本发明涉及一种暗褐网柄牛肝菌液体菌种深层发酵新方法。属食用真菌发酵领域。
背景技术：
暗褐网柄牛肝菌(phlebopusportentosus)，隶属于牛肝菌目小牛肝菌科，是牛肝菌目中目前发现唯一能人工栽培的食用牛肝菌，广泛分布于泛热带地区。其子实体个体肥大，味道鲜美，营养价值丰富，是云南南部及泰国东北部最受群众喜爱的名贵食用菌之一。
目前暗褐网柄牛肝菌人工栽培基本采用固体菌种，栽培成本高，栽培周期长，出菇不整齐，严重制约着其产业化发展。
技术实现要素：
本发明提供了一种暗褐网柄牛肝菌液体菌种深层发酵新方法
本发明暗褐网柄牛肝菌液体菌种深层发酵新方法以发酵培养基配方为基础，先将暗褐网柄牛肝菌原种进行一级深层发酵，让液体菌种中的菌丝体进入快速增殖阶段，得发酵种子液；随后再将发酵种子液在无菌条件下迅速转入二级发酵罐中扩大培养进行二级深层发酵，当发酵罐长满菌丝体后，二级深层发酵结束。
按重量百分比计，所述液体菌种深层发酵培养基配方为：
所述发酵培养基配方中的碳源为葡萄糖、氮源为酵母膏。
所述将配制好的培养基用500ml的三角瓶分装，然后用高压锅灭菌30min，冷却后备用；
本发明一级深层发酵方法为在三角瓶中接入预先培养好的暗褐网柄牛肝菌原种，然后用回旋振荡仪进行一级深层发酵培养，
培养条件为：培养基装液量为容积的3/5-4/5；接种量为2-5％；
培养温度：28-30℃；
光照条件：暗光培养；
培养转速：120-150r/min；
发酵周期：5-6天；
ph:4.5-7，当菌丝体进入快速增殖阶段一级发酵结束。
所述二级深层发酵方法为将一级深层发酵培养所的的发酵种子液在无菌条件下迅速转入二级发酵罐中扩大培养，其培养设备为发酵罐，
培养条件为：培养基装液量为发酵罐容积的3/5-4/5；
接种量为20-30％；
培养温度：28-30℃；
光照条件：暗光培养；
搅拌速率：150-200r/min；
罐压：0.02-0.05mpa；
发酵周期：7-9天；
ph:4.5-7,当发酵罐长满菌丝体后深层发酵结束。
所述液体菌种深层发酵结束后，接种于暗褐网柄牛肝菌栽培基质中既得栽培菌包。
所述碳源为葡萄糖，氮源为酵母膏。
本发明的优点：
1、实现暗褐网柄牛肝菌液体菌种的工厂化生产，为暗褐网柄牛肝菌产业化人工栽培提供技术支持。
2、能缩短暗褐网柄牛肝菌栽培周期，提高栽培效率，降低暗褐网柄人工栽培成本，提高出菇整齐度。
具体实施方式
以下结合具体实施例，对本发明作进一步说明。
本发明首先提供了一种暗褐网柄牛肝菌液体菌种深层发酵培养基，按重量百分比计，所述液体菌种深层发酵培养基制备为：
所述碳源为葡萄糖，氮源为酵母膏。
本发明还提供一种暗褐网柄牛肝菌液体菌种深层发酵新方法，包括以下步骤：
(1)制备深层发酵培养基：以马铃薯10-20％(去皮、煮汁后用)，碳源1.5-2.0％，氮源0.2-0.4％，磷酸二氢钾0.1-0.2％，硫酸镁0.1-0.2％，ph值4.5-7，余量为水，
(2)将配制好的培养基用500ml的三角瓶分装，然后用高压锅灭菌30min，冷却后备用。
(3)在三角瓶中接入预先培养好的暗褐网柄牛肝菌原种，然后用回旋振荡仪进行一级深层发酵培养，培养条件为：培养基装液量为容积的3/5-4/5；接种量为2-5％；培养温度：28-30℃；光照条件：暗光培养；培养转速：120-150r/min；发酵周期：6-7天；ph:4.5-7，当菌丝体进入快速增殖阶段一级发酵结束。
(4)二级深层发酵方法为将一级深层发酵培养所的的发酵种子液在无菌条件下迅速转入二级发酵罐中扩大培养，其培养设备为发酵罐，培养条件为：培养基装液量为发酵罐容积的3/5-4/5；接种量为20-30％；培养温度：28-30℃；光照条件：暗光培养；搅拌速率：150-200r/min；罐压：0.02-0.05mpa；发酵周期：7-9天；ph:4.5-7,当发酵罐长满菌丝体后深层发酵结束。
以下例实施中的暗褐网柄牛肝菌菌种由云南省热带作物科学研究所在西双版纳野外分离并驯化所得，原种用pda固体培养基培养并保存。
实施例1一种暗褐网柄牛肝菌液体菌种深层发酵新方法
制备液体菌种深层发酵培养基：按重量百分比制备：以马铃薯20％(去皮煮汁)，碳源1.5％，氮源0.2％，磷酸二氢钾0.1％，硫酸镁0.1％，初始ph值6.0，余量为水。
将配制好的培养基用500ml的三角瓶分装，然后用高压锅灭菌30min，冷却后备用。
在三角瓶中接入预先培养好的暗褐网柄牛肝菌原种，然后用回旋振荡仪进行一级深层发酵培养。
培养条件为：培养基装液量为容积的3/5；接种量为2％；培养温度：28℃；光照条件：暗光培养；培养转速：120r/min；发酵周期：6-7天；初始ph值6.0，当菌丝体进入快速增殖阶段一级发酵结束。
二级深层发酵方法为将一级深层发酵培养所的的发酵种子液在无菌条件下迅速转入二级发酵罐中扩大培养，
培养条件为：培养基装液量为发酵罐容积的4/5；接种量为20％；培养温度：28℃；光照条件：暗光培养；搅拌速率：150r/min；罐压：0.02-0.05mpa；发酵周期：7-9天；初始ph值6.0,当发酵罐长满菌丝体后深层发酵结束。
本发明采用食用菌栽培中常用的液体菌种深层发酵方法，实现暗褐网柄牛肝菌液体菌种的工厂化生产，降低暗褐网柄牛肝菌人工栽培成本，提高人工栽培效率，缩短栽培周期。
实施例2一种暗褐网柄牛肝菌液体菌种深层发酵新方法
制备液体菌种深层发酵培养基：按重量百分比制备：以马铃薯20％(去皮煮汁)，碳源2.0％，氮源0.3％，磷酸二氢钾0.2％，硫酸镁0.1％，初始ph值6.5，余量为水。
将配制好的培养基用500ml的三角瓶分装，然后用高压锅灭菌30min，冷却后备用。
在三角瓶中接入预先培养好的暗褐网柄牛肝菌原种，然后用回旋振荡仪进行一级深层发酵培养。
培养条件为：培养基装液量为容积的4/5；接种量为3％；培养温度：28℃；光照条件：暗光培养；培养转速：130r/min；发酵周期：6-7天；初始ph值6.0，当菌丝体进入快速增殖阶段一级发酵结束。
二级深层发酵方法为将一级深层发酵培养所的的发酵种子液在无菌条件下迅速转入二级发酵罐中扩大培养，
培养条件为：培养基装液量为发酵罐容积的4/5；接种量为20％；培养温度：28℃；光照条件：暗光培养；搅拌速率：180r/min；罐压：0.02-0.05mpa；发酵周期：7-9天；初始ph值6.0,当发酵罐长满菌丝体后深层发酵结束。
实施例3一种暗褐网柄牛肝菌液体菌种深层发酵新方法
制备液体菌种深层发酵培养基：按重量百分比制备：以马铃薯10％(去皮煮汁)，碳源2.0％，氮源0.4％，磷酸二氢钾0.1％，硫酸镁0.2％，初始ph值6.0，余量为水。
将配制好的培养基用500ml的三角瓶分装，然后用高压锅灭菌30min，冷却后备用。
在三角瓶中接入预先培养好的暗褐网柄牛肝菌原种，然后用回旋振荡仪进行一级深层发酵培养。
培养条件为：培养基装液量为容积的3/5；接种量为4％；培养温度：29℃；光照条件：暗光培养；培养转速：140r/min；发酵周期：6-7天；初始ph值5.5，当菌丝体进入快速增殖阶段一级发酵结束。
二级深层发酵方法为将一级深层发酵培养所的的发酵种子液在无菌条件下迅速转入二级发酵罐中扩大培养，
培养条件为：培养基装液量为发酵罐容积的4/5；接种量为30％；培养温度：29℃；光照条件：暗光培养；搅拌速率：200r/min；罐压：0.02-0.05mpa；发酵周期：7-9天；初始ph值6.0,当发酵罐长满菌丝体后深层发酵结束。
最后，还需要注意的是，以上列举的仅是本发明的三个具体实施例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。