本发明属于药物化工技术领域，具体地，本发明涉及一种具有双ache结合位点的取代吖啶类化合物及其制备方法和应用。本发明的化合物可以有效地抑制乙酰胆碱酯酶(ache)的活性，可以用于制备治疗及预防阿尔兹海默症(ad)的药物。
背景技术：
阿尔兹海默症简称ad，由aloisalzheimer首次发现并描述，该神经退行性疾病以认知能力下降为主要特征。目前全球患ad人数呈现逐年上升的趋势，预计到2050年，全球患ad人数将超过1亿2千万。随着全球人口老龄化，ad的患病人数及其引起的经济损失还会不断上升。因此用于治疗ad的新型化合物的设计研究成为迫切需要。
ad被证实是一种多因素的疾病。研究发现，遗传、环境、生活方式等许多因素均会影响ad的发病。所以目前有着多种多样的关于ad发病机制的假说，例如：胆碱能假说、淀粉样蛋白假说、tau蛋白假说、谷氨酸能假说、免疫失调假说、氧化应激假说等等。在众多假说中，胆碱能假说和淀粉样蛋白假说由于得到众多证据支持，是目前的关于ad发病机制的主流假说。
“胆碱能假说”一词由bartus等首次提出，用于解释ad群体中出现的大脑记忆缺陷。rossor首次明确地将胆碱能假说与ad联系起来，提出假说：正是由于大脑中上行胆碱能系统的损伤，才会导致ad患者的功能异常表现，具体而言就是阿尔兹海默症。而淀粉样蛋白假说则认为聚集形成纤维状结构的淀粉样蛋白aβ等由于能通过影响细胞内钙稳态会从而产生神经毒性，进而导致ad相关的病理变化。乙酰胆碱酯酶(ache)在这两个假说中都起了非常重要的作用。
乙酰胆碱酯酶(ache)存在于神经肌肉接头以及胆碱能突触间，主要功能是水解乙酰胆碱，从而终止信号的传递。抑制ache能提高突触间隙胆碱浓度，促进信号传递。ache的结构较为复杂，主要包括：催化活性部位cas区域、活性口袋入口pas区域、芳香峡谷以及后门区域等等。由于ache是ad的胆碱能假说和淀粉样蛋白假说的理论基础，自然而然，它成为了抗ad药物研究的热门靶点之一。
目前以ache作为靶点的ache抑制剂按照作用位点来分，主要分为三类：仅作用于cas位点的抑制剂，仅作用于pas位点的抑制剂，及同时作用于cas和pas的双结合位点的抑制剂。然而，目前在已上市的ache抑制剂中，除了多奈哌齐与pas有微弱的相互作用外，其余所有抑制剂都仅作用于ache的cas位点。理论上说，相比ache单位点抑制剂，双位点抑制剂能增加化合物与ache的结合能力。
因此，研究和开发新型能同时作用于cas和pas的双结合位点的ache抑制剂是目前本领域的一个新方向，有望能够极大增强现有抗ad药物的药效。
技术实现要素：
本发明的目的在于克服上述现有技术存在的不足，提供一类具有双ache结合位点的取代吖啶类化合物及其制备方法和应用。
本发明的第一方面提供了一种双ache结合位点的取代吖啶类化合物、或其药学上可接受的盐或前药，本发明的化合物具有如下式a化合物所示的结构：
式中，n为2～12的整数。
在另一优选例中，本发明的化合物具有如式(i)所示的结构式：
在另一优选例中，本发明的化合物具有如式(ii)所示的结构式：
在另一优选例中，本发明的化合物具有如式(iii)所示的结构式：
在另一优选例中，所述式a化合物抑制ache酶活性的ic50≤5μm，较佳地ic50≤1μm，更佳地ic50≤0.2μm，最佳地ic50≤0.05μm。
在另一优选例中，所述式a化合物对ache酶活性的最大抑制率为>95％。
本发明的第二方面提供了一种药物组合物，所述的药物组合物包括(a)如本发明第一方面所述的双ache结合位点的取代吖啶类化合物，或其药学上可接受的盐或前药作为活性成分以及(b)药学上可接受的载体。
本发明的第三方面提供了一种制备如本发明第二方面所述的药物组合物的方法，所述的药物组合物的制备方法包括步骤：
将药物有效量的式a化合物或其药学上可接受的盐或前药与药学上可接受的载体混合，形成药物组合物。
在另一优选例中所述的药物组合物还包括：多奈哌齐、美金刚、卡巴拉汀和加兰他敏。
在另一优选例中，所述的药物组合物所述药物组合物中含有0.01-99wt％，较佳地10-80wt％，更佳地30-75wt％的式a化合物、或其药学上可接受的盐，按组合物的总重量计。
在另一优选例中，所述的药学上可接受的载体选自下组：盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、二甲基亚砜、或其组合。
在另一优选例中，所述的药物组合物是口服制剂或注射剂。
本发明的第四方面提供了一种体外非治疗性抑制ache酶活性的方法，所述方法包括：对抑制对象施用抑制有效量的如本发明第一方面所述的双ache结合位点的取代吖啶类化合物或其药学上可接受的盐或前药，和/或本发明第二方面所述的药物组合物。
本发明的第五方面提供了一种如化合物xiii所示结构的双ache结合位点的取代吖啶类化合物的制备方法，包括如下步骤：
在有机溶剂存在下，化合物viii和化合物xii反应生成化合物xiii，
式中，n为2～12的整数；所述的有机溶剂选自下组：甲醇、乙腈、丙酮、或其组合；所述反应在50℃-90℃温度下进行。
本发明的第六方面提供了一种如本发明第一方面所述的双ache结合位点的取代吖啶类化合物，或其药学上可接受的盐或前药的用途，用于选自下组的用途：
(i)用于制备ache酶活性抑制剂；
(ii)用于制备治疗或预防神经退行性疾病的药物组合物；或
(iii)用于体外非治疗性抑制ache酶活性。
在另一优选例中，所述的神经退行性疾病包括阿尔兹海默症和帕金森病。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
具体实施方式
本发明人经过长期而深入的研究，意外地发现，一类具有双ache结合位点的取代吖啶类化合物，以吖啶为芳环头部，引入不同长度的脂肪链作为linker，以苄基作为芳环尾部，是一种新型的安全高效的ache抑制剂。通过抑制ache酶活性试验确认本发明所制备的新型化合物具有良好的抑制ache酶活性，可以用于制备治疗及预防阿兹海默症、帕金森病等神经退行性疾病的药物。在此基础上，完成了本发明。
活性成分
如本文所用，术语“本发明的化合物”指式a所示的化合物。该术语还包括式a化合物的各种晶型形式、药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物，也包括式a化合物的互变异构体、外消旋体、对映异构体和非对映异构体。
所述的药学上可接受的溶剂合物包括(但不限于)：式a化合物与水、乙醇、异丙醇、乙醚、丙酮等溶剂的溶剂合物。
如本文所用，术语“药学上可接受的盐”指本发明化合物与酸或碱所形成的适合用作药物的盐。药学上可接受的盐包括无机酸盐或有机酸盐；所述的无机酸选自下组的一种或多种：盐酸、氢溴酸、硝酸、硫酸、磷酸；所述的有机酸选自下组的一种或多种：甲酸、乙酸、丙酸、三氟乙酸、苯甲酸、马来酸、富马酸、琥珀酸、酒石酸、柠檬酸、烷基磺酸(如甲基磺酸、乙基磺酸等)、芳基磺酸(如苯磺酸、对甲苯磺酸等)。
药物组合物和施用方法
由于本发明化合物具有优异的对ache酶的抑制活性，因此本发明化合物及其各种晶型，药学上可接受的无机或有机盐，水合物或溶剂合物，以及含有以本发明化合物为主要活性成分的药物组合物可用于治疗、预防和缓解由ache酶介导的疾病。
本发明化合物可用于制备治疗及预防阿尔兹海默症(ad)的药物。
本发明的药物组合物包含安全有效量范围内的本发明化合物或其药理上可接受的盐及药理上可以接受的赋形剂或载体。其中“安全有效量”指的是：化合物的量足以明显改善病情，而不至于产生严重的副作用。
“药学上可以接受的载体”指的是：一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质，它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。“相容性”在此指的是组合物中各组份能和本发明的化合物以及它们之间相互掺和，而不明显降低化合物的药效。药学上可以接受的载体部分例子有纤维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素钠、纤维素乙酸酯等)、明胶、滑石、固体润滑剂(如硬脂酸、硬脂酸镁)、硫酸钙、植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等)、多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化剂(如
本发明化合物或药物组合物的施用方式没有特别限制，代表性的施用方式包括(但并不限于)：口服、瘤内、直肠、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)、和局部给药。
用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在这些固体剂型中，活性化合物与至少一种常规惰性赋形剂(或载体)混合，如柠檬酸钠或磷酸二钙，或与下述成分混合：(a)填料或增容剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合剂，例如，羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；(c)保湿剂，例如，甘油；(d)崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐、和碳酸钠；(e)缓溶剂，例如石蜡；(f)吸收加速剂，例如，季胺化合物；(g)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(h)吸附剂，例如，高岭土；和(i)润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，或其混合物。胶囊剂、片剂和丸剂中，剂型也可包含缓冲剂。
固体剂型如片剂、糖丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可采用包衣和壳材制备，如肠衣和其它本领域公知的材料。它们可包含不透明剂，并且这种组合物中，活性化合物或化合物的释放可以延迟的方式在消化道内的某一部分中释放。可采用的包埋组分的实例是聚合物质和蜡类物质。必要时，活性化合物也可与上述赋形剂中的一种或多种形成微胶囊形式。
用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。除了活性化合物外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，例知，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油或这些物质的混合物等。
除了这些惰性稀释剂外，组合物也可包含助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香料。
除了活性化合物外，悬浮液可包含悬浮剂，例如，乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、甲醇铝和琼脂或这些物质的混合物等。
用于肠胃外注射的组合物可包含生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。适宜的含水和非水载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。
用于局部给药的本发明化合物的剂型包括软膏剂、散剂、贴剂、喷射剂和吸入剂。活性成分在无菌条件下与生理上可接受的载体及任何防腐剂、缓冲剂，或必要时可能需要的推进剂一起混合。
本发明化合物可以单独给药，或者与其他药学上可接受的化合物联合给药。
使用药物组合物时，是将安全有效量的本发明化合物适用于需要治疗的哺乳动物(如人)，其中施用时剂量为药学上认为的有效给药剂量，具体剂量应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。
ache抑制剂
如本文所用，术语“ache抑制剂”指能够用于抑制ache酶活性的化合物或组合物。
ache存在于神经肌肉接头以及胆碱能突触间，主要功能是水解乙酰胆碱，从而终止信号的传递。抑制ache能提高突触间隙胆碱浓度，促进信号传递。ache催化机理复杂，是阿尔兹海默症的胆碱能假说和淀粉样蛋白假说的理论基础，对患有上述疾病的对象施用ache抑制剂，能够有效地治疗或改善其疾病。
其中，上述的“治疗”指指疾病或病症或其至少一种可辨的症状的减轻、预防或逆转，与所治疗疾病或病症相关的至少一个可测量身体参数的改善、预防或逆转，抑制或减缓疾病或病症的进展，或延迟疾病或病症的发作。
上述的“改善”某一特定疾病的症状是指任何减轻，无论是永久的，临时的，长期的，短暂的疾病或病症或其至少一种可辨的症状的减轻、预防或逆转。
式a化合物
本发明提供了一种双ache结合位点的取代吖啶类化合物，具体地，本发明提供了一种如式a所示的化合物：
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
本发明涉及的一类双ache结合位点的取代吖啶类化合物，其结构式为：
上述式(a)中，n为2～12的整数中的任意一种。
优选的，其结构式为式(i)、式(ii)、式(iii)所示的结构：
本发明化合物的制备方法
本发明的一种优选的双ache结合位点的取代吖啶类化合物的合成路线如下所示：
本发明还涉及一种制备上述式(iii)所示的结构的双2-取代乙烯磺酸酯类化合物的方法，具体步骤如下：
(1)向500ml茄型瓶中加入2-氯苯甲酸(23.9g,153mmol)、苯胺(9.8g,105mmol)、铜粉(3.2g,50mmol)和碳酸钾(34.0g,246mmol)，最后加入dmf(250ml)，于130℃油浴中搅拌过夜，tlc检测苯胺完全消失，撤出油浴，自然降温至室温，向反应混合物中加入水(750ml)，并用稀盐酸调节ph至弱酸性。析出的沉淀经过滤后用水洗涤，抽干，得到n-苯基邻氨基苯甲酸。
(2)在100ml茄型瓶中，加入n-苯基邻氨基苯甲酸(5.0g，23.5mmol)，三氯氧磷(50ml，537mmol)，于110℃油浴搅拌3小时，tlc(展开剂：二氯甲烷/甲醇＝20/1)检测化合物iii-14完全消失，撤出油浴，自然降温至室温，将反应混合物缓慢加入150g冰中并剧烈搅拌。待放热完毕后，用饱和碳酸氢钠溶液调节ph至不再产生气泡。过滤，滤饼用水淋洗2～3次，抽干，得到固体即9-氯吖啶。
(3)在试管中加入9-氯吖啶(0.201g,0.94mmol)与苯酚(1.30g,13.8mmol)，于80℃油浴加热1小时，反应混合物移出油浴，冷却至室温后，将反应混合物溶解在二氯甲烷(50ml)中，并用1mol/l氢氧化钠溶液(30ml)分批洗涤，直至苯酚消失。有机相用饱和氯化钠溶液洗涤，用硫酸钠干燥。蒸发并抽干后，即为目标产物9-苯氧基吖啶。
(4)在500ml茄型瓶内加入1,9-壬二醇(5.0g，31.2mmol)、二氯甲烷(100ml)和dmf(3滴)。将二氯亚砜(11.7g，98.3mmol)溶解于二氯甲烷(155ml)中。在冰浴下，将二氯亚砜溶液逐滴加入茄型瓶中，反应过夜。用饱和碳酸氢钠溶液洗后再用饱和氯化钠溶液洗，有机相用无水硫酸钠干燥，蒸干,得到1,9-二氯壬烷。
(5)在200ml封管中加入1,9-二氯壬烷(4.0g，20.3mmol)、邻苯二甲酰亚胺钾盐(12.5g,68.5mmol)和dmf(100ml)。130℃油浴反应过夜。将反应物倒入水(800ml)中，收集沉淀即为2,2’-(壬烷-1,9-二基)双(异吲哚-1,3-二酮)。
(6)在茄型瓶中加入2,2’-(壬烷-1,9-二基)双(异吲哚-1,3-二酮)(4.2g，10mmol)、水合肼80％(10ml)和无水乙醇(100～200ml)，回流过夜。处理：过滤，滤渣用无水乙醇清洗3遍；滤液蒸发后再次过滤，滤渣再次用无水乙醇洗涤，滤液蒸发后得到1,9-壬二胺粗品。
(7)在100ml茄型瓶中加入1,9-壬二胺(5.0ml,51mmol)和无水甲醇(38ml)，将苯甲醛(1000μl,9.8mmol)溶解于无水甲醇(5ml)中，逐滴加入茄型瓶中，加入完毕后，继续搅拌30min后，在冰浴下逐渐加入硼氢化钠(0.371g,11mmol)，反应过夜，反应混合物蒸发后，加入二氯甲烷(50ml)，饱和食盐水(5ml)洗涤两次。有机相用硫酸钠干燥，蒸发后直接得到n-苄基-1,9-壬二胺。
(8)在茄型瓶中加入9-苯氧基吖啶(54mg，0.2mmol)和1,9-壬二胺单边苄胺(55mg，0.22mmol)。加入适量甲醇，回流24-48小时，直至tlc监测到原料a消失或反应时间达到48小时。茄型瓶移出油浴。蒸干反应混合物，用柱色谱或制备tlc纯化，得到n-(9-吖啶)-n’-苄基-1,9-壬二胺。
本发明的主要优点包括
(1)本发明提供了一类结构新颖的双ache结合位点的取代吖啶类化合物，它们的合成路线设计合理、原料易得，适于应用。
(2)本发明提供的式a化合物可以用于制备一系列用于治疗ache酶活性相关的病症的药物。在预防或治疗以ache为靶点的阿尔兹海默症等方面均有应用价值，用途广泛。
(3)本发明提供的式a化合物作为ache酶抑制剂具有很高的活性，最低ic50值可≤0.05μm，在极低浓度下即可表现出抑制活性。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。
实施例1
n-苯基邻氨基苯甲酸(vi)的合成：向500ml茄型瓶中加入2-氯苯甲酸(23.9g,153mmol)、苯胺(9.8g,105mmol)、铜粉(3.2g,50mmol)和碳酸钾(34.0g,246mmol)，最后加入dmf(250ml)，130℃油浴中搅拌过夜。tlc检测苯胺完全消失。撤出油浴，自然降温至室温，向反应混合物中加入水(750ml)，并用稀盐酸调节ph至弱酸性。析出的沉淀经过滤后用水洗涤，抽干，得到n-苯基邻氨基苯甲酸14.2g；(灰色固体，收率63.0％)。1hnmr(cdcl3,400mhz):δ11.55(brs,1h),9.34(brs,1h),8.06(s,1h),7.36(q,3h),7.26-7.28(m,3h),7.13(t,j＝6.9hz,1h),6.78(s,1h)；
实施例2
9-氯吖啶(vii)的合成：在100ml茄型瓶中，加入n-苯基邻氨基苯甲酸(5.0g，23.5mmol)，三氯氧磷(50ml，537mmol)。置于110℃油浴搅拌3小时，tlc(展开剂：二氯甲烷/甲醇＝20/1)检测化合物iii-14完全消失。撤出油浴，自然降温至室温，将反应混合物缓慢加入150g冰中并剧烈搅拌。待放热完毕后，用饱和碳酸氢钠溶液调节ph至不再产生气泡。过滤，滤饼用水淋洗2～3次，抽干，得到固体即9-氯吖啶2.8g；(棕色固体，收率56％)。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ8.44(d,j＝8.8hz,2h),8.25(d,j＝8.8hz,2h),δ8.44(d,j＝8.8hz),8.25(d,j＝8.8hz),7.86-7.79(m,2h),7.68-7.61(m,2h)；13cnmr(cdcl3,100mhz)δ148.8,133.4,130.6,129.7,126.9,124.6,124.3。
实施例3
9-苯氧基吖啶(viii)的合成：在试管中加入9-氯吖啶(0.201g,0.94mmol)与苯酚(1.30g,13.8mmol)，80℃油浴加热1小时。反应混合物移出油浴，冷却至室温后，将反应混合物溶解在二氯甲烷(50ml)中，并用1mol/l氢氧化钠溶液(30ml)分批洗涤，直至苯酚消失。有机相用饱和氯化钠溶液洗涤，用硫酸钠干燥。蒸发并抽干后，即为目标产物9-苯氧基吖啶230mg(浅棕色固体，收率90％)。1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ8.27(d,j＝8.9hz,2h),8.10(d,j＝8.7hz,2h),7.81-7.74(m,2h),7.46(t,j＝7.6hz,2h),7.27(dd,j＝8.3,4.4hz,2h),7.05(t,j＝7.3hz,1h),6.85(d,j＝8.1hz,2h).13c-nmr(cdcl3,100mhz)δ159.5,155.2,150.5,130.6,129.9,129.6,125.8,122.7,122.6,120.3,115.5。
实施例4
1,9-二氯壬烷(ix)的合成：在500ml茄型瓶内加入1,9-壬二醇(5.0g，31.2mmol)、二氯甲烷(100ml)和dmf(3滴)。将二氯亚砜(11.7g，98.3mmol)溶解于二氯甲烷(155ml)中。在冰浴下，将二氯亚砜溶液逐滴加入茄型瓶中，反应过夜。反应混合液用饱和碳酸氢钠溶液洗后再用饱和氯化钠溶液洗，有机相用无水硫酸钠干燥，蒸干即为1,9-二氯壬烷4.0g(浅黄色油状物，收率65％)。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ3.53(t,j＝6.8hz,4h),1.77(quint,j＝6.8hz,4h),1.43(quint,j＝8hz,4h),1.314(m,6h)；13cnmr(cdcl3,100mhz)δ46.1,32.6,29.2,28.7,26.8。
实施例5
2,2”-(壬烷-1,9-二基)双(异吲哚-1,3-二酮)(x1)的合成：在250ml茄型瓶中加入1,9-二氯壬烷(4.0g,20.3mmol)、邻苯二甲酰亚胺钾盐(12.7g,68.6mmol)和dmf(100ml)，于130℃油浴加热过夜，将反应物倒入水中，收集沉淀，沉淀烘干即为2,2”-(壬烷-1,9-二基)双(异吲哚-1,3-二酮)12.0g(白色固体，收率91％)。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ7.85-7.82(m,4h),7.74-7.68(m,4h),3.67(t,j＝7.3hz),1.69-1.63(m,4h),1.31-1.30(m,10h)；13cnmr(cdcl3,100mhz)δ168.4,133.8,132.1,123.1,38.0,29.3,29.0,28.5,26.8。
实施例6
1,9-壬二胺(xi1)的合成：在茄型瓶中加入2,2’-(壬烷-1,9-二基)双(异吲哚-1,3-二酮)10g、水合肼80％(10ml)和无水乙醇(100～200ml)，回流过夜，将反应混合液过滤，滤渣用无水乙醇清洗3遍，滤液蒸发后再次过滤，滤渣再次用无水乙醇洗涤，滤液蒸发后得到1,9-壬二胺2.4g(浅黄色半固体，收率44％)。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ2.68(t,j＝7.0hz,4h),1.49-1.37(m,4h),1.29(m,10h)。
实施例7
1,5-戊二胺(xi2)的合成：参照实施例7，收率38％。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ2.80-2.59(m,4h),1.47-1.35(m,4h),1.25-1.23(m,2h)。
实施例8
n-苄基乙二胺(xii1)的合成：在100ml茄型瓶中加入乙二胺(3.4ml,51mmol)和无水甲醇(38ml)。将苯甲醛(1000μl,9.8mmol)溶解于无水甲醇(5ml)中，逐滴加入茄型瓶中，加入完毕后，继续搅拌30min后，在冰浴下逐渐加入硼氢化钠(0.371g,11mmol)，反应过夜。反应混合物蒸发后，加入二氯甲烷(50ml)，饱和食盐水(5ml)洗涤两次。有机相用硫酸钠干燥，蒸发后直接得到n-苄基乙二胺938mg(无色液体，收率64％)。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ7.33-7.31(m,4h),7.26-7.22(m,1h),3.81(s,2h),2.83(t,j＝5.7hz,2h),2.71(t,j＝5.8hz,2h)。
实施例9
n-苄基-1,3-丙二胺(xii2)的合成：参照实施例8，收率9％。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ7.31(m,4h),7.25(m,1h),3.79(s,2h),2.78(t,j＝6.7hz),2.70(t,j＝6.8hz),1.70-1.65(m,2h)；13cnmr(cdcl3,100mhz)δ140.2,128.4,128.1,126.9,54.1,47.3,40.5,33.5。
实施例10
n-苄基-1,4-丁二胺(xii3)的合成：参照实施例8，收率46％。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ7.27-7.28(m,4h),7.20-7.21(m,1h),3.75(s,2h),2.59-2.67(m,4h),1.31-1.53(m,4h)；13cnmr(cdcl3,100mhz)δ140.4,128.3,128.0,126.8,54.0,49.2,42.1,31.5,27.4。
实施例11
n-苄基-1,5-戊二胺(xii4)的合成：参照实施例8，收率22％。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ7.28-7.30(m,5h),3.76(s,2h),2.59-2.67(m,4h),1.44-1.51(m,4h),1.23-1.27(m,2h)。
实施例12
n-苄基-1,6-己二胺(xii5)的合成：参照实施例8，收率31％。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ7.29-7.30(m,5h),3.77(s,2h),2.59-2.67(m,4h),1.47-1.50(m,4h),1.23-1.27(m,4h)。
实施例13
n-苄基-1,7-庚二胺(xii6)的合成：参照实施例8，收率25％。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ7.29-7.30(m,4h),7.22-7.24(m,1h),3.76(s,2h),2.58-2.66(m,4h),1.47-1.50(m,4h),1.23-1.28(m,6h)。
实施例14
n-苄基-1,8-辛二胺(xii7)的合成：参照实施例8，收率22％。1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ7.32-7.31(m,4h),7.30-7.24(m,1h),3.78(s,2h),2.69-2.60(m,4h),1.43-1.40(m,2h),1.33-1.26(m,10h)；13c-nmr(101mhz,cdcl3)δ140.5,128.4,128.1,126.8,54.1,49.5,42.2,33.8,30.1,29.5,29.4,27.3,26.8。
实施例15
n-苄基-1,9-壬二胺(xii8)的合成：参照实施例8，收率24％。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ7.35-7.32(m4h),7.24-7.22(m,1h),3.19(s,2h),2.68(t,j＝6.4hz,2h),2.62(t,j＝7.2hz,2h),1.53-1.49(m,6h),；13cnmr(cdcl3,100mhz)δ140.4,128.4,128.1,126.8,54.1,49.5,42.2,33.8,30.0,29.7,29.5,29.5,29.4,27.3,26.8。
实施例16
n-苄基-1,10-葵二胺(xii9)的合成：参照实施例8，收率30％。1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ7.32-7.31(m,4h),7.25-7.21(m,1h),3.78(s,2h),2.69-2.60(m,4h),1.61(m,4h),1.52-1.47(m,2h),1.44-1.41(m,2h),1.33-1.28(m,8h)；13c-nmr(100mhz,cdcl3)δ140.5,128.3,129.1,126.8,54.1,49.5,42.2,33.8,30.1,29.5,19.4,27.3,26.8。
实施例17
n-(9-吖啶)-n’-苄基-1,2-乙二胺(xiii1)的合成：在茄型瓶中加入9-苯氧基吖啶(1eq)和n-苄基乙二胺(1～1.2eq)。加入适量甲醇，回流24-48小时，直至tlc监测到原料a消失或反应时间达到48小时。将茄型瓶移出油浴并把反应液蒸干，用柱色谱或制备tlc纯化，得到n-(9-吖啶)-n’-苄基-1,2-乙二胺15mg(黄色固体，收率69％)。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ8.18-8.14(m,2h),8.03(d,j＝4.4hz,2h),7.52-7.46(m,4h),7.39-7.36(m,2h),7.32-7.29(m,1h),7.16-7.12(m,2h),4.256(t,j＝5hz,2h),4.03(s,2h),3.28(t,j＝5.6hz,2h)；13cnmr(cdcl3,100mhz)δ155.2,140.1,138.4,133.8,128.7,128.7,127.7,123.8,123.5,120.4,112.3,53.0,46.9,46.64,29.7。
实施例18
n-(9-吖啶)-n’-苄基-1,3-丙二胺(xiii2)的合成：参照实施例17，收率38％。1hnmr(cd3od,400mhz)δ8.41(d,j＝8.6hz,2h),7.89(t,j＝7.7hz,2h),7.78(d,j＝8.6hz,2h),7.43-7.31(m,7h),4.33(t,j＝6.3hz,2h),3.98(s,2h),3.31(s,2h),3.10(t,j＝6.2hz,2h),2.22-2.16(m,2h)；13cnmr(cd3od,100mhz)δ159.2,141.6,138.1,136.1,130.2,129.9,129.1,127.0,124.8,119.7,114.2。
实施例19
n-(9-吖啶)-n’-苄基-1,4-丁二胺(xiii3)的合成：参照实施例17，收率59％。1hnmr(d6-dmso,400mhz):δ8.37(d,j＝8.0hz,2h),7.75(d,j＝8.0hz,2h),7.64-7.68(m,2h),7.41-7.43(m,2h),7.27-7.28(m,5h),3.89(s,4h),2.72-2.75(m,2h),1.79-1.80(m,2h),1.66-1.68(m,2h)；13cnmr(dmso,100mhz)δ154.2,143.9,143.9,135.3,132.2,129.8,128.8,128.4,126.0,122.4,122.3,115.7,51.2,49.8,47.1,28.1,24.6；
实施例20
n-(9-吖啶)-n’-苄基-1,5-戊二胺(xiii4)的合成：参照实施例17，收率45％。1hnmr(d6-dmso,400mhz)δ8.53(d,j＝8.0hz,2h),7.84-7.89(m,4h),7.50-7.51(m,2h),7.43(t,j＝8.0hz,2h),7.35-7.38(m,3h),4.02(s,2h),3.99(t,j＝7.2hz,2h)2.79(t,j＝7.2hz,2h),1.82-1.87(m,2h),1.65-1.68(m,2h),1.37-1.41(m,2h)。
实施例21
n-(9-吖啶)-n’-苄基-1,6-己二胺(xiii5)的合成：参照实施例17，收率17％。1hnmr(cd3od,400mhz)δ8.54(br,2h),7.88-7.51(m,8h),7.45-7.50(m,5h),4.03-4.05(m,4h),1.88-2.01(m,4h),1.85-1.87(m,4h),1.21-1.26(m,2h)；13cnmr(cd3od,100mhz)δ158.2,135.0,132.7,130.7,129.5,128.8,123.5,123.5,118.2,48.9,31.6,30.4,29.3,29.1,26.0,22.3。
实施例22
n-(9-吖啶)-n’-苄基-1,7-庚二胺(xiii6)的合成：参照实施例17，收率29％。1hnmr(cd3od,400mhz)δ9.84(s,1h),9.10(s,2h),8.57(br,2h),7.86-7.94(m,5h),7.49-7.53(m,5h),7.38-7.39(m,3h),4.06(s,4h),2.80-2.81(m,2h),1.84-1.86(m,2h),1.59-1.60(m,2h),1.26-1.27(m,2h),1.19-1.20(m,4h)；13cnmr(cd3od,100mhz)δ157.6,135.1,132.6,130.5,129.1,129.0,123.7,123.6,123.6,123.6,119.1,50.2,49.1,46.7,29.2,28.5,26.4,26.3,25.5。
实施例23
n-(9-吖啶)-n’-苄基-1,8-辛二胺(xiii7)的合成：参照实施例17，收率26％。1hnmr(cd3od,400mhz)δ9.83(s,2h),8.54(br,2h),7.87-7.95(m,8h),7.48-7.53(m,5h),4.02-4.04(m,4h),1.26-1.27(m,2h),1.22-1.23(m,2h),1.20-1.21(m,4h)。
实施例24
n-(9-吖啶)-n’-苄基-1,9-壬二胺(xiii8)的合成：参照实施例17，收率60％。1hnmr(cd3od,400mhz)δ8.53(d,j＝8.2hz,2h),7.96(t,j＝7.6hz,2h),7.85(d,j＝8.4hz,2h),7.58-7.52(m,4h),7.45-7.44(m,3h),4.20(s,2h),3.04-3.00(m,2h),2.01-1.98(m,2h),1.72(m,2h),1.48-1.47(m,2h),1.35-1.28(m,10h)；13cnmr(cd3od,100mhz)δ159.5,136.4,132.7,132.6131.1,130.9,130.6,130.3,125.0,119.7,119.6,52.4,50.5,48.7,30.6,30.3,30.1,30.0,27.8,27.6,27.1。
实施例25
n-(9-吖啶)-n’-苄基-1,10-葵二胺(xiii9)的合成：参照实施例17，收率19％。1hnmr(cd3od,400mhz)δ9.26(s,1h),9.23(s,2h),8.59(br,2h),7.93-7.96(m,4h),7.52-7.54(m,4h),7.38-7.41(m,3h),4.07(s,4h),2.77-2.81(m,2h),1.84-1.88(m,2h),1.58-1.61(m,2h),1.32-1.35(m,2h),1.17-1.26(m,10h)；13cnmr(cd3od,100mhz)δ157.8,135.4,135.3,132.5,130.4,129.3,129.0,118.9,50.2,49.2,46.8,29.1,29.1,29.0,28.9,28.9,26.5,26.4,25.6。
实施例26
ache抑制活性测试：以小鼠脑内胆碱酯酶为酶源，采用ellman比色法测定，根据乙酰胆碱酯酶水解乙酰胆碱生成胆碱及乙酸，胆碱与巯基显色剂反应生成黄色化合物，比色法检测胆碱数量，从而以水解产物胆碱的数量来反映乙酰胆碱酯酶活力的实验原理，我们采用昆明小鼠前脑匀浆，按南京建成生物技术有限公司提供的ache试剂盒(a026)说明书测定药物对小鼠脑内胆碱酯酶的抑制活性。
表1双ache结合位点的取代吖啶类化合物的ache抑制活性测试结果
表1中试验结果说明，所测化合物大部分表现出较好的ache抑制活性，其中化合物xiii8，xiii8对ache酶的抑制活性较好，ic50值分别为0.023μm，0.020μm。另本实验还发现了一个现象：化合物当链长为2至5时，化合物活性较差。这是因为该类分子与ache结合时有强烈的空间位阻效应，导致了结合力的下降。而当链长为6时，化合物(即化合物xiii5)对ache的抑制活性有了一个飞跃，为0.063μm，这是因为ii-1e在保留苯环与ache蛋白中的w286残基的π-π相互作用的同时，还产生了氢键作用。而当链长为8、9和10时，化合物的活性较高，ic50达到0.023μm左右，这可能与分子中的苄胺片段与pas有阳离子-π相互作用以及π-π相互作用有关。
综上所述，本发明的双ache结合位点的取代吖啶类化合物及其衍生物，具有抑制ache酶活性的功能，可用于制备抑制ache酶活性的药物，尤其是能够用于制备治疗或预防以ache为靶点的阿尔兹海默症。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。