(1)薏苡仁粉碎，过60目筛，取200g置于锥形瓶中，加入70％的乙醇1600mL，浸泡24小时，过滤；
(2)滤渣加入1200mL蒸馏水，于90℃水浴中搅拌提取2次，每次5小时；
(3)合并两次滤液，旋转蒸发浓缩，旋蒸温度55℃，真空度0.1Mpa，浓缩到200mL；
(4)在浓缩液中加入胃蛋白酶溶液20mL，于37℃水浴反应4h；
(5)浓缩液加入无水乙醇880mL，搅拌2min，于4℃冰箱静置12h，过滤；
(6)滤渣于50℃水浴挥干乙醇，冷冻干燥，得薏苡多糖。
试验结果分析：
实施例1、2、3具增强免疫作用的薏苡多糖，通过体外免疫实验来具体说明本发明的免疫增强效果。
(1)实验原料：采用RAW264.7小鼠巨噬细胞为实验细胞，检验本实施例和对比例得到的薏苡多糖的免疫作用。
(2)实验方法：配制1、50、150μg/mL的薏苡多糖溶液，分别加入到细胞浓度为7.5×105个/mL的96孔细胞培养板中，于37℃培养24h，取上清液，测定一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子(TNF-α)和细胞因子-6(IL-6)。本实验对比例1采用未超声处理薏苡多糖(按照实施例3不包括步骤6以外的步骤制备)。对比例2采用常规方法制备薏苡多糖。
(3)实验结果：表1为薏苡多糖免疫活性实验结果。表1中的“本发明实施例”是实施例1、2、3的平均数值，实施例1和2的结果近似，实施例3的结果略优于实施例1和实施例2。如表1所示：
表1薏苡多糖免疫活性实验结果
(4)结论与分析：上述实验结果证明，超声处理薏苡多糖组(本发明实施例)三种免疫因子NO、TNF-α和IL-6的生成量均明显地高于未超声处理薏苡多糖(对比例1)，这表明超声处理薏苡多糖对RAW264.7小鼠巨噬细胞的免疫作用强于未超声处理薏苡多糖(对比例1)。对比例2三种免疫因子的生成量均低于未超声处理薏苡多糖对比例1(未超声处理薏苡多糖)，表明其对RAW264.7小鼠巨噬细胞的免疫作用弱于对比例1。
由此可见，对比例1与本发明的实施例的区别仅在于对比例1未采用超声处理，而本发明采用了超声处理。通过对比我们不难看出，本发明采用超声制备的薏苡多糖对RAW264.7小鼠巨噬细胞的免疫作用明显强于未超声处理薏苡多糖。再来看对比例2，其是常规方法制备薏苡多糖。从结果数据分析来看，对比例1明显优于对比例2的常规制备方法。也就是说，本发明的制备方法在明显优于常规方法的基础上，又结合了超声处理法，因此，形成了自己独特的制备方法，该制备方法简单易行，得到的薏苡多糖较常规方法得到的产品的免疫作用更强。
因此，根据本发明制备方法制备得到的薏苡多糖，其可作为有效活性成分进一步加工成具有增强免疫力的产品，该产品的剂型可根据需要选择胶囊、粉剂、汤剂等各种不同的剂型。当然，本领域技术人员也可根据实际的需要，选择不同的剂型。本发明的剂型，并不以此为限。
虽然本发明已以实施例公开如上，然其并非用于限定本发明，任何本领域技术人员，在不脱离本发明的精神和范围内，均可作各种不同的选择和修改，因此本发明的保护范围由权利要求书及其等同形式所限定。