一种基于微滴式数字PCR的牛、猪源性成分定量检测方法、引物和探针及试剂盒与流程

文档序号:11899489阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种基于微滴式数字PCR的牛、猪源性成分定量检测的引物和探针,包括:

两条检测牛源性成分的引物,其序列分别为

Bov-BGH-F:5′-CCGATGGATGTGTTCAGAGCT-3′;

Bov-BGH-R:5′-GCCAAATGTCTGGGTGTAGATACC-3′;

一条检测牛源性成分的探针,其序列为

Bov-BGH-Pr:5′-TGGGCTTTAGGGCTTCCGAATGTGAA-3′;

两条检测猪源性成分的引物,其序列分别为

Sus-β-Actin-F:5′-CGAGACCTTCAACACCCCAG-3′;

Sus-β-Actin-R:5′-GGCGTACCCCTCGTAGATG-3′;

一条检测猪源性成分的探针,其序列为

Sus-β-Actin-Pr:5′-TGTGGGTGACCCCGTCTCCGGA-3′。

2.根据权利要求1所述的引物和探针,其特征在于,所述Bov-BGH-Pr的5′端标记有荧光报告基团FAM,3′端标记有荧光淬灭基团BHQ1;所述Sus-β-Actin-Pr的5′端标记有荧光报告基团HEX,3′端标记有荧光淬灭基团BHQ1。

3.一种基于微滴式数字PCR的牛、猪源性成分定量检测的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括权利要求1或2所述的引物和探针。

4.一种基于微滴式数字PCR的牛、猪源性成分定量检测方法,其特征在于,包括使用权利要求1或2所述引物和探针进行PCR扩增的步骤。

5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,包括以下步骤:

S1、提取样品基因组DNA;

S2、将权利要求1或2所述引物和探针加入反应体系中进行双重PCR扩增反应;

S3、将PCR产物置于数字PCR仪中读数分析。

6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,所述步骤S2中,PCR反应体系总体积为20μL,各组分如下:2×ddPCR Supermix混合反应液10μL,引物Bov-BGH-F、Bov-BGH-R、Sus-β-Actin-F、Sus-β-Actin-R各1μL,探针Bov-BGH-Pr、Sus-β-Actin-Pr各1μL,模板DNA 2μL,加ddH2O补足至20μL。

7.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,所述步骤S2中,PCR扩增反应条件为:95℃预变性10min;95℃变性15s,55℃退火10s,68℃延伸20s,40个循环;扩增结束后进行98℃ 10min的酶热失活。

8.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,所述引物Bov-BGH-F、Bov-BGH-R、Sus-β-Actin-F、Sus-β-Actin-R的使用终浓度均为900nmol/L,所述探针Bov-BGH-Pr、Sus-β-Actin-Pr的使用终浓度均为250nmol/L。

当前第2页1 2 3 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1