一种胆碱酯酶检测试剂盒的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种胆碱酯酶（丁酰基硫代胆碱法）检测试剂盒，属于临床体外检测试剂技术领域。本发明试剂盒包括试剂R1、试剂R2、校准品。通过在试剂中R1中加入35 mmol/L氯化镁催化剂与在试剂R2中加入30 ml/L TritonX?100表面活性剂，有效的提高了试剂盒的稳定性和分析灵敏度，其线性范围也较好，试剂的准确度高，有利于在市场中进一步的推广使用。
【专利说明】
一种胆碱酯酶检测试剂盒
技术领域
[0001]本发明涉及临床体外检测试剂技术领域，特别涉及一种胆碱酯酶(丁酰基硫代胆碱法)检测试剂盒。
【背景技术】
[0002]胆碱酯酶(CHE)是一类催化酰基胆碱水解的酶类，它是由肝脏合成，存在于血清或血浆中的一种水解酶;血清胆碱酯酶主要存在于脑、肝和血等，由真胆碱酯酶和拟胆碱酯酶两部分组成；拟胆碱酯酶是由肝细胞合成的水解酶，肝细胞变性、坏死越严重，拟胆碱酯酶合成就越少;临床常规检查的胆碱酯酶就是拟胆碱酯酶，通常简称为CHE。
[0003]当肝脏发生实质损伤时，广泛肝细胞变性坏死、肝小叶纤维支架塌陷，但是肝脏的代偿能力依然存在，故虽然胆碱酯酶合成减少，但其下降不明显；随着残存的肝细胞不沿原支架排列再生，形成了不规则的结节状肝细胞团，小叶中央静脉延伸扩展，包括再生结节，将残留肝小叶重新分割成为假小叶，肝细胞的坏死数量就继续增加，肝脏代偿能力慢慢达到极限，血清CHE开始明显下降;血清胆碱酯酶的下降程度与肝细胞的损害程度呈正相关。
[0004]肝硬化时，随着肝脏组织纤维化的进展，肝脏正常结构被破坏，肝细胞供血不足、功能受损，合成的拟胆碱酯酶不断减少，血清拟胆碱酯酶的活力也将明显下降；因此，胆碱酯酶可以作为衡量肝脏功能的一个重要指标。
【发明内容】
[0005]针对于现有技术存在的问题，本发明提供了一种胆碱酯酶(丁酰基硫代胆碱法)检测试剂盒，该试剂盒与常规的试剂盒相比，稳定性和线性范围比常规的检测试剂盒要好，分析灵敏度高，有利于试剂在临床上的推广应用。
[0006]本发明是通过以下措施实现的:
一种胆碱酯酶(丁酰基硫代胆碱法)检测试剂盒，其特征在于，它包含试剂Rl、试剂R2和校准品，其中试剂Rl组成为:50 mmol/L pH 7.5磷酸盐缓冲液、35 mmol/L氯化镁、0.27mmol/L 5，5-二硫代-2-硝基苯甲酸；试剂R2组成为:50 mmol/L pH 7.5磷酸盐缓冲液、8mmol/L丁酰基硫代胆碱、30 ml/L TritonX-100。
[0007]所述试剂Rl和试剂R2在使用时的比例为Rl:R2=250:50。
[0008]本发明所使用的校准品为久峰润达生物技术有限公司生产的CHE校准品。
[0009]本发明的试剂盒在具有双试剂功能的自动生化分析仪上进行，其具体使用方法如图4所示。
[0010]加入生理盐水、样本或校准品5 μ?，之后再加入Rl试剂250 μ?预孵育5 min后读取吸光度Al，之后再加入50 μ?的试剂R2反应5 min后，读取吸光度Α2，并计算ΔΑ/min。
[0011]本发明的有益效果:
本发明提供的胆碱酯酶(丁酰基硫代胆碱法)检测试剂盒，通过在试剂Rl中加入35mmol/L氯化镁催化剂，加快了反应速度，从而大大的提高了试剂的分析灵敏度;同时在试剂R2中加入30 ml/L TritonX-100表面活性剂，有利于酶与血清中其他物质的分离，因此35mmol/L氯化镁催化剂与30 ml/L TritonX-100表面活性剂共同作用有效地增强了试剂盒的稳定性，却不会对试剂的准确度产生影响，有利于该试剂在市场中进一步的推广。
【附图说明】
[0012]图1实施例2准确度验证实验检测结果与对照组检测结果相关性；
图2实施例3准确度验证实验检测结果与对照组检测结果相关性；
图3实施例4准确度验证实验检测结果与对照组检测结果相关性；
图4试剂Rl和R2的使用方法；
图5实施例1-4线性相关验证实验检测结果；
图6稳定性验证实验检测结果；
图7分析灵敏度实验结果。
【具体实施方式】
[0013]为了更好的理解本发明，下面结合具体实施例来进一步详细说明。
[0014]一种胆碱酯酶(丁酰基硫代胆碱法)检测试剂盒，其特征在于，它包含试剂Rl、试剂R2和校准品，其中试剂Rl组成为:50 mmol/L pH 7.5磷酸盐缓冲液、35 mmol/L氯化镁、0.27 mmol/L 5，5-二硫代-2-硝基苯甲酸;试剂R2组成为:50 mmol/L pH 7.5磷酸盐缓冲液、8 mmol/L丁酰基硫代胆碱、30 ml/L TritonX-100。
[0015]实施例1
一种常规的胆碱酯酶(丁酰基硫代胆碱法)检测试剂盒，它包括试剂Rl、试剂R2、校准品O
[0016]其中试剂Rl组成为:
pH 7.5磷酸盐缓冲液50 mmol/L；
氯化镁35 mmol/L；
5,5-二硫代-2-硝基苯甲酸0.27 mmol/L。
[0017]试剂R2组成为:
pH 7.5磷酸盐缓冲液50 mmol/L；
丁酰基硫代胆碱8 ml/L；
TritonX-10030 mL/L。
[0018]本实施例描述的试剂盒，在使用时，其测定方法是采用具有双试剂功能的东芝120自动分析仪，操作如下。
[0019]加入生理盐水、样本或校准品5 μ?，之后再加入Rl试剂250 μ?预孵育5 min后读取吸光度Al，之后再加入50 μ?的试剂R2反应5 min后，读取吸光度Α2，并计算ΔΑ/min。
[0020]本实施例所使用的校准品为久峰润达生物技术有限公司生产的CHE校准品。
[0021]实施例2
一种胆碱酯酶(丁酰基硫代胆碱法)检测试剂盒，它包括试剂R1、试剂R2、校准品。
[0022]其中试剂Rl组成为:
pH 7.5磷酸盐缓冲液50 mmol/L； 氯化镁15 mmol/L；
5，5-二硫代-2-硝基苯甲酸0.27 mmol/L。
[0023]试剂R2组成为:
pH 7.5磷酸盐缓冲液50 mmol/L；
丁酰基硫代胆碱8 ml/L；
TritonX-10010 mL/L；
具体测定方法同实施例1。
[0024]实施例3
一种胆碱酯酶(丁酰基硫代胆碱法)检测试剂盒，它包括试剂R1、试剂R2、校准品。
[0025]其中试剂Rl组成为:
pH 7.5磷酸盐缓冲液50 mmol/L；
氯化镁25 mmol/L；
5.5-二硫代-2-硝基苯甲酸0.27 mmol/L。
[0026]试剂R2组成为:
pH 7.5磷酸盐缓冲液50 mmol/L；
丁酰基硫代胆碱8 ml/L；
TritonX-10020 mL/L；
具体测定方法同实施例1。
[0027]实施例4
一种胆碱酯酶(丁酰基硫代胆碱法)检测试剂盒，它包括试剂R1、试剂R2、校准品。
[0028]其中试剂Rl组成为:
pH 7.5磷酸盐缓冲液50 mmol/L；
氯化镁35 mmol/L；
5.5-二硫代-2-硝基苯甲酸0.27 mmol/L。
[0029]试剂R2组成为:
pH 7.5磷酸盐缓冲液50 mmol/L；
丁酰基硫代胆碱8 ml/L；
TritonX-10030 mL/L；
具体测定方法同实施例1。
[0030]对上述实施例1-4中制得的试剂盒分析性能进行实验验证。
[0031 ] 准确度验证实验
将实施例2、3、4的试剂盒作为实验组，市场上获得认可的一种准确度优异的胆碱酯酶(丁酰基硫代胆碱法)(长春某公司生产)作为对照组进行对比实验，对40个样本进行检测，检测的结果如图1-图3。
[0032]通过图1-图3的检测数据可知，实施例2、3、4检测试剂盒与对照检测试剂盒的检测结果相关性分别为0.9939,0.9971,0.9981,相关性比较好，表明本发明的试剂盒与市场上获得认可的具有优异准确度的胆碱酯酶(丁酰基硫代胆碱法)检测试剂盒有高度一致性，证明本发明试剂盒添加的其他各种成分对其准确性不会造成影响，试剂盒依然保持较好的准确度。
[0033]线性相关性验证实验找到胆碱酯酶(丁酰基硫代胆碱法)高值样本为15000U/L，用生理盐水进行系列稀释，配制6个不同浓度的样本，依次为15000 U/L、12000 U/U9000U/L、6000 U/L、3000 U/L,O U/L浓度的样本，每个浓度水平各样本分别测定三次，分别取其平均值;分别利用实施例1、2、3、4的试剂进行检测，检测结果如图5所示。
[0034]检测结果显示，实施例1-4检测结果相关性均大于0.99，但实施例2、3、4的检测结果大于0.996，与实施例1相比具有更好的线性相关性，这说明本发明试剂具有更好的线性相关性。
[0035]稳定性验证实验
在2 0C?8°C、无腐蚀性气体的避光环境中贮存试剂，检测四种实施例试剂的稳定性。四种试剂每月选取同一样本测定其吸光度三次，取平均值，与新鲜的实施例1试剂检测结果进行对比，从而确定试剂的稳定时间，检测数据如图6所示。
[0036]实验结果显示，实施例1试剂在2°C?8°C、无腐蚀性气体的避光环境中贮存15个月稳定，而实施例2、3、4试剂在2°C?8°C、无腐蚀性气体的避光环境中贮存24个月稳定，说明在试剂中Rl中加入35 mmol/L氯化镁催化剂与在试剂R2中加入30 ml/L TritonX-100表面活性剂，二者共同作用有效的提高了胆碱酯酶(丁酰基硫代胆碱法)检测试剂盒的稳定性。
[0037]分析灵敏度验证实验
用本发明胆碱酯酶(丁酰基硫代胆碱法)试剂盒测试已知浓度在167.2 IU/mL的样本，记录吸光度差值，分别利用实施例1、2、3、4的试剂进行检测，检测结果如图7所示。
[0038]通过检测数据可知，实施例2、3、4检测试剂盒的吸光度差值均比实施例1的高，说明在试剂中Rl中加入35 mmol/L氯化镁催化剂与在试剂R2中加入30 ml/L TritonX-100表面活性剂，加快了反应速度，从而扩大了响应信号，并提高了试剂的分析灵敏度。
[0039]综合以上分析，本发明提供的胆碱酯酶(丁酰基硫代胆碱法)检测试剂盒，在试剂中Rl中加入35 mmol/L氯化镁催化剂与在试剂R2中加入30 ml/L TritonX-100表面活性剂能够有效的提高试剂盒的稳定性和分析灵敏度，线性范围较好，试剂的准确度也较好。因此，本发明提供的胆碱酯酶(丁酰基硫代胆碱法)检测试剂盒有利于在市场中进一步的推广使用。
【主权项】
1.一种胆碱酯酶(丁酰基硫代胆碱法)检测试剂盒，其特征在于，它包含试剂Rl、试剂R2和校准品，其中试剂Rl组成为:50 mmol/L pH 7.5磷酸盐缓冲液、35 mmol/L氯化镁、0.27mmol/L 5，5-二硫代-2-硝基苯甲酸；试剂R2组成为:50 mmol/L pH 7.5磷酸盐缓冲液、8mmol/L丁酰基硫代胆碱、30 ml/L TritonX-100。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，Rl中加入了35mmol/L氯化镁催化剂，R2中加入了30 ml/L TritonX-100表面活性剂。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂Rl和试剂R2在使用时的比例为Rl:R2=250:50o
【文档编号】G01N21/31GK106018308SQ201610655787
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年8月11日
【发明人】甘宜梧, 谭柏清, 罗维晓, 李静, 王慧娟
【申请人】山东博科生物产业有限公司