本发明属于分子生物学领域，涉及一种采用分子生物学手段鉴定中药的方法，具体为一种用于鉴定中药材泽泻的引物对及其应用。
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：泽泻别名水泽，为泽泻科植物，以块茎入药。泽泻分布很广，主产于四川、福建、江西、素有“川泽泻”、“建泽泻”、和“江泽泻”之称，为地道药材。到2000年止，我国植物药数量已达一万一千零四十六种，中国已成为世界上药用植物按吨位计算最大的贸易国，中草药出口对我国经济发展尤其是对目前中国中西部地区的经济发展具有十分重要的战略意义。然而，在世界上中草药市场已超过一百六十亿美元的年销售额中，我国只占有其中的百分之五，且大部分是原料药与保健药。相反，已有十多个国家和地区的近四十个品种的天然药物在我国注册，我国每年进口“洋中药”已超过六亿美元，其主要原因有：中草药有效成分或主成分难以通过试验验证；重金属或农药残毒含量偏高，难以用国际标准衡量，中医药理论与现代分析科学存在距离，难以与西医比较和贯通。再加上随着各个政府与社会各界对医药市场的监督越来越严，内地医药产业将面临来自加入wto的巨大压力，“洋中药”将越来越威胁我国的传统中草药知识产权。由此可见，中草药发展中诚待解决的问题是中草药的标准化、现代化与国际化。福建吉阳是福建地道药材泽泻的原产地，长期以来，种质不佳，品种退化，使其药效及产量均受很大影响，这使得我福建泽泻在国内乃至国际上都处于不利的地位。由此，为了使泽泻这种地道药材加速现代化，提高产品质量，更好的迎接wto的挑战与竞争力，并使药农能从中得到更多的实惠，将资源优势转化为产业优势。技术实现要素：本发明的目的是：为了克服现有技术的缺陷，使得泽泻药材的种质鉴定更加现代化，提高产品质量，获得一种能够特异性鉴定中药材泽泻的方法，利于泽泻的质量鉴别和标准化生产，本发明提供了一种用于鉴定中药材泽泻的引物对及其应用。技术方案：一种用于鉴定中药材泽泻的引物对，所述引物对及其序列为：p1，seqidno.1～2；p2，seqidno.3～4；p3，seqidno.5～6。优选的，所述引物对p1、p2和p3的上游引物的5，端加上特异性的gc发卡结构，所述发卡结构的长度为40bp，序列为seqidno.7。表1引物对及发卡结构序列名称序列(5，-3，)seqidno.p1-fccaggcaatcacacctgtgatgc1p1-rcctactccgcttcttgatatgc2p2-fgtccgtaggagaacctacgg3p2-rctcctccgctaattgatatgtatta4p3-fcagcggataacaataacacacagg5p3-raggcaaggcttaacccagtcacgac6发卡结构cgcccgccgcgcgcggcgggcggggcgggggcacgggggg7所述引物对在制备鉴定中药材泽泻试剂盒中的应用。优选的，所述试剂盒的组分包括：引物对、dntp、dna聚合酶、lcgreen、反应缓冲液。优选的，所述试剂盒鉴定中药材泽泻的步骤包括：(1)提取泽泻样品的基因组dna；(2)以步骤(1)提取的基因组dna为模板，以p1为特异性引物，进行第一轮pcr扩增；(3)取步骤(2)的扩增产物，稀释100～1000倍后作为第二轮pcr的模板，以p2作为特异性引物，进行第二轮pcr扩增；(4)取第二轮pcr扩增的产物，稀释10～100倍后作为第三轮pcr的模板，以p3作为特异性引物，进行第三轮pcr扩增；(5)收集第三轮pcr扩增的产物，并采用琼脂糖凝胶电泳检测。优选的，所述泽泻样品的基因组dna的提取方法是试剂盒法或改良ctab法。优选的，所述pcr扩增的程序为：95℃，2min；95℃，30s，52℃，30s，72℃，55s，35个循环；72℃，7min。有益效果：(1)本发明所述引物对使得泽泻药材的种质鉴定更加现代化，提高产品质量，利于泽泻的质量鉴别和标准化生产；(2)本发明所述引物对特异性好、灵敏度高、稳定性强。附图说明图1是实施例1～3pcr鉴定结果电泳图；其中m为分子量为3000的maker；1为实施例1pcr产物鉴定结果；2为实施例2pcr产物鉴定结果；3为实施例3pcr产物鉴定结果。具体实施方式实施例1一种用于鉴定中药材泽泻的引物对，所述引物对及其序列为：p1，seqidno.1～2；p2，seqidno.3～4；p3，seqidno.5～6。所述引物对p1、p2和p3的上游引物的5，端加上特异性的gc发卡结构，所述发卡结构的长度为40bp，序列为seqidno.7。所述引物对在制备鉴定中药材泽泻试剂盒中的应用。所述试剂盒的组分包括：引物对、dntp、dna聚合酶、lcgreen、反应缓冲液。所述试剂盒鉴定中药材泽泻的步骤包括：(1)提取泽泻样品的基因组dna；(2)以步骤(1)提取的基因组dna为模板，以p1为特异性引物，进行第一轮pcr扩增；(3)取步骤(2)的扩增产物，稀释100倍后作为第二轮pcr的模板，以p2作为特异性引物，进行第二轮pcr扩增；(4)取第二轮pcr扩增的产物，稀释100倍后作为第三轮pcr的模板，以p3作为特异性引物，进行第三轮pcr扩增；(5)收集第三轮pcr扩增的产物，并采用琼脂糖凝胶电泳检测。所述泽泻样品的基因组dna的提取方法是试剂盒法或改良ctab法。所述pcr扩增的程序为：95℃，2min；95℃，30s，52℃，30s，72℃，55s，35个循环；72℃，7min。实施例2一种用于鉴定中药材泽泻的引物对，所述引物对及其序列为：p1，seqidno.1～2；p2，seqidno.3～4；p3，seqidno.5～6。所述引物对p1、p2和p3的上游引物的5，端加上特异性的gc发卡结构，所述发卡结构的长度为40bp，序列为seqidno.7。所述引物对在制备鉴定中药材泽泻试剂盒中的应用。所述试剂盒的组分包括：引物对、dntp、dna聚合酶、lcgreen、反应缓冲液。所述试剂盒鉴定中药材泽泻的步骤包括：(1)提取泽泻样品的基因组dna；(2)以步骤(1)提取的基因组dna为模板，以p1为特异性引物，进行第一轮pcr扩增；(3)取步骤(2)的扩增产物，稀释100倍后作为第二轮pcr的模板，以p2作为特异性引物，进行第二轮pcr扩增；(4)取第二轮pcr扩增的产物，稀释10倍后作为第三轮pcr的模板，以p3作为特异性引物，进行第三轮pcr扩增；(5)收集第三轮pcr扩增的产物，并采用琼脂糖凝胶电泳检测。所述泽泻样品的基因组dna的提取方法是试剂盒法或改良ctab法。所述pcr扩增的程序为：95℃，2min；95℃，30s，52℃，30s，72℃，55s，35个循环；72℃，7min。实施例3一种用于鉴定中药材泽泻的引物对，所述引物对及其序列为：p1，seqidno.1～2；p2，seqidno.3～4；p3，seqidno.5～6。所述引物对p1、p2和p3的上游引物的5，端加上特异性的gc发卡结构，所述发卡结构的长度为40bp，序列为seqidno.7。所述引物对在制备鉴定中药材泽泻试剂盒中的应用。所述试剂盒的组分包括：引物对、dntp、dna聚合酶、lcgreen、反应缓冲液。所述试剂盒鉴定中药材泽泻的步骤包括：(1)提取泽泻样品的基因组dna；(2)以步骤(1)提取的基因组dna为模板，以p1为特异性引物，进行第一轮pcr扩增；(3)取步骤(2)的扩增产物，稀释650倍后作为第二轮pcr的模板，以p2作为特异性引物，进行第二轮pcr扩增；(4)取第二轮pcr扩增的产物，稀释65倍后作为第三轮pcr的模板，以p3作为特异性引物，进行第三轮pcr扩增；(5)收集第三轮pcr扩增的产物，并采用琼脂糖凝胶电泳检测。所述泽泻样品的基因组dna的提取方法是试剂盒法或改良ctab法。所述pcr扩增的程序为：95℃，2min；95℃，30s，52℃，30s，72℃，55s，35个循环；72℃，7min。如图1所示，将实施例1～3的扩增产物进行电泳检测，条带清晰可见，产物单一。sequencelisting<110>苏州市李良济健康产业有限公司<120>一种用于鉴定中药材泽泻的引物对及其应用<130><160>7<170>patentinversion3.3<210>1<211>23<212>dna<213>人工序列<400>1ccaggcaatcacacctgtgatgc23<210>2<211>22<212>dna<213>人工序列<400>2cctactccgcttcttgatatgc22<210>3<211>20<212>dna<213>人工序列<400>3gtccgtaggagaacctacgg20<210>4<211>25<212>dna<213>人工序列<400>4ctcctccgctaattgatatgtatta25<210>5<211>24<212>dna<213>人工序列<400>5cagcggataacaataacacacagg24<210>6<211>25<212>dna<213>人工序列<400>6aggcaaggcttaacccagtcacgac25<210>7<211>40<212>dna<213>人工序列<400>7cgcccgccgcgcgcggcgggcggggcgggggcacgggggg40当前第1页12