本发明属于药物化学技术领域，具体涉及一种高含量曲克芦丁的制备方法。
背景技术：
曲克芦丁（Troxerutin），即7,3′,4′-三羟乙基芦丁，本品呈浅黄色或浅黄绿色粉末，分子式为C33H42O19，CAS号7085-55-4，分子量为742.68，熔点为168 - 176 ℃，其结构式如下：
曲克芦丁是一类抗凝血药及溶栓药，它能够抑制血小板的凝集，有防止血栓形成的作用，同时能对抗5-羟色胺、缓激肽引起的血管损伤，增加毛细血管抵抗力，降低毛细血管通透性，可防止血管通透性升高引起的水肿，对急性缺血性脑损伤有显著的保护作用。
曲克芦丁的制备是以芦丁和环氧乙烷为原料，在碱性条件下发生Williamson醚化亲核取代反应而制得，其反应路线见如下方程式。由于芦丁具有多羟基的结构，故反应产物是一羟乙基芦丁、二羟乙基芦丁、三羟乙基芦丁和四羟乙基芦丁的混合物，其中，主要成分为7,3′,4′-三羟乙基芦丁，即曲克芦丁。
目前市场上曲克芦丁产品中主要成分三羟乙基芦丁的含量一般为80.0 %（供口服用）和88.0 %（供注射用）。而注射用曲克芦丁中尚有12.0 %的杂质，存在的杂质给临床用药带来较大的隐患，其中已报道的曲克芦丁注射液引起的不良反应以过敏反应居多。因此提高曲克芦丁原料药的纯度，具有重要的现实意义。
由于芦丁的黄酮结构上有四个活性羟基，在碱性条件下，四个羟基均会与环氧乙烷发生Williamson醚化亲核取代反应，虽然四个羟基活性不同，但其差异较小，故在反应中很难得到单一的三羟乙基芦丁。
文献中报道的高含量曲克芦丁的制备方法一般有：（1）申请号为200610065718.4的专利中，在常压下，采用水作溶剂，氢氧化钠为催化剂，环氧乙烷为醚化试剂，反应过程中用树脂调控反应液终点的pH值为9.5 - 10.3，得到的产品含量大于85.0 %；（2）申请号为201210443466.X的专利中，高压下，采用甲醇做溶剂，氢氧化钠为催化剂，环氧乙烷为醚化试剂，得到的产品含量为88.0 - 93.0 %；（3）申请号为201310028281.7的专利中，以水或水醇混合物为溶剂，氢氧化钠或氢氧化钾为催化剂，环氧乙烷为醚化试剂，反应分两个阶段进行，第一阶段生成主要以二羟乙基芦丁和三羟乙基芦丁的产物，第二阶段加入硼砂保护C5-OH，减少四羟乙基芦丁的比例，得到的曲克芦丁含量达90.0 %以上；（4）江正祥等以含量81 %的曲克芦丁为原料，采用优先结晶法纯化曲克芦丁，将曲克芦丁粗品在高于65 ℃的条件下，溶解到体积比为27 : 1的甲醇与异丙醇的混合溶剂中，然后降温到20 – 25 ℃，得到的曲克芦丁含量达95 %以上；（5）申请号为200310104132.0的专利中，采用甲醇为溶剂，吡啶为催化剂，得到的粗品曲克芦丁用有机溶剂（甲醇、乙醇）精制，最终得到的产品含量达90.0 %；（6）李军等采用C18柱，水-乙腈（体积比为83 : 17）为流动相，利用制备型HPLC对曲克芦丁原料进行分离纯化制得曲克芦丁对照品，纯度达99.0 %；（7）公开号为CN104177461A的专利中，先将芦丁制备成7-单羟乙基芦丁，然后对7-单羟乙基芦丁进行羟乙基化，将得到的粗品曲克芦丁进行精制，最终得到含量为98.0 %的曲克芦丁，该方法获得含量高于98.0 %的三羟乙基芦丁，成本在2000 - 3000元/公斤。
在已有的报道中，曲克芦丁的含量达98.0 %以上的方法，仅需要色谱法，操作繁琐，成本过高，并且不适合产业化推广应用。
技术实现要素：
为解决现有技术中存在的问题，本发明提供了一种高含量曲克芦丁的制备方法，具体指含量达98.0 %以上的三羟乙基芦丁的制备方法，本发明的关键在于采用高品质芦丁（含量达到99 %以上）为原料，从而得到高含量的曲克芦丁原料药，具有成本低廉、含量可达98.0 %以上、步骤简便、经济环保和适用于工业化生产等优点。
本发明为解决上述技术问题采用如下技术方案为：一种高含量曲克芦丁的制备方法，其特征在于具体步骤为：
（1）对原料粗品芦丁进行纯化精制获得含量高于99.0 %的高含量芦丁；
（2）将高含量芦丁在催化剂天然高分子海藻酸钠的催化作用下反应制备三羟乙基芦丁；
（3）将三羟乙基芦丁进行纯化得到含量高于98.0 %的高含量曲克芦丁。
进一步优选，步骤（1）中纯化精制的具体过程为：将粗品芦丁溶于碱的水溶液中，其中碱为氢氧化钠、氢氧化钾、甲醇钠、乙醇钠或乙醇钾中的一种或多种，加热至60 - 100 ℃溶解后加入硅藻土吸附，并趁热抽滤，滤液用酸溶液调节pH值为3 - 7，其中酸溶液为盐酸、硫酸、硝酸或醋酸中的一种或多种，降温静置析晶，抽滤得到含量高于99.0 %的高含量芦丁。
进一步优选，所述的粗品芦丁为市售普通芦丁，其HPLC含量为92 - 95 %，碱的水溶液中水的体积与粗品芦丁的质量比为15 - 25 L : 1 Kg，碱的水溶液中碱与粗品芦丁的摩尔比为0.5 - 2 : 1，硅藻土的用量为粗品芦丁质量的2 % - 10 %。
进一步优选，步骤（2）中反应的具体过程为：以高含量芦丁和环氧乙烷为反应原料，以无水甲醇为反应溶剂，以天然高分子海藻酸钠为催化剂，在自吸式搅拌的高压反应釜中于60 - 90 ℃反应，反应结束后用盐酸调节反应液的pH值为5 - 6，静置析晶得到三羟乙基芦丁。
进一步优选，所述的高含量芦丁、环氧乙烷、天然高分子海藻酸钠与无水甲醇的质量比为1 : 0.3 - 0.6 : 0.02 - 0.05 : 2 - 5。
进一步优选，步骤（3）中纯化的具体过程为：将得到的三羟乙基芦丁经过溶解、吸附、析晶和过滤得到含量高于98.0 %的高含量曲克芦丁，其中溶解过程采用的溶剂为甲醇、乙醇或异丙醇中的一种或多种。
进一步优选，所述的溶解过程中溶剂的体积与三羟乙基芦丁的质量比为15 - 20 mL : 1 g，溶解温度为回流温度；吸附过程中采用针用活性炭吸附，活性炭的用量为三羟乙基芦丁质量的3 % - 5 %，吸附时间为0.5 - 1 h。
本发明与现有技术相比具有以下优点：本发明通过对原料芦丁进行精制，精制过程采用水作溶剂，绿色环保，得到的芦丁纯度可达99.0 %以上；另外制备三羟乙基芦丁时采用天然高分子海藻酸钠及适宜的反应条件，使反应达到最佳水平，得到的产品只需简单纯化便可得到含量高于98.0 %的高含量曲克芦丁原料药；本发明获得该含量高于98.0 %的三羟乙基芦丁，成本仅为400 - 600元/Kg，明显低于目前常规的制备方法；另外，天然高分子海藻酸钠是一种白色或灰白色半透明的片状或粉状固体，无味、无臭、无毒性，在医药、食品、化妆品和生物医学工程等诸多领域用途广泛。
具体实施方式
以下通过实施例对本发明的上述内容做进一步详细说明，但不应该将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例，凡基于本发明上述内容实现的技术均属于本发明的范围。
实施例1
（1）将264 g (6.6 mol)氢氧化钠加入30 L蒸馏水中，搅拌溶解，再加入2 Kg (3.3 mol)的粗品芦丁，90 搅拌至溶解，加入100 g硅藻土，趁热抽滤，得到澄清的滤液。将该滤液用盐酸调节pH至5.0。缓慢降温至室温，降温时间控制在3 h，室温下静置4 h，抽滤，滤饼用4 L水淋洗，收率95.1 %，纯度99.0 %；
（2）取（1）中所得的200 g芦丁和10.0 g天然高分子海藻酸钠加入到800 g无水甲醇中，再通入80 g环氧乙烷，密封高压釜，开始加热及搅拌，加热至80 ℃后，保温反应5.0 h，HPLC检测三羟乙基芦丁比例达86 %时，迅速降温，终止反应，用盐酸调节反应液pH值至5.0，静置析晶12 h后，抽滤、干燥，得到晶体195 g，收率97.5 %；
（3）向（2）中所得的晶体190 g加入3600 mL无水甲醇，加热回流至完全溶解，加入针用活性炭6.0 g，继续回流1.0 h后，趁热抽滤，将滤液降至室温静置析晶12 h后，抽滤、干燥，得到产品154 g，收率81.0 %，总收率77.0 %，含量98.2 %。
实施例2
（1）将185 g (3.3 mol)氢氧化钾加入40 L蒸馏水中，搅拌溶解，再加入2 Kg (3.3 mol)的粗品芦丁，80 ℃搅拌至溶解，加入160 g硅藻土，趁热抽滤，得到澄清的滤液。将该滤液用盐酸调节pH至5.0。缓慢降温至室温，降温时间控制在3 h，室温下静置4 h，抽滤，滤饼用14 L水淋洗，收率95.2 %，纯度99.2 %；
（2）取（1）中所得的200 g芦丁和4.0 g天然高分子海藻酸钠加入到1000 g无水甲醇中，再通入80 g环氧乙烷，密封高压釜，开始加热及搅拌，加热至70 ℃后，保温反应8.0 h，HPLC检测三羟乙基芦丁比例达86 %时，迅速降温，终止反应，加入盐酸调节反应液pH值至6.0，静置析晶12 h后，抽滤、干燥，得到固体198 g，收率99.0 %；
（3）向（2）中所得的固体190 g加入3000 mL无水甲醇和异丙醇的混合溶液（无水甲醇与异丙醇的体积比为1 : 1），加热回流至完全溶解，加入针用活性炭7.2 g，继续回流1.0 h后，趁热抽滤，将滤液降至室温静置析晶12 h后，抽滤、干燥，得到产品161 g，收率84.7 %，总收率80.5 %，含量98.0 %。
实施例3
（1）将132 g (3.3 mol)氢氧化钠加入50 L蒸馏水中，搅拌溶解，再加入2 Kg (3.3 mol)的粗品芦丁，100 ℃搅拌至溶解，加入40 g硅藻土，趁热抽滤，得到澄清的滤液。将该滤液用硝酸调节pH至3.0。缓慢降温至室温，降温时间控制在3 h，室温下静置4 h，抽滤，滤饼用20 L水淋洗，收率94.3 %，纯度99.3 %；
（2）取（1）中所得的200 g芦丁和8.0 g天然高分子海藻酸钠加入到800 g无水甲醇中，再通入100 g环氧乙烷，密封高压釜，开始加热及搅拌，加热至60 ℃后，保温反应5.5 h，HPLC检测三羟乙基芦丁比例达86 %时，迅速降温，终止反应，加入盐酸调节反应液pH值至5.0，静置析晶12 h后，抽滤、干燥，得到固体197 g，收率98.5 %；
（3）向（2）中所得的固体190 g加入3100 mL无水甲醇和异丙醇的混合溶液（无水甲醇与异丙醇的体积比为1 : 1），加热回流至完全溶解，加入针用活性炭9.4 g，继续回流0.5 h后，趁热抽滤，将滤液降至室温静置析晶12 h后，抽滤、干燥，得到产品160 g，收率84.2 %，总收率80.0 %，含量98.6 %。
实施例4
（1）将265 g (4.9 mol)甲醇钠加入40 L蒸馏水中，搅拌溶解，再加入2 Kg (3.3 mol)的粗品芦丁，75 ℃搅拌至溶解，加入200 g硅藻土，趁热抽滤，得到澄清的滤液。将该滤液用盐酸调节pH至7.0。缓慢降温至室温，降温时间控制在3 h，室温下静置4 h，抽滤，滤饼用14 L水淋洗，收率95.0 %，纯度99.8 %；
（2）取（1）中所得的200 g芦丁和8.0 g天然高分子海藻酸钠加入到400 g无水甲醇中，再通入80 g环氧乙烷，密封高压釜，开始加热及搅拌，加热至90 ℃后，保温反应4 h，HPLC检测三羟乙基芦丁比例达86 %时，迅速降温，终止反应，加入盐酸调节反应液pH值至6.0，静置析晶12 h后，抽滤、干燥，得到固体197 g，收率98.5 %；
（3）向（2）中所得的固体190 g加入3300 mL无水甲醇和异丙醇的混合溶液（无水甲醇与异丙醇的体积比为1 : 1），加热回流至完全溶解，加入针用活性炭8.2 g，继续回流0.5 h后，趁热抽滤，将滤液降至室温静置析晶12 h后，抽滤、干燥，得到产品157 g，收率82.6 %，总收率78.5 %，含量98.1 %。
实施例5
（1）将198 g (4.9 mol)氢氧化钠加入30 L蒸馏水中，搅拌溶解，再加入2 Kg (3.3 mol)的粗品芦丁，90 ℃搅拌至溶解，加入160 g硅藻土，趁热抽滤，得到澄清的滤液。将该滤液用盐酸调节pH至6.0。缓慢降温至室温，降温时间控制在3 h，室温下静置4 h，抽滤，滤饼用10 L水淋洗，收率94.8 %，纯度99.3 %；
（2）取（1）中所得的200 g芦丁和8.0 g天然高分子海藻酸钠加入到1000 g无水甲醇中，再通入60 g环氧乙烷，密封高压釜，开始加热及搅拌，加热至80 ℃后，保温反应6.5 h，HPLC检测三羟乙基芦丁比例达86 %时，迅速降温，终止反应，加入盐酸调节反应液pH值至6.0，静置析晶12 h后，抽滤、干燥，得到固体198 g，收率99.0 %；
（3）向（2）中所得的固体190 g加入3700 mL无水甲醇和乙醇的混合溶液（无水甲醇与乙醇的体积比为1 : 1），加热回流至完全溶解，加入针用活性炭10.3 g，继续回流0.5 h后，趁热抽滤，将滤液降至室温静置析晶12 h后，抽滤、干燥，得到产品159 g，收率83.7 %，总收率79.5 %，含量97.0 %。
实施例6
（1）将264 g (6.6 mol)氢氧化钠加入40 L蒸馏水中，搅拌溶解，再加入2 Kg (3.3 mol)的粗品芦丁，100 ℃搅拌至溶解，加入160 g硅藻土，趁热抽滤，得到澄清的滤液。将该滤液用硫酸调节pH至5.0。缓慢降温至室温，降温时间控制在3 h，室温下静置4 h，抽滤，滤饼用10 L水淋洗，收率93.1 %，纯度99.2 %；
（2）取（1）中所得的200 g芦丁和10.0g天然高分子海藻酸钠加入到600 g无水甲醇中，再通入60 g环氧乙烷，密封高压釜，开始加热及搅拌，加热至90 ℃后，保温反应6.0 h，HPLC检测三羟乙基芦丁比例达86 %时，迅速降温，终止反应，加入盐酸调节反应液pH值至5.0，静置析晶12 h后，抽滤、干燥，得到固体197 g，收率98.5 %；
（3）向（2）中所得的固体190 g加入3000 mL无水甲醇和异丙醇的混合溶液（无水甲醇与异丙醇的体积比为1 : 1），加热回流至完全溶解，加入针用活性炭8.7 g，继续回流0.5 h后，趁热抽滤，将滤液降至室温静置析晶12 h后，抽滤、干燥，得到产品157.7 g，收率83.0 %，总收率78.8 %，含量98.3 %。
实施例7
（1）将66 g (1.6 mol)氢氧化钠加入50 L蒸馏水中，搅拌溶解，再加入2 Kg (3.3 mol)的粗品芦丁，60 ℃搅拌至溶解，加入200 g硅藻土，趁热抽滤，得到澄清的滤液。将该滤液用醋酸调节pH至6.0。缓慢降温至室温，降温时间控制在3 h，室温下静置4 h，抽滤，滤饼用20 L水淋洗，收率93.9 %，纯度99.1 %；
（2）取（1）中所得的200 g芦丁和10.0 g天然高分子海藻酸钠加入到400 g无水甲醇中，再通入100 g环氧乙烷，密封高压釜，开始加热及搅拌，加热至70 ℃后，保温反应4.0 h，HPLC检测三羟乙基芦丁比例达86 %时，迅速降温，终止反应，加入盐酸调节反应液pH值至6.0，静置析晶12 h后，抽滤、干燥，得到固体198.4 g，收率99.2 %；
（3）向（2）中所得的固体190 g加入3200 mL无水甲醇和乙醇的混合溶液（无水甲醇与乙醇的体积比为1 : 1），加热回流至完全溶解，加入针用活性炭8.0 g，继续回流0.5 h后，趁热抽滤，将滤液降至室温静置析晶12 h后，抽滤、干燥，得到产品166.4 g，收率87.6 %，总收率83.2 %，含量98.7 %。
实施例8
（1）将198 g (4.9 mol)氢氧化钠加入40 L蒸馏水中，搅拌溶解，再加入2 Kg (3.3 mol)的粗品芦丁，60 ℃搅拌至溶解，加入100 g硅藻土，趁热抽滤，得到澄清的滤液。将该滤液用盐酸调节pH至5.0。缓慢降温至室温，降温时间控制在3 h，室温下静置4 h，抽滤，滤饼用20 L水淋洗，收率94.8 %，纯度99.4 %；
（2）取（1）中所得的200 g芦丁和10.0 g天然高分子海藻酸钠加入到1000 g无水甲醇中，再通入115 g环氧乙烷，密封高压釜，开始加热及搅拌，加热至60 ℃后，保温反应5.5 h，HPLC检测三羟乙基芦丁比例达86 %时，迅速降温，终止反应，加入盐酸调节反应液pH值至5.0，静置析晶12 h后，抽滤、干燥，得到固体198.2 g，收率99.1 %；
（3）向（2）中所得的固体190 g加入3400 mL无水甲醇和异丙醇的混合溶液（无水甲醇与异丙醇的体积比为1 : 1），加热回流至完全溶解，加入针用活性炭5.9 g，继续回流1.0 h后，趁热抽滤，将滤液降至室温静置析晶12 h后，抽滤、干燥，得到产品156 g，收率82.1 %，总收率78.0 %，含量98.0 %。
实施例9
（1）将264 g (6.6 mol)氢氧化钠加入50 L蒸馏水中，搅拌溶解，再加入2 Kg (3.3 mol)的粗品芦丁，90 ℃搅拌至溶解，加入200 g硅藻土，趁热抽滤，得到澄清的滤液。将该滤液用盐酸调节pH至6.0。缓慢降温至室温，降温时间控制在3 h，室温下静置4 h，抽滤，滤饼用20 L水淋洗，收率94.4 %，纯度99.8 %；
（2）取（1）中所得的200 g芦丁和6.0 g天然高分子海藻酸钠加入到950 g无水甲醇中，再通入95 g环氧乙烷，密封高压釜，开始加热及搅拌，加热至90 ℃后，保温反应6.0 h，HPLC检测三羟乙基芦丁比例达86 %时，迅速降温，终止反应，加入盐酸调节反应液pH值至5.0，静置析晶12 h后，抽滤、干燥，得到固体197 g，收率98.5 %；
（3）向（2）中所得的固体190 g加入3800 mL无水甲醇，加热回流至完全溶解，加入针用活性炭7.1 g，继续回流1.0 h后，趁热抽滤，将滤液降至室温静置析晶12 h后，抽滤、干燥，得到产品158 g，收率83.2 %，总收率79.0 %，含量98.5 %。
以上实施例仅为说明本发明的技术思想，不能以此限定本发明的保护范围，凡是按照本发明提出的技术思想，在技术方案基础上所做的任何改动，均落入本发明保护范围之内。