细胞观察装置、用于评估免疫细胞活性水平的方法以及用于控制免疫细胞品质的方法与流程

本发明涉及细胞观察装置、用于评估免疫细胞活性水平的方法以及用于控制免疫细胞品质的方法。

背景技术

过去，在与多种细胞相关的细胞毒性测定中，使用了采用放射性同位素(cr51释放测定)的技术。然而，这种方法在操作方面受到限制并且需要复杂的操作。另外，必须一次使cr51进入待损伤的细胞中，并且其程度根据细胞的种类而变化，这是导致测量精度易变的原因。

在乳酸脱氢酶(ldh)测定(这是一种不使用放射性同位素的技术)中，可以通过测量从细胞释放的乳酸脱氢酶(ldh)来测量对细胞的损伤。然而，根据该技术，不可能区分哪些靶细胞和效应细胞与可测量的损伤相关，并且背景噪声高。此外，仅测量了基于批量的信号变化，并且不可能测量由每个效应细胞损伤的靶细胞数量。

同时，近年来，已经建立了用于治疗癌症的免疫疗法，并且需要生长高品质的免疫细胞。免疫细胞损伤或捕食癌细胞，但仅定性评估其损伤性质(非特许文献1)。

此外，进行了一种细胞接触测定，其中使免疫细胞和癌细胞相互接触以损伤癌细胞，并通过荧光评估结果(非特许文献2)。然而，尚未公开用于特异性确定一个免疫细胞损伤多少癌细胞的测定。

现有技术文献

非专利文献

非特许文献1：immunity.2015may19,42(5):864-76

非特许文献2：bioinformatics.2015oct1；31(19):3189-97

技术实现要素：

本发明要解决的问题

鉴于上述情况，本发明人进行了广泛而深入的研究，并且已经完成了一种基于单个细胞而非批量细胞的定量评估细胞活性的方法，以及用于此的装置。

问题的解决方案

具体地，本技术提供了

一种细胞观察装置，其包括：细胞导入部；细胞排列部；观察部；和分析部，

其中，细胞导入部将一个或多个细胞导入到细胞排列部，

细胞排列部排列所导入的一个或多个细胞，

观察部观察在细胞排列部中由细胞接触引起的时序事件，并且

分析部分析由细胞接触引起的时序事件。

另外，所述细胞观察装置可以包括药物添加部，其将药物添加到细胞导入部和/或细胞排列部。

由细胞接触引起的时序事件选自包括下列事件的组：细胞运动，细胞运动速度的变化，细胞形态的变化，细胞分泌物释放，细胞捕食，细胞死亡，细胞增值，细胞发出的荧光强度的变化，细胞间距离的变化，细胞内颗粒的产生和细胞内颗粒的局部化。

另外，通过使用从包括明亮视野图像、相位差图像、荧光图像和折射率图像的组中选择的图像来观察由细胞接触引起的时序事件。

此外，所述细胞是免疫细胞和/或癌细胞。

细胞排列部可以具有多个孔，可以在每个孔中布置一个或多个免疫细胞，并且可以在孔中布置一个或多个癌细胞。

本技术还提供了

一种用于评估免疫细胞活性水平的方法，其包括：

使多个癌细胞与单个免疫细胞接触；和

检查在预定时间内由所述单个免疫细胞导致死亡的癌细胞的数量。

进一步地，本技术还提供了

一种用于控制免疫细胞品质的方法，包括：

使多个癌细胞与单个免疫细胞接触；

检查由所述单个免疫细胞导致死亡的癌细胞的数量；和

在预定时间内，在由所述单个免疫细胞导致的癌细胞死亡的数量少于预定数量的情况下，或在由所述单个免疫细胞导致的癌细胞死亡的数量大于预定数量的情况下，排除该单个免疫细胞。

本发明的效果

根据本技术，可以观察到由单个细胞引起的细胞损伤或捕食等，可以定量评估单个细胞的活性，并且可以基于该评估选择适合使用的细胞。

应该注意的是，这里描述的效果不是限制性的，并且可以提供或使用本文描述的任何效果。

附图说明

[图1]是根据本技术的细胞观察装置的示意图。

[图2]是描绘根据本技术的细胞观察和分析的实例的示意图。

[图3]是描绘根据本技术的细胞观察和分析的实例的流程图。

[图4]是描绘根据本技术的细胞观察装置的观察部的操作的流程图。

[图5]是癌细胞死亡率随着时间变化的模拟图。

[图6]是描绘细胞毒性t细胞运动变化的活性的模拟图。

具体实施方式

下面将描述用于实施本技术的优选实施方式。需要注意的是，以下实施方式描述了本技术的典型实施方式，并且本技术的范围不应由此狭义地解释。将按以下顺序进行描述。

1.细胞观察装置

1-1.装置的配置

1-2.细胞观察和分析的实例

1-3.数据分析

2.用于评估免疫细胞活性水平的方法

2-1.通过细胞毒性测定评估

2-2.通过分泌物释放测定评估

2-3.通过抗体依赖性细胞毒性评估

2-4.应用例1

2-5.应用例2

3.用于控制免疫细胞品质的方法

<1.细胞观察装置>

1-1.装置的配置

图1中示意性地描绘了根据本技术的细胞观察装置的示例。

本技术的细胞观察装置至少包括细胞导入部102、细胞排列部103、观察部104和分析部105。除此之外，优选提供药物添加部114，以构成细胞观察装置1000的主要部100(由粗线包围的部分)。

细胞分选部101可以设置在细胞导入部102的上游。

细胞分选部101通过一个或多个参数区分放置在其中的细胞，并分类收集预设类型的细胞。

所述参数的实例包括细胞的荧光强度、大小、形态和电特性。

用作细胞分选部101的特定装置的实例包括facs和过滤器。

需要注意的是，细胞分选部101的安装是任意的，细胞可以根据它们的类型预先分离，然后可以引入到细胞分入部102。

细胞导入部102具有通道，通过该通道将在细胞分选部101中制备的细胞引入到细胞排列部103。

可以将药物添加到细胞导入部102中，并且可以根据每种细胞添加不同的药物。

用于在细胞导入部102中引入细胞的方法可以是，例如，从位于下游的细胞排列部103侧吸入细胞。

此外，所述药物的实例包括抗癌剂，例如分子靶向药物和免疫检查点抑制剂(抗-ctla-4抗体、抗pd-1抗体、抗pd-l1抗体等)、白细胞介素(il-2等)和干扰素(ifn-γ等)。

细胞排列部103设有孔，其中将引入的一种或多种细胞混合并布置在孔中。孔的数量没有特别限制，可以广泛设定为数十至数万或更多。所述孔的具体实例包括抽吸孔和沉淀孔。

可以将药物引入到细胞排列部103，并且可以将药物直接引入到细胞排列部103而不通过细胞导入部101。

放入孔中的细胞的数量可以是一个或多个。

此外，可以通过将在后面描述的细胞环境控制部113来控制细胞排列部的细胞环境如氧气、温度和ph。

放置在细胞排列部103的每个孔中的多个细胞彼此接触，并且会发生某些事件或多个事件。事件的实例包括：细胞运动，细胞运动速度的变化，细胞形态的变化，细胞分泌物释放，细胞捕食，细胞死亡，细胞增殖，细胞发出的荧光强度的变化，细胞间距离的变化，细胞内颗粒的产生和细胞内颗粒的局部化。

例如，当将免疫细胞和癌细胞放置在每个孔中时，免疫细胞和癌细胞相互接触以产生细胞毒性，导致癌细胞死亡。

免疫细胞的实例包括天然杀伤(nk)细胞、t细胞、小噬细胞、树突状细胞、嗜中性细胞、嗜酸性细胞、嗜碱性细胞和杀伤性t细胞。可以选择这些种类的一种或多种。

观察部104暂时观察细胞排列部103中排列的细胞。在观察中，可以追踪由细胞接触引起的事件。

用于观察的方法没有特别限制，并且可以通过利用例如明亮视野图像、相位差图像、荧光图像和折射率图像来进行观察。在利用荧光株的情况下，例如，可以预先对癌细胞进行基因重组从而获得荧光蛋白如gfp的表达，由此可以基于荧光来追踪癌细胞受免疫细胞损伤或捕食以达到死亡的过程。观察连续进行例如几分钟至几天。

另外，在观察部103处使用的具体装置的示例包括显微镜和诸如cmos等图像传感器。

分析部105分析由观察部获得的数据，例如图像数据。数据是表示细胞的运动、接触、形态变化、分泌物释放、捕食、死亡和生长等的图像，并且可以将这些变成数值和/或图形。

用作分析部105的具体装置的示例包括个人计算机和用于分析的程序。

另外，可以实时地对观察到的事件进行分析，或者可以在获取观察事件并作为数据存储之后进行分析。

将在下文中描述分析的示例。

此外，本技术的细胞观察装置可具有数据存储部107。

数据存储部107存储观测数据和分析数据。

用作数据存储部107的具体装置的示例包括服务器和存储盘。

此外，可以在数据存储部107的下游提供数据库115，以累积各种数据，从而可以执行过去数据的搜索、提取等。

可替换地，本技术的细胞观察装置可以在分析部105的下游具有比较部116。比较部116能够例如将分析部105中的数据与对照数据或过去的分析数据进行比较。

用作比较部116的具体装置的示例包括数据库参考个人计算机和程序。

此外，可以提供显示部106。

显示部106显示观察数据和分析数据。

用作显示部106的具体装置的示例包括pc监视器。

当完成细胞接触的观察时，可以取出细胞排列部103的孔中的细胞。例如，提供了细胞取出部108，并取出分析中指定的一个或多个细胞。

用作细胞取出部108的具体装置的实例包括移液管。

取出的细胞由细胞保持部109保持。可以根据例如细胞的种类提供多个细胞保持部109。由细胞环境控制部113根据细胞控制细胞保持部109的氧、温度、ph等。此外，细胞保持部109可以添加有来自药物添加部114的试剂。

可替换地，可以在下游设置的基因分析部110进行基因分析的预处理。

用作细胞保持部109的具体装置的实例包括96-孔板。

基因分析部110分析细胞保持部109中保持的细胞。

用作基因分析部110的具体装置的实例包括dna测序仪和rna测序仪。

另外，本技术的细胞观察装置可以具有通道启动部111和芯片配置部112。

通道启动部111准备通道芯片。通道启动部111能够例如进行用于去除气泡的操作或可涂覆性改善操作(例如允许乙醇流动，然后用水或缓冲液洗涤)。

芯片配置部112正确地在通道启动部111中安装清洗过的通道芯片，通过这种方式使得细胞排列在细胞排列部中。

此外，如上所述，可以提供细胞环境控制部113。细胞环境控制部113调节或控制放置在细胞排列部103和细胞保持部109中的细胞的环境。

用作细胞环境控制部113的和具体装置的实例包括co2-o2调节器、温度控制装置和培养基更换装置。

此外，可以在药物添加部114、细胞导入部102、细胞排列部103和细胞保持部109中放置不同的药物或试剂。可以在同一部中放置多种药物或试剂。

用作药物添加部114的具体装置的实例包括取样器(移液管)和微通道。

药物或试剂的具体实例包括细胞激活剂例如细胞因子、用于检查免疫细胞损伤或捕食癌细胞的有效性的药物、癌症抗原或癌细胞、制癌剂、染色试剂、细胞分散试剂、病毒、细菌、真菌、寄生虫和过敏原。

1-2.细胞观察和分析的实例

图2中描绘了通过本技术的细胞观察装置从样品分级靶细胞到靶细胞的观察和分析的一系列流动的实例。

样品包括多种细胞，例如，调节性t细胞(treg)201、骨髓来源的抑制细胞(mdsc)202、树突细胞(dc)203、细胞毒性t细胞(ctl)204和癌细胞205。

通过流式细胞仪2000对样品进行分选，并且基于种类(例如，细胞毒性t细胞204和癌细胞205)分级各种细胞。

这里，可以通过使用对癌细胞种类特异的抗体206来对癌细胞进行癌细胞种类的说明。

分级的细胞毒性t细胞204和癌细胞205取自细胞导入部102，并排列在细胞排列部103的孔1031中。

此后，进行时序观察；观察可以在每个孔1031的基础上进行，或者可以在整个细胞排列部103上进行。可替换地，可以将细胞排列部103划分为一些部分，可以将不同种类的细胞引入不同部分，并且可以进行观察。

在孔1031中，产生细胞毒性t细胞204对癌细胞205的攻击和癌细胞的死亡。通过cmos等观察一系列事件，并且记录数据。

图3描绘了根据本技术的从细胞分选到细胞反应分析的过程的流程图。

首先，将细胞样品(s301)送至流式细胞仪，以根据细胞种类进行细胞分选(s302)。

根据本技术，将一侧的细胞原样导入到细胞观察装置1000的细胞导入部102(s303)。

另一侧的细胞用从细胞观察装置1000的药物添加部114提供的药物处理(s304)，并且引入到细胞导入部102(s305)。

从细胞导入部102将所需数量的细胞排列到细胞排列部103的每个孔中(s306)。

排列在细胞排列部103中的细胞经历由细胞接触引起的反应、分泌物释放、捕食、细胞死亡等，并且观察部104暂时观察到这些事件。例如，通过相位差显微镜、荧光显微镜、ccd、cmos等观察事件(s307)，并且可以将其记录为数据。

1-3.数据分析

例如，由分析部105分析从由细胞接触引起的反应获得的数据(s308)。

在图4中示出了分析部105的操作的示例。

在分析荧光图像数据的情况下(s401)，进行数据的图像处理(s402)。图像处理例如是对比度调整、图像阈值分割、噪声处理或边界排除。

随后，进行细胞识别处理(s403)。在细胞识别处理中，识别细胞种类的差异，并且基于种类分离细胞。例如，可以通过颜色、大小、纹理(例如材料的感觉等)来识别和分离细胞。通过细胞识别处理，还可以基于过去时间中的预定间隔以及在处理结束时的种类来确定与检测到的细胞相关联的位置信息(s404)，并且所述位置信息可以是数据之一。

随后，进行事件检测处理(s405)。事件检测处理检测由细胞相互作用引起的事件。事件的实例包括细胞颜色的变化(凋亡反应试剂)、细胞形态的变化(细胞凋亡形态改变)、两种细胞的共定位(当免疫细胞以绿色显示着色时，癌细胞显示着色的红色以一定比例包含在免疫细胞的绿色中)、和接触(免疫细胞和癌细胞之间的边界处于等于或小于预定值的距离)。以预定的时间间隔检测这些事件。由于这些事件是在时间上观察到的，因此事件的定义或确定可能有些模糊，并且不同事件的确定时间可能彼此重叠。

此外，可以基于细胞检测和计算这些事件，或者可以基于引入到细胞排列部分103的孔中的细胞共同检测和计算这些事件(s406)。例如，如图5(模拟图)所示，该事件可以用累积图表表示(207)，其中随时间追踪所有孔的癌细胞死亡率。

在检测到事件时(s407)，由具有roi功能的图像分析仪形成关于已经检测到事件的细胞的目标区域(roi)(s408)，目的在于从图像数据中提取待进一步分析的部分、定量测定荧光等。roi可以形成为与细胞尺寸一致的尺寸，或者可以形成为与细胞尺寸相关的任意尺寸。另外，roi的形状没有特别限制。

接下来，在事件之前和之后分析形成的roi中的细胞的运动，并且计算和评估运动的指数(s409)。细胞运动指数的实例包括通过roi框之间的累积运动距离进行运动评估和自动多变量图像分析(mva)。例如，如图6(模拟图)所示，每个孔中细胞毒性t细胞运动变化的活性(s410)可以用如图(208)所示的指数表示。

数据表示的其它实例包括特定事件之前和之后的细胞运动的分布信息、基于细胞的运动追踪的图像表示、每个免疫细胞导致死亡的癌细胞数量、和关于特定事件随时间变化的表示。

<2.用于评估免疫细胞活性水平的方法>

2-1.通过细胞毒性测定评估

如上所述，在通过使用根据本技术的细胞观察装置使免疫细胞(nk细胞、t细胞、巨噬细胞、树突细胞等)与癌细胞接触以引起癌细胞的损伤的情况下，由此可以在该情况下进行免疫细胞活性的评估，免疫细胞和癌细胞之间的损伤亲和关系的评估等。

具体地，例如，可以通过以下计算方法进行评估。

癌细胞存活率的计算：(细胞接触后的活癌细胞数)/(癌细胞总数)

癌细胞死亡率的计算：(细胞接触后导致死亡的癌细胞数)/(癌细胞总数)

免疫细胞存活率的计算：(细胞接触后的活免疫细胞数)/(免疫细胞总数)

免疫细胞死亡率的计算：(细胞接触后导致死亡的免疫细胞数)/(免疫细胞总数)

另外，细胞接触测定的效率可以表示为：

(接触的细胞数)/(非接触的细胞数)，或(接触的细胞数)/(细胞总数)。

在上述计算方法的情况下，优选采用阴性对照作为背景。

此处，阴性对照是指在癌细胞生命/死亡测定的情况下不包括免疫细胞或是阴性的细胞，或者在免疫细胞生命/死亡测定的情况下不包括癌细胞或为阴性的细胞，或者在制癌剂的情况下不含制癌剂或不发生反应的分子。

需要注意的是，在由细胞接触引起的反应开始前的时间点的细胞数设定为100％存活。

需要注意的是，可以计算限于进行细胞接触的癌细胞的生死率，通过使用

由细胞接触引起的癌细胞死亡率的计算：(细胞接触后死亡的癌细胞数)/(进行细胞接触的癌细胞总数)，以及

细胞接触后癌细胞存活率的计算：(细胞接触后活癌细胞的数量)/(进行细胞接触的癌细胞总数)。

在这种情况下，可以计算由免疫细胞引起的癌细胞的生死，而无需考虑背景。

可以通过例如形态、大小、荧光等染色或运动来进行免疫细胞和癌细胞的识别。

此外，可以通过例如接触时间、细胞运运的停止(运行速度)、颗粒的局部化、或具有不同荧光染料的细胞的相邻排列(荧光染色)来进行细胞接触的测定。

可以通过例如细胞形态的改变或细胞死亡测定染料的信号的增强(荧光染色)来进行细胞死亡的测定。

需要注意的是，评估还可以通过细胞的实时观察和分析来进行。

2-2.通过分泌物释放测定评估

在分泌物释放测定中，评估伴随细胞接触的从细胞释放分泌物的存在与否。

细胞接触的测定与前述相同。

可以通过例如细胞形态的变化、颗粒的形成、分泌物的免疫测定或钙的现有测定等来进行分泌物释放的测定。

2-3.通过抗体依赖性细胞毒性评估

可以通过应用抗体依赖性细胞毒性(adcc)来评估免疫细胞的活性水平。

例如，通过抗体观察免疫细胞(nk细胞、t细胞、巨噬细胞、树突细胞等)对癌细胞的损伤。

例如，可以通过癌细胞和抗体的结合的评估、抗体和免疫细胞的结合和活化的评估、免疫细胞对癌细胞的损伤评估等，判断抗体依赖性细胞毒性的评估。

此外，通过抗体不仅可以观察到癌细胞的死亡，还可以观察到免疫细胞和癌细胞之间的相互作用的痕迹。

例如，可以检查制癌剂的有效性机制。

具体地，测量、观察nk细胞与癌细胞的接触时间以及观察抗体fc部分与nk细胞上表达fcγiii之间的亲和力就足够了。

另外，观察nk细胞细胞质中蛋白质(如穿孔素或颗粒酶)的表达诱导或颗粒形成就足够了。

进一步，可以观察诸如穿孔素等蛋白质侵入靶细胞中。

此外，还可以观察针对癌细胞的细胞死亡诱导或细胞凋亡非诱导。

2-4.应用例1

还可以通过应用本技术在药物开发时评估制癌剂。

例如，向布置在孔中的癌细胞施用候选制癌剂，并且将免疫细胞(例如nk细胞、细胞毒性t细胞)导入到同一孔中。通过本技术观察和分析所产生的事件，从而判断癌细胞的生死。

此外，在免疫治疗的情况下，通过生长免疫细胞、将生长的免疫细胞施用给癌细胞并观察癌细胞的变化，可以检查效果。另外，本技术可以应用于癌症免疫检查点抑制剂。

2-5.应用例2

通过应用本技术，通过癌细胞与肿瘤浸润淋巴细胞(til)之间的反应，可以选择t细胞受体(tcr)。

首先，从癌细胞中分离til，或从血液中分离t细胞。

随后，用il-2或ifn-γ等处理分离的til或t细胞。

另一方面，用免疫检查点抑制剂(例如opdivo(注册商标))处理癌细胞。

使经处理的til或t细胞与经处理的癌细胞彼此接触，随后通过本技术进行观察和分析，由此识别出对癌细胞的癌抗原具有特异性反应的til或t细胞的个体。

分离出识别的细胞，并且进行细胞所具有的dna、rna等的序列分析，以确定tcr。

通过应用本技术，即使til或t细胞等免疫细胞数量很少的情况下，也可以进行上述的应用例等，并且需要使用较少量的药物和试剂。

<3.用于控制免疫细胞品质的方法>

最近几年，已经关注到癌症的免疫疗法，并且必须在活体外生长免疫细胞，并且在活化后，将生长和活化的免疫细胞施用到体内。

本技术还适用于在单个细胞基础上而不是批量基础上评估和控制生长的免疫细胞的品质。

具体地，本技术的用于控制免疫细胞品质的方法可以通过如下方式进行：

使多个癌细胞与单个免疫细胞接触；

检查被所述单个免疫细胞损伤或捕食的癌细胞的数量；并且

在预定的时间内，在所述单个免疫细胞捕食的癌细胞数量少于预定数量的情况下或在所述单个免疫细胞损伤或捕食的癌细胞数量大于预定数量的情况下，排除所述单个免疫细胞。

此处，将描述在使用本技术进行从活体分离的免疫细胞的活性水平的评估时获得的数据的模拟实例。

在评估源自活体的免疫细胞的活性水平的情况下，提供包括各种免疫细胞的多个细胞群。在那种情况下，受损细胞的数量根据个体免疫细胞和靶细胞之间的相容性而不同。

鉴于此，例如，给每个免疫细胞赋予id号，一个免疫细胞布置在孔中，另外在同一孔中布置约10个癌细胞，并且通过使用本技术观察和分析免疫细胞损伤了多少癌细胞；在这种情况下，假设获得了下表1中列出的数据。

[表1]

<假设数据>

在控制免疫细胞的品质时，不希望免疫细胞的活性太强或太弱。例如，当将免疫细胞施用于受试者时，具有过高活性的免疫细胞可能引起诸如自身免疫疾病的症状。另一方面，当将免疫细胞施用于受试者时，具有过低活性的免疫细胞不能具有作为免疫细胞的充分功能。

在上表1的模拟示例中，例如，可以选择描绘受损细胞数量在4至6范围内的单个免疫细胞。

现有的品质控制是在批量基础上进行的；因此，如表1所示，即使在存在描绘的受损细胞数量处于4至6范围内的免疫细胞的情况下，也不能排除这些免疫细胞。换句话说，即使批量整体上描绘了良好的活性，在混合状态下的个体免疫细胞也包括具有高活性的免疫细胞和具有低活性的免疫细胞。

本技术也适用于免疫细胞生产过程中的品质控制。

在免疫细胞的生产中，有必要适当地控制储存状态等，并确认生产的细胞作为整体的细胞品质较高。

另一方面，可以存在免疫细胞的生产过程中细胞活化不均匀的情况，因此有必要确认单个细胞的品质也很高。

根据本技术，通过在单个细胞的基础上进行细胞评估，可以控制细胞的品质。

此处，表2描述了在使用本技术进行免疫细胞生产期间，在进行品质控制的免疫细胞活性水平评估时获得的数据的模拟实例。

[表2]

<假设数据>

如前所述，在基于批量的现有品质控制中，不能排除在混合状态下包括具有极高活性的免疫细胞和具有极低活性的免疫细胞。另一方面，根据本技术，可以选择描绘损伤细胞数量在4至6范围内的样品。

需要注意的是，在即将免疫细胞施用于患者之前，可以以类似的方式进行品质控制。

需要注意的是，本技术还可以采用以下配置。

<1>

一种细胞观察装置，包括：

细胞导入部；

细胞排列部；

观察部；和

分析部，

其中，所述细胞导入部将一个或多个细胞引入到所述细胞排列部，

所述细胞排列部排列所引入的一个或多个细胞，

所述观察部观察在所述细胞排列部中由细胞接触引起的时序事件，和

所述分析部分析由所述细胞接触引起的时序事件。

<2>

如上述段落<1>中所述的细胞观察装置，包括：

将药物添加到所述细胞导入部和/或细胞排列部的药物添加部。

<3>

如上述段落<1>或<2>中所述的细胞观察装置，其中，由所述细胞接触引起的时序事件选自于包括下列事件的组：细胞运动，细胞运动速度的变化，细胞形态的变化，细胞分泌物释放，细胞捕食，细胞死亡，细胞增殖，细胞发出的荧光强度的变化，细胞间距离的变化，细胞内颗粒的产生和细胞内颗粒的局部化。

<4>

如上述段落<1>至<3>中任一项所述的细胞观察装置，其中，通过使用选自于包括明亮视野图像、相位差图像、荧光图像和折射率图像的组中的图像来观察所述由细胞接触引起的时序事件。

<5>

如上述段落<1>至<4>中任一项所述的细胞观察装置，其中，所述细胞是免疫细胞和/或癌细胞。

<6>

如上述段落<5>中所述的细胞观察装置，其中，所述细胞排列部具有多个孔，并且一个或多个所述免疫细胞被排列在每个所述孔中。

<7>

如上述段落<6>中所述的细胞观察装置，其中，一个或多个所述癌细胞被排列在所述孔中。

<8>

一种用于评估免疫细胞活性水平的方法，包括：

使多个癌细胞与单个免疫细胞接触；和

检查在预定时间内由所述单个免疫细胞导致死亡的癌细胞的数量。

<9>

一种用于控制免疫细胞品质的方法，包括：

使多个癌细胞与单个免疫细胞接触；

检查由所述单个免疫细胞导致死亡的癌细胞的数量；和

在预定的时间内，在所述单个免疫细胞导致所述癌细胞死亡的数量少于预定数量的情况下，或者在所述单个免疫细胞导致所述癌细胞死亡的数量大于预定数量的情况下，排除所述单个免疫细胞。

附图标记列表

100主要部

101细胞分选部

102细胞导入部

103细胞排列部

104观察部

105分析部

106显示部

107数据存储部

108细胞取出部

109细胞保持部

110基因分析部

111通道启动部

112芯片配置部

113细胞环境控制部

114药物添加部

115数据库

201调节性t细胞

202骨髓来源的抑制细胞

203树突细胞

204细胞毒性t细胞

205癌细胞

206抗体

207累积图，其中随时间追踪所有孔的癌细胞死亡率

208细胞毒性t细胞运动变化的图表

1000细胞观察装置

1031孔

2000流式细胞仪。