本发明涉及生物工程领域，特别涉及一种培养基。
背景技术：
胃炎(gastritis)是各种原因引起的胃黏膜炎症，为最常见的消化系统疾病之一。按临床发病的缓急，一般可分为急性和慢性胃炎两大类型；按病因不同可分为幽门螺杆菌相关性胃炎、应激性胃炎、自身免疫性胃炎等。不同病因引起的胃炎其病理和组织学改变亦不同，通常包括三个过程即上皮损伤、黏膜炎症反应和上皮再生。急性胃炎根据其病理改变又可分为单纯性、糜烂出血性、腐蚀性、化脓性胃炎等，慢性胃炎根据其病理改变可分为非萎缩性、萎缩性和特殊类型胃炎三大类。各型胃炎的诊断和鉴别诊断主要依据胃镜检查。其中，慢性胃炎的主要致病菌为幽门螺杆菌，90％以上的慢性胃炎患者有幽门螺杆菌感染。
幽门螺杆菌是一种定植于胃粘膜的病原菌，世界范围内约有高达50％-70％的感染率。hp感染是慢性胃炎的主要原因。同时长期的hp感染还会引发严重的萎缩性胃炎、伴随性肠上皮化生，严重的还能导致胃癌。目前对于hp感染的检测包括多种方法：组织病理学和免疫组化，快速尿素酶试验，组织细菌培养，尿素呼气试验，粪便hp抗原检测以及血清学抗体检测等，但仍没有一种绝对的金标准检测方法。
组织细菌的培养仍然是一种可直接判断hp感染的有效方法，并且由于其高特异性以及其在抗生素耐药性的指导研究中的重要作用，使其在研究hp感染中占据着重要的位置。幽门螺杆菌(h.pylori，hp)的培养是诊断是否感染幽门螺杆菌的一项十分重要的技术手段，但目前受技术限制，该种方法对hp的培养阳性率较低，敏感性不够，然而目前对hp的培养存在的最大的缺陷就是敏感性较低，一般培养的阳性率只有50-70％，即便是在十分有经验的实验室和操作人员的取样和培养下，阳性率勉强可以提高到70-90％之间(以免疫组化作为参考的标准)。
技术实现要素：
有鉴于此，本发明提供一种培养基。本发明主要针对培养的阳性率低的缺陷，制备了一种优势培养基，使得hp的培养阳性率达到了98.88％，特异性100％，大大的改善了现有技术的缺点，提高了hp培养方法的应用。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种基础培养基，由牛心浸出物、牛脑浸出物、半胱氨酸、na2hpo4、蛋白胨、nacl和琼脂粉组成。
在一些具体实施方案中，基础培养基中，以g/g/g/g/g/ml/ml计，半胱氨酸、na2hpo4、蛋白胨、nacl、琼脂与牛心浸出物、牛脑浸出物的质量体积比为(1～5):(10～12):(4～8):(0.5～2):(25～30):250:200。
在一些具体实施方案中，每1000ml琼脂平皿含：
在一些具体实施方案中，每1000ml琼脂平皿含：
本发明还提供了所述的基础培养基在培养幽门螺杆菌中的应用。
本发明还提供了一种完全培养基，包括所述的基础培养基、抗生素和动物血。
在本发明的一些具体实施方案中，所述抗生素包括万古霉素、甲氧苄氨嘧啶、两性霉素或多粘菌素中的一种或两者以上的混合物。
在本发明的一些具体实施方案中，半胱氨酸与万古霉素、甲氧苄氨嘧啶、两性霉素与多粘菌素的质量比为(1000～5000):(9～12):(3～6):(3～6):(3～6)。
本发明还提供了所述完全培养基在培养幽门螺杆菌中的应用。
本发明还提供了所述完全培养基的配制方法，包括如下步骤：
步骤1：取配方量的牛心浸出物、牛脑浸出物、半胱氨酸、蛋白胨、氯化钠、磷酸氢二钠，与水混合，加热溶解，过滤后收集滤液，调整ph值为7.1～7.3，分装，灭菌，冷却后密封，制得基础培养基；
步骤2：取步骤1制得的基础培养基，加入配方量的琼脂粉，灭菌；
步骤3：降温至45℃～50℃，加入配方量的抗生素；
步骤4：再加入10％(v/v)的动物血(优选新鲜的羊血)，混匀后倒平板，冷却凝固后密封。
具体的，所述完全培养基的配制方法，包括如下步骤：
混合之后，加热溶解，然后用滤纸过滤，调整ph值到7.2±0.1，分装800ml/瓶，于高压蒸汽灭菌锅内高压灭菌，121℃灭菌20min，冷却至室温后密封，4℃保存备用。
制备平皿时：
1)取一定量以上4℃保存的基础培养基，按每1l加入25～30g琼脂粉的量加入琼脂粉，然后121℃，高压灭菌20min；
2)待培养基温度降至45℃-50℃左右，按照每1l培养基加入9～12mg万古霉素、3～6mg两性霉素、3～6mg多粘菌素和3～6mg甲氧氨苄嘧啶的浓度加入各种抗生素的原液；
3)按每1l培养基加100ml新鲜羊血的量加入新鲜羊血；
4)充分混匀之后倒平板；(每个直径90mm的平板需要20ml左右培养基，注意避免产生气泡，倒好之后将平板水平放置，动作迅速，以免液体培养基凝固无法倒平板。)
5)待平板冷却凝固之后，装入无菌密封袋，真空密封，4℃存放。
检测方法：
1.试验前准备：取出所需用的培养基，恢复至室温(18℃-25℃)。
2.内镜直视下，钳取不同部位胃粘膜组织。
3.在超净工作台上，直接将取下的胃粘膜组织面涂布接种至hp选择性分离培养基。
4.将培养基置于厌氧罐内，缓慢注入混和气体(5％o2、10％co2、85％n2)，37℃连续培养5～7天；
5.观察菌落形态。
优选的，所述完全培养基的配制方法，包括如下步骤：
混合之后，加热溶解，然后用滤纸过滤，调整ph值到7.2±0.1，分装800ml/瓶，于高压蒸汽灭菌锅内高压灭菌，121℃灭菌20min，冷却至室温后密封，4℃保存备用。
制备平皿时：
6)取一定量以上4℃保存的基础培养基，按每1l加入25g琼脂粉的量加入琼脂粉，然后121℃，高压灭菌20min；
7)待培养基温度降至45℃-50℃左右，按照每1l培养基加入10mg万古霉素、5mg两性霉素、5mg多粘菌素和5mg甲氧氨苄嘧啶的浓度加入各种抗生素的原液；
8)按每1l培养基加100ml新鲜羊血的量加入新鲜羊血；
9)充分混匀之后倒平板；(每个直径90mm的平板需要20ml左右培养基，注意避免产生气泡，倒好之后将平板水平放置，动作迅速，以免液体培养基凝固无法倒平板。)
10)待平板冷却凝固之后，装入无菌密封袋，真空密封，4℃存放。
检测方法：
1.试验前准备：取出所需用的培养基，恢复至室温(18℃-25℃)。
2.内镜直视下，钳取不同部位胃粘膜组织。
3.在超净工作台上，直接将取下的胃粘膜组织面涂布接种至hp选择性分离培养基。
4.将培养基置于厌氧罐内，缓慢注入混和气体(5％o2、10％co2、85％n2)，37℃连续培养5～7天；
5.观察菌落形态。
本发明针对幽门螺杆菌培养的阳性率低的缺陷，制备了一种培养基，该培养基由牛心浸出物、牛脑浸出物、半胱氨酸、na2hpo4、蛋白胨、nacl和琼脂粉组成，同时加入适量配方的抗生素和新鲜羊血。使得hp的培养敏感度可达到98.88％，特异性100％，大大的改善了现有技术的缺点，提高了hp培养方法的应用。
具体实施方式
本发明公开了一种培养基，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明提供的一种培养基中所用原料及试剂均可由市场购得。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1
培养幽门螺杆菌的培养基配方：
每1000ml琼脂平皿含：
具体的配制步骤：
按配方：
混合之后，加热溶解，然后用滤纸过滤，调整ph值到7.2±0.1，分装800ml/瓶，于高压蒸汽灭菌锅内高压灭菌，121℃灭菌20min，冷却至室温后密封，4℃保存备用。
制备平皿时：
1)取一定量以上4℃保存的基础培养基，按每1l加入25g琼脂粉的量加入琼脂粉，然后121℃，高压灭菌20min；
2)待培养基温度降至45℃-50℃左右，按照每1l培养基加入12mg万古霉素、6mg两性霉素、3mg多粘菌素和3mg甲氧氨苄嘧啶的浓度加入各种抗生素的原液；
3)按每1l培养基加100ml新鲜羊血的量加入新鲜羊血；
4)充分混匀之后倒平板；(每个直径90mm的平板需要20ml左右培养基，注意避免产生气泡，倒好之后将平板水平放置，动作迅速，以免液体培养基凝固无法倒平板。)
5)待平板冷却凝固之后，装入无菌密封袋，真空密封，4℃存放。
实施例2
培养幽门螺杆菌的培养基配方：
每1000ml琼脂平皿含：
具体的配制步骤：
按配方：
混合之后，加热溶解，然后用滤纸过滤，调整ph值到7.2±0.1，分装800ml/瓶，于高压蒸汽灭菌锅内高压灭菌，121℃灭菌20min，冷却至室温后密封，4℃保存备用。
制备平皿时：
1)取一定量以上4℃保存的基础培养基，按每1l加入25g琼脂粉的量加入琼脂粉，然后121℃，高压灭菌20min；
2)待培养基温度降至45℃-50℃左右，按照每1l培养基加入10mg万古霉素、5mg两性霉素、5mg多粘菌素和5mg甲氧氨苄嘧啶的浓度加入各种抗生素的原液；
3)按每1l培养基加100ml新鲜羊血的量加入新鲜羊血；
4)充分混匀之后倒平板；(每个直径90mm的平板需要20ml左右培养基，注意避免产生气泡，倒好之后将平板水平放置，动作迅速，以免液体培养基凝固无法倒平板。)
5)待平板冷却凝固之后，装入无菌密封袋，密封，4℃存放。
实施例3
培养幽门螺杆菌的培养基配方：
每1000ml琼脂平皿含：
具体的配制步骤：
按配方：
混合之后，加热溶解，然后用滤纸过滤，调整ph值到7.2±0.1，分装800ml/瓶，于高压蒸汽灭菌锅内高压灭菌，121℃灭菌20min，冷却至室温后密封，4℃保存备用。
制备平皿时：
1)取一定量以上4℃保存的基础培养基，按每1l加入30g琼脂粉的量加入琼脂粉，然后121℃，高压灭菌20min；
2)待培养基温度降至45℃-50℃左右，按照每1l培养基加入9mg万古霉素、3mg两性霉素、6mg多粘菌素和6mg甲氧氨苄嘧啶的浓度加入各种抗生素的原液；
3)按每1l培养基加100ml新鲜羊血的量加入新鲜羊血；
4)充分混匀之后倒平板；(每个直径90mm的平板需要20ml左右培养基，注意避免产生气泡，倒好之后将平板水平放置，动作迅速，以免液体培养基凝固无法倒平板。)
5)待平板冷却凝固之后，装入无菌密封袋，真空密封，4℃存放。
实施例4
临床样本：胃镜检查确认为幽门螺杆菌感染的阳性和阴性患者，并在内镜直视下，钳取的胃部粘膜组织样本。
实验方法：
试验前准备：取出本发明实施例1～3提供的的培养基，恢复至室温(18℃-25℃)。
内镜直视下，钳取不同部位胃粘膜组织。
在超净工作台上，直接将取下的胃粘膜组织面涂布接种至hp选择性分离培养基。之后置于厌氧罐内，缓慢注入混和气体(5％o2、10％co2、85％n2)，37℃连续培养5-7天；
观察培养结果：若长出针尖状、灰白色、半透明的细小菌落则可判断为幽门螺杆菌感染阳性，若连续培养7天没有细菌的生长则为幽门螺杆菌感染阴性。
数据分析：
用本发明实施例2提供的培养基培养89例阳性临床样本和86例阴性临床样本的结果见表1。
表1
以胃镜检测为金标准，本发明的培养基培养的结果阳性率为98.88％，即敏感性可达98.88％，阴性样本的培养结果与胃镜检测结果一致，即特异性可达100％。
以实施例1、实施例3制备的培养基进行上述实验，实验结果与实施例2制备的培养基的检测结果无显著差异(p＞0.05)。
综合上述实验结论，本发明提供的培养基对临床样本的hp的培养敏感度高达98.88％；其特异性达到100％。
实施例5
对照组：skirrow培养基、brainheartinfusion(bhiwith7％小牛血清)、哥伦比亚血琼脂培养基等；
实验组：本发明实施例1～实施例3制备的培养基。
以哥伦比亚血琼脂培养基为对照，对比了其与本发明实施例2制备的培养基的hp血琼脂培养基对上述175例临床样本的培养结果，见表2：
表2
从对比实验结果可看出，本发明的hp血琼脂培养基对临床样本的hp的培养敏感度高达98.88％，大大的高于对照培养基的敏感度(70.79％)；其特异性100％，也比对照培养基的特异性(98.84％)更好。
取skirrow培养基、brainheartinfusion(bhiwith7％小牛血清)进行上述实验，实验结果与哥伦比亚血琼脂培养基无显著差异(p＞0.05)。
以实施例1、实施例3制备的培养基进行上述实验，实验结果与实施例2制备的培养基的检测结果无显著差异(p＞0.05)。
综合上述实验结果表明，本发明提供的培养基与skirrow培养基、brainheartinfusion(bhiwith7％小牛血清)、哥伦比亚血琼脂培养基相比，能够显著(p＜0.05)提高敏感度，对临床样本hp的分离培养敏感度高达98.88％，显著高于对照培养基；其特异性100％，也比对照培养基的特异性(98.84％)显著提高(p＜0.05)。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。