1.一种人二倍体细胞微载体培养有效传代的方法,其特征在于用人二倍体细胞MRC-5或KMB17细胞,微载体为cytodex 1,用微载体培养人二倍体细胞种子,当种子反应器中微载体上培养的人二倍体细胞长至汇合度80%以上时,将预处理好的空白微载体加入到种子反应器中与细胞种子培养物共同培养6小时以上或过夜,用含柠檬酸钠的胰酶消化液消化微载体上的种子细胞,加入完全培养基中和后在种子反应器中温和地间歇搅拌,起始培养3-6小时,再将起始培养物从种子反应器转移至扩增反应器中进行扩增培养,得到人二倍体细胞微载体放大培养过程中有效的传代。
2.根据权利要求1所述的人二倍体细胞微载体培养有效传代的方法,其特征在于所述的微载体的浓度为1-10克/升。
3.根据权利要求1所述的人二倍体细胞微载体培养有效传代的方法,其特征在于所述的空白微载体的预处理是指干的cytodex 1微载体经磷酸盐缓冲液水化过夜、洗涤3-5次、121℃高压灭菌处理后,用预热至37℃的基础培养基润洗置换1-2次。
4.根据权利要求1所述的人二倍体细胞微载体培养有效传代的方法,其特征在于空白微载体和种子反应器中原有微载体的比例为2:1-5:1。
5.根据权利要求1所述的人二倍体细胞微载体培养有效传代的方法,其特征在于所述的消化微载体上的种子细胞,包括以下步骤:
①停止种子生物反应器的搅拌,使反应器内细胞种子培养物和新加入的微载体自然沉降,排去上清培养液,用预热至37℃洗涤液搅拌洗涤微载体及细胞1-3次;
②用预热至37℃的消化液间歇搅拌消化细胞,取样镜检观察细胞消化状态、检测脱落细胞浓度和活率从而控制消化时间。
6.根据权利要求1所述的人二倍体细胞微载体培养有效传代的方法,其特征在于所述起始培养在种子反应器中进行,按照每15-45分钟搅拌1-3分钟的频率进行温和地间歇搅拌,搅拌速度为20-50rpm,采取能搅起全部微载体的最小速度和最短时间,培养参数为温度35-37℃,pH值7.2-7.4,溶氧30%-50%,起始培养时间为3-6小时,期间每3小时取样观察细胞粘附情况。
7.根据权利要求5所述的人二倍体细胞微载体培养有效传代的方法,其特征在于所述步骤①的洗涤液为含0.01% EDTA-2Na的D-Hanks,洗涤液和微载体的比例为100-200毫升/克 cytodex 1,搅拌速度为30-50rpm,洗涤时间为5-10分钟。
8.根据权利要求5所述的人二倍体细胞微载体培养有效传代的方法,其特征在于所述步骤②的消化液的组成成份为:0.8%氯化钠、0.02%氯化钾、0.005%二水磷酸氢二钠、0.1%葡萄糖、0.1%碳酸氢钠、0.3%二水柠檬酸钠、0.25%胰酶、 0.002%酚红;消化液和微载体的比例为:20-30毫升/克cytodex 1; 消化pH值:7.4-8.0;消化搅拌转速:50-150rpm,每5分钟搅拌1分钟间歇搅拌;消化温度:36-38℃;消化总时间:5-20分钟;每5分钟取样观察消化程度,90%以上的细胞从微载体上脱落后,加入完全培养基中和,50-100rpm搅拌1-3分钟混匀载体和细胞。