一种中药组合物及其制备方法与应用与流程

本发明涉及一种中药组合物，特别涉及一种制备预防小儿哮喘复发药物的中药组合物及应用。

(二)

背景技术：

支气管哮喘是儿童常见慢性气道变态反应性疾病，临床主要表现为气道高反应性、气流受限、肺功能降低，病理特征为慢性气道炎症和气道重塑，导致疾病迁延难愈且反复急性发作。尽管哮喘一直是呼吸道疾病研究热点之一，但其治疗效果一直不尽人意。中医治疗哮喘有悠久的历史。中医学认为小儿哮喘属“哮病”、“喘证”范畴，肺、脾、肾三脏亏虚是哮喘发病的内因。针对小儿哮喘缓解期的治疗多以扶正为主，涉及脏腑主要为肺、脾、肾三脏。《景岳全书·喘促》曾指出:“此等证候，当惓惓以元气为念，必使元气渐充，庶可望其渐愈。”即只有通过扶正固本，才能使“元气渐充”，达到根治目的。

李香玉等运用王烈教授经验方(防哮方)治疗哮喘稳定期患儿取得较好疗效。中药组方组成：黄芪20g、玉竹20g、太子参5g、女贞子20g、补骨脂20g、五味子5g、牡蛎20g、大枣20g、佛手10g、山药20g，熟地黄20g、制何首乌20g、海螵蛸20g。吴疆运用参苓白术散加味方治疗哮喘缓解期患儿取得较好疗效。参苓白术散加味方组成：白术15g，茯苓15g，山药10g，莲子10g，薏苡仁10g，扁豆10g，砂仁8g，太子参20g，防风10g，桔梗10g，黄芪15g，炙甘草6g。朱永琴等运用冬令扶正膏治疗哮喘缓解期患儿，结果显示具有较好的抗复发作用。冬令扶正膏药物组成：太子参、云茯苓、炒白术、姜半夏各100～200g，生甘草、广陈皮、青防风、阳春砂各30～60g，生黄芪150～200g，当归100～150g，淮山药、津红枣各200g，石菖蒲60～100g，陈阿胶、陈黄酒、晶冰糖250g，制成冬令膏方，服用一个月。蒲春阳等运用固本止喘膏治疗支气管哮喘缓解期患儿，结果显示能有效改善临床症状，有效降低总IgE及EOS水平，并能降低哮喘发作次数。目前，文献报道的治疗方法基本从“肺、脾、肾三脏亏虚”的角度考虑的治疗方法，尚未有从“肺、肝、脾”角度考虑治疗哮喘缓解期的报道。

秦妍滨等检索了2004年1月至2013年12月公布在索中华人民共和国国家知识产权局网站(http://www.sipo.gov.cn)有关抗哮喘中药专利的相关数据，检索结果显示：共有662项抗哮喘中药专利，涉及5个国家，其中，中国有654项，占98.8％。韩国4项，日本2项，瑞典和新加坡各1项。在这662项抗哮喘中药专利中，82.3％(545/662)为传统中药剂型，制成中药丸占5.9％(39/662)，吸入剂占3.1％(20/662)，外用占4.7％(31/662)，食入占4.1％(27/622)。其中48项传统中药剂型在方剂中进行了辨证，主要为寒性哮喘、热性哮喘和各种虚证哮喘。治疗虚型哮喘的11个专利包括：肾阳虚哮喘、肾虚型哮喘、阳虚哮喘、阴虚哮喘、气虚型哮喘5个证型，但是没有治疗“气阴两虚型”哮喘的专利。

结合小儿“阳常有余，阴常不足”、“肝常有余、肺常不足、脾常不足”的生理特征，浙江省名中医、全国名老中医药专家学术经验继承指导老师宣桂琪教授从“肺、肝、脾”角度考虑，采用益气养阴法拟定了具益气养阴、补肺固表、平肝健脾之效的“宣氏防哮方”并在临床治疗气阴不足型儿童缓解期哮喘中取得良好效果。

(三)

技术实现要素：

本发明目的是提供一种中药组合物及其制备方法与应用。从“肺、肝、脾”角度考虑，为临床治疗气阴不足型儿童缓解期哮喘提供了有效的治疗方法。填补了目前临床上治疗气阴两虚型儿童哮喘有效治疗手段的空白，解决了现有治疗方法中：重视肺脾气虚而忽略肝阴不足的问题，并创制了一种治疗气阴两虚型儿童哮喘的有效膏方新制剂。

本发明采用的技术方案是：

本发明提供一种中药组合物，所述中药组合物由如下质量配比的原料制成：南沙参50～100份、北沙参50～100份、麦冬50～80份、地骨皮30～80份、生白芍50～90份、生石决明100～150份、太子参60～150份、白术60～90份、茯苓100～150份、陈皮50～90份、姜半夏60～80份、蝉衣30～60份和紫草30～60份。

进一步，优选所述中药组合物由如下质量配比的原料制成：南沙参60～100份、北沙参60～100份、麦冬60～80份、地骨皮50～80份、生白芍60～90份、生石决明100～150份、太子参90～150份、白术60～90份、茯苓100-150份、陈皮60～90份、姜半夏60～80份、蝉衣50～60份和紫草50～60份。

更进一步，优选所述中药组合物由如下质量配比的原料制成：南沙参60份、北沙参60份、麦冬60份、地骨皮50份、生白芍60份、生石决明100份、太子参150份、白术60份、茯苓100份、陈皮60份、姜半夏70份、蝉衣50份和紫草50份。

本发明所述中药组合物是由配方量各原料加水煎煮后获得的煎煮液经浓缩制成的浸膏。

进一步，所述中药组合物为膏方，所述膏方由中药组合物与药用辅料制成，所述药用辅料为阿胶、黄酒及冰糖中的一种或多种的混合。

进一步，所述膏方制备方法为：将中药组合物与药用辅料混合，煎成膏方；所述药用辅料由阿胶、黄酒和冰糖以质量比1:1:1组成；所述中药组合物用量以浸膏总量计，所述药用辅料与浸膏质量比为2～3：1。

本发明还提供一种所述中药组合物的制备方法，所述制备方法为：按配方量，将各原料加冷水浸泡12～24h后，水煎提取2～4次，每次先文火煎煮至药充分膨胀、再煮沸，保持沸腾1～2h，合并煎汁，将残渣压榨、过滤得到压榨液；将煎汁与压榨液合并，静置沉淀2h，过滤，取澄清液，浓缩物浸膏，即为中药组合物(生药量为4g/ml)。

此外，本发明还提供一种所述中药组合物在制备预防小儿哮喘复方药物中的应用。

根据小儿阴常不足，阳常有余的生理特点，临床发现：哮喘反复发作的患儿，阴虚火旺的体质逐年增多。同时，“小儿肺常不足，肝常有余，脾常不足，肾常虚”的生理特点，哮喘反复发作患儿，气阴两虚型的比例逐年增高。本型患儿既有肺阴不足，阴虚火旺的表现(喉间少痰，咽红不肿，五心烦热，夜寐汗出，盗汗较多，大便偏干，舌红苔薄光剥，脉弦数)，又有肺脾气虚的表现(哮喘反复发作，纳食欠佳，面色欠华，精神欠佳)，治疗上以南北沙参、麦冬养阴润肺；地骨皮清虚热；白芍配石决明养肝阴平肝热，以防肝火犯肺，木火刑金而致肺热难清；太子参、白术、茯苓益气健脾；陈皮、姜半夏健脾以祛“伏痰”；蝉衣、紫草祛风脱敏，上药共凑益气养阴、补肺固表、平肝健脾的作用。

与现有技术相比，本发明有益效果主要体现在：

传统治疗方法基本从“肺、脾、肾三脏亏虚”的角度考虑的治疗方法，尚未有从“肺、肝、脾”角度考虑治疗哮喘缓解期。本发明结合了小儿“阳常有余，阴常不足”、“肝常有余、肺常不足、脾常不足”的生理特征，从“肺、肝、脾”角度考虑，采用益气养阴法拟定了具益气养阴、补肺固表、平肝健脾之效的药物组合，并在临床运用，取得良好效果。本发明的药物组合，除了常用的益气、健脾、化痰药物：太子参、白术、茯苓、陈皮、姜半夏外，加用养肝平肝的白芍、石决明。同时，根据哮喘的病机，加用了具有祛风脱敏，抗过敏作用的蝉衣、紫草。

(四)附图说明

图1肺组织病理学改变HE染色图，光镜×200，A为正常对照组，B为哮喘模型组，C为中药组合物低剂量组，D为中药组合物中剂量组，E为中药组合物高剂量组，F为地塞米松组。

图2气道形态学参数的变化图，a为肺组织切片平滑肌标化面积WAm/Pbm，b为肺组织切片内管壁标化面积WAi/Pbm；A为正常对照组，B为哮喘模型组，C为中药组合物低剂量组，D为中药组合物中剂量组，E为中药组合物高剂量组，F为地塞米松组，与正常对照组比较，^*P<0.05；与哮喘模型组比较，^#P<0.05；与地塞米松组比较，^△P<0.05。

图3大鼠肺组织中TGF-β₁(a)、Smad2(b)、Smad 3(c)mRNA的扩增曲线。

图4大鼠肺组织中TGF-β₁(a)、Smad2(b)、Smad 3(c)mRNA的溶解曲线。

图5大鼠肺组织中TGF-β₁(a)、Smad2(b)、Smad 3(c)mRNA表达水平，A为正常对照组，B为哮喘模型组，C为中药组合物低剂量组，D为中药组合物中剂量组，E为中药组合物高剂量组，F为地塞米松组。

图6各组大鼠肺组织中Smad2/3磷酸化水平，a为P-Smad2表达量，b为P-Smad3表达量；A为正常对照组，B为哮喘模型组，C为中药组合物低剂量组，D为中药组合物中剂量组，E为中药组合物高剂量组，F为地塞米松组。

图7肺组织P-Smad2/3蛋白表达图，用Western-blot法检测获得的P-Smad2/3蛋白表达图；A为正常对照组，B为哮喘模型组，C为中药组合物低剂量组，D为中药组合物中剂量组，E为中药组合物高剂量组，F为地塞米松组。

(五)具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：

本发明实施例所用药物均按照《中国药典》2015版采集制备。

实施例1

(1)中药组合物配方：南沙参100克、北沙参100克、麦冬80克、地骨皮80克、生白芍80克、生石决明100克、太子参150克、白术70克、茯苓100克、陈皮60克、姜半夏80克、蝉衣60克，紫草50克。

(2)中药组合物的制备：

按配方量，将各原料加水浸泡(冷水)，水埋过药面10～20cm(即水面高出药面10～20cm)，浸泡12～24h后，水煎提取2～4次，每次先文火煎煮至药充分膨胀、再煮沸，保持沸腾1～2h，合并煎汁，将残渣压榨、过滤得到压榨液；将煎汁与压榨液合并，静置沉淀2h，过滤，取澄清液555ml，生药量为2g/ml；

(3)膏方

将步骤(2)制备的澄清液555ml煮沸、去浮沫，文火煎煮浓缩至浸膏250g，浸膏边搅拌边加入用250克黄酒洋化的阿胶250克，冰糖250克，不断搅拌直至收膏，获得膏方1000g。

(4)膏方服用方法

冬至前后起每日服用该膏方1～2次，每次10克，温开水冲服，30～50天服完1料，为1疗程，并随访12个月。中途哮喘发作者，停药按发作期处理，待缓解后继续服用膏方。

实施例2

配方：南沙参60g、北沙参70g、麦冬70g、地骨皮50g、生白芍70g、生石决明120g、太子参60g、白术60g、茯苓120g、陈皮70g、姜半夏60g、蝉衣40g、紫草40g。按实施例1方法制备，获得澄清液445ml，生药量为2g/ml。

实施例3

配方：南沙参50g、北沙参50g、麦冬50g、地骨皮30g、生白芍50g、生石决明150g、太子参105g、白术90g、茯苓150g、陈皮90g、姜半夏70g、蝉衣30g、紫草30g。按实施例1方法制备，获得澄清液473ml，生药量为2g/ml。

实施例4

1、实验操作

1)实验动物及分组

48只SD大鼠随机分为正常对照组、哮喘模型组、中药组合物低、中、高剂量组、地塞米松组，每组8只。以卵白蛋白(OVA)致敏及激发制备大鼠慢性哮喘模型，除正常对照组外各组分别于第1天、第8天分别在大鼠两腹股沟、前后足趾皮下注射新鲜配制的OVA生理盐水致敏液(1mL生理盐水含OVA 10mg，氢氧化铝200mg)0.2mL，同时腹腔注射0.2mL。正常对照组用等量生理盐水致敏。第15天，将大鼠置于透明密闭容器中，以不同OVA质量浓度的OVA生理盐水溶液进行雾化吸入激发(第1、2周用1％浓度，第3、4周用1.5％浓度，第5、6周用2％浓度，第7、8周用2.5％浓度)，每次雾化30min，隔天1次，连续8周。正常对照组用等量生理盐水激发。第12周开始给药。

2)给药方法

实验第12周开始灌胃给药。给药剂量根据体表面积法折算，大鼠等效给药量(g/kg)＝6.25×成人给药量(g/kg)。实施例1方法制备的中药组合物低、中、高剂量组：以等效给药量的0.5倍、1倍、2倍给药，即中药组合物低剂量组1.25g/(kg·d)(相当于生药量1.39g/(kg·d))、中药组合物中剂量组2.5g/(kg·d)(相当于生药量2.78g/(kg·d))、中药组合物高剂量组5g/(kg·d)(相当于生药量5.55g/(kg·d))；地塞米松组：0.5mg/(kg·d)；正常对照组与哮喘模型组：生理盐水10ml/(kg·d)。每天灌胃给药1次，连续14天。

3)观察指标

观察各组大鼠一般情况，HE染色光镜下观察肺组织形态学变化，德国Leica公司的病理图像分析系统检测气道形态学参数，实时荧光定量PCR法(Real-Time PCR)检测肺组织TGF-β1、Smad2/3 mRNA的表达水平，蛋白质印迹法(Western-blot)检测肺组织P-Smad2/3蛋白表达量。

表1、RT-PCR法检测TGF-β₁、Smad2/3 mRNA的表达水平所用引物序列及扩增长度

2、结果

1)肺组织病理学改变

(1)正常对照组(图1中A)：肺组织结构清晰，管腔通畅，管壁厚度正常，上皮组织结构清晰，细胞排列整齐无脱落，气道平滑肌厚度正常，黏膜无肿胀、充血，肺泡结构清晰完整，无萎陷，肺间质无明显炎性细胞浸润。

(2)哮喘模型组(图1中B)：气管壁明显增厚，管腔狭窄，上皮组织增生、脱落，黏膜肿胀、充血，黏膜下细胞外基质沉积，气道平滑肌增厚，肺泡萎陷，肺泡间隔增厚，肺间质大量炎性细胞浸润(嗜酸性粒细胞和淋巴细胞为主)，血管壁增厚。

(3)中药组合物低、中、高剂量治疗组(图1中C、D、E)：与哮喘模型组比较，中药低剂量组病理改变无明显减轻，中、高剂量组病理改变不同程度减轻，其中中药高剂量组最为明显，支气管管腔无明显狭窄，气管壁增厚不明显，上皮组织结构轻度模糊，少量上皮细胞脱落，粘膜肿胀、充血较模型组减轻，粘膜下细胞外基质沉积减少，气道平滑肌轻度增厚，肺泡结构清晰，无明显萎陷，部分肺泡结构不完整，肺泡间隔轻度增厚，肺间质可见少量炎性细胞浸润。

(4)地塞米松组(图1中F)：肺组织结构清晰，管腔未见明显狭窄，管壁厚度基本正常，上皮组织结构清晰，细胞排列整齐，少许上皮细胞脱落，气道平滑肌厚度基本正常，黏膜无明显肿胀、充血，肺泡结构清晰，扩张良好，部分肺泡结构不完整，肺间质无明显炎性细胞浸润。

2)气道形态学参数变化

与正常对照组比较，哮喘模型组肺组织切片平滑肌标化面积WAm/Pbm、内管壁标化面积WAi/Pbm数值明显增高，差异具有统计学意义(P<0.05)；各治疗组与哮喘模型组比较WAm/Pbm、WAi/Pbm明显降低(P<0.05)；与地塞米松组比较，中药组合物低、中剂量组WAm/Pbm、WAi/Pbm均大于地塞米松组，且差异具有统计学意义(P<0.05)，中药高剂量组降低程度与地塞米松组无明显差异(P>0.05)。结果见表1、图2。

表1 各组气道形态学参数的变化μm²/μm)

注：与正常对照组比较，^*P<0.05；与哮喘模型组比较，^#P<0.05；与地塞米松组比较，^△P<0.05。

3)各组肺组织TGF-β1、Smad2/3 mRNA表达水平

根据扩增曲线(图3)及溶解曲线(图4)，正常对照组、哮喘模型组和各治疗组的肺组织的目的基因扩增良好，引物特异性好。结果见表2、图3、图4。

1.TGF-β₁ mRNA表达水平比较(图5中a)：与正常对照组比较，哮喘模型组TGF-β₁mRNA表达水平显著升高(P<0.05)；与哮喘模型组比较，各治疗组表达水平均明显下降，差异具有统计学意义(P<0.05)；中药中、高剂量组TGF-β₁ mRNA的表达水平与地塞米松组比较差异无统计学意义(P>0.05)。

2.Smad2 mRNA表达水平比较(图5中b)：与正常对照组比较，哮喘模型组Smad2 mRNA表达水平显著升高(P<0.05)；与哮喘模型组比较，各治疗组Smad2 mRNA表达水平均明显下降，差异具有统计学意义(P<0.05)；中药高剂量组Smad2 mRNA的表达水平与地塞米松组接近，差异无统计学意义(P>0.05)。

3.Smad3 mRNA表达水平比较(图5中c)：与正常对照组比较，哮喘模型组Smad3 mRNA表达水平显著升高(P<0.01)；与哮喘模型组比较，各治疗组Smad3 mRNA表达水平均明显下降，差异具有统计学意义(P<0.05)；中药中、高剂量组Smad3 mRNA的表达水平与地塞米松组比较差异无统计学意义(P>0.05)。

表2 各组大鼠肺组织中TGF-β₁、Smad2/3 mRNA表达水平

注：与正常对照组比较，*P<0.05；与哮喘模型组比较，^#P<0.05，与地塞米松组比较，^△P<0.05。

4)各组肺组织Smad2/3磷酸化水平

1.P-Smad2表达量比较(图6中a，图7)：与正常对照组相比，哮喘模型组及各治疗组P-Smad2表达均显著升高(P<0.05)；与哮喘模型组相比，中药低剂量组P-Smad2表达量下降不明显(P>0.05)，而中药中、高剂量组及地塞米松组均显著下降(P<0.05)；与地塞米松组相比，各中药治疗组P-Smad2表达量均高于地塞米松组，且具有统计学意义(P<0.05)。

2.P-Smad3表达量比较(图6中b，图7)：与正常对照组相比，哮喘模型组及各治疗组P-Smad3表达均显著升高(P<0.05)；与哮喘模型组相比，中药低、中、高剂量组及地塞米松组P-Smad3表达量均显著下降(P<0.05)；与地塞米松组相比，各中药治疗组P-Smad3表达量均高于地塞米松组，且具有统计学意义(P<0.05)。结果见表3、图6和图7。

表3 各组大鼠肺组织中Smad2/3磷酸化水平

注：与正常对照组比较，^*P<0.05；与哮喘模型组比较，^#P<0.05；与地塞米松组比较，^△P<0.05。