显示增加的备选FVIII辅因子功能活性的双特异性抗体的制作方法

本发明涉及具有增强的fviii辅因子功能替代活性的抗体，包含此类抗体作为活性成分的药物制剂，产生此类抗体的方法等。更具体地，本发明涉及具有高于ace910(emicizumab)的fviii辅因子功能替代活性的双特异性抗体。
背景技术：
：血友病a是由凝血因子viii(fviii)功能的遗传性降低或缺乏引起的出血异常。针对出血，一般向血友病a患者施用fviii制剂(按需施用)。近年来，fviii制剂被预防性地施用以预防出血事件(非专利文献1和2)(预防性施用)。fviii制剂的血液半衰期约为12小时至16小时。因此，为了持续预防，将fviii制剂一周三次施用于患者(非专利文献3和4)。在按需施用中，还在必要时定期额外施用fviii制剂以预防再出血。此外，fviii制剂是静脉内施用的。因此，强烈需要比fviii制剂具有更少施用负荷的药剂。针对fviii的抗体(抑制剂)偶尔在血友病患者中产生。这些抑制剂抵消了fviii制剂的效果。对于已经产生出抑制剂的患者(抑制剂患者)的出血，施用旁路制剂。它们的作用机制不依赖于fviii功能，其为通过活化凝血因子ix(fixa)催化凝血因子x(fx)活化的功能。因此，在一些情况下，旁路制剂不能充分阻止出血。因此，强烈需要不受抑制剂存在影响并且可以替代fviii功能的药剂。作为解决这些问题的手段，替代fviii功能的双特异性抗体及其用途(专利文献1、2、3和4)已被报道。针对fixa和fx的双特异性抗体可以替代fviii功能并通过将这两个因子定位在附近来显示出fviii辅因子功能替代活性(非专利文献5)。针对fixa和fx的双特异性抗体的fviii辅因子功能替代活性是指通过fixa使用比色测定方法检查fx活化反应和使用血友病a血浆的凝血酶生成测定计算的活性。据报道，抗体的fviii辅因子功能替代活性可通过优化对fixa和fx的亲和力而增强(非专利文献6)。另外，已知抗体的fviii辅因子功能替代活性受igg同种型、二硫键模式、铰链区的氨基酸序列以及在fc区中糖链的存在或不存在影响(非专利文献7)。据报道ace910(emicizumab)(其为这些抗体之一并具有高fviii辅因子功能替代活性)在血友病的猴模型中显示出止血效果(非专利文献8和9)。另外，在ace910(emicizumab)对健康受试者的临床试验中，已经证实了优异的药代动力学(长半衰期)和耐受性(非专利文献10)，并且在有或没有抑制剂的血友病a患者的临床试验中，与ace910(emicizumab)施用前相比，ace910(emicizumab)施用显著抑制了出血发作(episodes)的数量(非专利文献11)。如上所述，在临床试验中，针对ace910(emicizumab)，观察到对出血发作数量的抑制效果。然而，由于通过ace910(emicizumab)对使用fviii缺乏血浆的体外凝血酶生成测定中凝血酶生成的最大量(峰高)的改善效果低于fviii活性的正常水平，即100u/dl(非专利文献8)，因此期望进一步提高药效。此外，期望能够通过改善特异性活性进一步降低施用剂量的双特异性抗体等。ace910(emicizumab)是具有高fviii辅因子功能替代活性的双特异性抗体，其制备如下：将通过动物免疫获得的抗fix抗体和/或抗fixa抗体以及抗fx抗体人源化以获得hbs1作为前导(lead)抗体；且将许多氨基酸取代引入前导抗体中以对其进行多边优化(非专利文献6和专利文献4)。为了提高药物功效和改善特异性活性，需要替代fviii功能的双特异性抗体，其具有比ace910(emicizumab)更高的最大活性(最大fviii辅因子功能替代活性)并且还可以在低于ace910(emicizumab)的浓度下显示出fviii辅因子功能替代活性。然而，至今，从浓度和最大活性的观点来看，没有关于具有高于ace910(emicizumab)的fviii辅因子功能替代活性的双特异性抗体的报道。[引用列表][专利文献][专利文献1]wo2005/035754[专利文献2]wo2005/035756[专利文献3]wo2006/109592[专利文献4]wo2012/067176[非专利文献][非专利文献1]blood58，1-13(1981)[非专利文献2]nature312，330-337(1984)[非专利文献3]nature312，337-342(1984)[非专利文献4]biochim.biophys.acta871，268-278(1986)[非专利文献5]natmed.2012oct；18(10)：1570-4.[非专利文献6]plosone.2013；8(2)：e57479.[非专利文献7]mabs.2015；7(1)：120-8.[非专利文献8]jthrombhaemost.2014feb；12(2)：206-213.[非专利文献9]blood.2014nov13；124(20)：3165-71.[非专利文献10]blood.2016mar31；127(13)：1633-1641[非专利文献11]newengjmed2016may26；374(21)：2044-2053[发明概述][本发明要解决的问题]鉴于上述情况完成了本发明。本发明的目的是要提供具有增加的fviii辅因子功能替代活性的抗体，包含此类抗体作为活性成分的药物制剂，以及产生它们的方法。更具体地，本发明的目的是要提供不同于ace910(emicizumab)的重链和轻链可变区位点中的突变或新型轻链cdr序列以用于制备具有高于ace910(emicizumab)的fviii辅因子功能替代活性的双特异性抗体，具有此类突变或此类cdr序列并识别fix和/或fixa以及fx的双特异性抗体，产生此类抗体的方法，包含此类抗体作为活性成分的药物制剂，以及使用此类药物制剂用于治疗血友病a的方法。[解决问题的手段]为了解决上述问题，本发明人通过将氨基酸取代引入其轻链可变区的多个位点产生了ace910(emicizumab)的变体并成功发现增强fviii辅因子功能替代活性的氨基酸取代。本发明人还成功地从人抗体文库中获得了具有不同于ace910的序列的新型轻链，其具有fviii辅因子功能替代活性，并且成功鉴定了轻链中的氨基酸取代，其增强fviii辅因子功能替代活性。另外，当通过使用这些轻链制备的双特异性抗体的变体是通过将氨基酸取代引入重链可变区的多个位点而产生时，发明人成功地发现了增强fviii辅因子功能替代活性的氨基酸取代。本发明基于这些发现，并具体提供以下内容：[1]包含抗体轻链可变结构域的多肽，其中所述多肽包含分别具有seqidno：7、8和9的轻链cdr1、2和3氨基酸序列的抗体轻链可变结构域，或具有seqidno：47的氨基酸序列的抗体轻链可变结构域，在其中选自由以下各项组成的组的一个或更多个氨基酸已被除了半胱氨酸以外的任意氨基酸取代：k24、a25、s26、r27、n28、i29、e30、r31、q32、l33、a34、q50、a51、s52、r53、k54、e55、s56、q89、q90、y91、s92、d93、p94、p95、l96和t97，依照kabat编号系统编号；[2]识别fix和/或fixa以及fx的双特异性抗体，其中所述抗体包含分别具有seqidno：7、8和9的轻链cdr1、2和3氨基酸序列的抗体轻链可变结构域，或具有seqidno：47的氨基酸序列的抗体轻链可变结构域，在其中选自由以下各项组成的组的一个或更多个氨基酸已被除了半胱氨酸以外的任意氨基酸取代：k24、a25、s26、r27、n28、i29、e30、r31、q32、l33、a34、q50、a51、s52、r53、k54、e55、s56、q89、q90、y91、s92、d93、p94、p95、l96和t97，依照kabat编号系统编号；[3]识别fix和/或fixa以及fx的双特异性抗体，其中第一多肽和第三多肽形成一对且第二多肽和第四多肽形成一对，其中所述第一多肽包含seqidno：45的抗体重链可变结构域氨基酸序列且所述第二多肽包含seqidno：46的抗体重链可变结构域氨基酸序列，其中所述第三多肽或所述第四多肽包含seqidno：47的抗体轻链可变结构域氨基酸序列，另一多肽包含分别具有seqidno：7、8和9的轻链cdr1、2和3氨基酸序列的抗体轻链可变结构域，或具有seqidno：47的氨基酸序列的抗体轻链可变结构域，且其中在所述另一多肽中选自由以下各项组成的组的一个或更多个氨基酸已被除了半胱氨酸以外的任意氨基酸取代：k24、a25、s26、r27、n28、i29、e30、r31、q32、l33、a34、q50、a51、s52、r53、k54、e55、s56、q89、q90、y91、s92、d93、p94、p95、l96和t97，依照kabat编号系统编号；[4]包含抗体重链可变结构域的多肽，其中所述多肽包含分别具有seqidno：1、2和3的重链cdr1、2和3氨基酸序列的抗体重链可变结构域，或具有seqidno：45的氨基酸序列的抗体重链可变结构域，在其中选自由以下各项组成的组的一个或更多个氨基酸已被除了半胱氨酸以外的任意氨基酸取代：y31、y32、d33、i34、q35、s50、i51、s52、p52a、s53、g54、q55、s56、t57、y58、y59、r60、r61、e62、v63、k64、g65、r95、t96、g97、r98、e99、y100、g100a、g100b、g100c、w100d、y100e、f100f、d101和y102，依照kabat编号系统编号；[5]识别fix和/或fixa以及fx的双特异性抗体，其中所述抗体包含分别具有seqidno：1、2和3的重链cdr1、2和3氨基酸序列的抗体重链可变结构域，或包含具有seqidno：45的氨基酸序列的抗体重链可变结构域，在其中选自由以下各项组成的组的一个或更多个氨基酸已被除了半胱氨酸以外的任意氨基酸取代：y31、y32、d33、i34、q35、s50、i51、s52、p52a、s53、g54、q55、s56、t57、y58、y59、r60、r61、e62、v63、k64、g65、r95、t96、g97、r98、e99、y100、g100a、g100b、g100c、w100d、y100e、f100f、d101和y102，依照kabat编号系统编号；[6]包含抗体重链可变结构域的多肽，其中所述多肽包含分别具有seqidno：4、5和6的重链cdr1、2和3氨基酸序列的抗体重链可变结构域，或具有seqidno：46的氨基酸序列的抗体重链可变结构域，在其中选自由以下各项组成的组的一个或更多个氨基酸已被除了半胱氨酸以外的任意氨基酸取代：d31、n32、n33、m34、d35、d50、i51、n52、t52a、r53、s54、g55、g56、s57、i58、y59、n60、e61、e62、f63、q64、d65、r95、k96、s97、y98、g99、y100、y100a、l100b、d101和e102，依照kabat编号系统编号；[7]识别fix和/或fixa以及fx的双特异性抗体，其中所述抗体包含分别具有seqidno：4、5和6的重链cdr1、2和3氨基酸序列的抗体重链可变结构域，或包含具有seqidno：46的氨基酸序列的抗体重链可变结构域，在其中选自由以下各项组成的组的一个或更多个氨基酸已被除了半胱氨酸以外的任意氨基酸取代：d31、n32、n33、m34、d35、d50、i51、n52、t52a、r53、s54、g55、g56、s57、i58、y59、n60、e61、e62、f63、q64、d65、r95、k96、s97、y98、g99、y100、y100a、l100b、d101和e102，依照kabat编号系统编号；[8]识别fix和/或fixa以及fx的双特异性抗体，其中第一多肽和第三多肽形成一对且第二多肽和第四多肽形成一对，其中所述第二多肽包含seqidno：46的抗体重链可变结构域氨基酸序列，所述第三多肽包含seqidno：42的抗体轻链氨基酸序列，且所述第四多肽包含seqidno：44的抗体轻链氨基酸序列，且所述第一多肽包含分别具有seqidno：1、2和3的重链cdr1、2和3氨基酸序列的抗体重链可变结构域，或具有seqidno：45的氨基酸序列的抗体重链可变结构域，且其中在所述第一多肽中选自由以下各项组成的组的一个或更多个氨基酸已被除了半胱氨酸以外的任意氨基酸取代：y31、y32、d33、i34、q35、s50、i51、s52、p52a、s53、g54、q55、s56、t57、y58、y59、r60、r61、e62、v63、k64、g65、r95、t96、g97、r98、e99、y100、g100a、g100b、g100c、w100d、y100e、f100f、d101和y102，依照kabat编号系统编号；[9]识别fix和/或fixa以及fx的双特异性抗体，其中第一多肽和第三多肽形成一对且第二多肽和第四多肽形成一对，其中所述第一多肽包含seqidno：45的抗体重链氨基酸序列，所述第三多肽包含seqidno：43的抗体轻链氨基酸序列，且所述第四多肽包含seqidno：44的抗体轻链氨基酸序列，且所述第二多肽包含分别具有seqidno：4、5和6的重链cdr1、2和3氨基酸序列的抗体重链可变结构域，或具有seqidno：46的氨基酸序列的抗体重链可变结构域，且其中在所述第二多肽中选自由以下各项组成的组的一个或更多个氨基酸已被除了半胱氨酸以外的任意氨基酸取代：d31、n32、n33、m34、d35、d50、i51、t52a、n52、r53、s54、g355、g356、s57、i58、y59、n60、e61、e62、f63、q64、d65、r95、k96、s97、y98、g99、y100、y100a、l100b、d101和e102，依照kabat编号系统编号；[10]抗体轻链，其包含选自以下(a1)至(a6)、(b1)至(b23)以及(c1)至(c3)中任意一种氨基酸序列：(a1)包含seqidno：13的氨基酸序列的抗体轻链(qnk131)；(a2)包含seqidno：14的氨基酸序列的抗体轻链(qnk284)；(a3)包含seqidno：15的氨基酸序列的抗体轻链(qnk315)；(a4)包含seqidno：16的氨基酸序列的抗体轻链(qnl182)；(a5)包含seqidno：17的氨基酸序列的抗体轻链(qnl492)；(a6)包含seqidno：18的氨基酸序列的抗体轻链(qnl576)；(b1)包含seqidno：19的氨基酸序列的抗体轻链(jnk131)；(b2)包含seqidno：20的氨基酸序列的抗体轻链(jnk163)；(b3)包含seqidno：21的氨基酸序列的抗体轻链(jnk252)；(b4)包含seqidno：22的氨基酸序列的抗体轻链(jnk263)；(b5)包含seqidno：23的氨基酸序列的抗体轻链(jnk339)；(b6)包含seqidno：24的氨基酸序列的抗体轻链(jnk348)；(b7)包含seqidno：25的氨基酸序列的抗体轻链(jnk351)；(b8)包含seqidno：26的氨基酸序列的抗体轻链(jnk360)；(b9)包含seqidno：27的氨基酸序列的抗体轻链(jnk378)；(b10)包含seqidno：28的氨基酸序列的抗体轻链(jnk382)；(b11)包含seqidno：29的氨基酸序列的抗体轻链(jnl036)；(b12)包含seqidno：30的氨基酸序列的抗体轻链(jnl072)；(b13)包含seqidno：31的氨基酸序列的抗体轻链(jnl095)；(b14)包含seqidno：32的氨基酸序列的抗体轻链(jnl176)；(b15)包含seqidno：33的氨基酸序列的抗体轻链(jnl208)；(b16)包含seqidno：34的氨基酸序列的抗体轻链(jnl224)；(b17)包含seqidno：35的氨基酸序列的抗体轻链(jnl260)；(b18)包含seqidno：36的氨基酸序列的抗体轻链(jnl056)；(b19)包含seqidno：37的氨基酸序列的抗体轻链(jnl059)；(b20)包含seqidno：38的氨基酸序列的抗体轻链(jnl226)；(b21)包含seqidno：39的氨基酸序列的抗体轻链(jnl250)；(b22)包含seqidno：40的氨基酸序列的抗体轻链(jnl263)；(b23)包含seqidno：41的氨基酸序列的抗体轻链(jnl281)；(c1)包含seqidno：42的氨基酸序列的抗体轻链(qal187)；(c2)包含seqidno：43的氨基酸序列的抗体轻链(qal201)；以及(c3)包含seqidno：44的氨基酸序列的抗体轻链(jyl280)；[11]识别fix和/或fixa以及fx的双特异性抗体，其中第一多肽(d)和第三多肽(f)形成一对，第二多肽(e)和第四多肽(g)形成一对，且其中每种多肽是以下多肽：(d)所述第一多肽是(d1)或(d2)：(d1)多肽，其包含分别具有seqidno：1、2和3的重链cdr1、2和3氨基酸序列的抗体重链可变结构域，或具有seqidno：45的氨基酸序列的抗体重链可变结构域；(d2)多肽，其包含分别具有seqidno：1、2和3的重链cdr1、2和3氨基酸序列的抗体重链可变结构域，或具有seqidno：45的氨基酸序列的抗体重链可变结构域，在其中选自由以下各项组成的组的一个或更多个氨基酸已被除了半胱氨酸以外的任意氨基酸取代：y31、y32、d33、i34、q35、s50、i51、s52、p52a、s53、g54、q55、s56、t57、y58、y59、r60、r61、e62、v63、k64、g65、r95、t96、g97、r98、e99、y100、g100a、g100b、g100c、w100d、y100e、f100f、d101和y102，依照kabat编号系统编号；(e)所述第二多肽是(e1)或(e2)：(e1)多肽，其包含分别具有seqidno：4、5和6的重链cdr1、2和3氨基酸序列的抗体重链可变结构域，或具有seqidno：46的氨基酸序列的抗体重链可变结构域；(e2)多肽，其包含分别具有seqidno：4、5和6的重链cdr1、2和3氨基酸序列的抗体重链可变结构域，或具有seqidno：46的氨基酸序列的抗体重链可变结构域，在其中选自由以下各项组成的组的一个或更多个氨基酸已被除了半胱氨酸以外的任意氨基酸取代：d31、n32、n33、m34、d35、d50、i51、t52a、n52、r53、s54、g55、g56、s57、i58、y59、n60、e61、e62、f63、q64、d65、r95、k96、s97、y98、g99、y100、y100a、l100b、d101和e102，依照kabat编号系统编号；(f)所述第三多肽是(f1)、(f2)或(f3)：(f1)多肽，其包含分别具有seqidno：7、8和9的轻链cdr1、2和3氨基酸序列的抗体轻链可变结构域，或具有seqidno：47的氨基酸序列的抗体轻链可变结构域；(f2)多肽，其包含分别具有seqidno：7、8和9的轻链cdr1、2和3氨基酸序列的抗体轻链可变结构域，或具有seqidno：47的氨基酸序列的抗体轻链可变结构域，在其中选自由以下各项组成的组的一个或更多个氨基酸已被除了半胱氨酸以外的任意氨基酸取代：k24、a25、s26、r27、n28、i29、e30、r31、q32、l33、a34、q50、a51、s52、r53、k54、e55、s56、q89、q90、y91、s92、d93、p94、p95、l96和t97，依照kabat编号系统编号；(f3)在[10]中描述的(a1)至(a6)和(c1)至(c2)中任意一种的多肽；以及(g)所述第四多肽是(g1)、(g2)或(g3)：(g1)多肽，其包含分别具有seqidno：7、8和9的轻链cdr1、2和3氨基酸序列的抗体轻链可变结构域，或具有seqidno：47的氨基酸序列的抗体轻链可变结构域；(g2)多肽，其包含分别具有seqidno：7、8和9的轻链cdr1、2和3氨基酸序列的抗体轻链可变结构域，或具有seqidno：47的氨基酸序列的抗体轻链可变结构域，在其中选自由以下各项组成的组的一个或更多个氨基酸已被除了半胱氨酸以外的任意氨基酸取代：k24、a25、s26、r27、n28、i29、e30、r31、q32、l33、a34、q50、a51、s52、r53、k54、e55、s56、q89、q90、y91、s92、d93、p94、p95、l96和t97，依照kabat编号系统编号；(g3)在[10]中描述的(b1)至(b23)和(c3)中任意一种的多肽；[12]产生emicizumab的变体的方法，其包括以下步骤(a)：(a)进行以下取代(i)至(iii)中的一种或更多种，其中编号依照kabat编号系统：(i)在包含分别具有seqidno：7、8和9的轻链cdr1、2和3氨基酸序列的抗体轻链可变结构域中，选自由以下各项组成的组的一个或更多个氨基酸的取代：k24、a25、s26、r27、n28、i29、e30、r31、q32、l33、a34、q50、a51、s52、r53、k54、e55、s56、q89、q90、y91、s92、d93、p94、p95、l96和t97；(ii)在包含分别具有seqidno：1、2和3的重链cdr1、2和3氨基酸序列的抗体重链可变结构域中，选自由以下各项组成的组的一个或更多个氨基酸的取代：y31、y32、d33、i34、q35、s50、i51、s52、p52a、s53、g54、q55、s56、t57、y58、y59、r60、r61、e62、v63、k64、g65、r95、t96、g97、r98、e99、y100、g100a、g100b、g100c、w100d、y100e、f100f、d101和y102；以及(iii)在包含分别具有seqidno：4、5和6的重链cdr1、2和3氨基酸序列的抗体重链可变结构域中，选自由以下各项组成的组的一个或更多个氨基酸的取代：d31、n32、n33、m34、d35、d50、i51、t52a、n52、r53、s54、g55、g56、s57、i58、y59、n60、e61、e62、f63、q64、d65、r95、k96、s97、y98、g99、y100、y100a、l100b、d101和e102；[13]分离emicizumab的变体的方法，其包括下列步骤(a)至(c)：(a)通过进行以下(i)至(iii)中的一种或更多种产生emicizumab的变体，其中编号依照kabat编号系统：(i)在包含分别具有seqidno：7、8和9的轻链cdr1、2和3氨基酸序列的抗体轻链可变结构域中，选自由以下各项组成的组的一个或更多个氨基酸的取代：k24、a25、s26、r27、n28、i29、e30、r31、q32、l33、a34、q50、a51、s52、r53、k54、e55、s56、q89、q90、y91、s92、d93、p94、p95、l96和t97；(ii)在包含分别具有seqidno：1、2和3的重链cdr1、2和3氨基酸序列的抗体重链可变结构域中，选自由以下各项组成的组的一个或更多个氨基酸的取代：y31、y32、d33、i34、q35、s50、i51、s52、p52a、s53、g54、q55、s56、t57、y58、y59、r60、r61、e62、v63、k64、g65、r95、t96、g97、r98、e99、y100、g100a、g100b、g100c、w100d、y100e、f100f、d101和y102；以及(iii)在包含分别具有seqidno：4、5和6的重链cdr1、2和3氨基酸序列的抗体重链可变结构域中，选自由以下各项组成的组的一个或更多个氨基酸的取代：d31、n32、n33、m34、d35、d50、151、t52a、n52、r53、s54、g55、g56、s57、i58、y59、n60、e61、e62、f63、q64、d65、r95、k96、s97、y98、g99、y100、y100a、l100b、d101和e102；(b)测量(a)中产生的所述变体的fviii辅因子功能替代活性；以及(c)选择与emicizumab相比具有改善的fviii辅因子功能替代活性的emicizumab变体。另外，本发明提供以下[14]至[26]：[14][1]、[4]和[6]中任意一项所述的多肽，其为抗体；[15][2]、[3]、[5]、[7]至[9]、[11]和[14]中任意一项所述的多肽，其为人源化抗体或人抗体；[16][2]、[3]、[5]、[7]至[9]、[11]、[14]和[15]中任意一项所述的抗体，其为选自由以下各项组成的组的抗体：fv、fab、fab’、fab’-sh、f(ab’)2、双抗体(diabody)、线性抗体、单链抗体分子和由抗体片段形成的多特异性抗体；[17]编码[2]、[3]、[5]、[7]至[9]、[11]、[14]至[16]中任意一项所述的抗体的核酸；[18]已经插入了[17]所述的核酸的载体；[19]细胞，其包含[17]所述的核酸或[17]所述的载体；[20]药物制剂，其包含[2]、[3]、[5]、[7]至[9]、[11]、[14]至[16]中任意一项所述的抗体，以及药学上可接受的载体；[21][20]所述的药物制剂，其用于预防和/或治疗出血、伴随出血的疾病或由出血引起的疾病，其中所述疾病是由于凝血因子viii和/或活化凝血因子viii的活性的降低或缺乏而形成和/或进展的疾病；[22][21]所述的药物制剂，其中所述由于凝血因子viii和/或活化凝血因子viii的活性的降低或缺乏而形成和/或进展的疾病是血友病a；[23][22]所述的药物制剂，其中所述由于凝血因子viii和/或活化凝血因子viii的活性的降低或缺乏而形成和/或进展的疾病是显示出现针对凝血因子viii和/或活化凝血因子viii的抑制剂的疾病；[24][21]所述的药物制剂，其中所述由于凝血因子viii和/或活化凝血因子viii的活性的降低或缺乏而形成和/或进展的疾病是获得性血友病；[25][21]所述的药物制剂，其中所述由于凝血因子viii和/或活化凝血因子viii的活性的降低或缺乏而形成和/或进展的疾病是冯威勒布兰特病(vonwillebranddisease)；以及[26]用于预防和/或治疗出血、伴随出血的疾病或由出血引起的疾病的方法的治疗产品的商业包装，其包含至少[2]、[3]、[5]、[7]至[9]、[11]和[14]至[16]中任意一项所述的抗体。附图简述图1显示呈现包含新型l链的双特异性抗体的fviii辅因子功能替代活性的图。图2显示呈现q499/qal201//j327/jyl280和q499/l404//j327/l404的fviii辅因子功能替代活性的图。[实施本发明的方式]本文中的术语“抗体”以最广义使用，并且涵盖多种抗体结构，包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)和抗体片段，只要它们显示出期望的抗原结合活性。“抗体片段”是指除了完整抗体以外的分子，其包含与完整抗体结合的抗原结合的完整抗体的一部分。抗体片段的例子包括但不限于fv、fab、fab′、fab′-sh、f(ab′)2；双抗体；线性抗体；单链抗体分子(例如scfv)；和由抗体片段形成的多特异性抗体。抗体的“类”是指其重链拥有的恒定结构域或恒定区的类型。抗体有五种主要的类：iga、igd、ige、igg和igm，并且其中的一些可以进一步分为亚类(同种型)，例如igg1、igg2、igg3、igg4、iga1和iga2。对应于不同类免疫球蛋白的重链恒定结构域分别称为α、δ、ε、γ和μ。药剂(例如药物制剂)的“有效量”是指在必要的剂量和时间段上有效实现期望治疗或预防结果的量。本文所用的术语“fc区”用于定义免疫球蛋白重链的含有恒定区的至少一部分的c末端区域。该术语包括天然序列fc区和变体fc区。在一个实施方案中，人igg重链fc区自cys226或自pro230延伸至重链的羧基端。然而，fc区的c端赖氨酸(lys447)或甘氨酸-赖氨酸(残基446-447)可以存在或不存在。除非本文另有规定，否则fc区或恒定区中氨基酸残基的编号依照eu编号系统，也称为eu索引，如kabat等，sequencesofproteinsofimmunologicalinterest，5thed，pblichealthservice，nationalinstitutesofhealth，bethesda，md，1991中所描述。“框架”或“fr”是指除高变区(hvr)残基之外的可变结构域残基。可变结构域的fr一般由四个fr结构域组成：fri、fr2、fr3和fr4。因此，hvr和fr序列一般在vh(或vl)中的以下序列中出现：fr1-h1(l1)-fr2-h2(l2)-fr3-h3(l3)-fr4。术语“全长抗体”、“完整抗体”和“全抗体”在本文中可互换使用，是指具有与天然抗体结构基本相似的结构或具有含有如本文所定义的fc区的重链的抗体。术语“宿主细胞”、“宿主细胞系”和“宿主细胞培养物”可互换使用，是指已引入外源核酸的细胞，包括此类细胞的后代。宿主细胞包括“转化体”和“经转化的细胞”，其包括原代的经转化的细胞及自其衍生的后代而不考虑传代的次数。后代在核酸内容物上可以与亲本细胞不完全相同，而是可以含有突变。本文包括具有与在初始经转化的细胞中筛选或选择的相同功能或生物学活性的突变后代。“人抗体”是拥有与由人或人细胞产生的或利用人抗体全集或其他人抗体编码序列自非人来源衍生的抗体的氨基酸序列对应的氨基酸序列的抗体。人抗体的此定义明确排除了包含非人抗原结合残基的人源化抗体。“人源化”抗体是指包含来自非人hvr的氨基酸残基和来自人fr的氨基酸残基的嵌合抗体。在某些实施方案中，人源化抗体会包含基本上全部的至少一个，通常两个可变结构域，在其中全部的或基本上全部的hvr(例如，cdr)对应于非人抗体的那些，并且全部的或基本上全部的fr对应于人抗体的那些。人源化抗体任选地可包含衍生自人抗体的抗体恒定区的至少一部分。抗体(例如非人抗体)的“人源化形式”，是指已经历人源化的抗体。如本文所用的术语“高变区”或“hvr”是指抗体可变结构域中在序列上是高变的(“互补决定区”或“cdr”)和/或形成结构上限定的环(“高变环”)和/或含有抗原接触残基(“抗原接触”)的每个区。抗体一般包含六个hvr：三个在vh中(h1、h2、h3)，且三个在vl中(l1、l2、l3)。本文示例性的hvr包括：(a)存在于氨基酸残基26-32(l1)、50-52(l2)、91-96(l3)、26-32(h1)、53-55(h2)和96-101(h3)上的高变环(chothia和lesk，j.mol.biol.196：901-917(1987))；(b)存在于氨基酸残基24-34(l1)、50-56(l2)、89-97(l3)、31-35b(h1)、50-65(h2)和95-102(h3)上的cdr(kabat等，sequencesofproteinsofimmunologicalinterest，5thed.publichealthservice，nationalinstitutesofhealth，bethesda，md(1991))；(c)存在于氨基酸残基27c-36(l1)、46-55(l2)、89-96(l3)、30-35b(h1)、47-58(h2)和93-101(h3)上的抗原接触(maccallum等，j.mol.biol.262：732-745(1996))；以及(d)(a)、(b)和/或(c)的组合，包括hvr氨基酸残基46-56(l2)、47-56(l2)、48-56(l2)、49-56(l2)、26-35(h1)、26-35b(h1)、49-65(h2)，93-102(h3)和94-102(h3)。除非另有说明，可变结构域中的hvr残基和其他残基(例如fr残基)依照kabat等(同上)编号。“分离的”抗体是指已经与其天然环境的组分分开的抗体。在一些实施方案中，将抗体纯化至大于95％或99％的纯度，如通过例如电泳(例如sds-page、等电聚焦(ief)、毛细管电泳)或层析(例如离子交换或反相hplc)测定的。关于用于评估抗体纯度的方法的综述，见例如flatman等，j.chromatogr.b848：79-87(2007)。“分离的”核酸是指已经与其天然环境的组分分开的核酸分子。分离的核酸包括通常含有核酸分子的细胞中含有的核酸分子，但该核酸分子存在于染色体外或在与其天然染色体位置不同的染色体位置。本文所用的术语“单克隆抗体”是指从一群基本上同质的抗体获得的抗体，即构成群体的各抗体个体是相同的和/或结合相同表位，除了可能的变体抗体，例如在含有天然存在的突变或在单克隆抗体制备物的产生期间出现，这类变体一般以少量存在。与典型的包含针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制备物不同，单克隆抗体制备物的每种单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。如此，修饰语“单克隆”指示抗体自一群基本上同质的抗体获得的特性，而不应解释为要求通过任何特定方法来生成抗体。例如，可以通过多种技术来生成要依照本发明使用的单克隆抗体，包括但不限于杂交瘤方法、重组dna方法、噬菌体展示方法和利用含有所有或部分人免疫球蛋白基因座的转基因动物的方法，本文中描述了用于生成单克隆抗体的此类方法和其他例示性方法。“天然抗体”指具有不同结构的天然存在的免疫球蛋白分子。例如，天然igg抗体是约150,000道尔顿的异四聚糖蛋白，由二硫化物键合的两条相同轻链和两条相同重链构成。从n至c端，每条重链具有一个可变区(vh)，又称作可变重域或重链可变结构域，接着是三个恒定结构域(ch1、ch2、和ch3)。类似地，从n至c端，每条轻链具有一个可变区(vl)，又称作可变轻域或轻链可变结构域，接着是一个恒定轻(cl)结构域。根据其恒定结构域氨基酸序列，抗体轻链可归入称作κ和λ的两种类型中的一种。术语“包装插页”用于指治疗产品的商业包装中通常包含的说明书，其含有关于涉及此类治疗产品应用的适应症、用法、剂量、施用、联合疗法、禁忌症和/或警告的信息。术语“药物制剂”指所处形式使得容许其中含有的活性成分的生物学活性是有效的，且不含对会接受制剂施用的受试者具有不可接受的毒性的额外组分的制剂。“药学上可接受载体”指药物制剂中除了活性成分外对受试者无毒的成分。药学上可接受载体包括但不限于缓冲剂、赋形剂、稳定剂、或防腐剂。本文使用的术语“fix”、“fixa”和“fx”是指来自任何脊椎动物来源的任何天然fix、fixa和fx，包括哺乳动物，诸如灵长类动物(例如人)和啮齿动物(例如，小鼠和大鼠)，除非另有说明。该术语涵盖“全长”的未加工的fix、fixa和fx以及源自细胞中的加工的任何形式的fix、fixa和fx。该术语还涵盖fix、fixa和fx的天然存在的变体，例如剪接变体或等位变体。如本文中所使用的，“治疗”指试图改变所治疗个体中的自然进程，并且可以为了预防或者在临床病理学的过程期间实施的临床干预。治疗的期望效果包括但不限于预防疾病的发生或复发、缓解症状、降低疾病的任何直接或间接病理学后果、预防转移、降低疾病进展率、改善或减轻疾病状态、和消退或改善的预后。在一些实施方案中，本发明的抗体用于延迟疾病的形成或延缓疾病的进展。术语“可变区”或“可变结构域”指抗体重或轻链中牵涉抗体结合抗原的结构域。天然抗体的重链和轻链可变结构域(分别为vh和vl)一般具有类似的结构，其中每个域包含4个保守的框架区(fr)和3个高变区(hvr)(见例如kindt等，kubyimmunology，6thed.，w.h.freemanandco.，page91(2007)。)单个vh或vl结构域可以足以赋予抗原结合特异性。另外，可以分别使用来自结合抗原的抗体的vh或vl结构域筛选互补vl或vh结构域的文库来分离结合特定抗原的抗体。见例如，portolano等，j.immunol.150：880-887(1993)；clarkson等，nature352：624-628(1991)。如本文所使用的，术语“载体”指能够传播与其连接的另一种核酸的核酸分子。该术语包括作为自身复制型核酸结构的载体及整合入已接受其导入的宿主细胞的基因组中的载体。某些载体能够指导与其可操作连接的核酸的表达。此类载体在本文中称为“表达载体”。下文描述了emicizumab(ace910)，其为取代fviii的功能，并与fix和/或fixa以及fx结合的双特异性抗体。双特异性抗体(q499-z121/j327-z119/l404-k)，在其中第一多肽和第三多肽形成一对，且第二多肽和第四多肽形成一对，且在其中所述第一多肽包含分别含有seqidno：1、2和3的h链cdr1、2和3氨基酸序列(q499的h链cdr)的h链，所述第二多肽包含分别含有seqidno：4、5和6的h链cdr1、2和3氨基酸序列(j327的h链cdr)的h链，且所述第三多肽和所述第四多肽包含分别含有seqidno：7、8和9的l链cdr1、2和3氨基酸序列(l404的l链cdr)的共享l链。更具体地，上述双特异性抗是双特异性抗体(q499-z121/j327-z119/l404-k)，在其中第一多肽和第三多肽形成一对，且第二多肽和第四多肽形成一对，且在其中所述第一多肽包含含有seqidno：45的抗体重链可变结构域氨基酸序列的h链，所述第二多肽包含含有seqidno：46的抗体重链可变结构域氨基酸序列的h链，且所述第三多肽和所述第四多肽包含含有seqidno：47的抗体轻链可变结构域氨基酸序列的共享l链。更具体地，上述双特异性抗是双特异性抗体(q499-z121/j327-z119/l404-k)，在其中第一多肽和第三多肽形成一对，且第二多肽和第四多肽形成一对，且在其中所述第一多肽包含含有seqidno：10的氨基酸序列的h链，所述第二多肽包含含有seqidno：11的氨基酸序列的h链，且所述第三多肽和所述第四多肽包含含有seqidno：12的氨基酸序列的共享l链。此类抗体可以例如通过遵循wo2005/035756、wo2006/109592、wo2012/067176等中描述的方法获得。在下文中，emicizumab在本说明书中与ace910同义。在一个方面，根据本发明的“emicizumab的变体”是指这样的多肽或抗体，在其中emicizumab的重链可变区或轻链可变区的至少一个或更多个氨基酸序列与emicizumab的氨基酸序列不同，且包括能够实现本发明目的的任何变体。在一个实施方案中，即使作为变体的一部分的重链或轻链的所有可变区与emicizumab的可变区不同，这种变体也可包括在本发明的变体中。例如，emicizumab的变体是以下的多肽和抗体，但不限于此。在一个方面，本发明提供了包含抗体轻链可变结构域的多肽，所述多肽包含分别具有seqidno：7、8和9的轻链cdr1、2和3氨基酸序列的抗体轻链可变结构域，或具有seqidno：47的氨基酸序列的抗体轻链可变结构域，在其中选自由以下各项组成的组的一个或更多个氨基酸已被除了半胱氨酸以外的任意氨基酸取代：k24、a25、s26、r27、n28、i29、e30、r31、q32、l33、a34、q50、a51、s52、r53、k54、e55、s56、q89、q90、y91、s92、d93、p94、p95、l96和t97，依照kabat编号系统编号。在另一个方面，本发明提供了识别fix和/或fixa以及fx的双特异性抗体，所述抗体包含分别具有seqidno：7、8和9的轻链cdr1、2和3氨基酸序列的抗体轻链可变结构域，或具有seqidno：47的氨基酸序列的抗体轻链可变结构域，在其中选自由以下各项组成的组的一个或更多个氨基酸已被除了半胱氨酸以外的任意氨基酸取代：k24、a25、s26、r27、n28、i29、e30、r31、q32、l33、a34、q50、a51、s52、r53、k54、e55、s56、q89、q90、y91、s92、d93、p94、p95、l96和t97，依照kabat编号系统编号。在另一个方面，本发明提供识别fix和/或fixa以及fx的双特异性抗体，在其中第一多肽和第三多肽形成一对且第二多肽和第四多肽形成一对，且在其中所述第一多肽包含seqidno：45的抗体重链可变结构域氨基酸序列，所述第二多肽包含seqidno：46的抗体重链可变结构域氨基酸序列，所述第三多肽或所述第四多肽包含seqidno：47的抗体轻链可变结构域氨基酸序列，且另一多肽包含分别具有seqidno：7、8和9的轻链cdr1、2和3氨基酸序列的抗体轻链可变结构域，或具有seqidno：47的氨基酸序列的抗体轻链可变结构域，且在所述另一多肽中的选自由以下各项组成的组的一个或更多个氨基酸已被除了半胱氨酸以外的任意氨基酸取代：k24、a25、s26、r27、n28、i29、e30、r31、q32、l33、a34、q50、a51、s52、r53、k54、e55、s56、q89、q90、y91、s92、d93、p94、p95、l96和t97，依照kabat编号系统编号。在另一个方面，本发明提供了包含抗体重链可变结构域的多肽，所述多肽包含分别具有seqidno：1、2和3的重链cdr1、2和3氨基酸序列的抗体重链可变结构域，或具有seqidno：45的氨基酸序列的抗体重链可变结构域，在其中选自由以下各项组成的组的一个或更多个氨基酸已被除了半胱氨酸以外的任意氨基酸取代：y31、y32、d33、i34、q35、s50、i51、s52、p52a、s53、g54、q55、s56、t57、y58、y59、r60、r61、e62、v63、k64、g65、r95、t96、g97、r98、e99、y100、g100a、g100b、g100c、w100d、y100e、f100f、d101和y102，依照kabat编号系统编号。在另一个方面，本发明提供识别fix和/或fixa以及fx的双特异性抗体，所述抗体包含分别具有seqidno：1、2和3的重链cdr1、2和3氨基酸序列的抗体重链可变结构域，或具有seqidno：45的氨基酸序列的抗体重链可变结构域，在其中选自由以下各项组成的组的一个或更多个氨基酸已被除了半胱氨酸以外的任意氨基酸取代：y31、y32、d33、i34、q35、s50、i51、s52、p52a、s53、g54、q55、s56、t57、y58、y59、r60、r61、e62、v63、k64、g65、r95、t96、g97、r98、e99、y100、g100a、g100b、g100c、w100d、y100e、f100f、d101和y102，依照kabat编号系统编号。在另一个方面，本发明提供了包含抗体重链可变结构域的多肽，所述多肽包含分别具有seqidno：4、5和6的重链cdr1、2和3氨基酸序列的抗体重链可变结构域，或具有seqidno：46的氨基酸序列的抗体重链可变结构域，在其中选自由以下各项组成的组的一个或更多个氨基酸已被除了半胱氨酸以外的任意氨基酸取代：d31、n32、n33、m34、d35、d50、i51、n52、t52a、r53、s54、g55、g56、s57、i58、y59、n60、e61、e62、f63、q64、d65、r95、k96、s97、y98、g99、y100、y100a、l100b、d101和e102，依照kabat编号系统编号。在另一个方面，本发明提供识别fix和/或fixa以及fx的双特异性抗体，所述抗体包含分别具有seqidno：4、5和6的重链cdr1、2和3氨基酸序列的抗体重链可变结构域，或具有seqidno：46的氨基酸序列的抗体重链可变结构域，在其中选自由以下各项组成的组的一个或更多个氨基酸已被除了半胱氨酸以外的任意氨基酸取代：d31、n32、n33、m34、d35、d50、i51、n52、t52a、r53、s54、g55、g56、s57、i58、y59、n60、e61、e62、f63、q64、d65、r95、k96、s97、y98、g99、y100、y100a、l100b、d101和e102，依照kabat编号系统编号；在另一个方面，本发明提供识别fix和/或fixa以及fx的双特异性抗体，在其中第一多肽和第三多肽形成一对且第二多肽和第四多肽形成一对，且在其中所述第二多肽包含seqidno：46的抗体重链可变结构域氨基酸序列，所述第三多肽包含seqidno：42的抗体轻链氨基酸序列，所述第四多肽包含seqidno：44的抗体轻链氨基酸序列，且所述第一多肽包含分别具有seqidno：1、2和3的重链cdr1、2和3氨基酸的抗体重链可变结构域，或具有seqidno：45的氨基酸序列的抗体重链可变结构域，且在所述第一多肽中选自由以下各项组成的组的一个或更多个氨基酸已被除了半胱氨酸以外的任意氨基酸取代：y31、y32、d33、i34、q35、s50、i51、s52、p52a、s53、g54、q55、s56、t57、y58、y59、r60、r61、e62、v63、k64、g65、r95、t96、g97、r98、e99、y100、g100a、g100b、g100c、w100d、y100e、f100f、d101和y102，依照kabat编号系统编号。在另一个方面，本发明提供识别fix和/或fixa以及fx的双特异性抗体，在其中第一多肽和第三多肽形成一对且第二多肽和第四多肽形成一对，且在其中所述第一多肽包含seqidno：45的抗体重链氨基酸序列，所述第三多肽包含seqidno：43的抗体轻链氨基酸序列，所述第四多肽包含seqidno：44的抗体轻链氨基酸序列，且所述第二多肽包含分别具有seqidno：4、5和6的重链cdr1、2和3氨基酸序列的抗体重链可变结构域，或具有seqidno：46的氨基酸序列的抗体重链可变结构域，且在所述第二个多肽中选自由以下各项组成的组的一个或更多个氨基酸已被除了半胱氨酸以外的任意的氨基酸取代：d31、n32、n33、m34、d35、d50、i51、t52a、n52、r53、s54、g55、g56、s57、i58、y59、n60、e61、e62、f63、q64、d65、r95、k96、s97、y98、g99、y100、y100a、l100b、d101和e102，根据kabat编号系统编号。在另一个方面，本发明提供抗体轻链，其是包含选自以下(a1)至(a6)以及(b1)至(b23)中任意一种氨基酸序列的新型抗体轻链。所述轻链可用作替代emicizumab中包括的共享轻链的轻链。以下(a1)至(a6)的轻链是结合至fix和/或fixa的轻链的例子，且以下(b1)至(b23)的l链是结合fx的轻链的例子：(a1)包含seqidno：13的氨基酸序列的抗体轻链(qnk131)；(a2)包含seqidno：14的氨基酸序列的抗体轻链(qnk284)；(a3)包含seqidno：15的氨基酸序列的抗体轻链(qnk315)；(a4)包含seqidno：16的氨基酸序列的抗体轻链(qnl182)；(a5)包含seqidno：17的氨基酸序列的抗体轻链(qnl492)；(a6)包含seqidno：18的氨基酸序列的抗体轻链(qnl576)；(b1)包含seqidno：19的氨基酸序列的抗体轻链(jnk131)；(b2)包含seqidno：20的氨基酸序列的抗体轻链(jnk163)；(b3)包含seqidno：21的氨基酸序列的抗体轻链(jnk252)；(b4)包含seqidno：22的氨基酸序列的抗体轻链(jnk263)；(b5)包含seqidno：23的氨基酸序列的抗体轻链(jnk339)；(b6)包含seqidno：24的氨基酸序列的抗体轻链(jnk348)；(b7)包含seqidno：25的氨基酸序列的抗体轻链(jnk351)；(b8)包含seqidno：26的氨基酸序列的抗体轻链(jnk360)；(b9)包含seqidno：27的氨基酸序列的抗体轻链(jnk378)；(b10)包含seqidno：28的氨基酸序列的抗体轻链(jnk382)；(b11)包含seqidno：29的氨基酸序列的抗体轻链(jnl036)；(b12)包含seqidno：30的氨基酸序列的抗体轻链(jnl072)；(b13)包含seqidno：31的氨基酸序列的抗体轻链(jnl095)；(b14)包含seqidno：32的氨基酸序列的抗体轻链(jnl176)；(b15)包含seqidno：33的氨基酸序列的抗体轻链(jnl208)；(b16)包含seqidno：34的氨基酸序列的抗体轻链(jnl224)；(b17)包含seqidno：35的氨基酸序列的抗体轻链(jnl260)；(b18)包含seqidno：36的氨基酸序列的抗体轻链(jnl056)；(b19)包含seqidno：37的氨基酸序列的抗体轻链(jnl059)；(b20)包含seqidno：38的氨基酸序列的抗体轻链(jnl226)；(b21)包含seqidno：39的氨基酸序列的抗体轻链(jnl250)；(b22)包含seqidno：40的氨基酸序列的抗体轻链(jnl263)；以及(b23)包含seqidno：41的氨基酸序列的抗体轻链(jnl281)。在具体的实施方案中，本发明提供上述(a1)至(a6)以及(b1)至(b23)的抗体l链变体。在一个实施方案中，本发明提供以下抗体l链变体：(c1)具有seqidno：42的氨基酸序列的抗体轻链(qal187)，其为seqidno：13的抗体轻链的变体；(c2)具有seqidno：43的氨基酸序列的抗体l链(qal201)，其为seqidno：13的抗体轻链的变体；以及(c3)具有seqidno：44的氨基酸序列的抗体l链(jyl280)，其为seqidno：31的抗体轻链的变体。在另一个方面，本发明提供识别fix和/或fixa以及fx的双特异性抗体，在其中第一多肽(d)和第三多肽(f)形成一对，第二多肽(e)和第四多肽(g)形成一对，且各自的多肽是以下多肽：(d)所述第一多肽是(d1)或(d2)：(d1)多肽，其包含分别具有seqidno：1、2和3的重链cdr1、2和3氨基酸序列的抗体重链可变结构域，或具有seqidno：45的氨基酸序列的抗体重链可变结构域；或者(d2)多肽，其包含分别具有seqidno：1、2和3的重链cdr1、2和3氨基酸序列的抗体重链可变结构域，或具有seqidno：45的氨基酸序列的抗体重链可变结构域，在其中选自由以下各项组成的组的一个或更多个氨基酸已被除了半胱氨酸以外的任意氨基酸取代：y31、y32、d33、i34、q35、s50、i51、s52、p52a、s53、g54、q55、s56、t57、y58、y59、r60、r61、e62、v63、k64、g65、r95、t96、g97、r98、e99、y100、g100a、g100b、g100c、w100d、y100e、f100f、d101和y102，依照kabat编号系统编号；(e)所述第二多肽是(e1)或(e2)：(e1)多肽，其包含分别具有seqidno：4、5和6的重链cdr1、2和3氨基酸序列的抗体重链可变结构域，或具有seqidno：46的氨基酸序列的抗体重链可变结构域；或者(e2)多肽，其包含分别具有seqidno：4、5和6的重链cdr1、2和3氨基酸序列的抗体重链可变结构域，或具有seqidno：46的氨基酸序列的抗体重链可变结构域，在其中选自由以下各项组成的组的一个或更多个氨基酸已被除了半胱氨酸以外的任意氨基酸取代：d31、n32、n33、m34、d35、d50、i51、t52a、n52、r53、s54、g55、g56、s57、i58、y59、n60、e61、e62、f63、q64、d65、r95、k96、s97、y98、g99、y100、y100a、l100b、d101和e102，依照kabat编号系统编号；(f)所述第三多肽是(f1)、(f2)或(f3)：(f1)多肽，其包含分别具有seqidno：7、8和9的轻链cdr1、2和3氨基酸序列的抗体轻链可变结构域，或具有seqidno：47的氨基酸序列的抗体轻链可变结构域；(f2)多肽，其包含分别具有seqidno：7、8和9的轻链cdr1、2和3氨基酸序列的抗体轻链可变结构域，或具有seqidno：47的氨基酸序列的抗体轻链可变结构域，在其中选自由以下各项组成的组的一个或更多个氨基酸已被除了半胱氨酸以外的任意氨基酸取代：k24、a25、s26、r27、n28、i29、e30、r31、q32、l33、a34、q50、a51、s52、r53、k54、e55、s56、q89、q90、y91、s92、d93、p94、p95、l96和t97，依照kabat编号系统编号；或(f3)在[11]中描述的(a1)至(a6)和(c1)至(c2)中任意一种的多肽；以及(g)所述第四多肽是(g1)、(g2)或(g3)：(g1)多肽，其包含分别具有seqidno：7、8和9的轻链cdr1、2和3氨基酸序列的抗体轻链可变结构域，或具有seqidno：47的氨基酸序列的抗体轻链可变结构域；(g2)多肽，其包含分别具有seqidno：7、8和9的轻链cdr1、2和3氨基酸序列的抗体轻链可变结构域，或具有seqidno：47的氨基酸序列的抗体轻链可变结构域，在其中选自由以下各项组成的组的一个或更多个氨基酸已被除了半胱氨酸以外的任意氨基酸取代：k24、a25、s26、r27、n28、i29、e30、r31、q32、l33、a34、q50、a51、s52、r53、k54、e55、s56、q89、q90、y91、s92、d93、p94、p95、l96和t97，根据kabat编号系统编号；(g3)在[11]中描述的(b1)至(b23)和(c3)中任意一种的多肽。在一个方面，本发明提供多肽或抗体，其中在分别具有seqidno：7、8和9的轻链cdr1、2和3氨基酸序列的抗体轻链可变结构域中的以下位置处的至少一个或更多个氨基酸残基，或在seqidno：47的抗体轻链可变结构域中以下位置的至少一个或更多个氨基酸残基是以下任何氨基酸残基。在上述多肽或抗体中，与分别具有seqidno：7、8和9的轻链cdr1、2和3氨基酸序列的抗体轻链可变结构域不同的氨基酸残基的个数，或与seqidno：47的抗体轻链可变结构域不同的氨基酸残基的个数是一个或更多个，优选是2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个，且更优选是21个或更多个。取代位置由根据kabat编号系统编号的位置表示。k24：a、i、l、m、p、v、g、n、q、s、t、d、e、h、r、f、w、ya25：i、l、m、p、v、g、n、q、s、t、d、e、h、k、r、f、w、ys26：a、i、l、m、p、v、g、n、q、t、d、e、h、k、r、f、w、yr27：a、i、l、m、p、v、g、n、q、s、t、d、e、h、k、f、w、yn28：a、i、l、m、p、v、g、q、s、t、d、e、h、k、r、f、w、yi29：a、l、m、p、v、g、n、q、s、t、d、e、h、k、r、f、w、ye30：a、i、l、m、p、v、g、n、q、s、t、d、h、k、r、f、w、yr31：a、i、l、m、p、v、g、n、q、s、t、d、e、h、k、f、w、yq32：a、i、l、m、p、v、g、n、s、t、d、e、h、k、r、f、w、yl33：a、i、m、p、v、g、n、q、s、t、d、e、h、k、r、f、w、ya34：i、l、m、p、v、g、n、q、s、t、d、e、h、k、r、f、w、yq50：a、i、l、m、p、v、g、n、s、t、d、e、h、k、r、f、w、ya51：i、l、m、p、v、g、n、q、s、t、d、e、h、k、r、f、w、ys52：a、i、l、m、p、v、g、n、q、t、d、e、h、k、r、f、w、yr53：a、i、l、m、p、v、g、n、q、s、t、d、e、h、k、f、w、yk54：a、i、l、m、p、v、g、n、q、s、t、d、e、h、r、f、w、ye55：a、i、l、m、p、v、g、n、q、s、t、d、h、k、r、f、w、ys56：a、i、l、m、p、v、g、n、q、t、d、e、h、k、r、f、w、yq89：a、i、l、m、p、v、g、n、s、t、d、e、h、k、r、f、w、yq90：a、i、l、m、p、v、g、n、s、t、d、e、h、k、r、f、w、yy91：a、i、l、m、p、v、g、n、q、s、t、d、e、h、k、r、f、ws92：a、i、l、m、p、v、g、n、q、t、d、e、h、k、r、f、w、yd93：a、i、l、m、p、v、g、n、q、s、t、e、h、k、r、f、w、yp94：a、i、l、m、v、g、n、q、s、t、d、e、h、k、r、f、w、yp95：a、i、l、m、v、g、n、q、s、t、d、e、h、k、r、f、w、yl96：a、i、m、p、v、g、n、q、s、t、d、e、h、k、r、f、w、yt97：a、i、l、m、p、v、g、n、q、s、d、e、h、k、r、f、w、y在一个方面，本发明提供多肽或抗体，其中在分别具有seqidno：1、2和3的重链cdr1、2和3氨基酸序列的抗体重链可变结构域中的以下位置处的至少一个或更多个氨基酸残基，或在seqidno：45的抗体重链可变结构域中以下位置的至少一个或更多个氨基酸残基是以下任何氨基酸残基。在上述多肽或抗体中，与分别具有seqidno：1、2和3的重链cdr1、2和3氨基酸序列的抗体重链可变结构域不同的氨基酸残基的个数，或与seqidno：45的抗体重链可变结构域不同的氨基酸残基的个数是一个或更多个，优选是2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个，且更优选是21个或更多个。取代位置由根据kabat编号系统编号的位置表示。y31：a、i、l、m、p、v、g、n、q、s、t、d、e、h、k、r、f、wy32：a、i、l、m、p、v、g、n、q、s、t、d、e、h、k、r、f、wd33：a、i、l、m、p、v、g、n、q、s、t、e、h、k、r、f、w、yi34：a、l、m、p、v、g、n、q、s、t、d、e、h、k、r、f、w、yq35：a、i、l、m、p、v、g、n、s、t、d、e、h、k、r、f、w、ys50：a、i、l、m、p、v、g、n、q、t、d、e、h、k、r、f、w、yi51：a、l、m、p、v、g、n、q、s、t、d、e、h、k、r、f、w、ys52：a、i、l、m、p、v、g、n、q、t、d、e、h、k、r、f、w、yp52a：a、i、l、m、v、g、n、q、s、t、d、e、h、k、r、f、w、ys53：a、i、l、m、p、v、g、n、q、t、d、e、h、k、r、f、w、yg54：a、i、l、m、p、v、n、q、s、t、d、e、h、k、r、f、w、yq55：a、i、l、m、p、v、g、n、s、t、d、e、h、k、r、f、w、ys56：a、i、l、m、p、v、g、n、q、t、d、e、h、k、r、f、w、yt57：a、i、l、m、p、v、g、n、q、s、d、e、h、k、r、f、w、yy58：a、i、l、m、p、v、g、n、q、s、t、d、e、h、k、r、f、wy59：a、i、l、m、p、v、g、n、q、s、t、d、e、h、k、r、f、wr60：a、i、l、m、p、v、g、n、q、s、t、d、e、h、k、f、w、yr61：a、i、l、m、p、v、g、n、q、s、t、d、e、h、k、f、w、ye62：a、i、l、m、p、v、g、n、q、s、t、d、h、k、r、f、w、yv63：a、i、l、m、p、g、n、q、s、t、d、e、h、k、r、f、w、yk64：a、i、l、m、p、v、g、n、q、s、t、d、e、h、r、f、w、yg65：a、i、l、m、p、v、n、q、s、t、d、e、h、k、r、f、w、yr95：a、i、l、m、p、v、g、n、q、s、t、d、e、h、k、f、w、yt96：a、i、l、m、p、v、g、n、q、s、d、e、h、k、r、f、w、yg97：a、i、l、m、p、v、n、q、s、t、d、e、h、k、r、f、w、yr98：a、i、l、m、p、v、g、n、q、s、t、d、e、h、k、f、w、ye99：a、i、l、m、p、v、g、n、q、s、t、d、h、k、r、f、w、yy100：a、i、l、m、p、v、g、n、q、s、t、d、e、h、k、r、f、wg100a：a、i、l、m、p、v、n、q、s、t、d、e、h、k、r、f、w、yg100b：a、i、l、m、p、v、n、q、s、t、d、e、h、k、r、f、w、yg100c：a、i、l、m、p、v、n、q、s、t、d、e、h、k、r、f、w、yw100d：a、i、l、m、p、v、g、n、q、s、t、d、e、h、k、r、f、yy100e：a、i、l、m、p、v、g、n、q、s、t、d、e、h、k、r、f、wf100f：a、i、l、m、p、v、g、n、q、s、t、d、e、h、k、r、w、yd101：a、i、l、m、p、v、g、n、q、s、t、e、h、k、r、f、w、yy102：a、i、l、m、p、v、g、n、q、s、t、d、e、h、k、r、f、w在一个方面，本发明提供多肽或抗体，其中在分别具有seqidno：4、5和6的重链cdr1、2和3氨基酸序列的抗体重链可变结构域中的以下位置处的至少一个或更多个氨基酸残基，或在seqidno：46的抗体重链可变结构域中以下位置的至少一个或更多个氨基酸残基是以下任何氨基酸残基。在上述多肽或抗体中，与分别具有seqidno：4、5和6的重链cdr1、2和3氨基酸序列的抗体重链可变结构域不同的氨基酸残基的个数，或与seqidno：46的抗体重链可变结构域不同的氨基酸残基的个数是一个或更多个，优选是2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个，且更优选是21个或更多个。取代位置由根据kabat编号系统编号的位置表示。d31：a、i、l、m、p、v、g、n、q、s、t、e、h、k、r、f、w、yn32：a、i、l、m、p、v、g、q、s、t、d、e、h、k、r、f、w、yn33：a、i、l、m、p、v、g、q、s、t、d、e、h、k、r、f、w、ym34：a、i、l、p、v、g、n、q、s、t、d、e、h、k、r、f、w、yd35：a、i、l、m、p、v、g、n、q、s、t、e、h、k、r、f、w、yd50：a、i、l、m、p、v、g、n、q、s、t、e、h、k、r、f、w、yi51：a、l、m、p、v、g、n、q、s、t、d、e、h、k、r、f、w、yn52：a、i、l、m、p、v、g、q、s、t、d、e、h、k、r、f、w、yt52a：a、i、l、m、p、v、g、n、q、s、d、e、h、k、r、f、w、yr53：a、i、l、m、p、v、g、n、q、s、t、d、e、h、k、f、w、ys54：a、i、l、m、p、v、g、n、q、t、d、e、h、k、r、f、w、yg55：a、i、l、m、p、v、n、q、s、t、d、e、h、k、r、f、w、yg56：a、i、l、m、p、v、n、q、s、t、d、e、h、k、r、f、w、ys57：a、i、l、m、p、v、g、n、q、t、d、e、h、k、r、f、w、yi58：a、l、m、p、v、g、n、q、s、t、d、e、h、k、r、f、w、yy59：a、i、l、m、p、v、g、n、q、s、t、d、e、h、k、r、f、wn60：a、i、l、m、p、v、g、q、s、t、d、e、h、k、r、f、w、ye61：a、i、l、m、p、v、g、n、q、s、t、d、h、k、r、f、w、ye62：a、i、l、m、p、v、g、n、q、s、t、d、h、k、r、f、w、yf63：a、i、l、m、p、v、g、n、q、s、t、d、e、h、k、r、w、yq64：a、i、l、m、p、v、g、n、s、t、d、e、h、k、r、f、w、yd65：a、i、l、m、p、v、g、n、q、s、t、e、h、k、r、f、w、yr95：a、i、l、m、p、v、g、n、q、s、t、d、e、h、k、f、w、yk96：a、i、l、m、p、v、g、n、q、s、t、d、e、h、r、f、w、ys97：a、i、l、m、p、v、g、n、q、t、d、e、h、k、r、f、w、yy98：a、i、l、m、p、v、g、n、q、s、t、d、e、h、k、r、f、wg99：a、i、l、m、p、v、n、q、s、t、d、e、h、k、r、f、w、yy100：a、i、l、m、p、v、g、n、q、s、t、d、e、h、k、r、f、wy100a：a、i、l、m、p、v、g、n、q、s、t、d、e、h、k、r、f、wl100b：a、i、m、p、v、g、n、q、s、t、d、e、h、k、r、f、w、yd101：a、i、l、m、p、v、g、n、q、s、t、e、h、k、r、f、w、ye102：a、i、l、m、p、v、g、n、q、s、t、d、h、k、r、f、w、y在一个实施方案中，本发明提供识别fix和/或fixa以及fx的双特异性抗体，在其中第一多肽和第三多肽形成一对且第二多肽和第四多肽形成一对，且在其中所述第一多肽包含seqidno：45的抗体重链可变结构域氨基酸序列，所述第二多肽包含seqidno：46的抗体重链可变结构域氨基酸序列，所述第四多肽包含seqidno：47的抗体轻链可变结构域氨基酸序列，且所述第三多肽包含含有选自上述(a1)至(a6)的氨基酸序列中任意一种的抗体轻链。在另一个实施方案中，本发明提供识别fix和/或fixa以及fx的双特异性抗体，在其中第一多肽和第三多肽形成一对且第二多肽和第四多肽形成一对，且在其中所述第一多肽包含seqidno：45的抗体重链可变结构域氨基酸序列，所述第三多肽包含seqidno：47的抗体轻链可变结构域氨基酸序列，所述第二多肽包含seqidno：46的抗体重链可变结构域氨基酸序列，且所述第四多肽包含含有选自上述(b1)至(b23)的氨基酸序列中任意一种抗体轻链。在一个具体的实施方案中，本发明提供本文所提供的多肽和抗体的变体。在一些具体的实施方案中，本文提供的变体包括已经历在氨基酸序列中的氨基酸残基缺失和/或针对氨基酸序列的氨基酸残基插入和/或氨基酸序列中的氨基酸残基取代的变体。在最终的构建体将具有改善的fviii辅因子功能替代活性的前提下，可以进行缺失、插入和取代的任意组合以得到最终的构建体。a.示例性抗fix(a)/fx双特异性抗体下文描述识别fix和/或fixa以及fx的双特异性抗体(在下文中简称为“抗fix(a)/fx双特异性抗体”)的例子；以下类似地适用于本文提供的其他抗体和多肽。在本文中，fix(a)意为fix和/或fixa。1.抗体片段在某些实施方案中，本文提供的抗体是抗体片段。抗体片段包括但不限于fab、fab′、fab′-sh、f(ab′)2、fv和scfv片段以及下文描述的其他片段。关于某些抗体片段的综述，见hudson等，nat.med.9：129-134(2003)。关于scfv片段的综述，见例如pluckthün，thepharmacologyofmonoclonalantibodies，vol.113，rosenburg和moore编，(springer-verlag，newyork)，pp.269-315(1994)；也见wo93/16185；以及美国专利no.5,571,894和5,587,458。关于包含补救受体结合表位残基并具有增加的体内半衰期的fab和f(ab′)2片段的讨论，见美国专利no.5,869,046。双抗体是具有两个抗原结合位点的抗体片段，其可以是二价的或双特异性的。见例如，ep404,097；wo1993/01161；hudson等，nat.med.9：129-134(2003)；以及hollinger等，proc.natl.acad.sci.usa90：6444-6448(1993)。hudson等，nat.med.9：129-134(2003)还描述了三抗体和四抗体。单结构域抗体是包含抗体的重链可变结构域的全部或一部分或轻链可变结构域的全部或一部分的抗体片段。在某些实施方案中，单结构域抗体是人单结构域抗体(domantis，inc.，waltham，ma；见例如美国专利no.6,248,516b1)。如本文所述，抗体片段可以通过多种技术制备，包括但不限于完整抗体的蛋白水解消化以及通过重组宿主细胞(例如大肠杆菌或噬菌体)产生。2.人抗体在某些实施方案中，本文提供的抗体是人抗体。可以使用本领域中已知的多种技术来生成人抗体。人抗体一般描述于vandijk和vandewinkel，curr.opin.pharmacol.5：368-74(2001)以及lonberg，curr.opin.immunol.20：450-459(2008)。可以通过对转基因动物施用免疫原来制备人抗体，所述转基因动物已被修饰为响应抗原性攻击而生成完整人抗体或具有人可变区的完整抗体。此类动物通常含有所有或部分人免疫球蛋白基因座，其替换内源免疫球蛋白基因座，或者其在染色体外存在或随机整合入动物的染色体中。在此类转基因小鼠中，一般已经将内源免疫球蛋白基因座灭活。关于自转基因动物获得人抗体的方法的综述，见lonberg，nat.biotech.23：1117-1125(2005)。还可见例如美国专利no.6,075,181和6,150,584，其描述了xenomousetm技术；美国专利no.5,770,429，其描述了humab(注册商标)技术；美国专利no.7,041,870，其描述了k-mmouse(注册商标)技术，和美国专利申请公布no.us2007/0061900，其描述了velocimouse(注册商标)技术)。可以例如通过与不同人恒定区组合进一步修饰来自由此类动物生成的完整抗体的人可变区。也可以通过基于杂交瘤的方法生成人抗体。已经描述了用于生成人单克隆抗体的人骨髓瘤和小鼠-人异源骨髓瘤细胞系。(见例如，kozborj.immunol.，133：3001(1984)；brodeur等，monoclonalantibodyproductiontechniquesandapplications，pp.51-63(marceldekker，inc.，newyork，1987)；以及boerner等，j.immunol.，147：86(1991)。)经由人b细胞杂交瘤技术生成的人抗体也记载于li等，proc.natl.acad.sci.usa，103：3557-3562(2006)。其他方法包括例如描述于美国专利no.7,189,826(其描述了自杂交瘤细胞系生成单克隆人igm抗体)和ni，xiandaimianyixue，26(4)：265-268(2006)(其描述了人-人杂交瘤)的那些。人杂交瘤技术(trioma技术)也描述于vollmers和brandlein，histologyandhistopathology，20(3)：927-937(2005)及vollmers和brandlein，methodsandfindingsinexperimentalandclinicalpharmacology，27(3)：185-91(2005)。也可以通过分离选自人衍生的噬菌体展示文库的fv克隆可变结构域序列生成人抗体。然后，可以将此类可变结构域序列与期望的人恒定域组合。下文描述了自抗体文库选择人抗体的技术。3.文库衍生的抗体可以通过对组合文库筛选具有期望的一种或更多种活性的抗体来分离本发明的抗体。例如，用于产生噬菌体展示文库并对此类文库筛选拥有期望结合特征的抗体的多种方法是本领域中已知的。此类方法综述于例如hoogenboom等，methodsinmolecularbiology178：1-37(o’brien等编，humanpress，totowa，nj，2001)并且进一步描述于例如，mccafferty等，nature348：552-554；clackson等，nature352：624-628(1991)；marks等，j.mol.biol.222：581-597(1992)；marks和bradbury，methodsinmolecularbiology248：161-175(lo，编，humanpress，totowa，nj，2003)；sidhu等，j.mol.biol.338(2)：299-310(2004)；lee等，j.mol.biol.340(5)：1073-1093(2004)；fellouse，proc.natl.acad.sci.usa101(34)：12467-12472(2004)；和lee等，j.immunol.methods284(1-2)：119-132(2004)。在某些噬菌体展示方法中，将vh和vl基因的全集分别通过聚合酶链式反应(pcr)克隆，并在噬菌体文库中随机重组，然后可以对所述噬菌体文库筛选抗原结合噬菌体，如描述于winter等，annrev.immunol.，12：433-455(1994)。噬菌体通常以单链fv(scfv)片段或以fab片段展示抗体片段。来自经免疫的来源的文库提供针对免疫原的高亲和力抗体，而不需要构建杂交瘤。备选地，可以(例如，自人)克隆天然全集以在没有任何免疫的情况中提供针对大范围的非自身和还有自身抗原的抗体的单一来源，如由griffiths等，emboj，12：725-734(1993)描述。最后，也可以通过自干细胞克隆未重排的v基因区段，并使用含有随机序列的pcr引物编码高度可变的cdr3区并在体外实现重排来合成制备天然文库(naivelibrary)，如由hoogenboom和winter，j.mol.biol.，227：381-388(1992)所描述。描述人抗体噬菌体文库的专利公布包括例如：美国专利no.5,750,373和美国专利公布号2005/0079574、2005/0119455、2005/0266000、2007/0117126、2007/0160598、2007/0237764、2007/0292936和2009/0002360。认为自人抗体文库分离的抗体或抗体片段是本文中的人抗体或人抗体片段。用于制备多特异性抗体的技术包括但不限于具有不同特异性的两个免疫球蛋白重链-轻链对的重组共表达(见milstein和cuello，nature305：537(1983)，wo93/08829以及traunecker等，emboj.10：3655(1991))和“突起-入-空穴(knob-in-hole)”工程化(见例如，美国专利no.5,731,168)。也可以通过以下方法制备多特异性抗体：用于制备抗体fc-异二聚体分子的工程化静电操纵效应(wo2009/089004a1)；交联两个或更多个抗体或片段(见例如，美国专利no.4,676,980，和brennan等，science，229：81(1985))；使用亮氨酸拉链来产生双特异性抗体(见例如，kostelny等，j.immunol.，148(5)：1547-1553(1992))；使用用于制备双特异性抗体片段的“双抗体”技术(见例如，hollinger等，proc.natl.acad.sci.usa，90：6444-6448(1993))；和使用单链fv(sfv)二聚体(见例如gruber等，j.immunol.，152：5368(1994))；以及如在例如tutt等，j.immunol.147：60(1991)中描述的制备三特异性抗体。a)取代、插入和缺失变体在某些实施方案中，提供了具有一处或更多处氨基酸取代的抗体变体。用于取代诱变的目标位点包括hvr和fr。保守取代在表1中在“优选取代”的标题下显示。更实质的变化在表1中在“示例性取代”的标题下提供，并且如下文参照氨基酸侧链类别进一步描述的。可以将氨基酸取代引入目标抗体中，并且对产物筛选期望的活性，例如保留/改善的抗原结合、降低的免疫原性或改善的fviii辅因子功能替代活性，adcc或cdc。[表1]依照共同的侧链特性，氨基酸可以如下分组：(1)疏水性：正亮氨酸、met、ala、val、leu、ile；(2)中性、亲水性：cys、ser、thr、asn、gln；(3)酸性：asp、glu；(4)碱性：his、lys、arg(5)影响链取向的残基：gly、pro；(6)芳香族：trp、tyr、phe。非保守取代会需要用这些类别之一的成员交换另一个类别的成员。一类取代变体牵涉取代亲本抗体(例如人源化或人抗体)的一个或更多个高变区残基。一般地，为进一步研究选择的所得变体相对于亲本抗体会具有某些生物学特性的改变(例如改进)(例如升高的fviii辅因子功能替代活性或亲和力、降低的免疫原性)和/或会基本上保留亲本抗体的某些生物学特性。在某些实施方案中，可以在一个或更多个hvr内发生取代、插入或缺失，只要此类变化不实质性降低抗体结合抗原的能力。例如，可以对hvr做出保守变化(例如，如本文中提供的保守取代)，其不实质性降低fviii辅因子功能替代活性。一种可用于鉴定抗体中可以作为诱变靶位的残基或区域的方法称作“丙氨酸扫描诱变”，如由cunningham和wells(1989)science，244：1081-1085所描述的。在此方法中，鉴定残基或靶残基的组(例如，带电荷的残基诸如arg、asp、his、lys和glu)，并用中性或带负电荷的氨基酸(例如，丙氨酸或聚丙氨酸)将其替换以测定抗体和抗原的相互作用是否受到影响。可以在对初始取代表明功能敏感性的氨基酸位置引入进一步的取代。备选地，或此外，可分析抗原-抗体复合物的晶体结构来鉴定抗体与抗原间的接触点。此类接触残基和邻近残基可以作为取代的候选靶向或消除。可以筛选变体以确定它们是否含有期望的特性。氨基酸序列插入包括长度范围为1个残基至含有100或更多个残基的多肽的氨基和/或羧基端融合，及单个或更多个氨基酸残基的序列内插入。末端插入的例子包括具有n端甲硫氨酰基残基的抗体。抗体分子的其他插入变体包括延长抗体的血浆半衰期的酶(例如对于adept)或多肽与抗体的n或c端的融合物。b)糖基化变体在某些实施方案中，改变本文中提供的抗体以提高或降低抗体糖基化的程度。可以通过改变氨基酸序列，使得创建或消除一个或更多个糖基化位点来方便地实现对抗体的糖基化位点的添加或去除。在抗体包含fc区的情况中，可以改变附着于其的碳水化合物。由哺乳动物细胞生成的天然抗体通常包含分支的、双触角寡糖，其一般通过n连接附着于fc区的ch2结构域的asn297。见例如，wright等，tibtech15：26-32(1997)。寡糖可以包括多种碳水化合物，例如，甘露糖、n-乙酰葡糖胺(glcnac)、半乳糖和唾液酸，以及附着于双链寡糖结构“茎干”中的glcnac的岩藻糖。在一些实施方案中，可以对本发明抗体中的寡糖进行修饰以创建具有某些改善的特性的抗体变体。在一个实施方案中，提供了抗体变体，其具有缺乏附着(直接或间接)于fc区的岩藻糖的碳水化合物结构。例如，此类抗体中的岩藻糖的量可以是1％至80％、1％至65％、5％至65％或20％至40％。通过相对于附着于asn297的所有糖结构(例如，复合的、杂合的和高甘露糖的结构)的总和，计算asn297处糖链内岩藻糖的平均量来测定岩藻糖的量，如通过maldi-tof质谱术测量，例如如描述于wo2008/077546的。asn297指位于fc区中的约位置297(fc区残基的eu编号)的天冬酰胺残基；然而，asn297也可以由于抗体中的微小序列变化而位于位置297上游或下游约+/-3个氨基酸，即，在位置294和位置300之间。此类岩藻糖基化变体可具有改善的adcc功能。见例如，美国专利公布号us2003/0157108(presta，l.)；us2004/0093621(kyowahakkokogyoco.，ltd)。涉及“脱岩藻糖基化的”或“岩藻糖缺乏的”抗体变体的公布的例子包括：us2003/0157108；wo2000/61739；wo2001/29246；us2003/0115614；us2002/0164328；us2004/0093621；us2004/0132140；us2004/0110704；us2004/0110282；us2004/0109865；wo2003/085119；wo2003/084570；wo2005/035586；wo2005/035778；wo2005/053742；wo2002/031140；okazaki等，j.mol.biol.336：1239-1249(2004)；yamane-ohnuki等，biotech.bioeng.87：614(2004)。能够产生脱岩藻糖基化抗体的细胞系的例子包括蛋白质岩藻糖基化缺陷的lec13cho细胞(ripka等，arch.biochem.biophys.249：533-545(1986)；美国专利申请号us2003/0157108a1，presta，l；和wo2004/056312a1，adams等，尤其在实施例11中)，和敲除细胞系，诸如α-1，6-岩藻糖基转移酶基因fut8敲除cho细胞(参见例如，yamane-ohnuki等，biotech.bioeng.87：614(2004)；kanda，y.等，biotechnol.bioeng.，94(4)：680-688(2006)；和wo2003/085107)。进一步提供了具有两分型寡糖的抗体变体，例如，在其中附着于抗体fc区的双触角寡糖是通过glcnac进行两分的。此类抗体变体可以具有降低的岩藻糖基化和/或改善的adcc功能。此类抗体变体的例子描述于例如wo2003/011878(jean-mairet等)；美国专利no.6,602,684(umana等)；和us2005/0123546(umana等)。还提供了在附着于fc区的寡糖中具有至少一个半乳糖残基的抗体变体。此类抗体变体可以具有改善的cdc功能。此类抗体变体描述于例如wo1997/30087(patel等)；wo1998/58964(raju，s.)；和wo1999/22764(raju，s.)。c)fc区变体在某些实施方案中，可以将一处或更多处氨基酸修饰引入本文中提供的抗体的fc区中，由此产生fc区变体。fc区变体可以包含在一个或更多个氨基酸位置包含氨基酸修饰(例如取代)的人fc区序列(例如，人igg1、igg2、igg3或igg4fc区)。在某些实施方案中，本发明涵盖拥有一些但不是所有效应子功能的抗体变体，所述效应子功能使其成为用于如下应用的期望候选物，在其中抗体的体内半衰期是重要的，而某些效应子功能(诸如补体和adcc)是不必要的或有害的。可以进行体外和/或体内细胞毒性测定以确认cdc和/或adcc活性的降低/消耗。例如，可以进行fc受体(fcr)结合测定以确保抗体缺乏fcγr结合(因此有可能缺乏adcc活性)，但是保留fcrn结合能力。用于介导adcc的主要细胞nk细胞仅表达fcγriii，而单核细胞表达fcγri、fcγrii和fcγriii。在ravetch和kinet，annu.annu.rev.immunol.9：457-492(1991)的第464页上的表3中汇总了造血细胞上的fcr表达。评估目标分子的adcc活性的体外测定的非限制性例子描述于美国专利no.5,500,362(参见例如hellstrom，i.等，proc.nat’lacad.sci.usa83：7059-7063(1986))和hellstrom，i等，proc.nat’lacad.sci.usa82：1499-1502(1985)；5,821,337(见bruggemann，m.等，j.exp.med.166：1351-1361(1987))。备选地，可以采用非放射性测定方法(参见例如用于流式细胞术的actitm非放射性细胞毒性测定(celltechnology，inc.mountainview，ca；和cytotox96(注册商标)非放射性细胞毒性测定(promega，madison，wi)。对于此类测定有用的效应细胞包括外周血单核细胞(pbmc)和天然杀伤(nk)细胞。备选地，或另外，可以在体内例如在动物模型(诸如公开于clynes等，proc.nat’lacad.sci.usa95：652-656(1998)的动物模型)中评估目标分子的adcc活性。也可以进行c1q结合测定以确认抗体不能结合c1q，并且因此缺乏cdc活性。见例如，wo2006/029879和wo2005/100402中的c1q和c3c结合elisa。为了评估补体激活，可以进行cdc测定(参见例如，gazzano-santoro等，j.immunol.methods202：163(1996)；cragg，m.s.等，blood101：1045-1052(2003)；和cragg，m.s.和m.j.glennie，blood103：2738-2743(2004))。也可以使用本领域中已知的方法来进行fcrn结合和体内清除/半衰期测定(参见例如，petkova，s.b.等，int′l.immunol.18(12)：1759-1769(2006))。具有降低的效应子功能的抗体包括具有fc区残基238、265、269、270、297、327和329中的一个或更多个的取代的那些(美国专利no.6,737,056)。此类fc突变体包括在氨基酸位置265、269、270、297和327中的两处或更多处具有取代的fc突变体，包括残基265和297取代成丙氨酸的所谓的“dana”fc突变体(美国专利no.7,332,581)。描述了具有升高的或降低的与fcr的结合的某些抗体变体。(参见例如，美国专利no.6,737,056；wo2004/056312，和shields等，j.biol.chem.9(2)：6591-6604(2001)。)在一些实施方案中，对fc区做出改变，其导致改变的(即，提高的或降低的)c1q结合和/或补体依赖性细胞毒性(cdc)，例如，如描述于美国专利no.6,194,551、wo99/51642和idusogie等，j.immunol.164：4178-4184(2000)。具有延长的半衰期和提高的对新生儿fc受体(fcrn)的结合的抗体描述于us2005/0014934a1(hinton等)，新生儿fc受体(fcrn)负责将母体igg转移至胎儿(guyer等，j.immunol.117：587(1976)和kim等，j.immunol.24：249(1994))。那些抗体包含其中具有提高fc区与fcrn结合的一处或更多处取代的fc区。此类fc变体包括在fc区残基：238、256、265、272、286、303、305、307、311、312、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424或434中的一处或更多处具有取代，例如，fc区残基434的取代的那些(美国专利no.7,371,826)。另外，具有抑制的与类风湿因子的结合的fc区变体可用作本发明的抗体。此类变体描述于wo2013/046704，且其例子包括在其两个h链中都具有q438r/s440e、q438r/s440d、q438k/s440e或q438k/s440d表示的突变的组合的变体。另外，具有增强的与fcrn的结合和抑制的与类风湿因子结合的fc区变体可用作本发明的抗体。更具体地，例子包括在其两个h链中具有以下a)至f)中任一个所示的突变组合的fc区变体。a)n434a/y436t/q438r/s440eb）n434a/y436v/q438r/s440ec)m428l/n434a/y436t/q438r/s440ed)m428l/n434a/y436v/q438r/s440ee)m428l/n434a/q438r/s440ef)n434a/q438r/s440e还可参见duncan&winter，nature322：738-40(1988)；美国专利no.5,648,260；美国专利no.5,624,821；和wo94/29351(其涉及fc区变体的其他例子)。d)抗体衍生物在某些实施方案中，可以进一步修饰本文中提供的抗体以含有本领域已知的且易于获得的额外非蛋白质性质部分。适合于抗体衍生化的部分包括但不限于水溶性聚合物。水溶性聚合物的非限制性例子包括但不限于聚乙二醇(peg)、乙二醇/丙二醇共聚物、羧甲基纤维素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚-1，3-二氧杂环戊烷、聚-1，3，6-三噁烷、乙烯/马来酸酐共聚物、聚氨基酸(均聚物或随机共聚物)、和葡聚糖或聚(n-乙烯吡咯烷酮)聚乙二醇、聚丙二醇均聚物、聚环氧丙烷/环氧乙烷共聚物、聚氧乙烯化多元醇(例如甘油)、聚乙烯醇及其混合物。由于其在水中的稳定性，聚乙二醇丙醛在生产中可能具有优势。聚合物可以是任何分子量的，而且可以是分支的或不分支的。附着到抗体上的聚合物数目可以变化，而且如果附着了超过一个聚合物，那么它们可以是相同或不同的分子。一般而言，可基于下列考虑来确定用于衍生化的聚合物的数目和/或类型，包括但不限于抗体要改进的具体特性或功能、抗体衍生物是否将用于限定的条件下的治疗等。b.重组方法和组合物可以使用重组方法和组合物来产生抗体，例如，如描述于美国专利no.4,816,567的。在一个实施方案中，提供了编码本文中所描述的抗fix(a)/fx双特异性抗体的分离的核酸。此类核酸可以编码包含抗体vl的氨基酸序列和/或包含抗体vh的氨基酸序列(例如，抗体的轻和/或重链)。在又一个实施方案中，提供了包含此类核酸的一种或更多种载体(例如，表达载体)。在又一个实施方案中，提供了包含此类核酸的宿主细胞。在一个此类实施方案中，宿主细胞包含(例如，已经用下述载体转化)：(1)包含核酸的载体，所述核酸编码包含抗体vl的氨基酸序列和包含抗体vh的氨基酸序列，或(2)第一载体和第二载体，所述第一载体包含编码包含抗体vl的氨基酸序列的核酸，所述第二载体包含编码包含抗体vh的氨基酸序列的核酸。在一个实施方案中，宿主细胞是真核的，例如中国仓鼠卵巢(cho)细胞或淋巴样细胞(例如，y0、ns0、sp2/0细胞)。在一个实施方案中，提供了产生抗fix(a)/fx双特异性抗体的方法，其中该方法包括在适合于表达抗体的条件下培养包含编码如上文提供的抗体的核酸的宿主细胞，并且任选地，自宿主细胞(或宿主细胞培养液)回收抗体。对于抗fix(a)/fx抗体的重组生成，将编码抗体的核酸(例如如上文所描述的)分离，并插入一种或更多种载体中，以在宿主细胞中进一步克隆和/或表达。可以使用常规程序将此类核酸容易地分离并测序(例如，通过使用寡核苷酸探针来进行，所述寡核苷酸探针能够特异性结合至编码抗体的重和轻链的基因)。用于克隆或表达抗体编码载体的合适的宿主细胞包括本文中所描述的原核或真核细胞。例如，可以在细菌中产生抗体，特别是在不需要糖基化和fc效应子功能时。对于抗体片段和多肽在细菌中的表达，见例如美国专利no.5,648,237，5,789,199和5,840,523。(还可见charlton，methodsinmolecularbiolog，vol.248(b.k.c.lo编，humanapress，totowa，nj，2003)，pp.245-254，其描述了抗体片段在大肠杆菌(e.coli)中的表达。)表达后，可以将抗体在可溶性级分中从细菌细胞浆分离，并可以进一步纯化。在原核生物外，真核微生物诸如丝状真菌或酵母是用于抗体编码载体的合适的克隆或表达宿主，包括其糖基化途径已经“人源化”，导致产生具有部分或完全人的糖基化模式的抗体的真菌和酵母菌株。见gerngross，nat.biotech.22：1409-1414(2004)；及li等，nat.biotech.24：210-215(2006)。适合于表达糖基化抗体的宿主细胞也衍生自多细胞生物体(无脊椎动物和脊椎动物)。无脊椎动物细胞的例子包括植物和昆虫细胞。已经鉴定出许多杆状病毒株，其可以与昆虫细胞一起使用，特别是用于转染草地夜蛾(spodopterafrugiperda)细胞。也可以利用植物细胞培养物作为宿主。见例如美国专利no.5,959,177、6,040,498，6,420,548、7,125,978和6,417,429(其描述了用于在转基因植物中生成抗体的plantibodiestm技术)。也可以使用脊椎动物细胞作为宿主。例如，适合于悬浮培养的哺乳动物细胞系可以是有用的。有用的哺乳动物宿主细胞系的其他例子是经sv40转化的猴肾cv1系(cos-7)；人胚肾系(293或293细胞，如描述于例如graham等，j.genvirol.36：59(1977))；幼年仓鼠肾细胞(bhk)；小鼠塞托利(sertoli)细胞(tm4细胞，如描述于例如mather，biol.reprod.23：243-251(1980))；猴肾细胞(cvl)；非洲绿猴肾细胞(vero-76)；人宫颈癌细胞(hela)；犬肾细胞(mdck；布法罗大鼠(buffalorat)肝细胞(brl3a)；人肺细胞(w138)；人肝细胞(hepg2)；小鼠乳腺肿瘤(mmt060562)；tri细胞，如描述于例如mather等，annalsn.y.acad.sci.383：44-68(1982)；mrc5细胞；和fs4细胞。其他有用的哺乳动物宿主细胞系包括中国仓鼠卵巢(cho)细胞，包括dhfr-cho细胞(urlaub等，proc.natl.acad.sci.usa77：4216(1980))；和骨髓瘤细胞系诸如y0、ns0和sp2/0。关于适合于抗体产生的某些哺乳动物宿主细胞系的综述，参见例如yazaki和wu，methodsinmolecularbiology，248卷(b.k.c.lo编，humanapress，totowa，nj)，第255-268页(2003)。c.测定通过本领域中已知的多种测定法，可以对本文中提供的抗fix(a)/fx双特异性抗体就其物理/化学特性和/或生物学活性进行鉴定、筛选或表征。1.结合测定和其他测定在一个方面，例如通过已知方法如elisa、蛋白印迹等测试本发明的抗体的抗原结合活性。2.活性测定在一个方面，提供了用于鉴定具有生物学活性的抗fix(a)/fx双特异性抗体的测定法。生物学活性可包括，例如fviii辅因子功能替代活性。还提供了在体内和/或体外具有这种生物学活性的抗体。在某些实施方案中，测试本发明的抗体的这种生物学活性。在本发明中，“fviii辅因子功能替代活性”、“fviii替代活性”和“替代fviii功能的活性”被同义地使用，并且其是指识别fix和/或fixa以及fx和促进fx激活(促进fxa生产)的活性。本发明中的“fviii辅因子功能替代活性”意指，例如，从使用比色测定法的fixa介导的fx活化反应测定和使用血友病a血浆的凝血酶生成测定计算的活性。更具体地，可以通过使用本发明的抗体以及例如含有fixa、fx、合成底物s-2222(fxa的合成底物)和磷脂的测量系统进行评估来确认活性。该测量系统显示了血友病a病例中疾病严重程度和临床症状之间的相关性(rosens，anderssonm，blomba..ckm等，clinicalapplicationsofachromogenicsubstratemethodfordeterminationoffviiiactivity.thrombhaemost1985；54：811-23)。d.药物制剂通过混合具有期望纯度的此类抗体与一种或更多种任选的药学上可接受的载体(remington′spharmaceuticalsciences第16版，osol，a.编(1980))以冻干制剂或水性溶液形式制备如本文中所描述的抗fix(a)/fx双特异性抗体的药物制剂。一般地，药学上可接受的载体在所采用的剂量和浓度对接受者是无毒的，并且包括但不限于缓冲剂，诸如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和蛋氨酸；防腐剂(诸如十八烷基二甲基苄基氯化铵；氯化六烃季铵；氯化苯甲烃铵；苄索氯铵；酚、丁醇或苯甲醇；对羟基苯甲酸烃基酯，诸如对羟基苯甲酸甲酯或丙酯；邻苯二酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，诸如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，诸如edta；糖类，诸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成盐反离子，诸如钠；金属复合物(例如zn-蛋白质复合物)；和/或非离子表面活性剂，诸如聚乙二醇(peg)。本文中的示例性的药学上可接受的载体进一步包括间质药物分散剂诸如可溶性中性-活性透明质酸酶糖蛋白(shasegp)，例如人可溶性ph-20透明质酸酶糖蛋白，诸如rhuph20(hylenex(注册商标))，baxterinternational，inc.)。某些示例性shasegp及使用方法，包括rhuph20，描述于美国专利公布号2005/0260186和2006/0104968。在一个方面，将shasegp与一种或更多种另外的糖胺聚糖酶诸如软骨素酶组合。活性成分可包埋于例如分别通过凝聚技术或通过界面聚合制备的微胶囊中(例如分别是羟甲基纤维素或明胶微胶囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊)，包埋在胶体药物递送系统(例如脂质体、白蛋白微球体、微乳剂、纳米颗粒和纳米胶囊)中，或包埋在粗乳剂中。此类技术公开于remington′spharmaceuticalsciences第16版，osol，a.编(1980)中。可以制备持续释放制剂。持续释放制剂的合适的例子包括含有抗体的固体疏水性聚合物的半透性基质，该基质为成形制品形式，例如膜或微胶囊。用于体内施用的制剂一般是无菌的。无菌性可容易地实现，例如通过透过无菌滤膜过滤。e.治疗方法和组合物本文中提供的任何抗fix(a)/fx双特异性抗体均可用于治疗方法中。在一个方面，提供用作药物的抗fix(a)/fx双特异性抗体。在另一个方面，提供用于治疗出血、伴随出血的疾病或由出血引起的疾病的抗fix(a)/fx双特异性抗体。在某些实施方案中，提供用于治疗方法的抗fix(a)/fx双特异性抗体。在某些实施方案中，本发明提供用于治疗具有出血、伴随出血的疾病的个体的方法，包括向所述个体施用有效量的抗fix(a)/fx双特异性抗体。在一个这样的实施方案中，所述方法进一步包括向所述个体施用有效量的至少一种额外的治疗剂，例如如下所述。在进一步的实施方案中，本发明提供用于替代fviii功能的抗fix(a)/fx双特异性抗体。在某些实施方案中，本发明提供用于在个体中替代fviii功能的方法的抗fix(a)/fx双特异性抗体，所述方法包括向所述个体施用有效量的抗fix(a)/fx双特异性抗体以替代fviii功能。根据以上任何实施方案中所述的“个体”优选是人。在本发明的抗体的一个实施方案，由于本发明的抗体具有替代辅因子fviii的功能，因此预期它们将成为针对由该辅因子的活性(功能)降低引起的疾病的有效药剂。上述疾病的例子包括出血、伴随出血的疾病或由出血引起的疾病，且优选的例子是由于viii和/或活化凝血因子viii(fviiia)的活性的降低或缺乏而形成和/或进展的疾病。这类疾病包括，例如血友病a，其中出现针对fviii/fviiia的抑制剂的疾病、获得性血友病、冯威勒布兰特病等，但不特别限于此。在另一方面，本发明提供抗fix(a)/fx双特异性抗体在生产或制备药物中的用途。在一个实施方案中，所述药物用于治疗出血、伴随出血的疾病或由出血引起的疾病。在进一步的实施方案中，所述药物用于治疗出血、伴随出血的疾病或由出血引起的疾病的方法，包括向具有出血、伴随出血的疾病或由出血引起的疾病的个体施用有效量的所述药物。在一个这样的实施方案中，所述方法进一步包括向所述个体施用有效量的至少一种额外的治疗剂，例如如下所述。在进一步的实施方案中，所述药物用于替代fviii功能。在进一步的实施方案中，所述药物用于在个体中替代fviii功能的方法，其包括向所述个体施用有效量的所述药物以替代fviii功能。根据以上任何实施方案中所述的“个体”可以是人。在另一个方面，本发明提供用于治疗出血、伴随出血的疾病或由出血引起的疾病的方法。在一个实施方案中，所述方法包括向具有这种出血、伴随出血的疾病或由出血引起的疾病的个体施用有效量的抗fix(a)/fx双特异性抗体。在一个这样的实施方案中，所述方法进一步包括向所述个体施用有效量的至少一种额外的治疗剂，如下所述。根据以上任何实施方案中所述的“个体”可以是人。在另一方面，本发明提供在个体中替代fviii功能的方法。在一个实施方案中，所述方法包括向所述个体施用有效量的抗fix(a)/fx双特异性抗体以替代fviii功能。在一个实施方案中，“个体”是人。在另一方面，该发明提供包含本文提供的任何抗fix(a)/fx双特异性抗体的药物制剂，例如用于以上任何治疗方法。在一个实施方案中，药物制剂包含本文提供的任何抗fix(a)/fx双特异性抗体和药学上可接受的载体。在另一个实施方案中，药物制剂包含本文提供的任何抗fix(a)/fx双特异性抗体和至少一种额外的治疗剂，例如如下所述。本发明的抗体可在治疗中单独使用或与其他药剂组合使用。例如，本发明的抗体可与至少一种额外的治疗剂共同施用。在某些实施方案中，额外的治疗剂是fviii制剂。上文提到的这种组合疗法包括联合施用(其中两种或更多种治疗剂包括在相同或分开的制剂中)和单独施用，在这种情况下，本发明的抗体的施用可以在施用所述额外的治疗剂或药剂之前、同时和/或之后进行。在一个实施方案中，所述抗fix(a)/fx双特异性抗体的施用和额外的治疗剂的施用彼此在约一个月内，或在约一、二或三周内，或在约一、二、三、四、五或六天内进行。本发明的抗体(和任何额外的治疗剂)可通过任何适合的手段施用，包括胃肠外、肺内、和鼻内，及若期望用于局部治疗的话，通过病灶内施用。胃肠外输注包括肌肉内、静脉内、动脉内、腹膜内、或皮下施用。施用可以通过任何合适的路径，例如通过注射，诸如静脉内或皮下注射进行，这部分取决于施用是短暂的还是长期的。本文中考虑各种给药日程表，包括但不限于单次施用或在多个时间点里的多次施用、推注施用、和脉冲输注。本发明的抗体可以以一种符合良好的医学实践的方式配制、确定剂量及施用。在此背景中考虑的因素包括治疗的特定病症、治疗的特定哺乳动物、个体患者的临床状态、病症原因、药剂递送部位、施用方法、施用日程以及其他为从业医生所知的因素。所述抗体无需但可任选地与一种或更多种目前用于预防或治疗所述问题病症的药剂一起配制。这类其他药剂的有效量取决于制剂中所存在的抗体的量、病症或治疗的类型、以及其他上述讨论的因素。这些制剂通常以与本文所描述的相同的剂量和施用途径使用，或者以本文所描述的剂量的约1％至99％使用，或通过任何剂量和凭经验/临床确定为合适的任何途径使用。为了预防或治疗疾病，本发明的抗体(当单独或与一种或更多种其他额外的治疗剂联合使用时)的合适剂量将取决于所要治疗的疾病的类型、抗体的类型、疾病的严重性和病程、是否施用所述抗体用于预防或治疗目的、之前的治疗、患者的临床史和对所述抗体的响应、以及主治医师的自由裁量权。所述抗体适合于在一次或一系列的治疗中施用至患者。根据疾病的类型和严重程度，约1μg/kg至15mg/kg(例如0.1mg/kg-10mg/kg)的抗体可作为初始候选剂量用于向患者施用，不论，例如，通过一种或更多种单独施用，或通过连续输注。根据上述因素，一种典型的日剂量可能范围为约1μg/kg至100mg/kg或更多。对于在数天或更长时间内的重复施用，根据状况，治疗一般将持续直至发生对疾病症状的期望的抑制。一种所述抗体的示例性剂量可为在约0.05mg/kg至约10mg/kg的范围内。因此，约0.5mg/kg、2.0mg/kg、4.0mg/kg或10mg/kg的一种或更多种剂量(或其任何组合)可被施用至患者。这种剂量可间歇施用，例如每周或每三周施用(例如使得患者接受约2-约20剂，或例如约6剂的所述抗体)。可施用初始较高的负荷剂量，接着施用一种或更多种较低的剂量。通过常规技术和测定法易于监测该治疗的进展。f.制品在本发明的另一方面，提供了一种制品，其含有可用于治疗、预防和/或诊断上文所描述的病症的材料。制品包含容器和容器上的标签或与容器联合的包装说明书。合适的容器包括例如瓶、小瓶、注射器、iv溶液袋等。所述容器可以由多种材料诸如玻璃或塑料形成。容器容纳单独的或与另一种组合物组合的有效治疗、预防和/或诊断病况的组合物，并且可以具有无菌存取口(例如，容器可以是具有由皮下注射针可穿过的塞子的静脉内溶液袋或小瓶)。组合物中的至少一种活性成分是本发明的抗体。标签或包装说明书指示组合物用于治疗选择的病况。此外，制品可以包含(a)其中含有组合物的第一容器，其中所述组合物包含本发明的抗体；和(b)其中含有组合物的第二容器，其中所述组合物包含另外的细胞毒性或其他的治疗剂。在本发明的此实施方案中的制品可以进一步包含包装说明书，其指示组合物可用于治疗特定的病况。或者，或此外，制品可以进一步包含第二(或第三)容器，其包含药学上可接受的缓冲液，诸如抑菌性注射用水(bwfi)、磷酸盐缓冲盐水、林格氏(ringer’s)溶液和葡聚糖溶液。它可以进一步包括从商业和用户观点看期望的其他材料，包括其他缓冲液、稀释剂、过滤器、针和注射器。在一个方面，本发明是产生emicizumab的变体的方法，其包括以下步骤(a)：(a)进行以下取代(i)至(iii)中的一种或更多种，其中编号依照kabat编号系统：(i)在包含分别具有seqidno：7、8和9的轻链cdr1、2和3氨基酸序列的抗体轻链可变结构域中，选自由以下各项组成的组的一个或更多个氨基酸的取代：k24、a25、s26、r27、n28、i29、e30、r31、q32、l33、a34、q50、a51、s52、r53、k54、e55、s56、q89、q90、y91、s92、d93、p94、p95、l96和t97；(ii)在包含分别具有seqidno：1、2和3的重链cdr1、2和3氨基酸序列的抗体重链可变结构域中，选自由以下各项组成的组的一个或更多个氨基酸的取代：y31、y32、d33、i34、q35、s50、i51、s52、p52a、s53、g54、q55、s56、t57、y58、y59、r60、r61、e62、v63、k64、g65、r95、t96、g97、r98、e99、y100、g100a、g100b、g100c、w100d、y100e、f100f、d101和y102；以及(iii)在包含分别具有seqidno：4、5和6的重链cdr1、2和3氨基酸序列的抗体重链可变结构域中，选自由以下各项组成的组的一个或更多个氨基酸的取代：d31、n32、n33、m34、d35、d50、i51、t52a、n52、r53、s54、g55、g56、s57、i58、y59、n60、e61、e62、f63、q64、d65、r95、k96、s97、y98、g99、y100、y100a、l100b、d101和e102。上述取代的位点可以是一处或更多处，或它们可以是(i)和(ii)的组合、(i)和(iii)的组合、(ii)和(iii)的组合或(i)、(ii)和(iii)的组合。在一个方面，本发明是分离emicizumab的变体的方法，其包括以下步骤(a)至(c)：(a)通过进行以下(i)至(iii)中的一种或更多种产生emicizumab的变体，其中编号依照kabat编号系统：(i)在包含分别具有seqidno：7、8和9的轻链cdr1、2和3氨基酸序列的抗体轻链可变结构域中，选自由以下各项组成的组的一个或更多个氨基酸的取代：k24、a25、s26、r27、n28、i29、e30、r31、q32、l33、a34、q50、a51、s52、r53、k54、e55、s56、q89、q90、y91、s92、d93、p94、p95、l96和t97；(ii)在包含分别具有seqidno：1、2和3的重链cdr1、2和3氨基酸序列的抗体重链可变结构域中，选自由以下各项组成的组的一个或更多个氨基酸的取代：y31、y32、d33、i34、q35、s50、i51、s52、p52a、s53、g54、q55、s56、t57、y58、y59、r60、r61、e62、v63、k64、g65、r95、t96、g97、r98、e99、y100、g100a、g100b、g100c、w100d、y100e、f100f、d101和y102；以及(iii)在包含分别具有seqidno：4、5和6的重链cdr1、2和3氨基酸序列的抗体重链可变结构域中，选自由以下各项组成的组的一个或更多个氨基酸的取代：d31、n32、n33、m34、d35、d50、i51、t52a、n52、r53、s54、g55、g56、s57、i58、y59、n60、e61、e62、f63、q64、d65、r95、k96、s97、y98、g99、y100、y100a、l100b、d101和e102：(b)测量步骤(a)中产生的所述抗体变体的fviii辅因子功能替代活性；以及(c)选择与emicizumab相比具有改善的fviii辅因子功能替代活性的emicizumab抗体变体。上述取代的位点可以是一处或更多处，或它们可以是(i)和(ii)的组合、(i)和(iii)的组合、(ii)和(iii)的组合或(i)、(ii)和(iii)的组合。实施例以下是本发明的方法和组合物的实施例。应理解，在给出上文提供的一般描述的情况下，可以实施各种其他实施方案。尽管为了清楚理解的目的，已经通过说明和例子详细地描述了前述发明，但是描述和例子不应被解释为限制本发明的范围。本文引用的所有专利和科学文献的公开内容明确地通过引用将其整体并入。[实施例1]筛选用于改善fviii辅因子功能替代活性的变体抗体ace910是显示fviii辅因子功能替代活性并包含抗fix(a)和抗fx结构域的人源化igg4抗体，该抗体由分别识别fix(a)和fx的两种类型的重链(q499和j327)和共享l链(l404)组成(重链seqidno：45和46，以及轻链seqidno：47)。本发明人通过本领域技术人员已知的方法(诸如pcr)广泛地将氨基酸修饰引入l404用于引入突变并进行了fviii辅因子功能替代活性的大规模筛选，从而发现改善ace910的fviii辅因子功能替代活性的l链氨基酸取代。取代变体通过将在ace910的抗fx抗体侧(重链seqidno：46以及轻链seqidno：47)的l链中的l404(seqidno：47)的所有cdr中的氨基酸修饰为除了半胱氨酸以外的氨基酸，同时将ace910的抗fix(a)抗体侧(重链seqidno：45以及轻链seqidno：47)的l链固定至l404而生成。进一步地，取代变体通过将在抗fix(a)抗体侧的l链中的l404的所有cdr中的氨基酸修饰为除了半胱氨酸以外的氨基酸，同时将抗fx抗体侧(重链seqidno：46以及轻链seqidno：47)的l链固定至ace910的l404而生成。双特异性抗体的表达和纯化通过本领域技术人员已知的方法进行。使用各种纯化的双特异性抗体，它们的fviii辅因子功能替代活性通过本领域技术人员已知的方法评估。具体地，测量通过以下方法进行。所有反应均在室温下进行。用含有0.1％牛血清白蛋白的tris缓冲盐水(以下称为tbsb)稀释的5μl抗体溶液与5μl600ng/ml人因子ixaβ(enzymeresearchlaboratories)混合，然后在384孔板中室温孵育30分钟。该混合物中的酶反应通过加入5μl的24.7μg/ml人因子x(enzymeresearchlaboratories)引发，4分钟后，加入5μl的0.5medta以终止反应。显色反应通过加入5μl显色底物溶液(s-2222，sekisuimedical)引发。在30分钟的显色反应后，使用spectramax340pc384(moleculardevices)测量405nm处的吸光度变化。结果，发现与亲本抗体ace910相比，下表2中所示的几个氨基酸取代能够改善fviii辅因子功能替代活性。表2显示由kabat编号表示的突变位置(最左侧“位置”栏中的编号)，ace910中的氨基酸(左起第二列中的氨基酸(单字母代码))，在该突变后面的氨基酸(最上一行中的氨基酸(单字母代码))，以及通过计算相对于ace910(纯化抗体)的特异性活性并使用ace910(培养上清液)的特异性活性的值进行校正而获得的值。在表2中，(-)表示抗体的表达水平低，且“/”表示该抗体由于所示的氨基酸与ace910的氨基酸相同而没有制备。[表2]通过将氨基酸取代引入q499/l404//j327/l404(ace910)而产生的经修饰的双特异性抗体的fviii辅因子功能替代活性抗fix(a)的l链被修饰抗fx抗体的l链被修饰[实施例2]获得与ace910的每个h链相容的新型l链如实施例1中所示，fviii辅因子功能替代活性能够通过全面修饰l404(其为ace910的共享l链)中的氨基酸来改善。作为改善ace910的fviii辅因子功能替代活性的另一种方法，可以想到的方法是从人抗体文库获得具有与共享l链完全不同的序列的新型l链，其将与抗fix(a)抗体和抗fx抗体的各自的h链(q499和j327)配对。参考本领域技术人员已知的方法，具体是biochemicalandbiophysicalresearchcommunications，(2000)，275，2：553-557的方法等，本发明人新近制备了一个抗体文库，其中ace910抗体的l链部分已经用来自人l链文库的l链部分取代，然后对生物素化的人fixa或生物素化的人fx进行淘选操作，从而成功获得包含新型l链并具有fviii辅因子功能替代活性的抗体。结果，对于具有fviii辅因子功能替代活性的双特异性抗体，下述链被发现作为抗人fix(a)抗体l链：qnk131(重链seqidno：45以及轻链seqidno：13)、qnk284(重链seqidno：45以及轻链seqidno：14)、qnk315(重链seqidno：45以及轻链seqidno：15)、qnl182(重链seqidno：45以及轻链seqidno：16)、qnl492(重链seqidno：45以及轻链seqidno：17)和qnl576(重链seqidno：45以及轻链seqidno：18)；以及，作为抗人fx抗体l链：jnk131(重链seqidno：46以及轻链seqidno：19)、jnk163(重链seqidno：46以及轻链seqidno：20)、jnk252(重链seqidno：46以及轻链seqidno：21)、jnk263(重链seqidno：46以及轻链seqidno：22)、jnk339(重链seqidno：46以及轻链seqidno：23)、jnk348(重链seqidno：46以及轻链seqidno：24)、jnk351(重链seqidno：46以及轻链seqidno：25)、jnk360(重链seqidno：46以及轻链seqidno：26)、jnk378(重链seqidno：46以及轻链seqidno：27)、jnk382(重链seqidno：46以及轻链seqidno：28)、jnl036(重链seqidno：46以及轻链seqidno：29)、jnl072(重链seqidno：46以及轻链seqidno：30)、jnl095(重链seqidno：46以及轻链seqidno：31)、jnl176(重链seqidno：46以及轻链seqidno：32)、jnl208(重链seqidno：46以及轻链seqidno：33)、jnl224(重链seqidno：46以及轻链seqidno：34)、jnl260(重链seqidno：46以及轻链seqidno：35)、jnl056(重链seqidno：46以及轻链seqidno：36)、jnl059(重链seqidno：46以及轻链seqidno：37)、jnl226(重链seqidno：46以及轻链seqidno：38)、jnl250(重链seqidno：46以及轻链seqidno：39)、jnl263(重链seqidno：46以及轻链seqidno：40)和jnl281(重链seqidno：46以及轻链seqidno：41)。通过本领域技术人员已知的方法表达和纯化包含这些新型l链的各种双特异性抗体。所制备的抗体显示在表3中(显示了克隆名称、重链seqidno和抗fix(a)轻链seqidno或抗fx轻链seqidno)。该新型l链仅用于一个臂，而l404(ace910的共享l链)用于另一个臂。测量各种纯化的双特异性抗体的fviii辅因子功能替代活性的结果显示在图1中。所有包含新型l链的双特异性抗体均被证实具有fviii辅因子功能替代活性。[表3]制备的具有新型l链的双特异性抗体克隆名重链seqidn0轻链seqidnoqnk1314513qnk2844514qnk3154515qnl1824516qnl4924517qnl5764518jnk1314619jnk1634620jnk2524621jnk2634622jnk3394623jnk3484624jnk3514625jnk3604626jnk3784627jnk3824628jnl0364629jnl0724630jnl0954631jnl1764632jnl2084633jnl2244634jnl2604635jnl0564636jnl0594637jnl2264638jnl2504639jnl2634640jnl2814641[实施例3]包含新型l链的双特异性抗体的变体的产生为了改善实施例2中获得的包含新型l链的双特异性抗体的fviii辅因子功能替代活性，将氨基酸取代修饰引入qnk131(轻链seqidno：13)，其是抗fix(a)抗体的新型l链，以获得qal187(轻链seqidno：42)和qal201(轻链seqidno：43)。类似地，将氨基酸取代修饰引入jnl095(轻链seqidno：31)，其是抗fx抗体的新型l链，以获得jyl280(轻链seqidno：44)。在一个实施例中，由包含重链q499和轻链qal201的抗fix(a)抗体和包含重链j327和轻链jyl280的抗fx抗体组成的双特异性抗体(q499/qal201//j327/jyl280)是通过本领域技术人员已知的方法表达和纯化，并且测量其fviii辅因子功能替代活性的结果显示在图2中。[实施例4]包含新型l链的双特异性抗体h链的变体的产生使用具有改进的fviii辅因子功能替代活性的新型l链(针对抗fix(a)抗体的qal187，和针对抗fx抗体的jyl280)，本发明人全面地将氨基酸突变引入q499和j327，并且进行了fviii辅因子功能替代活性的大量规模筛选以发现改善fviii辅因子功能替代活性的氨基酸取代。将抗fix(a)抗体侧的重链和轻链分别固定于q499和qal201，并将抗fx抗体侧的轻链固定于jyl280以产生取代变体，在该取代变体中，已将j327的cdr中的所有氨基酸修饰为除了半胱氨酸以外的氨基酸。将抗fx抗体侧的重链和轻链分别固定于j327和jyl280，并将抗fix(a)抗体侧的轻链固定于qal187以产生取代变体，在该取代变体中，已将q499的cdr中的所有氨基酸修饰为除了半胱氨酸以外的所有氨基酸。双特异性抗体的表达和纯化通过本领域技术人员已知的方法进行。fviii辅因子功能替代活性藉由使用各种纯化的双特异性抗体，通过本领域技术人员已知的方法评估。结果，发现与亲本双特异性抗体q499/qal187//j327/jyl280或q499/qal201//j327/jyl280相比，下表4中所示的几个氨基酸取代能够改善fviii辅因子功能替代活性。表4显示了由kabat编号表示的突变位置(最左侧“位置”栏中的编号)，亲本抗体中的氨基酸(左起第二列中的氨基酸(单字母代码))，在该突变后面的氨基酸(最上一行中的氨基酸(单字母代码))，以及相对于ace910(纯化抗体)的特异性活性(表中的每个数值)。在表4中，(-)表示抗体的表达水平低，且“/”表示该抗体由于所示的氨基酸与亲本抗体的氨基酸相同而没有制备。[表4]通过将氨基酸取代引入q499/qal187//j327/jyl280的q499而产生的经修饰的双特异性抗体的fviii辅因子功能替代活性通过将氨基酸取代引入q499/qal201//j327/jyl280的j327而产生的经修饰的双特异性抗体的fviii辅因子功能替代活性工业实用性本发明发现了改善ace910(emicizumab)的fviii辅因子功能替代活性的轻链氨基酸取代，显示fviii辅因子功能替代活性的新型轻链，以及改善包含新型轻链的双特异性抗体的fviii辅因子功能替代活性的重链氨基酸取代。这些氨基酸取代和新型轻链可用于产生具有优于ace910(emicizumab)的fviii辅因子功能替代活性的双特异性抗体。当前第1页12