本发明属于中药的质量分析控制领域，具体的涉及到一种中药组合物中多种成分的分离方法。
背景技术：
中药复方是中医用药的主要形式，在经过几千年的临床使用中，复方可以获得比单味药更强的治疗效果，这已经充分证明了复方构成的科学性。
本发明药物组合物由连翘、金银花和麻黄等13味中药组成，具有清瘟解毒、宣肺泄热之功效，用于治疗流行性感冒。
临床研究证实本发明药物组合物治疗流感、急性上呼吸道感染疗效确切、效果显著。
为阐明复方的药理作用机制以及复方药物配伍规律的科学内含，对其物质基础进行系统的研究十分必要。
基于此，对于本发明药物组合物的化学成分进行了深入研究，在其总浸膏大孔吸附树脂柱的30%乙醇部位分离并鉴定了18个化合物，分别为连翘酯苷a(1)、连翘酯苷i(2)、连翘酯苷h(3)、lugrandoside(4)、isolugrandoside(5)、ferruginosidea(6)、lianqiaoxinganc(7)、calceolariosidec(8)、连翘酯苷e(9)、ferruginosideb(10)、d-苦杏仁苷(11)、l-苦杏仁苷(12)、sambunigrin(13)、cornoside(14)、4-hydroxy-4-methylenecarbomethoxy-cyclohexa-2,5-dienone(15)、liriodendrin(16)、甘草素-7-o-β-d-葡萄糖苷(17)、3,4-二羟基苯甲醛(18)。
其中，化合物2-8,10,13-18为首次从本发明总浸膏中分离得到，化合物4-6,10,15,16未见从复方单味药中分离的报道，并首次对化合物8在dmso-d6溶剂中的核磁数据进行归属。
技术实现要素：
本发明提供一种中药组合物的18中化合物的分离方法。
该中药组合物由如下重量份的原料药制成：连翘200-300、麻黄60-100、大黄40-60、鱼腥草200-300、金银花200-300、板蓝根200-300、广藿香60-100、绵马贯众200-300、红景天60-100、薄荷脑5-9、苦杏仁60-100、甘草60-100、石膏200-300
本发明所述分离方法包括以下步骤：
（1）该中药组合物总浸膏经ab-8型号大孔树脂分离，依次用水、10%乙醇、30%乙醇洗脱，收集30%乙醇洗脱液，回收溶剂，得30%乙醇浸膏；
（2）将步骤（1）得到的30%乙醇浸膏，加入反相硅胶ods-aq-hg（s-50μm）拌样，待拌样ods自然晾干后，将拌样ods加入到上样柱内，上中压制备液相进行分离（分离柱填料为ods-aq-hg（s-50μm）），依次用10%甲醇，根据洗脱顺序得到5个流份，分别编号为10%-1、10%-2、10%-3、10%-4、10%-5；20%甲醇洗脱，根据洗脱顺序得到6个流份，分别编号为20%-1、20%-2、20%-3、20%-4、20%-5和20%-6，分别收集洗脱液，回收溶剂，得编号为10%-1、10%-2、10%-3、10%-4、10%-5洗脱干膏和20%-1、20%-2、20%-3、20%-4、20%-5和20%-6洗脱干膏；
（3）将步骤（2）得到的编号为10%-1洗脱干膏，用30%甲醇溶解，溶解液过0.45μm微孔滤膜，采用高效液相色谱法进行初步分离，流动相为甲醇-水22:78，流速为1ml/min，检测波长210nm，分别收集保留时间为3-9min、9-11min、19-22min、22-26min、26-30min、37-41min、和44-48min的色谱峰，并减压回收溶剂，并分别进行以下分离：
3-9min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：甲醇-水,5:95，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：ymc-packr&dods-a，250×20mm，s-10μm，在此条件下收集保留时间25-27min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物14：cornoside；
9-11min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：甲醇-水,12:88，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：ymc-packr&dods-a，250×20mm，s-10μm，在此条件下收集保留时间32-35min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物10：ferruginosideb；
19-22min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：甲醇-水,18:82，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：ymc-packr&dods-a，250×20mm，s-10μm，在此条件下收集保留时间31-35min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物9：连翘酯苷e；
22-26min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：甲醇-水,16:84，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：ymc-packr&dods-a，250×20mm，s-10μm，在此条件下收集保留时间32-37min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物18：3,4-二羟基苯甲醛；
26-30min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：甲醇-水,18:82，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：ymc-packr&dods-a，250×20mm，s-10μm，在此条件下收集保留时间38-42min的色谱峰，减压回收溶剂后得到化合物11：d-苦杏仁苷和化合物12：l-苦杏仁苷的混合物；
37-41min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：甲醇-水,18:82，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：ymc-packr&dods-a，250×20mm，s-10μm，在此条件下收集保留时间52-56min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物13：sambunigrin；
44-48min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：甲醇-水,22:78，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：ymc-packr&dods-a，250×20mm，s-10μm，在此条件下收集保留时间41-44min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物15：4-hydroxy-4-methylenecarbomethoxy-cyclohexa-2,5-dienone；
（4）将步骤（2）得到的编号为20%-2洗脱干膏，用30%甲醇溶解，并经过0.45μm微孔滤膜过滤，高效液相色谱法进行初步分离，流动相：甲醇-水,22:78，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：ymc-packr&dods-a，250×20mm，s-10μm，分别收集保留时间为14-17min、17-19min、22-24min、29-34min和35-40min的色谱峰，并减压回收溶剂，并分别进行以下分离：
14-17min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：乙腈-水,15:85，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：ymc-packr&dods-a，250×20mm，s-10μm，在此条件下收集保留时间38-40min和45-47min的色谱峰，收集的保留时间为45-47min色谱峰减压回收溶剂后，得到化合物化合物7：lianqiaoxinganc；保留时间为38-40min流份再经高效液相色谱法纯化，流动相：乙腈-水,13:87，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：ymc-packr&dods-a，250×20mm，s-10μm，收集此条件下52-56min色谱峰，减压回收溶剂，得到化合物6：ferruginosidea；
17-19min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：乙腈-水,15:85，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：ymc-packr&dods-a，250×20mm，s-10μm，在此条件下收集保留时间28-30min和37-44min的色谱峰，减压回收溶剂后，分别得到化合物16：liriodendrin，和化合物2：连翘酯苷i；
22-24min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：乙腈-水,17:83，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：ymc-packr&dods-a，250×20mm，s-10μm，在此条件下收集保留时间22-25min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物8：calceolariosidec；
29-34min色谱峰，在减压回收溶剂后，在放置过程中有白色固体析出，5000rpm离心得到化合物17：甘草素-7-o-β-d-葡萄糖苷；上清液经高效液相进一步纯化，流动相：乙腈-水,16:84，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：ymc-packr&dods-a，250×20mm，s-10μm，在此条件下收集保留时间40-45min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物3：连翘酯苷h；
35-40min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：乙腈-水,16:84，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：ymc-packr&dods-a，250×20mm，s-10μm，在此条件下收集保留时间34-45min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物1：连翘酯苷a；
（5）将步骤（2）得到的编号为20%-4和20%-5流份合并，采用30%甲醇溶解，并经过0.45μm微孔滤膜过滤，高效液相色谱法进行初步分离，流动相：乙腈-水,15:85，流速：15ml/min，检测波长210nm，色谱柱：ymc-packr&dods-a，250×20mm，s-10μm，分别收集保留时间为15-17min和35-40min的色谱峰，并减压回收溶剂，得到15-17min的色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：乙腈-水,15:85，流速：12ml/min，检测波长210nm，色谱柱：ymc-packr&dods-a，250×20mm，s-10μm，在此条件下收集保留时间15-16min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物5：isolugrandoside；得到的35-40min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：甲醇-水,25:75，流速：12ml/min，检测波长210nm，色谱柱：ymc-packr&dods-a，250×20mm，s-10μm，在此条件下收集保留时间26-29min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物4：lugrandoside；
优选的十八种成分的分离方法，为所述步骤（1）中，洗脱剂水、10%乙醇、30%乙醇的用量为1g中药组合物总浸膏用水40ml、10%乙醇17.6ml、30%乙醇45ml。
优选的十八种成分的分离方法，为所述步骤（2）中反相硅胶ods-aq-hg的用量为：1g步骤（1）所得30%乙醇浸膏用8g反相硅胶ods-aq-hg，其中3g用于与1g步骤（1）所得30%乙醇浸膏拌样，5g用做中压分离柱的填料。
优选的十八种成分的分离方法，为所述步骤（2）中依次用10%甲醇，根据洗脱顺序得到5个流份，每个流份的洗脱剂用量为：1g步骤（1）所得30%乙醇浸膏用66.7ml的10%甲醇；20%甲醇洗脱，根据洗脱顺序得到6个流份，每个流份的洗脱剂用量为：1g步骤（1）所得30%乙醇浸膏用44.4-66.7ml的10%甲醇。
优选的，中药组合物是由如下重量份的原料药制成：
连翘200、金银花300、板蓝根200、大黄40、广藿香60、绵马贯众300、红景天100、薄荷脑9、麻黄60、苦杏仁100、鱼腥草200、甘草100、石膏200。
优选的，中药组合物是由如下重量份的原料药制成：
连翘300、金银花200、板蓝根300、大黄60、广藿香100、绵马贯众200、红景天60、薄荷脑5、麻黄100、苦杏仁60、鱼腥草300、甘草60、石膏300。
优选的，中药组合物是由如下重量份的原料药制成：
连翘278、金银花294、板蓝根285、大黄55、广藿香95、绵马贯众290、红景天87、薄荷脑8.5、麻黄88、苦杏仁80、鱼腥草284、甘草95、石膏277。
本发明所述中药组合物总浸膏由以下步骤制成：
(1)按照原料药重量比例称取中药材，净选，酌情碎断；
(2)广藿香碎断，加10倍量水提取挥发油，提油时间8小时，收集挥发油，备用；提取液过滤后，残渣弃去，滤液备用；
(3)连翘、麻黄、鱼腥草、大黄，用12倍量70%的乙醇提取3次，每次2.5小时，提取液合并过滤，回收乙醇，滤液备用；
(4)金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加12倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁，煎煮2次，每次1小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤（2）广藿香提油后的滤液合并，浓缩成在60℃时测定相对密度为1.10-1.15的清膏，加入乙醇，调节至醇浓度为70%，冷藏放置，过滤，回收乙醇至无醇味，得清膏备用；
(5)将步骤（4）所得清膏与步骤（3）所得醇提液合并，浓缩至在60℃时测定相对密度为1.15-1.20的清膏，干燥，得总浸膏，备用。
具体实施方式
实施例1
按比例称取：连翘20kg、金银花30kg、板蓝根20kg、大黄4kg、广藿香6kg、绵马贯众30kg、红景天10kg、薄荷脑0.9kg、麻黄6kg、苦杏仁10kg、鱼腥草20kg、甘草10kg、石膏20kg，按照以下工艺提取：
(1)按照原料药重量比例称取中药材，净选，酌情碎断；
(2)广藿香碎断，加10倍量水提取挥发油，提油时间8小时，收集挥发油，备用；提取液过滤后，残渣弃去，滤液备用；
(3)连翘、麻黄、鱼腥草、大黄，用12倍量70%的乙醇提取3次，每次2.5小时，提取液合并过滤，回收乙醇，滤液备用；
(4)金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加12倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁，煎煮2次，每次1小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤（2）广藿香提油后的滤液合并，浓缩成在60℃时测定相对密度为1.15的清膏，加入乙醇，调节至醇浓度为70%，冷藏放置，过滤，回收乙醇至无醇味，得清膏备用；
(5)将步骤（4）所得清膏与步骤（3）所得醇提液合并，浓缩至在60℃时测定相对密度为1.20的清膏，干燥，得总浸膏，备用。
分离方法步骤如下：
1.仪器和材料
brukeraviiihd600核磁共振波谱仪（瑞士bruker公司）；agilentnmrvnmrs600核磁共振波谱仪（美国agilent公司）；synaptg2-smass质谱仪（美国waters公司）；combiflashrf中低压制备液相色谱仪（美国teledvneisco公司）；waters2489-1525制备液相色谱仪（美国waters公司）；nu3000型制备液相色谱仪（江苏汉邦科技有限公司）；milli-q纯水净化器(美国millipore公司)；al204分析电子天平（美国mettlertoledo公司）；ab135-s分析电子天平（美国mettlertoledo公司）；tgl-16g离心机（上海安亭科学仪器厂）；ymcods-a-hg50μm反相硅胶（日本ymc公司）；ymc-packr&dods-a（250×20mm，s-10μm，日本ymc公司）；本发明药物组合物总浸膏（石家庄以岭药业股份有限公司，批号：b1509001）；色谱纯乙腈、甲醇（上海阿达玛斯试剂公司）；分析纯试剂（北京化工厂）。
提取和分离
本发明药物组合物总浸膏5kg（批号：b1509001），经ab-8大孔树脂吸附，顺次采用200升水、88升10%乙醇、225升30%乙醇、250升50%乙醇、150升70%乙醇和162升95%乙醇洗脱，回收溶剂得到相应浸膏，其中30%乙醇洗脱部分浸膏625.0g。
取30%乙醇洗脱部分浸膏90.0g，加入反相硅胶ods-aq-hg（s-50μm）270.0g拌样，待拌样ods自然晾干后，将拌样ods加入上样柱内，上中压制备液相进行分离（分离柱规格：49×460mm，填料：450gods-aq-hg（s-50μm）），分别用30升10%甲醇、32升20%甲醇、24升30%甲醇、22升35%甲醇、18升40%甲醇、18升45%甲醇、12升50%甲醇、10升70%甲醇、6升无水甲醇洗脱，各洗脱部分采用减压方式回收溶剂；其中10%洗脱部分根据洗脱顺序得到5个流份（每个流份的溶剂用量为6升），分别编号为10%-14.5g、10%-24.0g、10%-33.5g、10%-42.0g和10%-50.9g；其中20%洗脱部分根据洗脱顺序得到6个流份（每个流份的溶剂用量为4-6升），分别编号为20%-12.4g、20%-28.6g、20%-33.8g、20%-43.1g、20%-54.0g和20%-61.7g。
取流份10%-12.5g，采用30%甲醇溶解，并经过0.45μm微孔滤膜过滤，高效液相色谱法进行初步分离（流动相：甲醇-水,22:78，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：ymc-packr&dods-a（250×20mm，s-10μm）），分别收集保留时间为3-9min、9-11min、、19-22min、22-26min、26-30min、37-41min、和44-48min的色谱峰，并减压回收溶剂；上述流份经过进一步的高效液相色谱法纯化得到多个单体化合物，具体分离条件如下：
化合物14的分离：3-9min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化（流动相：甲醇-水,5:95，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：ymc-packr&dods-a（250×20mm，s-10μm）），在此条件下收集保留时间25-27min的色谱峰，减压回收溶剂后得到化合物14(22mg)。
化合物10的分离：9-11min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化（流动相：甲醇-水,12:88，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：ymc-packr&dods-a（250×20mm，s-10μm）），在此条件下收集保留时间32-35min的色谱峰，减压回收溶剂后得到化合物10(15mg)。
化合物9的分离：19-22min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化（流动相：甲醇-水,18:82，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：ymc-packr&dods-a（250×20mm，s-10μm）），在此条件下收集保留时间31-35min的色谱峰，减压回收溶剂后得到化合物9(79mg)。
化合物18的分离：22-26min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化（流动相：甲醇-水,16:84，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：ymc-packr&dods-a（250×20mm，s-10μm）），在此条件下收集保留时间32-37min的色谱峰，减压回收溶剂后得到化合物18(8mg)。
化合物11和化合物12的分离：26-30min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化（流动相：甲醇-水,18:82，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：ymc-packr&dods-a（250×20mm，s-10μm）），在此条件下收集保留时间38-42min的色谱峰，减压回收溶剂后得到化合物11和12混合物(159mg)。
化合物13的分离：37-41min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化（流动相：甲醇-水,18:82，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：ymc-packr&dods-a（250×20mm，s-10μm）），在此条件下收集保留时间52-56min的色谱峰，减压回收溶剂后得到化合物13(8mg)。
化合物15的分离：44-48min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化（流动相：甲醇-水,22:78，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：ymc-packr&dods-a（250×20mm，s-10μm）），在此条件下收集保留时间41-44min的色谱峰，减压回收溶剂后得到化合物15(10mg)。
取流份20%-22.9g，采用30%甲醇溶解，并经过0.45μm微孔滤膜过滤，高效液相色谱法进行初步分离（流动相：甲醇-水,22:78，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：ymc-packr&dods-a（250×20mm，s-10μm）），分别收集保留时间为14-17min、17-19min、22-24min、29-34min和35-40min的色谱峰，并减压回收溶剂；上述各流份经过进一步的高效液相色谱法纯化得到多个单体化合物，具体分离条件如下：
化合物6和化合物7的分离：14-17min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化（流动相：乙腈-水,15:85，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：ymc-packr&dods-a（250×20mm，s-10μm）），在此条件下收集保留时间38-40min和45-47min的色谱峰，减压回收溶剂后得到化合物化合物38-40min流份和7(4mg)，38-40min流份再经高效液相色谱法纯化（流动相：乙腈-水,13:87，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：ymc-packr&dods-a（250×20mm，s-10μm）），收集此条件下52-56min色谱峰，减压回收溶剂，得到化合物6(4mg)。
化合物16和化合物2的分离：17-19min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化（流动相：乙腈-水,15:85，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：ymc-packr&dods-a（250×20mm，s-10μm）），在此条件下收集保留时间28-30min和37-44min的色谱峰，减压回收溶剂后得到化合物化合物16(3mg)和2(117mg)。
化合物8的分离：22-24min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化（流动相：乙腈-水,17:83，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：ymc-packr&dods-a（250×20mm，s-10μm）），在此条件下收集保留时间22-25min的色谱峰，减压回收溶剂后得到化合物化合物8(36mg)。
化合物17和化合物3的分离：29-34min色谱峰，在减压回收溶剂后，在放置过程中有白色固体析出，5000rpm离心得到化合物17（10mg），上清液经高效液相进一步纯化（流动相：乙腈-水,16:84，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：ymc-packr&dods-a（250×20mm，s-10μm）），在此条件下收集保留时间40-45min的色谱峰，减压回收溶剂后得到化合物3(19mg)。
化合物1的分离：35-40min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化（流动相：乙腈-水,16:84，流速：10ml/min，检测波长210nm，色谱柱：ymc-packr&dods-a（250×20mm，s-10μm）），在此条件下收集保留时间34-45min的色谱峰，减压回收溶剂后得到化合物化合物1(161mg)。
化合物4和化合物5的分离：将20%-4和20%-5流份合并，取混合流份2.0g，采用30%甲醇溶解，并经过0.45μm微孔滤膜过滤，高效液相色谱法进行初步分离（流动相：乙腈-水,15:85，流速：15ml/min，检测波长210nm，色谱柱：ymc-packr&dods-a（250×20mm，s-10μm）），分别收集保留时间为13-15min和15-17min的色谱峰，并减压回收溶剂。
35-40min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化（流动相：甲醇-水,25:75，流速：12ml/min，检测波长210nm，色谱柱：ymc-packr&dods-a（250×20mm，s-10μm）），在此条件下收集保留时间26-29min的色谱峰，减压回收溶剂后得到化合物化合物4(32mg)。
15-17min的色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化（流动相：乙腈-水,15:85，流速：12ml/min，检测波长210nm，色谱柱：ymc-packr&dods-a（250×20mm，s-10μm）），在此条件下收集保留时间15-16min的色谱峰，减压回收溶剂后得到化合物化合物5(4mg)。
结构鉴定
化合物1浅绿色玻璃状固体（甲醇），esi-msm/z:623.2[m-h]-，结合nmr数据确定该化合物的分子式为c29h36o15。
1h-nmr(dmso-d6,600mhz)δh:6.63(1h,d,j=1.9hz,h-2),6.64(1h,d,j=8.1hz,h-5),6.50(1h,dd,j=8.1,1.9hz,h-6),2.69(2h,m,h-7),4.31(1h,d,j=7.8hz,h-1'),4.51(1h,brs,h-1''),1.05(1h,d,j=6.2hz,h-6''),7.05(1h,brs,h-2'''),6.77(1h,d,j=8.1hz,h-5'''),7.00(1h,brs,h-6'''),7.50(1h,d,j=15.8hz,h-7'''),6.26(1h,d,j=15.8hz,h-8''')。
13c-nmr(dmso-d6,150mhz)δc:129.3(c-1),115.6(c-2),145.1(c-3),143.6(c-4),116.4(c-5),119.6(c-6),35.2(c-7),70.4(c-8),103.0(c-1'),73.1(c-2'),73.6(c-3'),71.0(c-4'),74.0(c-5'),66.2(c-6'),100.6(c-1''),70.7(c-2''),70.4(c-3''),71.9(c-4''),68.5(c-5''),17.9(c-6''),125.6(c-1'''),115.0(c-2'''),145.7(c-3'''),148.6(c-4'''),115.9(c-5'''),121.5(c-6'''),145.7(c-7'''),113.9(c-8'''),166.0(c-9''')。
以上氢谱特征及碳谱数据与文献报道基本一致，鉴定该化合物为连翘酯苷a。
化合物2浅绿色玻璃状固体（甲醇），esi-msm/z:623.2[m-h]-，结合nmr数据确定该化合物的分子式为c29h36o15。
1h-nmr(dmso-d6,600mhz)δh:6.62(1h,d,j=1.8hz,h-2),6.64(1h,d,j=8.1hz,h-5),6.50(1h,dd,j=8.1,1.8hz,h-6),2.69(2h,m,h-7),4.35(1h,d,j=7.7hz,h-1'),4.60(1h,brs,h-1''),1.14(1h,d,j=6.2hz,h-6''),7.05(1h,brs,h-2'''),6.77(1h,d,j=8.0hz,h-5'''),7.01(1h,dd,j=8.0,1.7hz,h-6'''),7.47(1h,d,j=15.8hz,h-7'''),6.28(1h,d,j=15.8hz,h-8''')。
13c-nmr(dmso-d6,150mhz)δc:129.3(c-1),115.6(c-2),144.9(c-3),143.6(c-4),116.4(c-5),119.7(c-6),35.2(c-7),70.3(c-8),102.8(c-1'),71.5(c-2'),77.6(c-3'),68.3(c-4'),75.2(c-5'),66.6(c-6'),100.8(c-1''),70.8(c-2''),70.6(c-3''),72.0(c-4''),68.5(c-5''),18.1(c-6''),125.8(c-1'''),114.9(c-2'''),145.7(c-3'''),148.4(c-4'''),115.9(c-5'''),121.3(c-6'''),145.1(c-7'''),114.8(c-8'''),166.2(c-9''')。
以上氢谱特征及碳谱数据与文献报道基本一致，鉴定该化合物为连翘酯苷i。
化合物3透明玻璃状固体（甲醇），esi-msm/z:623.2[m-h]-，结合nmr数据确定该化合物的分子式为c29h36o15。
1h-nmr(dmso-d6,600mhz)δh:6.54(1h,brs,h-2),6.55(1h,d,j=8.2hz,h-5),6.41(1h,dd,j=8.2,2.0hz,h-6),2.56(2h,m,h-7),4.49(1h,d,j=8.1hz,h-1'),4.60(1h,brs,h-1''),1.14(1h,d,j=6.8hz,h-6''),7.06(1h,d,j=1.9hz,h-2'''),6.77(1h,d,j=8.2hz,h-5'''),7.02(1h,dd,j=8.2,1.9hz,h-6'''),7.49(1h,d,j=15.8hz,h-7'''),6.28(1h,d,j=15.8hz,h-8''')。
13c-nmr(dmso-d6,150mhz)δc:129.1(c-1),115.4(c-2),144.8(c-3),143.4(c-4),116.2(c-5),119.5(c-6),35.0(c-7),69.8(c-8),100.2(c-1'),73.4(c-2'),74.1(c-3'),70.6(c-4'),75.4(c-5'),66.6(c-6'),100.7(c-1''),70.4(c-2''),70.3(c-3''),71.9(c-4''),68.4(c-5''),17.9(c-6''),125.6(c-1'''),114.9(c-2'''),145.5(c-3'''),148.3(c-4'''),115.8(c-5'''),121.2(c-6'''),144.8(c-7'''),114.2(c-8'''),165.6(c-9''')。
以上氢谱特征及碳谱数据与文献报道基本一致，鉴定该化合物为连翘酯苷h。
化合物4透明玻璃状固体（甲醇），esi-msm/z:639.2[m-h]-，结合nmr数据确定该化合物的分子式为c29h36o16。
1h-nmr(dmso-d6,600mhz)δh:6.64(1h,o,h-2),6.64(1h,o,h-5),6.51(1h,brd,j=7.3hz,h-6),2.69(2h,m,h-7),4.31(1h,d,j=7.5hz,h-1'),4.19(1h,d,j=7.7hz,h-1''),7.06(1h,brs,h-2'''),6.77(1h,o,h-5'''),7.01(1h,d,j=7.1hz,h-6'''),7.49(1h,d,j=15.8hz,h-7'''),6.26(1h,d,j=15.8hz,h-8''')。
13c-nmr(dmso-d6,150mhz)δc:129.7(c-1),116.8(c-2),145.4(c-3),140.0(c-4),116.3(c-5),120.0(c-6),35.5(c-7),71.7(c-8),103.1(c-1'),73.9(c-2'),74.4(c-3'),70.7(c-4'),73.7(c-5'),68.6(c-6'),103.7(c-1''),74.0(c-2''),77.0(c-3''),70.4(c-4''),77.3(c-5''),61.4(c-6''),125.9(c-1'''),115.4(c-2'''),146.1(c-3'''),149.1(c-4'''),116.0(c-5'''),121.9(c-6'''),145.4(c-7'''),114.2(c-8'''),166.7(c-9''')。
以上碳谱数据与文献[9]报道基本一致，鉴定该化合物为lugrandoside。
化合物5透明色玻璃状固体（甲醇），esi-msm/z:639.2[m-h]-，结合nmr数据确定该化合物的分子式为c29h36o16。
1h-nmr(dmso-d6,600mhz)δh:6.64(2h,brs,h-2,5),6.52(1h,dd,j=8.0,1.7hz,h-6),2.69(2h,m,h-7),4.36(1h,d,j=7.7hz,h-1'),4.25(1h,d,j=7.7hz,h-1''),7.06(1h,brs,h-2'''),6.78(1h,d,j=7.9hz,h-5'''),7.01(1h,d,j=7.9hz,h-6'''),7.48(1h,d,j=15.9hz,h-7'''),6.30(1h,d,j=15.9hz,h-8''')。
13c-nmr(dmso-d6,150mhz)δc:129.8(c-1),116.8(c-2),145.3(c-3),143.9(c-4),116.3(c-5),120.1(c-6),35.5(c-7),70.6(c-8),103.0(c-1'),71.9(c-2'),78.0(c-3'),68.3(c-4'),75.8(c-5'),68.5(c-6'),103.8(c-1''),74.0(c-2''),77.3(c-3''),70.5(c-4''),77.1(c-5''),61.5(c-6''),126.1(c-1'''),116.0(c-2'''),145.4(c-3'''),148.7(c-4'''),116.3(c-5'''),121.7(c-6'''),146.0(c-7'''),115.2(c-8'''),166.6(c-9''')。
以上氢谱特征及碳谱数据与文献报道基本一致，鉴定该化合物为isolugrandoside。
化合物6浅棕色玻璃状固体（甲醇），esi-msm/z:639.2[m-h]-，结合nmr数据确定该化合物的分子式为c29h36o16。
1h-nmr(dmso-d6,600mhz)δh:6.55(1h,brs,h-2),6.54(1h,d,j=8.0hz,h-5),6.42(1h,dd,j=8.0,1.9hz,h-6),2.56(2h,m,h-7),4.49(1h,d,j=8.1hz,h-1'),4.24(1h,d,j=7.8hz,h-1''),7.06(1h,brs,h-2'''),6.77(1h,d,j=8.1hz,h-5'''),7.02(1h,dd,j=8.1,1.9hz,h-6'''),7.49(1h,d,j=15.8hz,h-7'''),6.28(1h,d,j=15.8hz,h-8''')。
13c-nmr(dmso-d6,150mhz)δc:129.3(c-1),115.9(c-2),145.0(c-3),143.5(c-4),116.3(c-5),119.7(c-6),35.1(c-7),69.9(c-8),100.2(c-1'),74.3(c-2'),75.8(c-3'),70.2(c-4'),73.5(c-5'),68.4(c-6'),103.5(c-1''),73.6(c-2''),77.0(c-3''),70.1(c-4''),76.8(c-5''),61.2(c-6''),125.7(c-1'''),115.5(c-2'''),145.7(c-3'''),148.4(c-4'''),115.5(c-5'''),121.4(c-6'''),145.2(c-7'''),115.0(c-8'''),165.8(c-9''')。
以上氢谱特征及碳谱数据文献报道基本一致，鉴定该化合物为ferruginosidea。
化合物7浅棕色玻璃状固体（甲醇），esi-msm/z:609.2[m-h]-，结合nmr数据确定该化合物的分子式为c28h34o15。
1h-nmr(dmso-d6,600mhz)δh:6.63(1h,brs,h-2),6.62(1h,d,j=8.0hz,h-5),6.50(1h,dd,j=8.0,2.0hz,h-6),2.69(2h,m,h-7),4.33(1h,d,j=7.7hz,h-1'),4.89(1h,t,j=9.4hz,h-3'),4.19(1h,d,j=7.6hz,h-1''),7.05(1h,brs,h-2'''),6.77(1h,d,j=8.0hz,h-5'''),7.01(1h,dd,j=8.0,1.9hz,h-6'''),7.47(1h,d,j=15.7hz,h-7'''),6.29(1h,d,j=15.7hz,h-8''')。
13c-nmr(dmso-d6,150mhz)δc:129.3(c-1),116.5(c-2),145.1(c-3),143.6(c-4),115.9(c-5),119.7(c-6),35.2(c-7),70.3(c-8),102.7(c-1'),71.5(c-2'),77.6(c-3'),67.9(c-4'),75.4(c-5'),68.1(c-6'),104.2(c-1''),73.4(c-2''),76.7(c-3''),69.7(c-4''),65.8(c-5''),125.8(c-1'''),114.8(c-2'''),145.7(c-3'''),148.4(c-4'''),115.6(c-5'''),121.3(c-6'''),145.1(c-7'''),114.9(c-8'''),166.3(c-9''')。
以上氢谱特征与文献报道基本一致，进一步结合二维光谱对该化合物的结构进行确认，并对碳信号进行归属，鉴定该化合物为lianqiaoxinganc。
化合物8浅棕色玻璃状固体（甲醇），esi-msm/z:609.2[m-h]-，结合nmr数据确定该化合物的分子式为c28h34o15。
1h-nmr(dmso-d6,600mhz)δh:6.64(1h,brs,h-2),6.63(1h,d,j=8.0hz,h-5),6.51(1h,dd,j=8.0,1.8hz,h-6),2.70(2h,m,h-7),3.62,3.89(2h,m,h-8),4.30(1h,d,j=8.1hz,h-1'),4.64(1h,t,j=9.8hz,h-4'),4.15(1h,d,j=7.6hz,h-1''),7.06(1h,brs,h-2'''),6.77(1h,d,j=7.9hz,h-5'''),7.02(1h,dd,j=7.9,1.4hz,h-6'''),7.49(1h,d,j=15.8hz,h-7'''),6.27(1h,d,j=15.8hz,h-8''')。
13c-nmr(dmso-d6,150mhz)δc:129.3(c-1),115.6(c-2),145.7(c-3),143.6(c-4),116.4(c-5),119.6(c-6),35.2(c-7),70.3(c-8),102.8(c-1'),74.0(c-2'),73.6(c-3'),71.3(c-4'),73.3(c-5'),68.2(c-6'),103.9(c-1''),73.4(c-2''),76.5(c-3''),69.6(c-4''),65.8(c-5''),125.6(c-1'''),115.0(c-2'''),145.0(c-3'''),148.6(c-4'''),115.9(c-5'''),121.6(c-6'''),145.8(c-7'''),113.9(c-8'''),166.3(c-9''')。
以上氢谱特征及碳谱数据与文献报道基本一致，并通过二维核磁数据对碳氢信号进行了归属，鉴定该化合物为calceolariosidec。
化合物9透明玻璃状固体（甲醇），esi-msm/z:461.2[m-h]-，结合nmr数据确定该化合物的分子式为c20h30o12。
1h-nmr(dmso-d6,400mhz)δh:6.59(1h,d,j=3.2hz,h-2),6.61(1h,d,j=8.0hz,h-5),6.47(1h,dd,j=8.0,2.0hz,h-6),2.64(2h,t,j=7.6hz,h-7),1.11(3h,d,j=6.4hz,h-6″)。
13c-nmr(dmso-d6,100mhz)δc:129.3(c-1),116.3(c-2),144.9(c-3),143.5(c-4),115.5(c-5),119.5(c-6),35.2(c-7),70.1(c-8),103.0(c-1′),73.4(c-2′),76.7(c-3′),70.2(c-4′),75.4(c-5′),67.0(c-6′),100.8(c-1″),70.7(c-2″),70.5(c-3″),72.0(c-4″),68.4(c-5″),18.0(c-6″)。
以上氢谱特征及碳谱数据与文献报道基本一致，鉴定该化合物为连翘酯苷e。
化合物10透明玻璃状固体（甲醇），esi-msm/z:477.2[m-h]-，结合nmr数据确定该化合物的分子式为c20h30o13。
1h-nmr(dmso-d6,600mhz)δh:6.60(1h,d,j=1.8hz,h-2),6.61(1h,d,j=8.2hz,h-5),6.47(1h,dd,j=8.2,1.8hz,h-6),4.15(1h,d,j=7.8hz,h-1′),4.22(1h,d,j=7.8hz,h-1′)。
13c-nmr(dmso-d6,150mhz)δc:129.3(c-1),116.3(c-2),144.9(c-3),143.5(c-4),115.5(c-5),119.5(c-6),35.1(c-7),70.0(c-8),102.8(c-1′),73.4(c-2′),76.7(c-3′),69.9(c-4′),75.7(c-5′),68.4(c-6′),103.3(c-1″),73.4(c-2″),76.9(c-3″),70.0(c-4″),76.7(c-5″),61.0(c-6″)。
以上氢谱特征及碳谱数据与文献报道基本一致，鉴定该化合物为ferruginosideb。
化合物11和化合物12为白色粉末状固体（甲醇），核磁共振光谱显示待测成分为一对差向异构体的混合物。
将核磁数据与文献报道对照，可以确认该成分为d-苦杏仁苷和l-苦杏仁苷的混合物，该混合物的分子量为esi-msm/z:456.2[m-h]-。
化合物11d-苦杏仁苷核磁数据归属如下：1h-nmr(dmso-d6,400mhz)δh:7.55(2h,o,h-4,8),7.48(3h,o,h-5,6,7),5.99(1h,s,h-2),4.20-4.60(2h,o,h-1',1'')；13c-nmr(dmso-d6,100mhz)δc:118.9(c-1),68.5(c-2),133.9(c-3),129.6(c-6),127.3(c-5,7),129.0(c-4,8),103.7(c-1'),73.1(c-2'),76.8(c-3'),70.1(c-4'),76.6(c-5'),66.8(c-6'),101.6(c-1''),73.8(c-2''),76.8(c-3''),70.1(c-4''),76.5(c-5''),61.1(c-6'')。
化合物12l-苦杏仁苷核磁数据归属如下：1h-nmr(dmso-d6,400mhz)δh:7.55(2h,o,h-4,8),7.48(3h,o,h-5,6,7),5.99(1h,s,h-2),4.20-4.60(2h,o,h-1',1'')；13c-nmr(dmso-d6,100mhz)δc:118.2(c-1),69.0(c-2),133.8(c-3),128.9(c-4,8),127.5(c-5,7),129.6(c-6),104.0(c-1'),72.9(c-2'),76.8(c-3'),70.3(c-4'),76.5(c-5'),67.1(c-6'),101.0(c-1''),73.6(c-2''),76.8(c-3''),70.0(c-4''),76.2(c-5''),61.1(c-6'')。
化合物13无定形固体（甲醇）esi-msm/z:340.1[m+hcoo]-,结合nmr数据确定该化合物的分子式为c14h17no6。
1h-nmr(dmso-d6,600mhz)δh:7.56(2h,d,j=7.7hz,h-2,6),7.48(2h,o,h-3,5),7.48(1h,o,h-4),6.03(1h,s,h-7),4.19(1h,d,j=6.6hz,h-1'),3.70(1h,brd,j=11.6hz,h-6'a),3.51(1h,brd,j=11.0hz,h-6'b),3.09(4h,o,h-2',h-3',h-4',h-5');13c-nmr(dmso-d6,150mhz)δc:134.4(c-1),128.1(c-2,6),129.7(c-3,5),130.3(c-4),67.3(c-7),119.5(c-8),101.8(c-1'),73.9(c-2'),77.2(c-3'),70.6(c-4'),78.0(c-5'),61.8(c-6').以上氢谱特征及碳谱数据与文献报道基本一致，鉴定该化合物为sambunigrin。
化合物14不定形固体（甲醇），esi-msm/z:315.1［m-h]-，结合nmr数据确定该化合物的分子式为c14h20o8。
1h-nmr(dmso-d6,600mhz)δh:6.04(2h,d,j=10.1hz,h-2,6),6.97(2h,dd,j=10.1hz,2.6hzh-3,5),4.07(1h,d,j=7.8hz,h-1'),1.89(2h,m,h-1'')。
13c-nmr(dmso-d6,150mhz)δc:185.3(c-1),126.4(c-2,6),153.4(c-3orc-5),153.3(c-3orc-5),67.3(c-4),39.7(c-1'),63.9(c-2'),102.9(c-1''),73.4(c-2''),76.9(c-3''),70.0(c-4''),76.7(c-5''),61.0(c-6'')。
以上氢谱特征及碳谱数据与文献报道基本一致，鉴定该化合物为cornoside。
化合物15不定形固体（甲醇），esi-msm/z:195.1[m-h]-，结合nmr数据确定该化合物的分子式为c10h12o4。
1h-nmr(dmso-d6,600mhz)δh:7.02(2h,brd,j=10.0hzh-2,6),6.08(2h,brd,j=10.0hz,h-3,5),2.69(2h,s,h-1'),4.01(2h,q,j=14.2hz,7.1hz,h-3'),1.13(3h,td,j=7.1hz,1.4hz,h-4')。
13c-nmr(dmso-d6,150mhz)δc:185.2(c-1),126.8(c-2,c-6),151.7(c-3,c-5),66.6(c-4),44.9(c-1'),168.6(c-2'),60.2(c-3'),14.1(c-4')。
以上氢谱特征及碳谱数据与文献报道基本一致，鉴定该化合物为4-hydroxy-4-methylenecarbomethoxy-cyclohexa-2,5-dienone。
化合物16白色结晶（甲醇），esi-msm/z:787.2[m+hcoo]-,765.3[m+na]+，结合nmr数据确定该化合物的分子式为c34h46o18。
1h-nmr(dmso-d6,600mhz)δh:3.76(12h,s,och3-2,2',6,6'),6.66(4h,s,h-3,3',5,5'),4.67(2h,d,j=3.8hz,h-7,7'),4.20(2h,m,h-9α,9'α),3.83(2h,dd,j=9.2,3.4hz,h-9β,9'β)。
13c-nmr(dmso-d6,150mhz)δc:137.3(c-1,1'),152.8(c-2,2',6,6'),104.3(c-3,3',5,5'),133.8(c-4,4'),85.2(c-7,7'),53.7(c-8,8'),71.5(c-9,9'),56.6(och3-2,2',6,6'),102.8(c-1'',1'''),74.3(c-2'',2'''),77.3(c-3'',3'''),70.0(c-4'',4'''),76.6(c-5'',5'''),61.0(c-6'',6''')。
以上氢谱特征及碳谱数据与文献报道基本一致，鉴定该化合物为liriodendrin。
化合物17白色粉末（甲醇），esi-msm/z:417.1[m-h]-，结合nmr数据确定该化合物的分子式为c21h22o9。
1h-nmr(dmso-d6,600mhz)δh:5.53(1h,dd,j=12.7,2.8hz,h-2),7.65(1h,d,j=8.6hz,h-5),6.35(1h,d,j=2.2hz,h-8),6.51(1h,dd,j=8.6,2.2hz,h-6),7.45(2h,d,j=8.7hz,h-2',6'),7.07(2h,d,j=8.8hz,h-3',5'),3.15(1h,o,h-3a)2.68(1h,dd,j=16.7,2.9hz,h-3b),3.2-3.5(4h,m,,2'',3'',4'',5''),4.89(1h,d,j=7.5hz,h-6''a),3.70(1h,d,j=12.0hz,h-6''b).13c-nmr(dmso-d6,150mhz)δc:78.8(c-2),43.3(c-3),190.0(c-4),132.5(c-5),110.7(c-6),164.8(c-7),113.6(c-8),163.2(c-9),102.7(c-10),128.5(c-1'),128.1(c-2',6'),116.3(c-3',5'),157.6(c-4'),100.4(c-1''),73.3(c-2''),76.7(c-3''),69.8(c-4''),77.2(c-5''),60.8(c-6'').以上氢谱特征及碳谱数据与文献报道基本一致，鉴定该化合物为甘草素-7-o-β-d-葡萄糖苷。
化合物18淡黄色不定形固体（甲醇），esi-msm/z:137.0［m-h]-，结合nmr数据确定该化合物的分子式为c7h6o3。
1h-nmr(dmso-d6,600mhz)δh:9.68(cho),7.22(1h,brs,h-2),6.89(1h,d,j=8.4hz,h-3),7.25(1h,brd,j=7.8hz,h-4)。
13c-nmr(dmso-d6,150mhz)δc:191.1(cho),128.8(c-1),115.5(c-2),145.9(c-3),152.2(c-4),114.3(c-5),124.5(c-6)。
以上氢谱特征及碳谱数据与文献报道基本一致，鉴定该化合物为3,4-二羟基苯甲醛。
实施例2
按比例称取：连翘30kg、金银花20kg、板蓝根30kg、大黄6kg、广藿香10kg、绵马贯众20kg、红景天6kg、薄荷脑0.5kg、麻黄10kg、苦杏仁6kg、鱼腥草30kg、甘草6kg、石膏30kg，按照以下工艺提取：
(1)按照原料药重量比例称取中药材，净选，酌情碎断；
(2)广藿香碎断，加10倍量水提取挥发油，提油时间8小时，收集挥发油，备用；提取液过滤后，残渣弃去，滤液备用；
(3)连翘、麻黄、鱼腥草、大黄，用12倍量70%的乙醇提取3次，每次2.5小时，提取液合并过滤，回收乙醇，滤液备用；
(4)金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加12倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁，煎煮2次，每次1小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤（2）广藿香提油后的滤液合并，浓缩成在60℃时测定相对密度为1.10的清膏，加入乙醇，调节至醇浓度为70%，冷藏放置，过滤，回收乙醇至无醇味，得清膏备用；
(5)将步骤（4）所得清膏与步骤（3）所得醇提液合并，浓缩至在60℃时测定相对密度为1.15的清膏，干燥，得总浸膏，备用。
分离方法步骤同实施例1，结果分离得到十八种化合物。
实施例3
原料药配方为：连翘27.8kg、金银花29.4kg、板蓝根28.5kg、大黄5.5kg、广藿香9.5kg、绵马贯众29kg、红景天8.7kg、薄荷脑0.85kg、麻黄8.8kg、苦杏仁8kg、鱼腥草28.4kg、甘草9.5kg、石膏27.7kg，按照以下工艺提取：
(1)按照原料药重量比例称取中药材，净选，酌情碎断；
(2)广藿香碎断，加10倍量水提取挥发油，提油时间8小时，收集挥发油，备用；提取液过滤后，残渣弃去，滤液备用；
(3)连翘、麻黄、鱼腥草、大黄，用12倍量70%的乙醇提取3次，每次2.5小时，提取液合并过滤，回收乙醇，滤液备用；
(4)金银花、石膏、板蓝根、绵马贯众、甘草、红景天，加12倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁，煎煮2次，每次1小时，提取液合并过滤，所得滤液与步骤（2）广藿香提油后的滤液合并，浓缩成在60℃时测定相对密度为1.13的清膏，加入乙醇，调节至醇浓度为70%，冷藏放置，过滤，回收乙醇至无醇味，得清膏备用；
(5)将步骤（4）所得清膏与步骤（3）所得醇提液合并，浓缩至在60℃时测定相对密度为1.18的清膏，干燥，得总浸膏，备用。
分离方法步骤同实施例1，结果分离得到十八种化合物。