【技术领域】
本发明属于天然产物有效成份的提取技术领域，具体涉及一种从白芨中提取纯化白芨醇的方法。
背景技术：
白芨，又名连及草、甘根、白给、箬兰、朱兰、紫兰、紫蕙、百笠，多年生草本球根植物(块根)，植株高18-60厘米，主要分布在中国、日本以及缅甸北部。主要花期在春季，但依各地气候之不同，晚冬至夏初都可能开花。白芨有广泛的药用价值及园林价值。主要用于收敛止血，消肿生肌。花有紫红、白、蓝、黄和粉等色，可盆栽室内观赏，亦可点缀于较为荫蔽的花台、花境或庭院一角。
白芨具有止血作用、美白祛斑、收敛去痘印、抗氧化、消肿生肌、保护胃粘膜、抗菌、治疗结核病的功效与作用。其中，白芨中含有的二氢菲并吡喃类化合物白芨醇，白芨醇浸液对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、人型结核杆菌有抑制作用；水浸液对奥杜盎小孢子菌有抑制作用；白芨所含有的3个联苯类和2个双氢菲类化合物对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、白色念珠菌atcc1057及发癣菌qm248有抑制作用。
关于白芨的研究多集中于种养技术，而公开的白芨醇的制备方法与工艺的专利比较少，公开专利cn104997701a“含白芨醇提取物的具有抗幽门螺杆菌的口腔护理产品”公开了一种白芨醇的提取方法，包括以下步骤：粉碎、乙醇回流提取、减压过滤、回流提取、浓缩，制得白芨醇提取物，该方法较为简单，提取效率较高，可操作性较强，易于实现工业化生产。
目前白芨醇提取方法存在的问题是：采用提取方法工艺较为单一，使得提取物中所含的杂质成分较多，纯度低，粘度不足，折光率低，使得白芨醇提取物难以作为定性、定量的对照品。
技术实现要素：
本发明提供的一种从白芨中提取纯化白芨醇的方法，以解决目前白芨醇提取纯度低，难以满足作为定性、定量的对照品的要求等问题。
为解决以上技术问题，本发明采用以下技术方法：
一种从白芨中提取纯化白芨醇的方法，包括以下步骤：
s1：将白芨块茎用灭菌生理盐水洗净，干燥后粉碎成粗粉，加入无菌蒸馏水在45-50℃下进行密闭发胀，滤掉水份，得到膨胀粗粉；
s2：将膨胀的粗粉与88-95％的乙醇混合，调节混合液ph为5.5-6.5，加入α-淀粉酶，在微波加热条件下回流提取3次，微波频率控制为450-550w，合并提取液，调节提取液的ph值至6.5-7，温度控制为35-45℃，将提取液通过活性炭脱色除杂，过滤得到一次脱色液；
s3：将步骤s2中的脱色液进行过滤、离心，真空减压浓缩后结晶，结晶过程中固液比为1:5-7(w/v)，晶体洗晶至棕黄色得到粗晶，粗晶加3-5倍量的蒸馏水溶解，再利用6-8倍量的石油醚反复萃取3次，将萃取液再次通过活性炭脱色除杂，过滤得到二次脱色液，所得二次脱色液置于60-65的旋转蒸发仪中，在0.9-1.1mpa下浓缩体积至5-8％，干燥，制得白芨醇。
优选地，步骤s1中，所述灭菌生理盐水浓度为4-5.5％。
优选地，步骤s1中，所述密闭发胀的时长为24-32h。
优选地，步骤s1中，所述无菌蒸馏水的的加入量应使其能浸没粗粉。
优选地，步骤s2中，所述粗粉与88-95％的乙醇混合的比例为1:8-12。
优选地，步骤s2中，所述α-淀粉酶为中温型淀粉酶或高温型淀粉酶，其加入量为混合液质量分数的0.1％。
优选地，步骤s2中，所述微波加热的温度应控制在92-95℃
优选地，步骤s2中，所述回流提取提取时长为10-15min。
优选地，步骤s3中，所述离心的转速为600r/min。
优选地，步骤s3中，所述干燥的温度为75-80℃，干燥时长为3-5h。
本发明具有以下有益效果：
本发明提供的一种从白芨中提取纯化白芨醇的方法是在无菌条件进行，无毒无污染，有效确保了白芨醇的纯度，所制备的白芨醇纯度高，达到99.21-99.62％，产品满足作为定性、定量的对照品的要求；同时本方法生产效率高，易于实现工业化生产。
【具体实施方式】
下面结合具体实施例进行具体说明。
实施例1
一种从白芨中提取纯化白芨醇的方法，包括以下步骤：
s1：将白芨块茎用浓度为4％灭菌生理盐水洗净，干燥后粉碎成粗粉，加入无菌蒸馏水并使其浸没粗粉，在45℃下进行密闭发胀24h，滤掉水份，得到膨胀粗粉；
s2：将膨胀的粗粉与88％的乙醇按1:8的比例混合，调节混合液ph为5.5，加入相当于混合液质量分数0.1％的中温型或高温型α-淀粉酶，在微波加热条件下回流提取3次，微波频率控制为450w，每次提取10min，同时通过控制微波辐照量将加热温度控制在92℃，合并提取液，调节提取液的ph值至6.5，温度控制为35℃，将提取液通过活性炭脱色除杂，过滤得到一次脱色液；
s3：将步骤s2中的提取液进行过滤，将滤液放入离心机并在600r/min的转速下离心分离，真空减压浓缩后结晶，结晶过程中固液比为1:5(w/v)，晶体洗晶至棕黄色得到粗晶，粗晶加3倍量的蒸馏水溶解，再利用6倍量的石油醚反复萃取3次，将萃取液再次通过活性炭脱色除杂，过滤得到二次脱色液，所得二次脱色液置于60的旋转蒸发仪中，在0.9mpa下浓缩体积至5％，在温度为75℃的条件下干燥3h，制得99.60％的白芨醇。
实施例2
一种从白芨中提取纯化白芨醇的方法，包括以下步骤：
s1：将白芨块茎用浓度为5％灭菌生理盐水洗净，干燥后粉碎成粗粉，加入无菌蒸馏水并使其浸没粗粉，在48℃下进行密闭发胀28h，滤掉水份，得到膨胀粗粉；
s2：将膨胀的粗粉与90％的乙醇按1:10的比例混合，调节混合液ph为6，加入相当于混合液质量分数0.1％的中温型或高温型α-淀粉酶，在微波加热条件下回流提取3次，微波频率控制为500w，每次提取12min，同时通过控制微波辐照量将加热温度控制在93℃，合并提取液，调节提取液的ph值至6.8，温度控制为40℃，将提取液通过活性炭脱色除杂，过滤得到一次脱色液；
s3：将步骤s2中的提取液进行过滤，将滤液放入离心机并在600r/min的转速下离心分离，真空减压浓缩后结晶，结晶过程中固液比为1:6(w/v)，晶体洗晶至棕黄色得到粗晶，粗晶加4倍量的蒸馏水溶解，再利用7倍量的石油醚反复萃取3次，将萃取液再次通过活性炭脱色除杂，过滤得到二次脱色液，所得二次脱色液置于62的旋转蒸发仪中，在1mpa下浓缩体积至6％，在温度为77℃的条件下干燥4h，制得99.25％的白芨醇。
实施例3
一种从白芨中提取纯化白芨醇的方法，包括以下步骤：
s1：将白芨块茎用浓度为5.5％灭菌生理盐水洗净，干燥后粉碎成粗粉，加入无菌蒸馏水并使其浸没粗粉，在50℃下进行密闭发胀32h，滤掉水份，得到膨胀粗粉；
s2：将膨胀的粗粉与95％的乙醇按1:12的比例混合，调节混合液ph为6.5，加入相当于混合液质量分数0.1％的中温型或高温型α-淀粉酶，在微波加热条件下回流提取3次，微波频率控制为550w，每次提取15min，同时通过控制微波辐照量将加热温度控制在95℃，合并提取液，调节提取液的ph值至7，温度控制为45℃，将提取液通过活性炭脱色除杂，过滤得到一次脱色液；
s3：将步骤s2中的提取液进行过滤，将滤液放入离心机并在600r/min的转速下离心分离，真空减压浓缩后结晶，结晶过程中固液比为1:7(w/v)，晶体洗晶至棕黄色得到粗晶，粗晶加5倍量的蒸馏水溶解，再利用8倍量的石油醚反复萃取3次，将萃取液再次通过活性炭脱色除杂，过滤得到二次脱色液，所得二次脱色液置于65的旋转蒸发仪中，在1.1mpa下浓缩体积至8％，在温度为80℃的条件下干燥5h，制得99.48％的白芨醇。
通过本发明实施例1-3制备的白芨醇，其纯度分别达到99.60％、99.25％、99.48％，纯度较高。为更好的验证本发明的方法制备的白芨醇作为定性与定量的特征，取实施例1-3制备的浓缩但未干燥的白芨醇采用阿贝折光仪进行折光率的测试，同时以公开专利cn104997701a“含白芨醇提取物的具有抗幽门螺杆菌的口腔护理产品”中的实施例1-3白芨醇制备方法所制备的白芨醇浓缩膏作为对比例，按照在同一条件下等量提取液浓缩至等量体积分数的条件进行，测试浓缩后的白芨醇的折光率，同时测试其粘度，结果如下表所示。
折光率和粘度是衡量有机化合物的重要物理常数，可以反映出有机化合物的纯度，由上述测试数据得出，本发明的实施例所制备的白芨醇折光率及粘度比现有技术都有了明显的提高，可以满足作为定性、定量对照品的要求。
以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明，对于所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明由所提交的权利要求书确定的专利保护范围。