本发明属于医药制备技术领域，具体涉及一种放线酰胺素的制备方法。
背景技术：
放线酰胺素(actinonin)是第一个被报道的具有肽脱甲酰基酶抑制活性的天然产物。1962年，英国的gordon等人在nature,1962,第701–702页首次报道了放线酰胺素的发现过程。他们从放线菌中分离出具有抑制分支杆菌和葡萄球菌的活性物质——放线酰胺素。放线酰胺素具有一定弱酸性，分子式为c19h35o5n8，低温条件下在碱性条件下可以稳定存在，可溶于水、醇和吡啶。在体外实验中对大多数革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌如金黄色葡萄球菌、粪球杆菌等具有抑制活性。放线酰胺素抗菌的作用机制由chen等人在biochemistry,2000,第1256–1262页首次报道。他们发现放线酰胺素通过与细菌内的肽脱甲酰基酶结合并抑制其活性，从而可以起到抑制细菌生长的作用。因此放线酰胺素也被视为肽脱甲酰基酶抑制剂药物设计的一个新起点。
虽然放线酰胺素很早就被发现，但由于其多手性中心的复杂结构，目前只有很少关于放线酰胺素的全合成的报道。j.chem.soc.,perkini,1975,第830-841页，报道了利用拆分的方法来合成光学纯的放线酰胺素的方法，此方法最大的缺陷就是只能首先合成消旋体，然后经过多次复杂繁琐的化学拆分来得到光学纯的产物。由此，造成产物收率低、原料消耗大，不符合绿色化学的要求，而且不利于放线酰胺素以及具有类似结构的、高生物活性的类似物的放大生产。tetrahedronlett.,1988,29(49)第6509–6512页，报道了利用汇聚式立体选择性地合成放线酰胺素的方法。但是该方法需要用到dcc等缩合剂，生成的副产物难以除去，产物不好纯化，同时还容易造成化合物的手性中心消旋等；同时，还需要用到正丁基锂等试剂，溶剂需要除水并且反应需要超低温，反应不方便操作。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种原料廉价易得，操作简单，制备路线短，同时副产物较少，易于纯化的制备放线酰胺素的方法。由于放线酰胺素是一个类似四肽的化合物，为实现本发明的目的，本发明中放线酰胺素的制备方法采用多肽类化合物合成的最常用的方法，即从c-端到n-端的合成方法。以式(2)所示的n-boc-l-脯氨醇为起始原料，首先对n-boc-l-脯氨醇的羟基进行保护，然后由c-端到n-端依次与n-boc-l-缬氨酸，式(5)所示的酸，以及苄氧基胺盐酸盐缩合，最后脱除苄基保护，得到终产物放线酰胺素；即，本发明以n-boc-l-脯氨醇为原料，首先对羟基进行保护，然后与n-boc-l-缬氨酸缩合得到二肽(式(4)化合物)。随后与酸(式(5)化合物)缩合得到三肽(式(6)化合物)，随后三肽的叔丁酯进行水解，再与苄氧羟胺盐酸盐缩合得到四肽(式(7)化合物)，最后在催化氢化条件下脱除苄基保护，得到放线酰胺素。
本发明提出的放线酰胺素制备方法，如下路线(1)所示：
具体包括以下步骤：
(1)式(3)n-boc-pro-obn的合成
在有机溶剂中，式(2)n-boc-l-脯氨醇、卤化苄、碱进行羟基的苄基保护反应，得到式(3)n-boc-pro-obn；
步骤(1)中，所述有机溶剂选自卤代烃、脂肪烃、芳香烃、极性溶剂、醚类溶剂等中的一种或多种；其中，所述卤代烃选自二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷、四氯化碳等，所述脂肪烃选自乙腈、乙酸乙酯等，所述芳香烃选自甲苯、二甲苯、各种卤代苯等，所述极性溶剂选自n,n-二甲基甲酰胺、n,n-二乙基甲酰胺等、醚类溶剂选自四氢呋喃、二氧六环等；优选地，所述有机溶剂为dmf。
步骤(1)中，所述碱选自氢化钠、氢化钾；优选地，为氢化钠。
步骤(1)中，所述卤化苄包括溴化苄或氯化苄；优选地，为溴化苄。
步骤(1)中，所述苄基保护反应的温度为0℃-25℃；优选地，为25℃(室温)。
步骤(1)中，所述苄基保护反应的时间为2-5个小时；优选地，为3小时。
步骤(1)中，所述式(2)n-boc-l-脯氨醇、碱金属、卤化苄的摩尔比为1：(1.2-1.5)：(1.05-1.1)；优选地，式(2)n-boc-l-脯氨醇、碱金属、卤化苄的摩尔比为1：1.25：1.05。
步骤(1)中，所述有机溶剂的用量为式(2)n-boc-l-脯氨醇的8-12倍体积；优选地，为式(2)n-boc-l-脯氨醇的10倍体积。
(2)式(4)n-boc-val-pro-obn(二肽)的合成
在第一有机溶剂中，式(3)n-boc-pro-obn和三氟乙酸进行boc保护基脱除反应，脱除氨基的boc保护基；反应完成后，再加入第二有机溶剂、n-boc-l-缬氨酸、缩合剂、碱、添加剂、进行酰胺缩合反应，得到式(4)n-boc-val-pro-obn；
步骤(2)中，所述第一有机溶剂选自卤代烃、脂肪烃、芳香烃、醚类溶剂等中的一种或多种；其中，所述卤代烃选自二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷、四氯化碳等，所述脂肪烃选自乙腈、乙酸乙酯等，所述芳香烃选自甲苯、二甲苯、各种卤代苯等，所述醚类溶剂选自四氢呋喃、二氧六环等；优选地，所述第一有机溶剂为二氯甲烷。
步骤(2)中，所述第二有机溶剂选自卤代烃、脂肪烃、芳香烃、极性溶剂、醚类溶剂等中的一种或多种；其中，所述卤代烃选自二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷、四氯化碳等，所述脂肪烃选自乙腈、乙酸乙酯等，所述芳香烃选自甲苯，二甲苯、各种卤代苯等，所述极性溶剂选自n,n-二甲基甲酰胺，n,n-二乙基甲酰胺等，醚类溶剂选自四氢呋喃、二氧六环等；优选地，所述第二有机溶剂为dmf。
步骤(2)中，在酰胺缩合反应中，所述碱选自三乙胺、n,n-二异丙基乙胺、n-甲基吗啡啉、哌啶、二乙胺等中的一种或多种；优选地，dipea。
步骤(2)中，在酰胺缩合反应中，所述缩合剂选自depc、edci、hatu、dppa、pybop、hbtu等中的一种或多种；优选地，edci。
步骤(2)中，所述添加剂选自dmap、4-ppy、hobt、hoat、hosu；优选地，为hobt。
步骤(2)中，所述boc保护基脱除反应的温度为0℃-25℃；优选地，为25℃(室温)。
步骤(2)中，所述boc保护基脱除反应的时间为2-4小时；优选地，为3小时。
步骤(2)中，所述酰胺缩合反应的温度为-5℃-10℃；优选地，为0℃。
步骤(2)中，所述酰胺缩合反应的时间为20-60分钟；优选地，为45分钟。
步骤(2)中，在boc保护基脱除反应中，所述式(3)n-boc-pro-obn、三氟乙酸的摩尔比为1：(8-12)；优选地，式(3)n-boc-pro-obn与三氟乙酸的摩尔比为1：10。
步骤(2)中，在酰胺缩合反应中，当boc保护基脱除反应中使用的式(3)化合物摩尔数为1时，所述碱、缩合剂、添加剂、n-boc-l-缬氨酸的摩尔数分别为(4.5-5.2)、(1.25-1.45)、(1.25-1.45)、(1.25-1.5)；优选地，所述碱、缩合剂、添加剂、n-boc-l-缬氨酸的摩尔数分别为5.0、1.3、1.3、1.3。
步骤(2)中，所述第一有机溶剂的用量为式(3)n-boc-pro-obn的4-7倍体积；优选地，为式(3)n-boc-pro-obn的5倍体积。
步骤(2)中，所述第二有机溶剂的用量为式(3)n-boc-pro-obn的8-12倍体积；优选地，为式(3)n-boc-pro-obn的10倍体积。
(3)式(6)化合物(tert-butyl(r)-3-(((s)-1-((s)-2-((benzyloxy)methyl)pyrrolidin-1-yl)-3
-methyl-1-oxobutan-2-yl)carbamoyl)octanoate)的合成
在第一有机溶剂中，式(4)n-boc-val-pro-obn和三氟乙酸进行boc保护基脱除反应，脱除二肽的氨基保护基；反应完成后，再加入第二有机溶剂、式(5)化合物、缩合剂、添加剂、碱进行酰胺缩合反应，得到式(6)化合物(三肽)；
步骤(3)中，所述第一有机溶剂选自卤代烃、脂肪烃、芳香烃、醚类溶剂等中的一种或多种；其中，所述卤代烃选自二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷、四氯化碳等，所述脂肪烃选自乙腈、乙酸乙酯等，所述芳香烃选自甲苯、二甲苯、各种卤代苯等，所述醚类溶剂选自四氢呋喃、二氧六环等；优选地，所述第一有机溶剂为二氯甲烷。
步骤(3)中，所述第二有机溶剂选自卤代烃、脂肪烃、芳香烃、醚类溶剂等中的一种或多种；其中，所述卤代烃选自二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷、四氯化碳等，所述脂肪烃选自乙腈、乙酸乙酯等，所述芳香烃选自甲苯，二甲苯、各种卤代苯等，所述醚类溶剂选自四氢呋喃、二氧六环等；优选地，所述第二有机溶剂为dmf。
步骤(3)中，在酰胺缩合反应中，所述碱选自三乙胺、n,n-二异丙基乙胺、n-甲基吗啡啉、哌啶、二乙胺等中的一种或多种；优选地，dipea。
步骤(3)中，在酰胺缩合反应中，所述缩合剂为dcc、edci、hatu、dppa、pybop、hbtu等中的一种或多种；优选地，edci。
步骤(3)中，所述添加剂选自dmap、4-ppy、hobt、hoat、hosu；优选地，为hobt。
步骤(3)中，所述三氟乙酸可以由盐酸甲醇来替代。
步骤(3)中，所述boc保护基脱除反应的温度为0℃-25℃(室温)；优选地，为25℃(室温)。
步骤(3)中，所述boc保护基脱除反应的时间为2-6小时；优选地，为3小时。
步骤(3)中，所述酰胺缩合反应的温度为-5℃-10℃；优选地，为0℃。
步骤(3)中，所述酰胺缩合反应的时间为2-6小时；优选地，为4小时。
步骤(3)中，在boc保护基脱除反应中，所述式(4)n-boc-val-pro-obn、三氟乙酸的摩尔比为1：(8-12)；优选地，式(4)n-boc-val-pro-obn与三氟乙酸的摩尔比为1：10。
步骤(3)中，在酰胺缩合反应中，当boc保护基脱除反应中使用的式(4)n-boc-val-pro-obn的摩尔数为1时，所述碱、缩合剂、添加剂、式(5)化合物的摩尔数分别为(4.5-5.2)、(1.15-1.30)、(1.15-1.30)、(1.15-1.35)；优选地，所述碱、缩合剂、添加剂、式(5)化合物的摩尔数分别为5.0、1.2、1.2、1.2。
步骤(3)中，所述第一有机溶剂的用量为式(4)n-boc-val-pro-obn的4-7倍体积；优选地，为式(4)n-boc-val-pro-obn的5倍体积。
步骤(3)中，所述第二有机溶剂的用量为式(4)n-boc-val-pro-obn的8-12倍体积；优选地，为式(4)n-boc-val-pro-obn的10倍体积。
(4)化合物(7)化合物(r)-n4-(benzyloxy)-n1-((s)-1-((s)-2-((benzyloxy)methyl)pyrrolidin-1-yl)-3-methyl-1-oxobutan-2-yl)-2-pentylsuccinamide的合成
在第一有机溶剂中，式(6)化合物和三氟乙酸进行叔丁酯水解反应，反应完成后，再加入第二有机溶剂、苄氧基胺盐酸盐、缩合剂、碱进行酰胺缩合反应，得到式(7)化合物(四肽)。
步骤(4)中，所述第一有机溶剂选自卤代烃、脂肪烃、芳香烃、醚类溶剂等中的一种或多种；其中，所述卤代烃选自二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷、四氯化碳等，所述脂肪烃选自乙腈、乙酸乙酯等，所述芳香烃选自甲苯、二甲苯、各种卤代苯等，所述醚类溶剂选自四氢呋喃、二氧六环等；优选地，所述第一有机溶剂为二氯甲烷。
步骤(4)中，所述第二有机溶剂选自卤代烃、脂肪烃、芳香烃、醚类溶剂等中的一种或多种；其中，所述卤代烃选自二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷、四氯化碳等，所述脂肪烃选自乙腈、乙酸乙酯等，所述芳香烃选自甲苯、二甲苯、各种卤代苯等，所述醚类溶剂选自四氢呋喃、二氧六环等；优选地，所述第二有机溶剂为dmf。
步骤(4)中，在酰胺缩合反应中，所述碱选自三乙胺、n,n-二异丙基乙胺、n-甲基吗啡啉、哌啶、二乙胺等中的一种或多种；优选地，dipea。
步骤(4)中，在酰胺缩合反应中，所述缩合剂为edci、hbtu、hatu、dppa、pybop、hbtu等中的一种或多种；优选地，hatu。
步骤(4)中，所述苄氧基胺盐酸盐为bnonh2·hcl。
步骤(4)中，所述叔丁酯水解反应的温度为0℃-25℃(室温)；优选地，为25℃(室温)。
步骤(4)中，所述叔丁酯水解反应的时间为1-5小时；优选地，为2小时。
步骤(4)中，所述酰胺缩合反应的温度为-5℃-10℃；优选地，为0℃。
步骤(4)中，所述酰胺缩合反应的时间为1-5小时；优选地，为3小时。
步骤(4)中，在叔丁酯水解反应中，所述式(6)化合物、三氟乙酸的摩尔比为1：(3-6)；优选地，为1：5。
步骤(4)中，在酰胺缩合反应中，当叔丁酯水解反应中使用的式(6)化合物摩尔数为1时，所述碱、缩合剂、苄氧基胺盐酸盐的摩尔数分别为(4.5-5.2)、(1.35-1.60)、(1.75-2.25)；优选地，所述碱、缩合剂、苄氧基胺盐酸盐的摩尔数分别为5.0、1.5、2.0。
步骤(4)中，所述第一有机溶剂的用量为式(6)化合物的4-7倍体积；优选地，为化合物(6)的5倍体积。
步骤(4)中，所述第二有机溶剂的用量为式(6)化合物的8-12倍体积；优选地，为化合物(6)的10倍体积。
(5)式(1)所示的放线酰胺素的合成
在有机溶剂中，在催化剂的作用下，式(7)化合物和氢气进行苄基脱除反应，得到所述式(1)所示的放线酰胺素。
步骤(5)中，所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇等中的一种或多种；优选地，为甲醇。
步骤(5)中，所述苄基脱除反应的温度为15℃-35℃；优选地，为25℃(室温)。
步骤(5)中，所述苄基脱除反应的时间为2-6小时；优选地，为3小时。
步骤(5)中，所述催化剂选自氢氧化钯碳(pd(oh)2/c)、钯碳、兰尼镍、pt/c、pt、pto2、rd/c、rhcl(pph3)3等中的一种或多种，优选地，为pd(oh)2/c。
步骤(5)中，所述苄基脱除反应中，所述式(7)化合物、催化剂的质量比为1：(0.05-0.2)；优选地，所述式(7)化合物、催化剂的质量比为1：0.1。
步骤(5)中，所述有机溶剂的用量为式(7)化合物的8-12倍体积；优选地，为化合物(7)的10倍体积。
步骤(5)中，优选在氢气压2-15atm条件下进行，优选为5atm。
本发明还提出了一种式(1)所示的放线酰胺素的纯化方法，通过用有机溶剂进行重结晶的方法进行纯化，所述方法包括以下步骤：将上述步骤(5)制备得到的放线酰胺素加入混合溶剂5-10ml，加热至60-70℃，搅拌15-30分钟。冷却至室温，析出白色固体，过滤得到产物。重结晶后产物的纯度为95％-98.9％。
其中，所述重结晶的有机溶剂选自异丙醇/正庚烷、乙醇/正己烷、异丙醇/正己烷、乙酸乙酯/石油醚、乙酸乙酯/正己烷等；优选地，为乙醇/正己烷、异丙醇/正己烷；进一步优选地，所述异丙醇：正己烷(体积比)＝1：(7.5-15)；进一步优选地，异丙醇：正己烷(体积比)＝1：10。
在一个具体实施方式中，本发明放线酰胺素的制备方法，如下路线(1’)所示：
本发明有益效果在于，(1)本发明方法采用苄基对n-boc-脯氨醇的羟基进行保护，避免了后续缩合反应中羟基的干扰，减少副反应的同时，提高了收率；(2)本发明主要使用edci作为缩合剂，原料便宜，成本低，并且反应副产物很容易通过水洗除去，产物容易纯化，并且消旋程度低。(3)本发明使用混合有机溶剂，如异丙醇-正己烷混合溶剂作为溶剂对终产物放线酰胺素进行重结晶纯化，能在一次重结晶之后得到高纯度的产品，重结晶溶剂价廉易得，且能最大限度减少产物的损失。(4)本发明制备方法成本低廉，操作简便，能高效，立体选择性地制备得到放线酰胺素。
具体实施方式
结合以下具体实施例，对本发明作进一步的详细说明，实施本发明的过程、条件、试剂、实验方法等，除以下专门提及的内容之外，均为本领域的普遍知识和公知常识，本发明没有特别限制内容。
实施例1
化合物3的合成
称取n-boc-l-脯氨醇(6.03g,30mmol)溶于干燥dmf(60ml)，氮气保护，冰水浴冷却。一次性加入nah(1.5g,37.5mmol)，搅拌30min。然后，称取bnbr(5.36g,31.5mmol)溶于干燥dmf(17.5ml)，于0℃在15min内滴加入上述反应液中，加完使体系自然升至室温搅拌过夜。加水淬灭反应，乙酸乙酯萃取(2×100ml)，有机相分别用水(80ml)、饱和食盐水(60ml)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到浅黄色油状粗产物，粗产物通过柱层析分离纯化，得到无色油状化合物3(7.94g,91％)。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.39–7.17(m,5h),4.52(s,2h),3.96(d,j＝47.6hz,1h),3.61(d,j＝20.8hz,1h),3.39(d,j＝49.2hz,3h),2.02–1.74(m,4h),1.40(d,j＝20.1hz,9h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ128.35,127.47,77.42,77.11,76.79,73.17,56.52,28.52.
化合物4的合成
称取化合物3(7.28g,25mmol)溶于二氯甲烷(40ml)，再加入tfa(28.5g,250mmol)，于室温搅拌，直至tlc显示反应完成。减压旋除二氯甲烷以及大部分tfa，将得到的残余物溶于dmf(80ml)，再依次加入n-boc-l-缬氨酸(7.05g,32.5mmol)，dipea(16.13g,125mmol)，氮气保护，冰水浴冷却。然后，称取edci(6.25g,32.5mmol)、hobt(4.39g,32.5mmol)一次性地加入上述反应液中，加完使体系维持冰水浴反应3小时。加水淬灭反应，乙酸乙酯萃取(2×100ml)，有机相分别用水(80ml)、饱和食盐水(60ml)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到固体的粗产品，粗产物通过柱层析分离纯化(乙酸乙酯:石油醚＝1:10)，得到黄色油状化合物4(8.29g,85％)。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.35–7.09(m,5h),5.21(t,j＝9.0hz,1h),4.47–4.37(m,2h),4.26(dd,j＝3.5,1.6hz,1h),4.19(dd,j＝9.1,6.2hz,1h),3.59(t,j＝8.3hz,1h),3.56–3.46(m,2h),3.41(ddd,j＝10.0,9.6,6.0hz,1h),1.88(dddd,j＝23.0,18.1,12.9,7.4hz,5h),1.37(d,j＝9.3hz,9h),0.88(d,j＝6.8hz,3h),0.82(d,j＝6.8hz,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ170.00,154.89,137.42,127.38,127.31,126.49,126.41,78.31,76.36,76.04,75.72,72.16,69.10,55.95,55.63,46.60,31.69,30.59,27.62,27.35,26.30,23.47,20.59,18.38,16.41.
化合物6的合成
将化合物4(7.02g,18mmol)溶于二氯甲烷(40ml)，再加入tfa(20.5g,180mmol)，于室温搅拌，直至tlc显示反应完成。减压旋除二氯甲烷以及大部分tfa，将得到的残余物溶于dmf(80ml)，再依次加入化合物5(5.27g,21.6mmol)，dipea(11.61g,90mmol)。然后，氮气保护，冰水浴冷却。接着，称取edci(4.15g,21.6mmol)、hobt(2.9g,21.6mmol)一次性加入上述反应液中，加完使体系维持冰水浴反应3-5小时。加水淬灭反应，乙酸乙酯萃取(2×100ml)，有机相分别用水(80ml)、饱和食盐水(60ml)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到化合物6的粗产品，粗产物通过柱层析分离纯化(乙酸乙酯:石油醚＝1:25)，得到无色油状化合物6(6.69g,72％)。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.40–7.19(m,5h),6.43(d,j＝9.0hz,1h),4.61(dd,j＝9.0,6.6hz,1h),4.57–4.44(m,2h),4.31(td,j＝9.0,3.4hz,1h),3.71(dt,j＝10.2,7.0hz,1h),3.65–3.54(m,2h),3.54–3.44(m,1h),2.70–2.52(m,2h),2.33(t,j＝8.8hz,1h),2.11–1.81(m,6h),1.60(dd,j＝9.2,4.8hz,1h),1.47–1.33(m,10h),1.29–1.21(m,6h),0.94(t,j＝6.8hz,3h),0.92–0.88(m,3h),0.83(dt,j＝13.8,6.7hz,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ174.54,174.05,171.60,170.66,170.51,138.42,128.36,128.30,127.62,127.59,127.49,127.40,80.48,77.41,77.09,76.77,73.39,73.17,70.91,70.06,56.92,56.66,55.47,55.39,47.67,45.69,43.04,43.01,38.01,32.81,32.39,32.34,31.64,31.60,28.57,28.06,27.33,26.87,24.46,22.43,21.60,19.40,19.14,18.16,17.60,14.18,13.93,13.91.
化合物7的合成
将化合物6(5.16g,10mmol)溶于二氯甲烷(30ml)，再加入tfa(5.7g,50mmol)，于室温搅拌，直至tlc显示反应完成。减压旋除二氯甲烷以及大部分tfa，将得到的残余物溶于dmf(60ml)，再依次加入hatu(5.7g,15mmol)，dipea(6.45g,50mmol)。然后，氮气保护，冰水浴冷却。接着，称取苄氧基胺盐酸盐(1.2g,20mmol)加入上述反应液中，加完使体系维持冰水浴反应3-5小时。加水淬灭反应，乙酸乙酯萃取(2×80ml)，有机相分别用水(50ml)、饱和食盐水(50ml)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到化合物7的粗产品，粗产物通过柱层析分离纯化(乙酸乙酯:石油醚＝1:5)，得到无色油状化合物7(4.41g,78％)。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.46–7.17(m,10h),6.64(d,j＝8.8hz,1h),4.87(s,2h),4.55(dd,j＝17.2,9.8hz,1h),4.53–4.42(m,2h),4.30(d,j＝6.7hz,1h),3.68(d,j＝7.8hz,1h),3.58(ddd,j＝12.3,9.3,4.4hz,2h),3.52–3.43(m,1h),2.74(s,1h),2.44–2.30(m,1h),2.28–2.14(m,1h),1.98(s,3h),1.99–1.79(m,3h),1.67–1.47(m,1h),1.40(dd,j＝9.8,4.5hz,1h),1.27–1.19(m,6h),0.96–0.91(m,3h),0.89(d,j＝6.8hz,3h),0.87–0.73(m,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ174.79,162.58,138.38,128.52,128.41,128.33,127.53,127.42,78.11,77.38,77.07,76.75,73.36,73.20,70.81,70.02,60.40,56.97,56.76,55.73,47.71,45.68,43.41,36.49,35.90,32.61,31.61,31.44,31.36,29.69,28.54,27.32,26.79,24.49,22.43,21.56,21.04,19.40,19.15,18.20,17.68,14.19,13.95.
放线酰胺素(1)的合成
将化合物7(4.52g,8mmol)溶于甲醇(45ml)，再将pd(oh)2/c(0.45g)加入反应液中，换气，通入氢气，于室温反应3-5小时，直至tlc显示反应完成。过滤，滤液减压浓缩得到放线酰胺素(1)的固体粗产品。粗产物通过重结晶(正己烷：异丙醇＝10:1)，得到白色固体状放线酰胺素(1)(2.19g,71％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.32(s,1h),8.65(s,1h),7.90(dd,j＝62.2,8.0hz,1h),4.80(d,j＝46.2hz,1h),4.32(dt,j＝16.2,7.8hz,1h),3.95(s,1h),3.68(s,1h),3.47(d,j＝11.1hz,1h),3.34–3.06(m,2h),2.71(s,1h),2.15(dd,j＝14.1,6.3hz,1h),2.06–1.65(m,6h),1.25(dd,j＝59.5,23.9hz,8h),1.00–0.65(m,9h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ173.97,170.21,167.58,61.49,60.95,58.39,55.88,55.26,46.87,45.33,41.11,40.10,39.89,39.69,39.48,39.27,39.06,38.85,35.04,31.76,31.16,29.86,27.43,26.48,25.92,23.53,21.94,20.78,19.00,18.75,18.59,18.51,13.72.
实施例2
化合物3的合成
称取n-boc-l-脯氨醇(3.02g,15mmol)溶于干燥dmf(30ml)，氮气保护，冰水浴冷却。一次性加入nah(0.9g,22.5mmol)，搅拌30min。然后，称取bnbr(2.81g,16.5mmol)溶于干燥dmf(7.5ml)，于0℃在15min内滴加入上述反应液中，加完使体系自然升至室温搅拌过夜。加水淬灭反应，乙酸乙酯萃取(2×50ml)，有机相分别用水(30ml)、饱和食盐水(30ml)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到浅黄色油状粗产物，粗产物通过柱层析分离纯化，得到无色油状化合物3(3.80g,87％)。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.39–7.17(m,5h),4.52(s,2h),3.96(d,j＝47.6hz,1h),3.61(d,j＝20.8hz,1h),3.39(d,j＝49.2hz,3h),2.02–1.74(m,4h),1.40(d,j＝20.1hz,9h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ128.35,127.47,77.42,77.11,76.79,73.17,56.52,28.52.
化合物4的合成
称取化合物3(3.49g,12mmol)溶于二氯甲烷(20ml)，再加入tfa(15.5g,132mmol)，于室温搅拌，直至tlc显示反应完成。减压旋除二氯甲烷以及大部分tfa，将得到的残余物溶于dmf(40ml)，再依次加入n-boc-l-缬氨酸(3.91g,18mmol)，dipea(7.74g,60mmol)，氮气保护，冰水浴冷却。然后，称取edci(2.88g,15mmol)、hobt(2.03g,15mmol)加入上述反应液中，加完使体系维持冰水浴反应3小时。加水淬灭反应，乙酸乙酯萃取(2×60ml)，有机相分别用水(40ml)、饱和碳酸氢钠水溶液(50ml)以及饱和食盐水(40ml)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到固体的粗产品，粗产物通过柱层析分离纯化((乙酸乙酯:石油醚＝1:10)，得到黄色油状化合物4(3.79g,81％)。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.35–7.09(m,5h),5.21(t,j＝9.0hz,1h),4.47–4.37(m,2h),4.26(dd,j＝3.5,1.6hz,1h),4.19(dd,j＝9.1,6.2hz,1h),3.59(t,j＝8.3hz,1h),3.56–3.46(m,2h),3.41(ddd,j＝10.0,9.6,6.0hz,1h),1.88(dddd,j＝23.0,18.1,12.9,7.4hz,5h),1.37(d,j＝9.3hz,9h),0.88(d,j＝6.8hz,3h),0.82(d,j＝6.8hz,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ170.00,154.89,137.42,127.38,127.31,126.49,126.41,78.31,76.36,76.04,75.72,72.16,69.10,55.95,55.63,46.60,31.69,30.59,27.62,27.35,26.30,23.47,20.59,18.38,16.41.
化合物6的合成
将化合物4(3.12g,8mmol)溶于二氯甲烷(25ml)，再加入tfa(9.12g,80mmol)，于室温搅拌，直至tlc显示反应完成。减压旋除二氯甲烷以及大部分tfa，将得到的残余物溶于dmf(35ml)，再依次加入化合物5(2.64g,10.8mmol)，et3n(4.04g,40mmol)。然后，氮气保护，冰水浴冷却。接着，称取edci(1.99g,10.4mmol)、hobt(1.41g,10.4mmol)加入上述反应液中，加完使体系维持冰水浴反应3-5小时。加水淬灭反应，乙酸乙酯萃取(2×60ml)，有机相分别用水(40ml)、饱和碳酸氢钠水溶液(50ml)以及饱和食盐水(40ml)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到化合物6的粗产品，粗产物通过柱层析分离纯化(乙酸乙酯:石油醚＝1:25)，得到无色油状化合物6(2.68g,65％)。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.40–7.19(m,5h),6.43(d,j＝9.0hz,1h),4.61(dd,j＝9.0,6.6hz,1h),4.57–4.44(m,2h),4.31(td,j＝9.0,3.4hz,1h),3.71(dt,j＝10.2,7.0hz,1h),3.65–3.54(m,2h),3.54–3.44(m,1h),2.70–2.52(m,2h),2.33(t,j＝8.8hz,1h),2.11–1.81(m,6h),1.60(dd,j＝9.2,4.8hz,1h),1.47–1.33(m,10h),1.29–1.21(m,6h),0.94(t,j＝6.8hz,3h),0.92–0.88(m,3h),0.83(dt,j＝13.8,6.7hz,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ174.54,174.05,171.60,170.66,170.51,138.42,128.36,128.30,127.62,127.59,127.49,127.40,80.48,77.41,77.09,76.77,73.39,73.17,70.91,70.06,56.92,56.66,55.47,55.39,47.67,45.69,43.04,43.01,38.01,32.81,32.39,32.34,31.64,31.60,28.57,28.06,27.33,26.87,24.46,22.43,21.60,19.40,19.14,18.16,17.60,14.18,13.93,13.91.
化合物7的合成
将化合物6(2.06g,4mmol)溶于二氯甲烷(20ml)，再加入tfa(2.28g,20mmol)，于室温搅拌，直至tlc显示反应完成。减压旋除二氯甲烷以及大部分tfa，将得到的残余物溶于dmf(25ml)，再依次加入hatu(2.28g,6mmol)，nmm(2.02g,20mmol)。然后，氮气保护，冰水浴冷却。接着，称取苄氧基胺盐酸盐(1.12g,7mmol)加入上述反应液中，加完使体系维持冰水浴反应3-5小时。加水淬灭反应，乙酸乙酯萃取(2×50ml)，有机相分别用水(30ml)、饱和碳酸氢钠水溶液(30ml)以及饱和食盐水(20ml)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到化合物7的粗产品，粗产物通过柱层析分离纯化(乙酸乙酯:石油醚＝1:5)，得到无色油状化合物7(1.79g,79％)。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.46–7.17(m,10h),6.64(d,j＝8.8hz,1h),4.87(s,2h),4.55(dd,j＝17.2,9.8hz,1h),4.53–4.42(m,2h),4.30(d,j＝6.7hz,1h),3.68(d,j＝7.8hz,1h),3.58(ddd,j＝12.3,9.3,4.4hz,2h),3.52–3.43(m,1h),2.74(s,1h),2.44–2.30(m,1h),2.28–2.14(m,1h),1.98(s,3h),1.99–1.79(m,3h),1.67–1.47(m,1h),1.40(dd,j＝9.8,4.5hz,1h),1.27–1.19(m,6h),0.96–0.91(m,3h),0.89(d,j＝6.8hz,3h),0.87–0.73(m,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ174.79,162.58,138.38,128.52,128.41,128.33,127.53,127.42,78.11,77.38,77.07,76.75,73.36,73.20,70.81,70.02,60.40,56.97,56.76,55.73,47.71,45.68,43.41,36.49,35.90,32.61,31.61,31.44,31.36,29.69,28.54,27.32,26.79,24.49,22.43,21.56,21.04,19.40,19.15,18.20,17.68,14.19,13.95.
放线酰胺素(1)的合成
将化合物7(1.70g,3mmol)溶于甲醇(20ml)，再将pd(oh)2/c(0.26g)加入反应液中，换气，通入氢气，于室温反应3-5小时，直至tlc显示反应完成。过滤，滤液减压浓缩得到放线酰胺素(1)的固体粗产品。粗产物通过重结晶(正己烷：异丙醇＝10:1)，得到白色固体状放线酰胺素(1)(0.79g,68％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.32(s,1h),8.65(s,1h),7.90(dd,j＝62.2,8.0hz,1h),4.80(d,j＝46.2hz,1h),4.32(dt,j＝16.2,7.8hz,1h),3.95(s,1h),3.68(s,1h),3.47(d,j＝11.1hz,1h),3.34–3.06(m,2h),2.71(s,1h),2.15(dd,j＝14.1,6.3hz,1h),2.06–1.65(m,6h),1.25(dd,j＝59.5,23.9hz,8h),1.00–0.65(m,9h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ173.97,170.21,167.58,61.49,60.95,58.39,55.88,55.26,46.87,45.33,41.11,40.10,39.89,39.69,39.48,39.27,39.06,38.85,35.04,31.76,31.16,29.86,27.43,26.48,25.92,23.53,21.94,20.78,19.00,18.75,18.59,18.51,13.
实施例3
化合物3的合成
称取n-boc-l-脯氨醇(4.03g,20mmol)溶于干燥dmf(40ml)，氮气保护，冰水浴冷却。一次性加入nah(1.08g,27mmol)，搅拌30min。然后，称取bnbr(3.64g,21.4mmol)溶于干燥dmf(7.5ml)，于0℃在15min内滴加入上述反应液中，加完使体系自然升至室温搅拌过夜。加水淬灭反应，乙酸乙酯萃取(2×50ml)，有机相分别用水(30ml)、饱和食盐水(30ml)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到浅黄色油状粗产物，粗产物通过柱层析分离纯化，得到无色油状化合物3(4.54g,78％)。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.39–7.17(m,5h),4.52(s,2h),3.96(d,j＝47.6hz,1h),3.61(d,j＝20.8hz,1h),3.39(d,j＝49.2hz,3h),2.02–1.74(m,4h),1.40(d,j＝20.1hz,9h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ128.35,127.47,77.42,77.11,76.79,73.17,56.52,28.52.
化合物4的合成
称取化合物3(4.37g,15mmol)溶于二氯甲烷(30ml)，再加入tfa(13.7g,120mmol)，于室温搅拌，直至tlc显示反应完成。减压旋除二氯甲烷以及大部分tfa，将得到的残余物溶于dmf(40ml)，再依次加入n-boc-l-缬氨酸(4.40g,20.3mmol)，dipea(9.50g,73.5mmol)，氮气保护，冰水浴冷却。然后，称取edci(4.03g,21mmol)、hobt(2.84g,21mmol)加入上述反应液中，加完使体系维持冰水浴反应3小时。加水淬灭反应，乙酸乙酯萃取(2×60ml)，有机相分别用水(40ml)、饱和碳酸氢钠水溶液(50ml)以及饱和食盐水(40ml)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得到固体的粗产品，粗产物通过柱层析分离纯化((乙酸乙酯:石油醚＝1:10)，得到黄色油状化合物4(4.98g,85％)。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.35–7.09(m,5h),5.21(t,j＝9.0hz,1h),4.47–4.37(m,2h),4.26(dd,j＝3.5,1.6hz,1h),4.19(dd,j＝9.1,6.2hz,1h),3.59(t,j＝8.3hz,1h),3.56–3.46(m,2h),3.41(ddd,j＝10.0,9.6,6.0hz,1h),1.88(dddd,j＝23.0,18.1,12.9,7.4hz,5h),1.37(d,j＝9.3hz,9h),0.88(d,j＝6.8hz,3h),0.82(d,j＝6.8hz,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ170.00,154.89,137.42,127.38,127.31,126.49,126.41,78.31,76.36,76.04,75.72,72.16,69.10,55.95,55.63,46.60,31.69,30.59,27.62,27.35,26.30,23.47,20.59,18.38,16.41.
化合物6的合成
将化合物4(3.9g,10mmol)溶于二氯甲烷(30ml)，再加入tfa(9.12g,80mmol)，于室温搅拌，直至tlc显示反应完成。减压旋除二氯甲烷以及大部分tfa，将得到的残余物溶于dmf(35ml)，再依次加入化合物5(2.93g,12mmol)，et3n(4.96g,49mmol)。然后，氮气保护，冰水浴冷却。接着，称取edci(2.40g,12.5mmol)、hobt(1.69g,12.5mmol)加入上述反应液中，加完使体系维持冰水浴反应3-5小时。加水淬灭反应，乙酸乙酯萃取(2×60ml)，有机相分别用水(40ml)、饱和碳酸氢钠水溶液(50ml)以及饱和食盐水(40ml)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到化合物6的粗产品，粗产物通过柱层析分离纯化(乙酸乙酯:石油醚＝1:25)，得到无色油状化合物6(3.61g,70％)。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.40–7.19(m,5h),6.43(d,j＝9.0hz,1h),4.61(dd,j＝9.0,6.6hz,1h),4.57–4.44(m,2h),4.31(td,j＝9.0,3.4hz,1h),3.71(dt,j＝10.2,7.0hz,1h),3.65–3.54(m,2h),3.54–3.44(m,1h),2.70–2.52(m,2h),2.33(t,j＝8.8hz,1h),2.11–1.81(m,6h),1.60(dd,j＝9.2,4.8hz,1h),1.47–1.33(m,10h),1.29–1.21(m,6h),0.94(t,j＝6.8hz,3h),0.92–0.88(m,3h),0.83(dt,j＝13.8,6.7hz,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ174.54,174.05,171.60,170.66,170.51,138.42,128.36,128.30,127.62,127.59,127.49,127.40,80.48,77.41,77.09,76.77,73.39,73.17,70.91,70.06,56.92,56.66,55.47,55.39,47.67,45.69,43.04,43.01,38.01,32.81,32.39,32.34,31.64,31.60,28.57,28.06,27.33,26.87,24.46,22.43,21.60,19.40,19.14,18.16,17.60,14.18,13.93,13.91.
化合物7的合成
将化合物6(2.58g,5mmol)溶于二氯甲烷(20ml)，再加入tfa(2.57g,22.5mmol)，于室温搅拌，直至tlc显示反应完成。减压旋除二氯甲烷以及大部分tfa，将得到的残余物溶于dmf(25ml)，再依次加入hatu(3.04g,8mmol)，nmm(2.48g,24.5mmol)。然后，氮气保护，冰水浴冷却。接着，称取苄氧基胺盐酸盐(1.12g,7mmol)加入上述反应液中，加完使体系维持冰水浴反应3-5小时。加水淬灭反应，乙酸乙酯萃取(2×50ml)，有机相分别用水(30ml)、饱和碳酸氢钠水溶液(30ml)以及饱和食盐水(20ml)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到化合物7的粗产品，粗产物通过柱层析分离纯化(乙酸乙酯:石油醚＝1:5)，得到无色油状化合物7(1.78g,75％)。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.46–7.17(m,10h),6.64(d,j＝8.8hz,1h),4.87(s,2h),4.55(dd,j＝17.2,9.8hz,1h),4.53–4.42(m,2h),4.30(d,j＝6.7hz,1h),3.68(d,j＝7.8hz,1h),3.58(ddd,j＝12.3,9.3,4.4hz,2h),3.52–3.43(m,1h),2.74(s,1h),2.44–2.30(m,1h),2.28–2.14(m,1h),1.98(s,3h),1.99–1.79(m,3h),1.67–1.47(m,1h),1.40(dd,j＝9.8,4.5hz,1h),1.27–1.19(m,6h),0.96–0.91(m,3h),0.89(d,j＝6.8hz,3h),0.87–0.73(m,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ174.79,162.58,138.38,128.52,128.41,128.33,127.53,127.42,78.11,77.38,77.07,76.75,73.36,73.20,70.81,70.02,60.40,56.97,56.76,55.73,47.71,45.68,43.41,36.49,35.90,32.61,31.61,31.44,31.36,29.69,28.54,27.32,26.79,24.49,22.43,21.56,21.04,19.40,19.15,18.20,17.68,14.19,13.95.
放线酰胺素(1)的合成
将化合物7(1.78g,3.7mmol)溶于甲醇(20ml)，再将pd(oh)2/c(0.2266g)加入反应液中，换气，通入氢气，于室温反应3-5小时，直至tlc显示反应完成。过滤，滤液减压浓缩得到放线酰胺素(1)的固体粗产品。粗产物通过重结晶(正己烷：异丙醇＝10:1)，得到白色固体状放线酰胺素(1)(1.15g,80％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.32(s,1h),8.65(s,1h),7.90(dd,j＝62.2,8.0hz,1h),4.80(d,j＝46.2hz,1h),4.32(dt,j＝16.2,7.8hz,1h),3.95(s,1h),3.68(s,1h),3.47(d,j＝11.1hz,1h),3.34–3.06(m,2h),2.71(s,1h),2.15(dd,j＝14.1,6.3hz,1h),2.06–1.65(m,6h),1.25(dd,j＝59.5,23.9hz,8h),1.00–0.65(m,9h).13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ173.97,170.21,167.58,61.49,60.95,58.39,55.88,55.26,46.87,45.33,41.11,40.10,39.89,39.69,39.48,39.27,39.06,38.85,35.04,31.76,31.16,29.86,27.43,26.48,25.92,23.53,21.94,20.78,19.00,18.75,18.59,18.51,13.
本发明的保护内容不局限于以上实施例。在不背离发明构思的精神和范围下，本领域技术人员能够想到的变化和优点都被包括在本发明中，并且以所附的权利要求书为保护范围。