一种能促进毛脉酸模生长的内生真菌及其应用的制作方法

本发明涉及毛脉酸模生长领域，特别涉及一株能促进毛脉酸模生长的内生真菌及其应用。

背景技术：

毛脉酸模为廖科酸模属多年生草本植物，在民间以根入药，对淋病、上呼吸道感染、癣病和疮毒有确切疗效，其根中含有酸模素、大黄酚、大黄素、白藜芦醇、白藜芦醇苷、大黄素甲醚等多种有效成分，具有重要的应用和研究价值。内生真菌是指植物在其生命周期的各个时段体内所包含的定植在宿主活体组织中并且不使宿主产生任何病症的真菌。植物界中的所有植物几乎都含有内生真菌。在长期的互作过程中，内生真菌和植物形成互利共生的关系，植物为真菌提供存在的环境和营养物质，内生真菌产生植物激素促进植物生长和组织分化，还可以通过制造营养素和与病原菌竞争来保护植物。本实验研究内生真菌对毛脉酸模的作用，获得有促生作用的内生真菌，为毛脉酸模栽培技术的研究提供参考，填补了内生真菌对毛脉酸模生长研究的空白，为内生真菌的应用与开发提供借鉴。

技术实现要素：

为解决上述现有技术，存在的问题，本发明的目的在于提供一种能促进毛脉酸模生长的内生真菌及其应用，填补了内生真菌对毛脉酸模生长研究的空白，为内生真菌的应用与开发提供借鉴。

为达到上述目的，本发明的技术方案为：

一种毛脉酸模内生真菌，经微生物分类学鉴定为小尾孢属cercosporellasacc，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为cgmccno.13196，保藏日期为2016年12月07日，所述的毛脉酸模内生真菌是从毛脉酸模活体中采用内生真菌分离纯化技术分离获得的。

进一步的，所述毛脉酸模内生真菌显微形态为：分生孢子梗无色，细长，分生孢子无色，几个细胞，长圆形；

进一步的，所述毛脉酸模内生真菌在pda培养基上28℃培养，两周后，得到细小的白色菌落，菌落正面白色，中央隆起或稍有皱褶，背面酒红色。

进一步的，所述毛脉酸模内生真菌为黑龙江中医药大学药用植物园栽培的毛脉酸模根中得到的菌株。

上述毛脉酸模内生真菌的分离方法，具体步骤如下：

步骤一、用自来水冲洗采集到的新鲜毛脉酸模叶、茎、根，除去表面的泥土和灰尘后，用去离子水洗3次；

步骤二、用无菌滤纸吸干表面水分，进行表面消毒后，无菌滤纸吸干残留水分；

步骤三、用消毒后的医用剪刀或枝剪分别将叶、茎、根切成根、茎长1cm，叶1cm²的组织块，分别从各个部位中各随机挑取12个组织块，每4个组织块为一组放在加有青霉素的pda培养基的培养皿中；

步骤四、培养4-8天，进一步纯化，得到内生真菌纯菌株；

步骤五、取毛脉酸模内生真菌菌种，在无菌条件下，用接种针挑取少量菌丝，接入已灭菌的pda固体培养基，于28℃活化培养2周；得到细小的白色菌落，菌落正面白色，中央隆起或稍有皱褶，背面酒红色。

进一步的，所述步骤二中，按以下程序进行表面消毒：叶：75％酒精浸泡3min—无菌水冲洗3次—10％的次氯酸钠浸泡4min—无菌水冲洗5次；茎：75％酒精浸泡3min—无菌水冲洗3次—10％的次氯酸钠浸泡8min—无菌水冲洗5次；根：75％酒精浸泡3min—无菌水冲洗3次—10％的次氯酸钠浸泡10min—无菌水冲洗5次。

进一步的，所述毛脉酸模内生真菌在促进毛脉酸模生长方面的应用。

进一步的，所述毛脉酸模内生真菌在制备促进毛脉酸模生长药剂方面的应用。

相对于现有技术，本发明的有益效果为：

本发明一种能促进毛脉酸模生长的内生真菌及其应用，促进了毛脉酸模的生长，实现了毛脉酸模生物量的增加，所述一种毛脉酸模内生真菌，经微生物分类学鉴定为小尾孢属cercosporellasacc，保藏编号为cgmccno.13196，保藏日期为2016年12月07日，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，所述的毛脉酸模内生真菌是从毛脉酸模活体中采用内生真菌分离纯化技术分离获得的。

通过无菌对照组和处理组的对比试验，结果表明，cercosporellasacc能促进毛脉酸模生长，共培养第25天，处理组的株高是对照组的108.16％，地上鲜重是对照组的148.87％，根鲜重是对照组的256.18％，地上干重是对照组的132.96％，根干重是对照组的216.72％。内生真菌能显著促进毛脉酸模的生长。

附图说明

图1本发明的毛脉酸模内生真菌在培养基上的形态图，其中a为正面，b为反面。

图2本发明的毛脉酸模内生真菌与毛脉酸模无菌苗共培养25天后对照组与处理组的对比图。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施方式对本发明技术方案做进一步详细描述：

如图1-2所示，一种毛脉酸模内生真菌，经微生物分类学鉴定为小尾孢属cercosporellasacc，保藏编号为cgmccno.13196，保藏日期为2016年12月07日，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，所述的毛脉酸模内生真菌是从毛脉酸模活体中采用内生真菌分离纯化技术分离获得的。

所述毛脉酸模内生真菌显微形态为：分生孢子梗无色，细长，分生孢子无色，几个细胞，长圆形；所述毛脉酸模内生真菌在pda培养基上28℃培养，两周后，得到细小的白色菌落，菌落正面白色，中央隆起或稍有皱褶，背面酒红色。

本发明的毛脉酸模内生真菌为黑龙江中医药大学药用植物园栽培的毛脉酸模根中得到的菌株。本发明的毛脉酸模内生真菌按以下步骤分离获得：自来水冲洗采集到的新鲜毛脉酸模叶、茎、根，除去表面的泥土和灰尘后，用去离子水洗3次。用无菌滤纸吸干表面水分,按以下程序进行表面消毒：叶：75％酒精浸泡3min—无菌水冲洗3次—10％的次氯酸钠浸泡4min—无菌水冲洗5次；茎：75％酒精浸泡3min—无菌水冲洗3次—10％的次氯酸钠浸泡8min—无菌水冲洗5次；根：75％酒精浸泡3min—无菌水冲洗3次—10％的次氯酸钠浸泡10min—无菌水冲洗5次。无菌滤纸吸干残留水分后，用消毒后的医用剪刀或枝剪分别将叶、茎、根切成小的组织块，分别从各个部位中各随机挑取12个组织块，每4个组织块为一组放在加有青霉素的pda培养基的培养皿中。培养4-8天，进一步纯化，得到内生真菌纯菌株。

取毛脉酸模内生真菌菌种，在无菌条件下，用接种针挑取少量菌丝，接入已灭菌的pda固体培养基，于28℃活化培养2周。毛脉酸模内生真菌在pda培养基上的形态如图1所示；得到细小的白色菌落，菌落正面白色，中央隆起或稍有皱褶，背面酒红色。

将毛脉酸模种子置蒸馏水中浸泡24h，再用75％的乙醇浸泡2min，之后用无菌水反复冲洗种子3遍，然后用10％次氯酸钠浸泡10min，最后再用无菌水冲洗5遍，将处理好的种子接种于固体pda培养基中，10天后，种子长出2片真叶；

待毛脉酸模萌发后10天，用接菌环将配养皿中的内生真菌接种置共生培养基和毛脉酸模共培养，接种位置距离毛脉酸模根尖2cm；

共培养25天后收获植株，统计接菌后无菌苗的生长指标：株高、地上鲜重、地上干重、根鲜重、根干重。

通过无菌对照组和处理组的对比试验，结果表明，cercosporellasacc能促进毛脉酸模生长，共培养第25天，处理组的株高是对照组的108.16％，地上鲜重是对照组的148.87％，根鲜重是对照组的256.18％，地上干重是对照组的132.96％，根干重是对照组的216.72％。如图2所示，内生真菌能显著促进毛脉酸模的生长。具体数据见表1：

以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何不经过创造性劳动想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应该以权利要求书所限定的保护范围为准。