氘代N-[5-(嘧啶-2-氨基)-2,4-二取代苯基]-反式-2,4-戊二烯酰胺的制作方法

本发明属于药物化学技术领域，尤其涉及一种氘代N-[5-(嘧啶-2-氨基)-2,4-二取代苯基]-反式-2,4-戊二烯酰胺及应用。

背景技术：

EGFR是HER/erbB家族重要成员，它广泛分布于人体各类组织的细胞膜上，其结构分为胞外区、跨膜区及胞内区。当EGFR受体受到相应配体的作用后，可诱导受体形成同源二聚体或异源二聚体，引起胞外结构发生构象变化，进而激活胞内区酪氨酸激酶，使其残基磷酸化，进一步激活下游信号通路，如MARK通路及PI3K通路等，最终导致肿瘤发生一系列生物学行为，如肿瘤的发生发展、增殖、侵袭及转移等。

人类许多癌症(如胃癌、肺癌、乳腺癌、膀胱癌和头颈部鳞癌等)的EGFR表达增高。因此erbB拥有与抗癌药物结合的合理靶点，靶向EGFR或erbB2的许多抑制剂现在应用于临床上，如吉非替尼、厄洛替尼、拉帕替尼、阿法替尼、卡奈替尼、达克替尼等，Biochemical and Biophysical Research Communications(2004,319,1-11)和New England Journal of medicine(2008,358,1160-1174)中有详细论述。EGFR酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine-kinase-inhibitor，TKI)是一种小分子EGFR抑制剂，它们通过内源性配体竞争性结合EGFR，抑制酪氨酸激酶的活化，进而阻断EGFR信号通路，最终产生抑制肿瘤细胞的增殖、转移并促进肿瘤细胞发生凋亡等一系列生物学效应。

随着这些抗癌药物广泛使用，在癌症治疗过程中已经出现获得性抗性，例如由于看门残基T790M的突变，据报道在50～60％的临床耐药性患者中检测到该突变，因此发展新型EGFR突变体抑制剂非常迫切和需要。

技术实现要素：

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种氘代N-[5-(嘧啶-2-氨基)-2,4-二取代苯基]-反式-2,4-戊二烯酰胺及其应用，该氘代物的生物利用度较高。

本发明提供了一种氘代N-[5-(嘧啶-2-氨基)-2,4-二取代苯基]-反式-2,4-戊二烯酰胺，如式(I)所示化合物、其药学上可接受的盐或其前药：

其中，A选自取代或未取代的吡唑并吡啶基、取代或未取代的氢化吡唑并吡啶基、取代或未取代的吲哚基；所述取代的吡唑并吡啶基、取代的氢化吡唑并吡啶基与取代的吲哚基中的取代基各自独立地选自氘、C1～C5的烷基与C1～C5的氘代烷基中的一种或多种；

R¹选自氢、氘、卤素、C1～C5的烷基、C1～C5的氘代烷基或氰基；

R²选自C1～C5的烷氧基、C1～C5的氘代烷氧基、C1～C5的氟代烷氧基或C1～C5的氘代部分氟化的烷氧基；

R³选自取代或未取代的氮杂环基、或式(II)所示的取代基：

其中，R¹⁴选自C1～C3的烷基或C1～C3的氘代烷基；R¹⁵与R¹⁶各自独立地选自氢或氘；R¹⁷与R¹⁸各自独立地选自氢、氘、C1～C3的烷基或C1～C3的氘代烷基，且不同时为氢或氘，或者R¹⁷与R¹⁸连接成环；n为2～5的整数；

所述取代的氮杂环基中的取代基选自氘、C1～C5的烷基、C1～C5的氘代烷基、C1～C5的烷氨基或C1～C5的氘代烷氨基；

R⁴～R¹³各自独立地选自氢或氘；

且所述式(I)所示化合物、其药学上可接受的盐或其前药中至少含有一个氘原子。

优选的，所述A选自4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基、氘代4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基、1H-吲哚-3-基、氘代1H-吲哚-3-基、1-甲基-1H-吲哚-3-基、氘代1-甲基-1H-吲哚-3-基、吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基或氘代吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基。

优选的，所述R¹选自氢、氘、氯、甲基、氘代甲基或氰基；

所述R²选自甲氧基、氘代甲氧基、二氟甲氧基、氘代二氟甲氧基或三氟甲氧基。

优选的，所述R³选自(3R)-3-(二甲氨基)吡咯烷-1-基、氘代(3R)-3-(二甲氨基)吡咯烷-1-基、(3S)-3-(二甲氨基)吡咯烷-1-基、氘代(3S)-3-(二甲氨基)吡咯烷-1-基、3-(二甲氨基)氮杂环丁烷-1-基、氘代3-(二甲氨基)氮杂环丁烷-1-基、[2-(二甲氨基)乙基](甲基)氨基、氘代[2-(二甲氨基)乙基](甲基)氨基、[2-(甲氨基)乙基](甲基)氨基、氘代[2-(甲氨基)乙基](甲基)氨基、5-甲基-2,5-二氮杂螺环[3,4]辛-2-基、氘代5-甲基-2,5-二氮杂螺环[3,4]辛-2-基、(3aR,6aR)-5-甲基六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-1(2H)-基、氘代(3aR,6aR)-5-甲基六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-1(2H)-基、1-甲基-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基、氘代1-甲基-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基、4-甲基哌嗪-1-基、氘代4-甲基哌嗪-1-基、4-[2-(二甲氨基)-1-氧代乙基]哌嗪-1-基、氘代4-[2-(二甲氨基)-1-氧代乙基]哌嗪-1-基、甲基[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基]氨基、氘代甲基[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基]氨基、甲基[2-(吗啉-4-基)乙基]氨基、氘代甲基[2-(吗啉-4-基)乙基]氨基、4-[(2S)-2-氨基丙酰基]哌嗪-1-基或氘代4-[(2S)-2-氨基丙酰基]哌嗪-1-基。

优选的，如式(I-1)～式(I-21)所示的化合物中的一种或多种：

本发明还提高了上述的氘代N-[5-(嘧啶-2-氨基)-2,4-二取代苯基]-反式-2,4-戊二烯酰胺作为表皮生长因子受体抑制剂的应用。

本发明还提高了上述的氘代N-[5-(嘧啶-2-氨基)-2,4-二取代苯基]-反式-2,4-戊二烯酰胺在制备治疗和/或预防癌症药物中的应用。

优选的，所述癌症选自肺癌、脑癌、卵巢癌、宫颈癌、结肠直肠癌、乳腺癌、胰腺癌、胶质瘤、胶质母细胞瘤、黑色素瘤、前列腺癌、白血病、淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、胃癌、肝癌、胃肠道间质瘤、甲状腺癌、胆管癌、子宫内膜癌、肾癌、间变性大细胞淋巴瘤、急性髓细胞白血病、多发性骨髓瘤、间皮瘤以及它们的并发症。

优选的，所述癌症为非小细胞癌。

本发明还提供了一种药物组合物，包括上述的氘代N-[5-(嘧啶-2-氨基)-2,4-二取代苯基]-反式-2,4-戊二烯酰胺。

本发明提供了一种氘代N-[5-(嘧啶-2-氨基)-2,4-二取代苯基]-反式-2,4-戊二烯酰胺，如式(I)所示化合物、其药学上可接受的盐或其前药，其中，A选自A选自取代或未取代的吡唑并吡啶基、取代或未取代的氢化吡唑并吡啶基、取代或未取代的吲哚基；所述取代的吡唑并吡啶基、取代的氢化吡唑并吡啶基与取代的吲哚基中的取代基各自独立地选自氘、C1～C5的烷基与C1～C5的氘代烷基中的一种或多种；R¹选自氢、氘、卤素、C1～C5的烷基、C1～C5的氘代烷基或氰基；R²选自C1～C5的烷氧基、C1～C5的氘代烷基、C1～C5的氟代烷氧基或C1～C5的氘代部分氟化的烷氧基；R³选自取代或未取代的氮杂环基、或式(II)所示的取代基；R¹⁴选自C1～C3的烷基或C1～C3的氘代烷基；R¹⁵与R¹⁶各自独立地选自氢或氘；R¹⁷与R¹⁸各自独立地选自氢、氘、C1～C3的烷基或C1～C3的氘代烷基，且不同时为氢或氘，或者R¹⁷与R¹⁸连接成环；n为2～5的整数；所述取代的氮杂环基中的取代基选自氘、C1～C5的烷基、C1～C5的氘代烷基、C1～C5的烷氨基或C1～C5的氘代烷氨基；R⁴～R¹³各自独立地选自氢或氘；且所述式(I)所示化合物、其药学上可接受的盐或其前药中至少含有一个氘原子。与现有技术相比，本发明以氘原子取代了相关部位的氢原子，体积变化不明显，含氘有机化合物进入机体后不易被体内活性物质所识别，且由于碳-氘键稳定不易断裂，含氘有机化合物氧化还原性增强，使其在体内不易被代谢降解，阻碍其正常代谢循环，同时其脂肪链长脂溶性高，从而增强了式(I)所示的氘代物的生物利用度，因此将含有碳-氘键的式(I)所示的化合物及其药学上可接受的盐作为EGFR调谐子用于治疗或预防癌症，在体内降解速度减慢，延长了药物的半衰期，增加了血药浓度，扩大了给药时间间隔，最终减小了医疗剂量，降低了其毒副作用。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明提供了一种氘代N-[5-(嘧啶-2-氨基)-2,4-二取代苯基]-反式-2,4-戊二烯酰胺，如式(I)所示化合物、其药学上可接受的盐或其前药：

其中，A为取代或未取代的吡唑并吡啶基、取代或未取代的氢化吡唑并吡啶基、取代或未取代的吲哚基；所述取代的吡唑并吡啶基、取代的氢化吡唑并吡啶基与取代的吲哚基中的取代基各自独立地为氘、C1～C5的烷基与C1～C5的氘代烷基中的一种或多种，优选为氘、C1～C3的烷基与C1～C3的氘代烷基中的一种或多种，更优选为氘、C1～C2的烷基与C1～C2的氘代烷基中的一种或多种，再优选为氘、甲基或氘代甲基；在本发明中，所述A优选为4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基、氘代4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基、1H-吲哚-3-基、氘代1H-吲哚-3-基、1-甲基-1H-吲哚-3-基、氘代1-甲基-1H-吲哚-3-基、吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基或氘代吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基。

R¹为氢、氘、卤素、C1～C5的烷基、C1～C5的氘代烷基或氰基；优选为氢、氘、氯、C1～C3的烷基、C1～C3的氘代烷基或氰基；更优选为氢、氘、氯、C1～C2的烷基、C1～C2的氘代烷基或氰基；再优选为氢、氘、氯、甲基、氘代甲基或氰基。

R²为C1～C5的烷氧基、C1～C5的氘代烷氧基、C1～C5的氟代烷氧基或C1～C5的氘代部分氟化的烷氧基；优选为C1～C3的烷氧基、C1～C3的氘代烷氧基、C1～C3的氟代烷氧基或C1～C3的氘代部分氟化的烷氧基；更优选为C1～C2的烷氧基、C1～C2的氘代烷氧基、C1～C2的氟代烷氧基或C1～C2的氘代部分氟化的烷氧基；再优选为甲氧基、氘代甲氧基、氟代甲氧基或氘代部分氟化的甲氧基；最优选为甲氧基、氘代甲氧基、二氟甲氧基、氘代二氟甲氧基或三氟甲氧基；

R³为取代或未取代的氮杂环基、或式(II)所示的取代基：

其中，R¹⁴为C1～C3的烷基或C～C3的氘代烷基，优选为C1～C2的烷基或C1～C2的氘代烷基，再优选为甲基或氘代甲基；R¹⁵与R¹⁶各自独立地选自氢或氘；R¹⁷与R¹⁸各自独立地选自氢、氘、C1～C3的烷基或C1～C3的氘代烷基，且不同时为氢或氘，优选为氢、氘、C1～C2的烷基或C1～C2的氘代烷基，更优选为氢、氘、甲基或氘代甲基；或者R¹⁷与R¹⁸连接成环，优选成C4～C6的环或C4～C6的氘代环；环上优选含有杂原子，更优选含O；n为2～5的整数，优选为2～4的整数，更优选为2～3的整数。

所述取代的氮杂环基中的取代基为氘、C1～C5的烷基、C1～C5的氘代烷基、C1～C5的烷氨基或C1～C5的氘代烷氨基，优选为氘、C1～C3的烷基、C1～C3的氘代烷基、C1～C3的烷氨基或C1～C3的氘代烷氨基，更优选为氘、C1～C2的烷基、C1～C2的氘代烷基、C1～C2的烷氨基或C1～C2的氘代烷氨基，最优选为氘、甲基、氘代甲基、甲氨基、氘代甲氨基、二甲氨基或氘代二甲氨基。

所述氮杂环基为本领域技术人员熟知的含氮杂环基即可，其可为饱和的也可为不饱和的，并无特殊的限制，本发明中优选为吡啶基、氢化吡啶基、哌嗪基、吡咯基、吡咯烷基、C2～C6的氮杂环烷基、氮杂螺环基或上述任意两种形成稠环。

在本发明中，所述R³最优选为(3R)-3-(二甲氨基)吡咯烷-1-基、氘代(3R)-3-(二甲氨基)吡咯烷-1-基、(3S)-3-(二甲氨基)吡咯烷-1-基、氘代(3S)-3-(二甲氨基)吡咯烷-1-基、3-(二甲氨基)氮杂环丁烷-1-基、氘代3-(二甲氨基)氮杂环丁烷-1-基、[2-(二甲氨基)乙基](甲基)氨基、氘代[2-(二甲氨基)乙基](甲基)氨基、[2-(甲氨基)乙基](甲基)氨基、氘代[2-(甲氨基)乙基](甲基)氨基、5-甲基-2,5-二氮杂螺环[3,4]辛-2-基、氘代5-甲基-2,5-二氮杂螺环[3,4]辛-2-基、(3aR,6aR)-5-甲基六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-1(2H)-基、氘代(3aR,6aR)-5-甲基六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-1(2H)-基、1-甲基-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基、氘代1-甲基-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基、4-甲基哌嗪-1-基、氘代4-甲基哌嗪-1-基、4-[2-(二甲氨基)-1-氧代乙基]哌嗪-1-基、氘代4-[2-(二甲氨基)-1-氧代乙基]哌嗪-1-基、甲基[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基]氨基、氘代甲基[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基]氨基、甲基[2-(吗啉-4-基)乙基]氨基、氘代甲基[2-(吗啉-4-基)乙基]氨基、4-[(2S)-2-氨基丙酰基]哌嗪-1-基或氘代4-[(2S)-2-氨基丙酰基]哌嗪-1-基。

R⁴～R¹³各自独立地选自氢或氘；

且所述式(I)所示化合物、其药学上可接受的盐或其前药中至少含有一个氘原子。

按照本发明，所述式(I)所示化合物药学上可接受的盐为本领域技术人员熟知的药学上可接受的盐即可，其可为式(I)所示化合物与无机酸形成的盐也可为式(I)所示化合物与有机酸形成的盐，并无特殊的限制，本发明中优选为盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、乙酸、柠檬酸、马来酸、草酸、甲酸、苯甲酸、富马酸、琥珀酸、酒石酸、乳酸、丙酮酸、甲磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸与三氟乙酸中的一种或多种与式(I)所示的化合物形成的酸加成盐。

本发明提供的氘代N-[5-(嘧啶-2-氨基)-2,4-二取代苯基]-反式-2,4-戊二烯酰胺最优选为如式(I-1)～式(I-21)所示的化合物中的一种或多种：

所述式(I)所示化合物的前药为本领域技术人员熟知的前药即可，并无特殊的限制，前药可在人体或动物体内被分解而产生式(I)所示的化合物，本发明中优选为式(I)化合物的体内可水解酯。可通过将式(I)所示化合物中的羟基酯化，形成体内可水解酯。

本发明以氘原子取代了相关部位的氢原子，体积变化不明显，含氘有机化合物进入机体后不易被体内活性物质所识别，且由于碳-氘键稳定不易断裂，含氘有机化合物氧化还原性增强，使其在体内不易被代谢降解，阻碍其正常代谢循环，同时其脂肪链长脂溶性高，从而增强了式(I)所示的氘代物的生物利用度，因此将含有碳-氘键的式(I)所示的化合物及其药学上可接受的盐作为EGFR调谐子用于治疗或预防癌症，在体内降解速度减慢，延长了药物的半衰期，增加了血药浓度，扩大了给药时间间隔，最终减小了医疗剂量，降低了其毒副作用。

本发明还提供了一种上述氘代N-[5-(嘧啶-2-氨基)-2,4-二取代苯基]-反式-2,4-戊二烯酰胺作为表皮生长因子受体抑制剂的应用，在有效治疗剂量下，可以治疗和/或预防表皮生长因子受体EGFR调节性疾病；这些化合物或其盐对某些突变形式的表皮生长因子受体(例如L858R激活突变体、外显子-19缺失激活突变体和T790M抗性突变体)有一定的选择性，可阻断增殖信号的传导而用于疾病或病况的治疗或预防。这些化合物或其盐可用于一些不同癌症的治疗或预防。

本发明还提供了一种上述氘代N-[5-(嘧啶-2-氨基)-2,4-二取代苯基]-反式-2,4-戊二烯酰胺在制备治疗和/或预防癌症药物中的应用；所述癌症为本领域技术人员熟知的表皮生长因子受体EGFR调节性疾病，优选为肺癌、脑癌、卵巢癌、宫颈癌、结肠直肠癌、乳腺癌、胰腺癌、胶质瘤、胶质母细胞瘤、黑色素瘤、前列腺癌、白血病、淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、胃癌、肝癌、胃肠道间质瘤、甲状腺癌、胆管癌、子宫内膜癌、肾癌、间变性大细胞淋巴瘤、急性髓细胞白血病、多发性骨髓瘤、间皮瘤以及它们的并发症，更优选为非小细胞癌。作为制备治疗和/或预防癌症药物时，其可单独给药，也可与其它药物联合给药。

本发明还提供了一种药物组合物，包括上述氘代N-[5-(嘧啶-2-氨基)-2,4-二取代苯基]-反式-2,4-戊二烯酰胺。

所述药物组合物的剂型为本领域技术人员熟知的剂型即可，并无特殊的限制，本发明中优选为片剂、胶囊、水悬浮剂或油悬浮剂、乳剂、分散性粉剂或颗粒剂、糖浆剂、霜剂、软膏剂、凝胶剂、水溶液、油溶液、细粉、液体气溶胶静脉、无菌水溶液或无菌油溶液；其给药的方式可为口服使用(例如片剂、胶囊、水悬浮剂或油悬浮剂、乳剂、分散性粉剂或颗粒剂、糖浆剂)；局部使用(例如霜剂、软膏剂、凝胶剂、或者水溶液或油溶液)；通过吸入给药(例如细粉或者液体气溶胶)；通过吹入法给药(例如细粉)或者胃肠外给药(例如用于静脉、皮下、肌肉内或肌肉内给药的无菌水溶液或油溶液)。

所述药物组合物还包括药学上可接受的稀释剂或载体；式(I)所示化合物、其药学上可接受的盐与其前药中的一种或多种作为活性成分，可紧密地与药学载体混合在一起，这是根据经典的制药配料技术而进行，其中的载体可根据不同的给药方式(如口服或静脉注射等)设计好制备方式而采用多种多样的形式。药学上可接受的载体在技术上是众所周知的，例如对一些这类药学可接受的载体的描述可以在《药学赋形剂手册》里找到，该书由美国药学会和英国药学社联合出版。在本发明中所述载体优选包括惰性稀释液、填充物、水以及各种不同的有机溶剂。如果按照预先的设计，药学配方可包括一些附加成分如调味品、止泻剂、赋形剂以及诸如此类的材料。因此，对于口服药来说，包含着各种赋形剂的药片如柠檬酸，可以和各种分解质如淀粉、海藻酸，某种硅酸盐配合物以及一些止泻剂如蔗糖、凝胶和阿拉伯树胶结合起来；另外，像硬脂酸镁、十二醇硫酸钠、滑石等润滑剂对于制成药片也是相当有用的；相似类型的固态化合物也可用于或软或硬的凝胶胶囊填塞；因此，首选材料包括乳糖或奶糖以及高分子量聚乙醇醚。当悬浮水溶液或甘香酒剂作为口服药的必需品时，那里面的活性成分可能结合着不同的甜味剂或其他调味品、增色剂及染色剂，必要时还可添加乳化剂或悬浮剂，一并加入的还有稀释液，如水、酒精、丙烯乙二醇、甘油或其混合物。

活性成分的给药可以被任何能把该成分传递至作用部位(如：肿瘤细胞)的方式所影响。这些方式可包括口腔途径、直肠途径、十二指肠途径、胃肠外注射(包括静脉内、皮下、肌肉，血管内或灌注)、局部给药等等。被给予的活性成分的剂量将依赖于接受治疗的主体、疼痛的严重程度、给药方式以及开处方的医师的判断能力。然而有效剂量优选大约在0.001毫克至300毫克之间(通常在0.01毫克至80毫克之间，更合适的情况是大约在0.1毫克至30毫克之间)，具体用药剂量可以从每天每千克体重0.001毫克至每天每千克体重300毫克(比较常用的是每天每千克体重0.01毫克至每天每千克体重80毫克，更合适的是每天每千克体重0.1毫克至每天每千克体重30毫克)。

本发明中的术语“主体”，指的是一种动物，尤其是哺乳动物，最常指的是人类，人类往往被当作预防、治疗、观察或试验对象。术语“有效治疗剂量”，指的是活性化合物或药学成分的剂量，这些剂量能在组织、动物或人体内导致生物学或医学上的反应，而这样的反应正是被研究者、兽医、内科医生或其他临床医生所找寻的，包括正被治疗的疾病或混乱状态的症状的缓和。术语“成分”，指的是一种由指定数量的指定成分以及任何从指定数量的指定成分的混合物中直接或间接产生的产物。因此，作为活性成分的本发明的化合物或其药学上可接受的盐在内的药学成分，以及制备这些化合物或其药学上可接受的盐的方法，都是本发明的内容。而且，可以以结晶形态制备某些化合物及其盐，这些结晶形态可以以多晶型存在，这种形式也被包括在本发明里面。另外，一些化合物及其盐可以和水(即水合物)或普通的有机溶剂一起形成溶剂化物，这种溶剂化物也被包括在本发明的范畴内。术语“联合用药”，指的是与本发明化合物或其盐并列地、同时地、先后地、或分别地给药。

本发明还提供一种上述式(I)所示化合物的制备方法，包括：将式(II)所示的反式-2,4-戊二烯酰氯、第一中间体与碱在有机溶剂中混合反应后，得到式(I)所示的化合物；反应式如下：

其中，所述第一中间体的制备方法可按照已出版的程序来制备如D.J.Abraham,Burger's Medicinal Chemistry and Drug Discovery(Wiley,2003)和R.A.Ward et al.,J.Med.Chem.(2013,56,7025-7048)；所述碱为本领域技术人员熟知的碱即可，并无特殊的限制，本发明中优选为有机碱，更优选为胺类有机碱，再优选为二异丙基乙基胺(DIPEA)；所述有机溶剂为本领域技术人员熟知的有机溶剂即可，并无特殊的限制，本发明中优选为弱极性有机溶剂，更优选为二氯甲烷和/或四氢呋喃；所述混合反应的温度优选为0℃～30℃；所述混合反应的时间优选为30min～5h；所述混合反应优选在保护气氛中进行；所述保护气氛为本领域技术人员熟知的保护气氛即可，并无特殊的限制，本发明中优选为氮气；混合反应后，可直接加入碳酸氢钠溶液与少量甲醇淬灭反应；也可浓缩后溶于有机溶剂再加入碳酸氢钠溶液与少量甲醇淬灭反应；淬灭反应之后，优选水洗、干燥后，脱除有机溶剂，再经色谱纯化后得到式(I)所示的化合物。

按照本发明，上述制备过程优选具体为：将第一中间体、碱与有机溶剂混合后，再滴加式(II)所示的反式-2,4-戊二烯酰氯溶液，反应后，得到式(I)所示的化合物。

为了进一步说明本发明，以下结合实施例对本发明提供的氘代N-[5-(嘧啶-2-氨基)-2,4-二取代苯基]-反式-2,4-戊二烯酰胺及其应用进行详细描述。

以下实施例中所用的试剂均为市售；除非有特别说明，所有的份数和百分比均为质量份数及质量百分比，所指温度为摄氏温度；实施例中缩写如下：TFA，三氟乙酸；ATP，三磷酸腺苷；DMF，N,N-二甲基甲酰胺；DMSO，二甲基亚砜；EtOAc，乙酸乙酯；THF，四氢呋喃；DIPEA，二异丙基乙基胺；GSR，谷胱甘肽-S-转移酶；CrK，CT10，鸡肿瘤逆转录酶病毒10；SDS，十二烷基硫酸钠；SDS-PAGE，十二烷基硫酸钠-聚酰胺电泳胶；rt，室温；TLC，薄层色谱。

所有化学药品都是从市场供应商购置，都是直接使用而未进一步纯化处理，除非特别说明。快速柱色谱用青岛海洋化工200～300目标准硅胶；薄层色谱用青岛海洋化工0.20mm标准板；核磁共振波谱数据(NMR)是用布鲁克(Bruker)400或600兆核磁共振仪测试获取，以四甲基硅烷为内标，氘代氯仿或氘代二甲亚砜或氘代甲醇为溶剂(s表示单峰,d表示双重峰,t表示三重峰,q表示四重峰,m表示多重峰，br表示宽峰)；质谱数据采用microTOF-QII或Waters Micromass GCT Premier仪器获得。

实施例1：N-{2-(2-二甲氨基乙基-甲氨基)-4-甲氧基-5-[4-(1-甲基-4,5,6,7-四氘代吲哚-3-基)嘧啶-2-基]氨基苯基}-反式-2,4-戊二烯酰胺

步骤一：制备3-(2-氯嘧啶-4-基)-1H-4,5,6,7-四氘代吲哚

于0℃将CH₃MgBr(3.0M，溶于甲基四氢呋喃中，6.67mL，20mmol)慢慢滴加至4,5,6,7-D₄-吲哚(2.42g,20mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液中，10分钟加毕，继续在0℃搅拌半小时。然后在0℃将溶有2,4-二氯嘧啶(1.49g，10mmol)的四氢呋喃(5mL)溶液滴加到该溶液中；移去冰浴，将反应混合液于室温搅拌1小时，再于60℃搅拌20小时。继续在60℃下，慢慢向混合液中滴加乙酸(1.15mL，20mmol)，接着加入水20mL。将反应混合物继续在60℃搅拌半小时。过滤收集固体，并用水洗涤。真空干燥后，得到白色固体目标产物(1.52g，65％)；¹H NMR:8.22(1H,d),8.46(1H,d),8.56(1H,s),12.12(1H,s)。

步骤二：制备3-(2-氯嘧啶-4-基)-1-甲基-4,5,6,7-四氘代吲哚

将3-(2-氯嘧啶-4-基)-1H-4,5,6,7-四氘代吲哚(1.17g，5mmol)溶于四氢呋喃(45mL)中，将溶液冷却至0℃，分批加入60％NaH(0.24g，6mmol)，15分钟加毕，继续在0℃搅拌半小时。向反应体系中滴加碘甲烷(0.86g，6mmol)，加毕，继续在0℃反应2小时(薄层色谱监测反应，原料完全消失)。向反应体系中慢慢滴加饱和碳酸氢钠溶液(10mL)淬灭反应，向反应体系加入20mL乙酸乙酯，将混合液转入分液漏斗中，分得有机相；水相用乙酸乙酯20mL萃取2次；合并有机相，并用饱和食盐水(30mL)洗涤3次，加入无水硫酸镁干燥，旋蒸脱除溶剂，得到浅黄色固体(1.47g，99％)。直接用于下步反应。

步骤三：制备N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(1-甲基-4,5,6,7-四氘代吲哚-3-基)嘧啶-2-胺

将对甲苯磺酸一水合物(1.14g，6mmol)、4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺(0.93g，5mmol)和3-(2-氯嘧啶-4-基)-1-甲基-4,5,6,7-四氘代吲哚(1.24g，5mmol)加入反应瓶中，再加入30mL 2-戊醇。将反应混合物加热至120℃反应20小时，薄层色谱监测反应，原料完全消失。将反应混合物冷却至室温，析出浅黄色固体，过滤并用2-戊醇和水洗涤。将固体转入乙腈20mL烧瓶中，快速机械搅拌半小时，过滤得到浅黄色固体(1.53g，77％)。直接用于下步反应。

步骤四：制备N’-(2-二甲氨基乙基)-5-硝基-2-甲氧基-N’-甲基-N-[4-(1-甲基-4,5,6,7-四氘代吲哚-3-基)嘧啶-2-基]苯-1,4-二胺

将N¹,N¹,N²-三甲基乙烷-1,2-二胺(307mg，3mmol)、N-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-4-(1-甲基-4,5,6,7-四氘代吲哚-3-基)嘧啶-2-胺(1.19g，3mmol)、二异丙基乙基胺(970mg，7.5mmol)和三氟乙醇(15mL)加入高压反应釜中，用高纯氮置换3次，密闭后加热至140℃反应5小时，薄层色谱监测，反应完全。旋蒸脱除溶剂和过量的二异丙基乙基胺后，粘稠物硅胶柱层析分离，用CH₂Cl₂-MeOH-NH₃进行分级洗脱，得到黄色固体产物(1.17g，81％)。¹H NMR:2.12(6H,s),2.30(2H,t),2.77(3H,s),3.21(2H,t),3.82(3H,s),3.94(3H,s),6.34(1H,s),7.11(1H,s),7.20(1H,d),7.25(1H,s),8.62(1H,d)。

步骤五：N¹-(2-二甲氨基乙基)-5-甲氧基-N¹-甲基-N⁴-[4-(1-甲基-4,5,6,7-四氘代吲哚-3-基)嘧啶-2-基]苯-1,2,4-三胺

将N’-(2-二甲氨基乙基)-5-硝基-2-甲氧基-N’-甲基-N-[4-(1-甲基-4,5,6,7-四氘代吲哚-3-基)嘧啶-2-基]苯-1,4-二胺(0.96g，2mmol)、铁粉(672mg，12mmol)、氯化铵(76mg，1.4mmol)、乙醇(45mL)和水(15mL)加入反应瓶中，搅拌加热回流3小时，薄层色谱监测，反应完全。冷却，过滤，旋蒸脱除溶剂和水后，将反应粗产物进行硅胶柱层析分离，用CH₂Cl₂-MeOH-NH₃进行分级洗脱，得到黄色泡沫固体产物(836mg，93％)。¹H NMR:2.15(6H,s),2.34(2H,t),2.68(3H,s),2.87(2H,t),3.78(3H,s),3.92(3H,s),4.56(2H,br,s),6.34(1H,s),7.07(1H,s),7.20(1H,d),7.22(1H,s),8.49(1H,d)。

步骤六：制备N-{2-(2-二甲氨基乙基-甲氨基)-4-甲氧基-5-[4-(1-甲基-4,5,6,7-四氘代吲哚-3-基)嘧啶-2-基]氨基苯基}-反式-2,4-戊二烯酰胺

在0℃和N₂保护下，将反式2,4-戊二烯酰氯(116mg,1mmol，溶于2mLCH₂Cl₂中)逐滴添加到N¹-(2-二甲氨基乙基)-5-甲氧基-N¹-甲基-N⁴-[4-(1-甲基-4,5,6,7-四氘代吲哚-3-基)嘧啶-2-基]苯-1,2,4-三胺(450mg,1mmol)和DIPEA(194mg,1.5mmol)的CH₂Cl₂(20mL)溶液中。将所得混合物于0℃下搅拌反应3小时。然后加入饱和NaHCO₃(10mL)和少量甲醇(3～5滴)淬灭反应，有机相再用水(10mL)洗涤后，加入MgSO₄干燥，薄膜旋蒸脱除有机溶剂。将所得粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用CH₂Cl₂/MeOH(5～25％)作为洗脱剂，将所得溶液浓缩，获得目标产物(286mg，54％)。¹H NMR:2.22(6H,s),2.36(2H,t),2.70(3H,s),2.95(2H,t),3.87(3H,s),3.96(3H,s),5.70(1H,d),6.23(1H,d),6.51(1H,dd),6.93(1H,s),7.11(1H,s),7.20(1H,d),7.25(1H,s),8.71(1H,d),10.30(1H,s)；ES(m/z):M+H⁺530.4。

实施例2：N-{2-(2-二甲氨基乙基-甲氨基)-4-甲氧基-5-{4-[1-(三氘代甲基)吲哚-3-基]嘧啶-2-基}氨基苯基}-反式-2,4-戊二烯酰胺

在0℃和N₂保护下，将反式2,4-戊二烯酰氯(232mg,2mmol，溶于2mLTHF中)逐滴添加到N¹-(2-二甲氨乙基)-5-甲氧基-N¹-甲基-N⁴-{4-[1-(三氘代甲基)吲哚-3-基]嘧啶-2-基}苯-1,2,4-三胺(897mg,2mmol)和DIPEA(388mg,3mmol)的THF(10mL)溶液中。将所得混合物于0℃下搅拌反应30分钟，再升至室温反应4小时后，真空浓缩。然后将残留物溶解于CH₂Cl₂(20mL)中，并加入饱和NaHCO₃(5mL)和少量甲醇(5滴)淬灭反应，有机相再用水洗(6mL)后，加入MgSO₄干燥，薄膜旋蒸脱除有机溶剂。将所得粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用CH₂Cl₂/MeOH(5～25％)作为洗脱剂，将所得溶液浓缩，获得目标产物(581mg，55％)。¹H NMR:2.21(6H,s),2.25(2H,t),2.68(3H,s),2.97(2H,t),3.96(3H,s),5.18(1H,dd),5.24(1H,d),5.44(1H,d),6.55(1H,m),6.81(1H,s),7.20(1H,d),7.25-7.28(2H,m),7.38-7.40(2H,m),7.74(1H,s),8.05-8.08(1H,m),8.38(1H,d),8.92(1H,s),9.71(1H,s),10.48(1H,s)；ES(m/z):M+H⁺529.4。

实施例2A：N-{2-(2-二甲氨基乙基-甲氨基)-4-甲氧基-5-{4-[1-(三氘代甲基)吲哚-3-基]嘧啶-2-基}氨基苯基}-反式-2,4-戊二烯酰胺甲磺酸盐

将N-{2-(2-二甲氨基乙基-甲氨基)-4-甲氧基-5-{4-[1-(三氘代甲基)吲哚-3-基]嘧啶-2-基}氨基苯基}-反式-2,4-戊二烯酰胺(实施例2,106mg,0.2mmol)溶于丙酮(5mL)，搅拌升温至35℃，向其中慢慢滴加溶有甲磺酸(19mg,0.2mmol)的丙酮(1mL)溶液。将所得混合物继续搅拌2小时，过滤得到固体化合物，于室温真空干燥过夜，获得多晶型目标产物(115mg，92％)。

实施例3：N-{2-(2-二甲氨基乙基-甲氨基)-5-[4-(1-甲基吲哚-3-基)嘧啶-2-基]氨基-4-(三氘代甲氧基)苯基}-反式-2,4-戊二烯酰胺

在0℃和N₂保护下，将反式2,4-戊二烯酰氯(232mg,2mmol，溶于2mLTHF中)逐滴添加到N¹-(2-二甲氨乙基)-N¹-甲基-N⁴-[4-(1-甲基吲哚-3-基)嘧啶-2-基]-5-(三氘代甲氧基)苯-1,2,4-三胺(897mg,2mmol)和DIPEA(388mg,3mmol)的THF(10mL)溶液中。将所得混合物于0℃下搅拌反应30分钟，再升至室温反应4小时后，真空浓缩。然后将残留物溶解于CH₂Cl₂(20mL)中，并加入饱和NaHCO₃(5mL)和少量甲醇(5滴)淬灭反应，有机相再用水洗(6mL)后，加入MgSO₄干燥，薄膜旋蒸脱除有机溶剂。将所得粗产物通过硅胶柱色谱纯化，用CH₂Cl₂/MeOH(5～25％)作为洗脱剂，将所得溶液浓缩，获得目标产物(549mg，52％)。¹H NMR:2.21(6H,s),2.25(2H,t),2.68(3H,s),2.97(2H,t),3.84(3H,s),5.18(1H,dd),5.24(1H,d),5.44(1H,d),6.55(1H,m),6.81(1H,s),7.20(1H,d),7.25-7.28(2H,m),7.38-7.40(2H,m),7.74(1H,s),8.05-8.08(1H,m),8.38(1H,d),8.92(1H,s),9.71(1H,s),10.48(1H,s)；ES(m/z):M+H⁺529.4。

实施例3A：N-{2-(2-二甲氨基乙基-甲氨基)-5-[4-(1-甲基吲哚-3-基)嘧啶-2-基]氨基-4-(三氘代甲氧基)苯基}-反式-2,4-戊二烯酰胺甲磺酸盐

将N-{2-(2-二甲氨基乙基-甲氨基)-5-[4-(1-甲基吲哚-3-基)嘧啶-2-基]氨基-4-(三氘代甲氧基)苯基}-反式-2,4-戊二烯酰胺(实施例2,106mg,0.2mmol)溶于丙酮(5mL)，搅拌升温至35℃，向其中慢慢滴加溶有甲磺酸(19mg,0.2mmol)的丙酮(1mL)溶液。将所得混合物继续搅拌2个小时，过滤得到固体化合物，于室温真空干燥过夜，获得多晶型目标产物(119mg，95％)。

实施例4：N-{2-(2-二甲氨基乙基-甲氨基)-5-[4-(1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]氨基-4-(三氘代甲氧基)苯基}-反式-2,4-戊二烯酰胺

在0℃和N₂保护下，将反式2,4-戊二烯酰氯(180mg,2mmol，溶于2mLTHF中)逐滴添加到N¹-(2-二甲氨乙基)-N¹-甲基-N⁴-[4-(1H-吲哚-3-基)嘧啶-2-基]-5-(三氘代甲氧基)苯-1,2,4-三胺(869mg,2mmol)和DIPEA(388mg,3mmol)的THF(10mL)溶液中。将所得混合物于0℃下搅拌反应30分钟，再升至室温反应4小时后，真空浓缩。然后将残留物溶解于CH₂Cl₂(20mL)中，并加入饱和NaHCO₃(5mL)和少量甲醇(5滴)淬灭反应，有机相再用水洗(6mL)后，加入MgSO₄干燥，薄膜旋蒸脱除有机溶剂。将所得粗产物通过硅胶柱色谱纯化，以CH₂Cl₂/MeOH(5～25％)作为洗脱剂，将所得溶液浓缩，获得目标产物(504mg，49％)。¹H NMR:2.21(6H,s),2.25(2H,t),2.68(3H,s),2.97(2H,t),5.18(1H,dd),5.24(1H,d),5.44(1H,d),6.55(1H,m),6.81(1H,s),7.20(1H,d),7.25-7.28(2H,m),7.38-7.40(2H,m),7.74(1H,s),8.05-8.08(1H,m),8.38(1H,d),8.92(1H,s),9.71(1H,s),10.48(1H,s)；ES(m/z):M+H⁺515.2。

实施例5：N-{2-(2-二甲氨基乙基-甲氨基)-5-{4-[1-(三氘代甲基)吲哚-3-基]嘧啶-2-基}氨基-4-三氟甲氧基苯基}-反式-2,4-戊二烯酰胺

在0℃和N₂保护下，将反式2,4-戊二烯酰氯(232mg,2mmol，溶于2mLTHF中)逐滴添加到N¹-(2-二甲氨乙基)-N¹-甲基-N⁴-{4-[1-(三氘代甲基)吲哚-3-基]嘧啶-2-基}-5-三氟甲氧基苯-1,2,4-三胺(1.00g,2mmol)和DIPEA(388mg,3mmol)的THF(10mL)溶液中。将所得混合物于0℃下搅拌反应30分钟，再升至室温反应5小时后，真空浓缩。然后将残留物溶解于CH₂Cl₂(20mL)中，并加入饱和NaHCO₃(5mL)和少量甲醇(5滴)淬灭反应，有机相再用水洗(6mL)后，加入MgSO₄干燥，薄膜旋蒸脱除有机溶剂。将所得粗产物通过硅胶柱色谱纯化，以CH₂Cl₂/MeOH(5～25％)作为洗脱剂，将所得溶液浓缩，获得目标产物(652mg，56％)。¹H NMR:2.20(6H,s),2.24(2H,t),2.69(3H,s),2.95(2H,t),5.20(1H,dd),5.26(1H,d),5.45(1H,d),6.57(1H,m),6.82(1H,s),7.21(1H,d),7.26-7.29(2H,m),7.39-7.44(2H,m),7.74(1H,s),8.05-8.08(1H,m),8.38(1H,d),8.92(1H,s),9.71(1H,s),10.48(1H,s)；¹⁹F NMR:-57.6(3F,s)；ES(m/z):M+H⁺583.2。

实施例5A：N-{2-(2-二甲氨基乙基-甲氨基)-5-{4-[1-(三氘代甲基)吲哚-3-基]嘧啶-2-基}氨基-4-三氟甲氧基苯基}-反式-2,4-戊二烯酰胺甲磺酸盐

将N-{2-(2-二甲氨基乙基-甲氨基)-5-{4-[1-(三氘代甲基)吲哚-3-基]嘧啶-2-基}氨基-4-三氟甲氧基苯基}-反式-2,4-戊二烯酰胺(实施例5,106mg,0.2mmol)溶于丙酮(5mL)，搅拌升温至35℃，向其中慢慢滴加溶有甲磺酸(19mg,0.2mmol)的丙酮(1mL)溶液。将所得混合物继续搅拌2小时，过滤得到固体化合物，于室温真空干燥过夜，获得多晶型目标产物(113mg，90％)。

实施例6：N-{4-二氟甲氧基-2-(2-二甲氨基乙基-甲氨基)-5-{4-[1-(三氘代甲基)吲哚-3-基]嘧啶-2-基}氨基苯基}-反式-2,4-戊二烯酰胺

在0℃和N₂保护下，将反式2,4-戊二烯酰氯(232mg,2mmol，溶于1mLCH₂Cl₂中)逐滴添加到5-二氟甲氧基-N¹-(2-二甲氨基乙基)-N¹-甲基-N⁴-{4-[1-(三氘代甲基)吲哚-3-基]嘧啶-2-基}苯-1,2,4-三胺(969mg,2mmol)和DIPEA(390mg,3mmol)的CH₂Cl₂(20mL)溶液中。将所得混合物升至室温搅拌反应5小时。然后加入饱和NaHCO₃(4mL)和少量甲醇(5滴)淬灭反应，有机相再用水洗(8mL)后，加入MgSO₄干燥，薄膜旋蒸脱除有机溶剂。将所得粗产物通过硅胶柱色谱纯化，以CH₂Cl₂/MeOH(5～25％)作为洗脱剂，将所得溶液浓缩，获得目标产物(655mg，58％)。¹H NMR:2.21(6H,s),2.26(2H,t),2.67(3H,s),2.85(2H,t),5.19(1H,dd),5.25(1H,d),5.46(1H,d),6.55(1H,m),6.82(1H,s),7.20(1H,d),7.23-7.28(2H,m),7.38-7.41(2H,m),7.45(1H,m),7.76(1H,s),8.04-8.08(1H,m),8.42(1H,d),8.89(1H,s),9.68(1H,s),10.40(1H,s)；¹⁹F NMR:-79.8(2F,d)；ES(m/z):M+H⁺565.4。

实施例6A：N-{4-二氟甲氧基-2-(2-二甲氨基乙基-甲氨基)-5-{4-[1-(三氘代甲基)吲哚-3-基]嘧啶-2-基}氨基苯基}-反式-2,4-戊二烯酰胺甲磺酸盐

将N-{4-二氟甲氧基-2-(2-二甲氨基乙基-甲氨基)-5-{4-[1-(三氘代甲基)吲哚-3-基]嘧啶-2-基}氨基苯基}-反式-2,4-戊二烯酰胺(实施例6,113mg,0.2mmol)溶于丙酮(5mL)，搅拌升温至35℃，向其中慢慢滴加溶有甲磺酸(19mg,0.2mmol)的丙酮(1mL)溶液。将所得混合物继续搅拌2小时，过滤得到固体化合物，于室温真空干燥过夜，获得多晶型目标产物(119mg，90％)，ES(m/z):M-H⁺659.2。

实施例7：N-{2-(2-二甲氨基乙基-三氘代甲氨基)-5-[4-(1-甲基吲哚-3-基)嘧啶-2-基]氨基-4-甲氧基苯基}-反式-2,4-戊二烯酰胺

在0℃和N₂保护下，将反式2,4-戊二烯酰氯(23mg,0.2mmol，溶于1mLCH₂Cl₂中)逐滴添加到N¹-(2-二甲氨乙基)-N⁴-[4-(1-甲基吲哚-3-基)嘧啶-2-基]-N¹-三氘代甲基-5-甲氧基苯-1,2,4-三胺(90mg,0.2mmol)和DIPEA(39mg,0.3mmol)的CH₂Cl₂(10mL)溶液中。将所得混合物升至室温搅拌反应7小时。然后加入饱和NaHCO₃(4mL)和少量甲醇(3滴)淬灭反应，有机相再用水洗(4mL)后，加入MgSO₄干燥，薄膜旋蒸脱除有机溶剂。将所得粗产物通过硅胶柱色谱纯化，以CH₂Cl₂/MeOH(5～25％)作为洗脱剂，将所得溶液浓缩，获得目标产物(69mg，65％)。¹H NMR:2.24(6H,s),2.28(2H,t),2.89(2H,t),3.84(3H,s),3.95(3H,s),5.19(1H,dd),5.25(1H,d),5.46(1H,d),6.55(1H,m),6.85(1H,s),7.20(1H,d),7.25-7.29(2H,m),7.39-7.44(2H,m),7.76(1H,s),8.04-8.07(1H,m),8.42(1H,d),8.89(1H,s),9.71(1H,s),10.40(1H,s)；ES(m/z):M+H⁺529.2。

实施例8：N-{2-[2-二(三氘代甲基)氨基乙基-甲氨基]-5-[4-(1-甲基吲哚-3-基)嘧啶-2-基]氨基-4-甲氧基苯基}-反式-2,4-戊二烯酰胺

在-5℃和N₂保护下，将反式2,4-戊二烯酰氯(23mg,0.2mmol，溶于1mLTHF中)逐滴添加到N¹-[2-二(三氘代甲基)氨基-乙基]-N¹-甲基-N⁴-[4-(1-甲基吲哚-3-基)嘧啶-2-基]-5-甲氧基苯-1,2,4-三胺(90mg,0.2mmol)和DIPEA(39mg,0.3mmol)的THF(6mL)溶液中。将所得混合物于0℃下搅拌反应30分钟，再升至室温反应5小时后，真空浓缩。然后将残留物溶解于CH₂Cl₂(10mL)中，并加入饱和NaHCO₃(4mL)和少量甲醇(3滴)淬灭反应，有机相再用水洗(4mL)后，加入MgSO₄干燥，薄膜旋蒸脱除有机溶剂。将所得粗产物通过硅胶柱色谱纯化，以CH₂Cl₂/MeOH(5～25％)作为洗脱剂，将所得溶液浓缩，获得目标产物(60mg，56％)。¹H NMR:2.26(2H,t),2.69(3H,s),2.85(2H,t),3.84(3H,s),3.96(3H,s),5.18(1H,dd),5.24(1H,d),5.45(1H,d),6.54(1H,m),6.87(1H,s),7.21(1H,d),7.26-7.30(2H,m),7.40-7.45(2H,m),7.77(1H,s),8.04-8.07(1H,m),8.41(1H,d),8.90(1H,s),9.68(1H,s),10.33(1H,s)；ES(m/z):M+H⁺532.4。

实施例9：N-{2-[2-甲基(三氘代甲基)氨基乙基-甲氨基]-4-甲氧基-5-[4-(1-甲基吲哚-3-基)嘧啶-2-基]氨基苯基}-反式-2,4-戊二烯酰胺

在0℃和N₂保护下，将反式2,4-戊二烯酰氯(23mg,0.2mmol，溶于1mLCH₂Cl₂中)逐滴添加到5-甲氧基-N¹-[2-甲基(三氘代甲基)氨基乙基]-N¹-甲基-N⁴-[4-(1-甲基吲哚-3-基)嘧啶-2-基]苯-1,2,4-三胺(90mg,0.2mmol)和DIPEA(39mg,0.3mmol)的CH₂Cl₂(10mL)溶液中。将所得混合物升至室温搅拌反应1.5小时。然后加入饱和NaHCO₃(4mL)和少量甲醇(3滴)淬灭反应，有机相再用水洗(4mL)后，加入MgSO₄干燥，薄膜旋蒸脱除有机溶剂。将所得粗产物通过硅胶柱色谱纯化，以CH₂Cl₂/MeOH(5～25％)作为洗脱剂，将所得溶液浓缩，获得目标产物(52mg，49％)。¹H NMR:2.15(3H,s),2.25(2H,t),2.70(3H,s),2.84(2H,t),3.81(3H,s),3.94(3H,s),5.20(1H,dd),5.26(1H,d),5.46(1H,d),6.58(1H,m),6.81(1H,s),7.18(1H,d),7.24-7.28(2H,m),7.36-7.40(1H,m),7.45(1H,m),7.75(1H,s),8.01-8.05(1H,m),8.38(1H,d),8.87(1H,s),9.62(1H,s),10.30(1H,s)；ES(m/z):M+H⁺529.2。

实施例10：N-{2-[2-二甲氨基-2,2-双氘代乙基-三氘代甲氨基]-5-[4-(1-甲基吲哚-3-基)嘧啶-2-基]氨基-4-甲氧基苯基}-反式-2,4-戊二烯酰胺

在-10℃和N₂保护下，将反式2,4-戊二烯酰氯(23mg,0.2mmol，溶于1mLTHF中)逐滴添加到N¹-[2-二甲基氨基-2,2-双氘代乙基]-N⁴-[4-(1-甲基-4,5,6,7-四氘代吲哚-3-基)嘧啶-2-基]-N¹-三氘代甲基-5-甲氧基苯-1,2,4-三胺(90mg,0.2mmol)和DIPEA(39mg,0.3mmol)的THF(6mL)溶液中。将所得混合物于0℃下搅拌反应30分钟，再升至室温反应4小时后，真空浓缩。然后将残留物溶解于CH₂Cl₂(15mL)中，并加入饱和NaHCO₃(4mL)和少量甲醇(3～5滴)淬灭反应，有机相再用水洗(4mL)后，加入MgSO₄干燥，薄膜旋蒸脱除有机溶剂。将所得粗产物通过硅胶柱色谱纯化，以CH₂Cl₂/MeOH(5～25％)作为洗脱剂，将所得溶液的浓缩，获得目标产物(62mg，58％)。¹H NMR:2.17(6H,s),2.25(2H,t),3.82(3H,s),3.95(3H,s),5.18(1H,dd),5.24(1H,d),5.45(1H,d),6.54(1H,m),6.84(1H,s),7.19(1H,d),7.24-7.29(2H,m),7.36-7.41(1H,m),7.46(1H,m),7.76(1H,s),8.01-8.05(1H,m),8.36(1H,d),8.88(1H,s),9.60(1H,s),10.32(1H,s)；ES(m/z):M+H⁺531.4。

实施例11：N-{2-(2-二甲氨基乙基-甲氨基)-5-{4-[1-(三氘代甲基)吲哚-3-基]嘧啶-2-基}氨基-4-(三氘代甲氧基)苯基}-反式-2,4-戊二烯酰胺

在5℃和N₂保护下，将反式2,4-戊二烯酰氯(116mg,1mmol，溶于1mLTHF中)逐滴添加到N¹-(2-二甲氨基乙基)-N¹-甲基-N⁴-{4-[1-(三氘代甲基)吲哚-3-基]嘧啶-2-基}-5-(三氘代甲氧基)苯-1,2,4-三胺(451mg,1mmol)和DIPEA(194mg,1.5mmol)的THF(15mL)溶液中。将所得混合物于0℃下搅拌反应6小时后，真空浓缩。然后将残留物溶解于CH₂Cl₂(20mL)中，并加入饱和NaHCO₃(4mL)和少量甲醇(5滴)淬灭反应，有机相再用水洗(4mL)后，加入MgSO₄干燥，薄膜旋蒸脱除有机溶剂。将所得粗产物通过硅胶柱色谱纯化，以CH₂Cl₂/MeOH(5～25％)作为洗脱剂，将所得溶液浓缩，获得目标产物(319mg，60％)。¹H NMR:2.20(6H,s),2.27(2H,t),2.67(3H,s),2.86(2H,t),5.19(1H,dd),5.25(1H,d),5.44(1H,d),6.55(1H,m),6.87(1H,s),7.22(1H,d),7.26-7.31(2H,m),7.38-7.41(1H,m),7.46(1H,m),7.78(1H,s),8.03-8.07(1H,m),8.38(1H,d),8.90(1H,s),9.59(1H,s),10.36(1H,s)；ES(m/z):M+H⁺532.4。

实施例11A：N-{2-(2-二甲氨基乙基-甲氨基)-5-{4-[1-(三氘代甲基)吲哚-3-基]嘧啶-2-基}氨基-4-(三氘代甲氧基)苯基}-反式-2,4-戊二烯酰胺甲磺酸盐

将N-{2-(2-二甲氨基乙基-甲氨基)-5-{4-[1-(三氘代甲基)吲哚-3-基]嘧啶-2-基}氨基-4-(三氘代甲氧基)苯基}-反式-2,4-戊二烯酰胺(实施例11,106mg,0.2mmol)溶于丙酮(5mL)，搅拌升温至35℃，向其中慢慢滴加溶有甲磺酸(19mg,0.2mmol)的丙酮(1mL)溶液。将所得混合物继续搅拌2小时，过滤得到固体化合物，于室温真空干燥过夜，获得多晶型目标产物(115mg，92％)，ES(m/z):M-H⁺626.2。

实施例12：N-{2-(2-二甲氨基乙基-甲氨基)-4-甲氧基-5-[4-(1-甲基-2-氘代吲哚-3-基)嘧啶-2-基]氨基苯基}-2-氘代-反式-2,4-戊二烯酰胺

在室温和N₂保护下，将N-{2-(2-二甲氨基乙基-甲氨基)-4-甲氧基-5-[4-(1-甲基吲哚-3-基)嘧啶-2-基]氨基苯基}-反式-2,4-戊二烯酰胺(525mg，1mmol)溶于4mL DMF中，然后加入60％氢化钠(96mg,4mmol)和0.5mL氘代甲醇。将混合物于室温搅拌反应过夜，真空浓缩。将所得粗产物通过硅胶柱色谱纯化，以CH₂Cl₂/MeOH(5～25％)作为洗脱剂，将所得溶液浓缩，得到产物。将产物继续溶于4mL DMF中，然后加入60％氢化钠(96mg,4mmol)和0.5mL氘代甲醇；将混合物于室温搅拌反应过夜，真空浓缩。将所得粗产物通过硅胶柱色谱纯化，以CH₂Cl₂/MeOH(5～25％)作为洗脱剂，将所得溶液浓缩，得到最终目标产物(480mg,91％)。¹H NMR:2.21(6H,s),2.25(2H,t),2.68(3H,s),2.96(2H,t),3.85(3H,s),3.96(3H,s),5.18(1H,dd),5.44(1H,d),6.55(1H,m),6.81(1H,s),7.25-7.28(2H,m),7.38-7.41(2H,m),7.74(1H,s),8.05-8.08(1H,m),8.38(1H,d),8.92(1H,s),9.71(1H,s),10.48(1H,s)；ES(m/z):M+H⁺528.4。

实施例13：N-{2-(2-二甲氨基乙基-甲氨基)-5-[4-(1-甲基-2-氘代吲哚-3-基)嘧啶-2-基]氨基-4-三氟甲氧基苯基}-2-氘代-反式-2,4-戊二烯酰胺

在室温和N₂保护下，将N-{2-(2-二甲氨基乙基-甲氨基)-5-[4-(1-甲基吲哚-3-基)嘧啶-2-基]氨基-4-三氟甲氧基苯基}-反式-2,4-戊二烯酰胺(579mg，1mmol)溶于4mL DMF中，然后加入60％氢化钠(96mg,4mmol)和0.5mL氘代甲醇。将混合物于室温搅拌反应过夜，真空浓缩。将所得粗产物通过硅胶柱色谱纯化，以CH₂Cl₂/MeOH(5～25％)作为洗脱剂，将所得溶液浓缩，得到产物。将产物继续溶于4mL DMF中，然后加入60％氢化钠(96mg,4mmol)和0.5mL氘代甲醇；将混合物于室温搅拌反应过夜，真空浓缩。将所得粗产物通过硅胶柱色谱纯化，以CH₂Cl₂/MeOH(5～25％)作为洗脱剂，将所得溶液浓缩，得到最终目标产物(512mg,88％)。¹H NMR:2.22(6H,s),2.26(2H,t),2.69(3H,s),2.95(2H,t),3.85(3H,s),5.20(1H,dd),5.46(1H,d),6.56(1H,m),6.81(1H,s),7.25-7.29(2H,m),7.39(1H,m),7.46(1H,d),7.72(1H,s),8.05(1H,m),8.40(1H,d),8.90(1H,s),9.70(1H,s),10.51(1H,s)；¹⁹F NMR:-58.0(3F,s)；ES(m/z):M+H⁺582.2。

实施例14：N-{4-氘代二氟甲氧基-2-(2-二甲氨基乙基-甲氨基)-5-[4-(1-甲基-2-氘代吲哚-3-基)嘧啶-2-基]氨基苯基}-2-氘代-反式-2,4-戊二烯酰胺

在室温和N₂保护下，将N-{4-二氟甲氧基-2-(2-二甲氨基乙基-甲氨基)-5-[4-(1-甲基吲哚-3-基)嘧啶-2-基]氨基苯基}-反式-2,4-戊二烯酰胺(561mg，1mmol)溶于4mL DMF中，然后加入60％氢化钠(96mg,4mmol)和0.5mL氘代甲醇。将混合物于室温搅拌反应过夜，真空浓缩。将所得粗产物通过硅胶柱色谱纯化，以CH₂Cl₂/MeOH(5～25％)作为洗脱剂，将所得溶液浓缩，得到产物。将产物继续溶于4mL DMF中，然后加入60％氢化钠(96mg,4mmol)和0.5mL氘代甲醇；将混合物于室温搅拌反应过夜，真空浓缩。将所得粗产物通过硅胶柱色谱纯化，以CH₂Cl₂/MeOH(5～25％)作为洗脱剂，将所得溶液浓缩，得到最终目标产物(525mg,93％)。¹H NMR:2.23(6H,s),2.27(2H,t),2.75(3H,s),2.95(2H,t),3.80(3H,s),5.21(1H,dd),5.46(1H,d),6.56(1H,m),6.80(1H,s),7.25-7.30(2H,m),7.46(1H,m),7.73(1H,s),8.07(1H,m),8.42(1H,d),8.92(1H,s),9.73(1H,s),10.55(1H,s)；¹⁹F NMR:-80.1(2F,d)；ES(m/z):M+H⁺565.2。

实施例15：N-{2-[2-二甲氨基乙基-甲氨基]-5-{[4-吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基嘧啶-2-基]氨基}-4-(三氘代甲氧基)苯基}-反式-2,4-戊二烯酰胺

在-5℃和N₂保护下，将反式-2,4-戊二烯酰氯(23mg,0.2mmol，溶于0.4mLTHF中)逐滴添加到N¹-(2-二甲氨乙基)-N¹-甲基-N⁴-{4-吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基嘧啶-2-基}-5-三氘代甲氧基苯-1,2,4-三胺(87mg,0.2mmol)和DIPEA(39mg,0.3mmol)的THF(6mL)溶液中。将所得混合物于0℃下搅拌反应30分钟，再升至室温反应6小时后，真空浓缩。然后将残留物溶解于CH₂Cl₂(8mL)中，并加入饱和NaHCO₃(4mL)和少量甲醇(3～5滴)淬灭反应，有机相再用水洗(4mL)后，加入MgSO₄干燥，薄膜旋蒸脱除有机溶剂。将所得粗产物通过硅胶柱色谱纯化，以CH₂Cl₂/MeOH(5～25％)作为洗脱剂，将所得溶液浓缩，获得目标产物(53mg，51％)。¹H NMR:2.24(6H,s),2.34(2H,t),2.73(3H,s),2.95(2H,t),5.20(1H,dd),5.25(1H,d),5.46(1H,d),6.54(1H,m),6.96(1H,s),7.05(1H,d),7.26(1H,d),7.29-7.35(1H,m),7.44(1H,m),8.16(1H,s),8.35(1H,d),8.45(1H,d),8.77-8.81(2H,m),8.82(1H,s),10.08(1H,br)；ES(m/z):M+H⁺516.2。

实施例16：N-{2-[2-二甲氨基乙基-甲氨基]-5-[4-(4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-基]氨基-4-三氘代甲氧基苯基}-反式-2,4-戊二烯酰胺

在0℃和N₂保护下，将反式-2,4-戊二烯酰氯(23mg,0.2mmol，溶于0.3mLTHF中)逐滴添加到N¹-(2-二甲氨乙基)-N¹-甲基-N⁴-{4-(4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基)嘧啶-2-基}-5-三氘代甲氧基苯-1,2,4-三胺(108mg,0.2mmol)和DIPEA(39mg,0.3mmol)的THF(5mL)溶液中。将所得混合物于0℃下搅拌反应30分钟，再升至室温反应4小时后，真空浓缩。然后将残留物溶解于CH₂Cl₂(8mL)中，并加入饱和NaHCO₃(4mL)和少量甲醇(3～5滴)淬灭反应，有机相再用水洗(4mL)后，加入MgSO₄干燥，薄膜旋蒸脱除有机溶剂。将所得粗产物通过硅胶柱色谱纯化，以CH₂Cl₂/MeOH(5～25％)作为洗脱剂，将所得溶液浓缩，获得目标产物(55mg，53％)。¹H NMR:1.68-1.77(2H,m),1.90-1.97(2H,m),2.24(6H,s),2.28(2H,t),2.73(3H,s),2.85(2H,t),3.03(2H,t),4.09(2H,t),5.20(1H,dd),5.27(1H,d),5.48(1H,d),6.57(1H,m),6.87(1H,s),6.96-7.07(1H,m),7.44(1H,m),7.87(1H,s),8.15(1H,s),8.35(1H,d),8.89(1H,s),10.10(1H,s)；ES(m/z):M+H⁺520.4。

实施例17：硬凝胶胶囊的配方：作为一个口服药的明确具体化，称取实施例1中化合物60mg，用充分细微化的乳糖调配得到总量约为560mg，充填O型硬凝胶胶囊。

生物学特性

测验1--L858R/T790M EGFR(双突变体)细胞磷酸化测验：将人肺细胞系NCI-H1975 40μL细胞播种于Corning黑色透明底384孔板中的生长培养基中，37℃下5％CO₂培养过夜。使用声波定剂量，将100％DMSO中连续稀释的化合物加至细胞。将培养板再培养2小时，轻柔混合培养基之后，将40μL裂解缓冲液添加到各孔中。将Greiner黑色高结合力384孔板用捕捉抗体覆盖，然后用3％BSA封闭。接着去除封闭液，将15μL裂解液转移到Greiner黑色高结合力384孔板中，培养2小时。在轻柔混合和用PBS清洗培养板之后，添加20μL检测抗体，培养2小时。在轻柔混合和用PBS清洗培养板之后，添加20μL荧光过氧化物酶底物，培养1小时。将20μL终止溶液添加到培养板中，在采用352nm激发波长和460nm发射波长的Envision微孔板检测仪中读出荧光。选用Origin等软件基于数据获得相应的拟合曲线，并通过计算获得50％效果所需的化合物浓度来确定IC₅₀值，得到结果见表1。

测验2--Exon19缺失EGFR(激活单突变体)细胞磷酸化测验：将人肺细胞系PC9(Exon19缺失EGFR)依照R&D Systems DuoSet IC Human Phospho-EGF R ELISA所规定的操作，来执行测量细胞裂解液中内源性p-EGFR的细胞磷酸化的测验。将40μL细胞播种于Corning黑色透明底384孔板中的生长培养基中，于37℃下在5％CO₂培养过夜。使用声波定剂量，将100％DMSO中连续稀释的化合物加至细胞。将培养板再培养2小时，轻柔混合培养基之后，将40μL裂解缓冲液添加到各孔中。将Greiner黑色高结合力384孔板用捕捉抗体覆盖，然后用3％BSA封闭。接着去除封闭液，将15μL裂解液转移到Greiner黑色高结合力384孔板中，培养2小时。在轻柔混合和用PBS清洗培养板之后，添加20μL检测抗体，培养2小时。在轻柔混合和用PBS清洗培养板之后，添加20μL荧光过氧化物酶底物，培养1小时。将20μL终止溶液添加到培养板中，在采用352nm激发波长和460nm发射波长的Envision微孔板检测仪中读出荧光。选用Origin等软件基于数据获得相应的拟合曲线，并通过计算获得50％效果所需的化合物浓度来确定IC₅₀值，得到结果见表1。

测验3--野生型EGFR细胞磷酸化测验：将人结肠细胞系LoVo依照R&D Systems DuoSet IC Human Phospho-EGF R ELISA所规定的操作，来执行测量细胞裂解液中内源性p-EGFR的细胞磷酸化的测验。将40μL细胞播种于Corning黑色透明底384孔板中的生长培养基中，于37℃下5％CO₂培养过夜。使用声波定剂量，将100％DMSO中连续稀释的化合物加至细胞。将培养板培养2小时，轻柔混合培养基之后，将40μL裂解缓冲液添加到各孔中。将Greiner黑色高结合力384孔板用捕捉抗体覆盖，然后用3％BSA封闭。接着去除封闭液，将15μL裂解液转移到Greiner黑色高结合力384孔板中，培养2小时。在轻柔混合和用PBS清洗培养板之后，添加20μL检测抗体，培养2小时。在轻柔混合和用PBS清洗培养板之后，添加20μL荧光过氧化物酶底物，培养1小时。将20μL终止溶液添加到培养板中，在采用352nm激发波长和460nm发射波长的Envision微孔板检测仪中读出荧光。选用Origin等软件基于数据获得相应的拟合曲线，并通过计算获得50％效果所需的化合物浓度来确定IC₅₀值，得到结果见表1。

将本发明实施例中的检测数据(μM)显示于下表中。虽然用一定数量的有效数字来表述检测数据，但不应该认为表示数据己确定精确为有效数字的数。

表1生物学特性测试结果

测试结果显示，所有实施例均对激活突变、双突变和野生型突变有作用，且有良好的选择性，有较好的应用前景。

经过稳定性测试，显示这些化合物的半衰期大多在48h以上，能够较好的降低药品的用量，扩大药品使用的时间间隔，使药品具有更低的毒性。

本发明所公开的化合物能单独使用或者与其他试剂组合使用可用于各种癌症的治疗，并不仅限于非小细胞肺癌、前列腺癌、白血病、淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、胃癌、肺癌、肝细胞癌、卵巢癌、宫颈癌、结肠直肠癌、乳腺癌、胰腺癌等。