本发明涉及一种从三白草中提取三白草酮和金丝桃甙的方法，属于天然产物分离技术领域。
背景技术：
三白草又名水木通、五路白、白水鸡、白花照水莲、天性草、田三白、白黄脚、白面姑、三点白、白叶莲。多年生草本，常生湿地。果实为半浆质的蓇葖或肉质而顶端裂开的蒴果；种子有少量胚乳和丰富粉质的外胚乳。裸蒴属为中国特产，有两种，分布于西南及华南；三白草属及蕺菜属各一种，广布於秦岭以南各省区，也见於日本及东南亚。蕺菜俗称鱼腥草，有特殊气味，微毒，全草含挥发油，油中含抗菌成分鱼腥草素(即癸醯乙醛)，甲基正壬基酮，月桂烯，月桂醛，癸醛﹑癸酸，尚含蕺菜碱等，花穗，果穗含异槲皮，叶含槲皮，有抗菌，抗病毒作用，可治疗上呼吸道感染，癰疽肿毒等。三白草全草含挥发油，油中主要成分为甲基正壬基酮，茎含可水解鞣质，叶含槲皮素，槲皮，异槲皮，扁蓄，金丝桃甙，芸香和可水解鞣质。主治：清利湿热，消肿，解毒。治水肿，脚气，黄疸，淋浊，带下，痈肿，疗毒。
三白草酮溶于乙酸乙酯，甲醇，乙醇，不溶于水。三白草酮是从中药三白草中分离得到的木脂素类化合物，其含量高达0.4％。国内外研究表明其具有明确的保肝效果，它能通过降低谷丙转氨酶、谷草转氨酶、丙二醛值而保护损伤的肝细胞；对小鼠灌胃三白草酮能保护肝脏免受苯肼的伤害；三白草酮还能抑制高脂食物引起的肝硬化和氧化损伤；近年来研究表明三白草酮还有抗炎、神经保护等作用。但药动学实验发现其在体内的吸收差，且消除很快，研究表明三白草酮的水溶性和脂溶性都很差。
金丝桃甙是广泛存在于各种软果、坚果等植物组织中的一种天然多酚组分，没食子酸的二聚衍生物，是一种多酚二内酯，它不仅以游离的形式存在，而且更多的是以缩合形式(以鞣花单宁或苷等)存在于自然界。金丝桃甙与三氯化铁的显色反应呈蓝色，遇硫酸呈黄色。它微溶于水、醇，溶于碱、吡啶，不溶于醚。金丝桃甙表现出对化学物质诱导癌变及其他多种癌变有明显的抑制作用，特别是对结肠癌、食管癌、肝癌、肺癌、舌及皮肤肿瘤等有很好的抑制作用。
公开号为cn101254253的中国专利公开了一种三白草总木脂素提取物的方法，包括如下步骤：(1)三白草药材处理后用50％～95％的选自甲醇、乙醇、丙酮中的一种醇室温或加热回流提取后，提取液减压浓缩，使其含有机溶剂量不高于15％，总体积为原药材量的0.5～1.0倍，浓缩后的提取液室温放置过夜，过滤，取上清液；(2)上清液减压蒸至无醇味后，以己烷或石油醚萃取脱脂，至萃取液颜色变淡，经萃取后的药液用碱调ph值为9.0-10.0，以有乙酸乙酯继续萃取，合并乙酸乙酯萃取液；(3)乙酸乙酯萃取液减压浓缩至原体积的1/3后，用ph为3.0-4.5的酸水萃取，弃酸水萃取液，乙酸乙酯层减压浓缩得木脂素含量在50％以上的提取物。
公开号为cn102351876a的中国专利公开了一种从三白草中提取三白草酮的方法。方法步骤如下：a.取三白草药材粉碎40-80目，加入超临界萃取釜中，在萃取压力15-25mpa、温度40-60℃的条件下，通入液态co2和夹带剂超临界萃取2-3小时，在压力5-10mpa，温度50-60℃解析得萃取物；b.上述萃取物热水分散，加入大孔树脂柱吸附，乙醇溶液梯度洗脱，收集洗脱液减压浓缩，得粗提物；c.把上述粗提物采用高速逆流色谱分离，紫外检测器检测，收集目标成分，减压干燥得三白草酮。
公开号为cn106361644a的中国专利公开了一种多功能美白保湿洁面乳，包含如下步骤：(1)将金缕梅、三白草、银杏叶和地木耳分别干燥、粉碎过筛，得到金缕梅粗粉、三白草粗粉、银杏叶粗粉和地木耳粗粉；(2)将金缕梅粗粉、三白草粗粉和银杏叶粗粉混合，然后加入到水中，在温度为30～40℃，超声频率为20～25khz，超声功率为200～300w的条件下进行超声辅助提取2～4次，每次30～60min，合并提取液，得到提取物1；将提取后的植物残渣加入到体积分数为50～70％的乙醇水溶液中，100～300mpa超高压提取10～20min后泄压，过滤；将滤液与提取物1合并，浓缩，得到提取物2；(3)将地木耳粗粉加入到体积分数为50～70％的乙醇水溶液中，在温度为50～60℃，提取功率为500～600w的条件下进行微波辅助提取2～4次，每次3～5min，合并提取液，浓缩，得到提取物3；(4)将步骤(2)制得的提取物2和步骤(3)制得的提取物3混合均匀，得到植物复合提取物。
目前对其研究主要集中在整株入药，而对它的药效成分提取方面的研究报道很少，特别是其果实之药用价值未被重视。随着三白草果实的药用有效成分研究的进一步深入，三白草果实的药用价值必将会得到更加充分的发现和利用。若对提取过程中其有效成分进行综合开发利用，因而对三白草进行综合深加工意义非凡，探索从三白草中同时提取三白草酮和金丝桃甙，其意义相当远大。
技术实现要素：
针对三白草含有大量多糖成分，在提取过程中由于破碎不彻底，造成细胞内活性成分未能充分释放，在提取废渣中残留较多，此类功能性成分并未得到充分利用，生产成本较高。
本发明采用的技术方案包括：三白草经醇提、硅胶柱和大孔树脂吸附、分步洗脱、浓缩结晶制得三白草酮和金丝桃甙纯品。
因此，本发明提供一种从三白草提取三白草酮和金丝桃甙的方法，具体步骤包括如下：
(1)将三白草粉碎，加入乙醇水溶液进行混合，50～65℃回流提取50～100min，陶瓷膜过滤一次，得提取液，其中三白草重量kg与乙醇水溶液的体积l比为1:2～4。
(2)将提取液在45～55℃减压进行浓缩至原有体积的1/5～1/20，得到浓缩液ⅰ；
(3)向浓缩液ⅰ加入二到四倍体积的乙酸乙酯进行萃取，得乙酸乙酯萃取液和水相；
(4)将水相上硅胶柱，用三倍柱体积的水进行冲洗，并用两倍至四倍柱体积的含有20～35％乙醇的0.001mol/l氨水的乙醇水溶液进行洗脱，得到洗脱液ⅰ；
(5)将乙酸乙酯萃取液在45～55℃减压进行浓缩至干，得干燥物，再加入乙醇进行溶解，上大孔树脂，再用三倍至五倍柱体积的含有80～90％乙醇水溶液对大孔树脂进行洗脱，得到洗脱液ⅱ，并将洗脱液ⅱ进行45～55℃减压浓缩至原来体积的1/10～1/25，得浓缩液ⅱ；
(6)将浓缩液ⅱ放置在4～8℃静置过夜结晶，过滤得结晶物，即为三白草酮粗品，再在4～8℃重结晶得三白草酮纯品。
(7)将洗脱液ⅰ进行45～55℃减压浓缩至原来体积的1/10～1/15，用0.01mol/lhcl调节ph到6～7，静置过夜，过滤，干燥滤渣得金丝桃甙。
上述所采用的大孔树脂为klfc-150、ab-8、lsa-20、s-9等。
在一个实施方案中，步骤(1)中所述乙醇溶液，是指80～90％的乙醇水溶液，其中80％乙醇水溶液的配制方法为80ml无水乙醇加入20ml水混合制成。
在一个实施方案中，步骤(1)、(6)和(7)中所述过滤，是指采用0.2μm孔径大小的陶瓷膜过滤一次。
在一个实施方案中，步骤(5)中所述加入乙醇的体积l与干燥物重量kg比为0.5～4：1，乙醇是指无水乙醇或95％乙醇。
技术效果
1、本发明方法操作简单，大大提高了三白草酮和金丝桃甙的产率，极大地降低了三白草酮和金丝桃甙的生产成本，简化了其生产过程。
2、使用三白草作为提取原料，既大大提高了三白草的利用效率，又提高了三白草的附加值。
具休实施方式
下面，本发明将用实施例进行进一步的说明，但是它并不限于这些实施例的任何一个或类似实例。
实施例1
将100kg三白草粉碎，加入85％的乙醇水溶液300l进行混合，60℃回流提取60min，陶瓷膜过滤一次，得350l提取液。将提取液在50℃减压进行浓缩至20l，得到浓缩液ⅰ，向浓缩液ⅰ加入60l乙酸乙酯进行萃取，得乙酸乙酯萃取液和水相；将水相上硅胶柱，用三倍柱体积的水进行冲洗，并用四倍柱体积的含有35％乙醇的0.001mol/l氨水的乙醇水溶液进行洗脱，得到80l洗脱液ⅰ。将乙酸乙酯萃取液在55℃减压进行浓缩至干，得2.31kg干燥物，再加入4l乙醇进行溶解，上ab-8大孔树脂，再用五倍柱体积的含有85％乙醇水溶液对大孔树脂进行洗脱，得到100l洗脱液ⅱ，并将洗脱液ⅱ进行50℃减压浓缩至6l，得浓缩液ⅱ，放置在4℃静置过夜结晶，陶瓷膜过滤一次得结晶物，即为三白草酮粗品，再在5℃重结晶得0.865kg三白草酮纯品。将洗脱液ⅰ进行55℃减压浓缩至8l，用0.01mol/lhcl调节ph到6，静置过夜，陶瓷膜过滤一次，干燥滤渣得1.245kg金丝桃甙。经hplc检测，金丝桃甙样品的含量为98.68％，三白草酮样品的含量为98.82％。
实施例2
将200kg三白草粉碎，加入60％的乙醇水溶液600l进行混合，55℃回流提取60min，陶瓷膜过滤一次，得640l提取液。将提取液在50℃减压进行浓缩至40l，得到浓缩液ⅰ，向浓缩液ⅰ加入二到四倍体积的乙酸乙酯进行萃取，得乙酸乙酯萃取液和水相；将水相上硅胶柱，用三倍柱体积的水进行冲洗，并用三倍柱体积的含有35％乙醇的0.001mol/l氨水的乙醇水溶液进行洗脱，得到120l洗脱液ⅰ；将乙酸乙酯萃取液在55℃减压进行浓缩至干，得4.85kg干燥物，再加入6l乙醇进行溶解，上ab-8大孔树脂，再用五倍柱体积的含有85％乙醇水溶液对大孔树脂进行洗脱，得到150l洗脱液ⅱ。并将洗脱液ⅱ进行55℃减压浓缩至10l，得浓缩液ⅱ，放置在4℃静置过夜结晶，陶瓷膜过滤一次得结晶物，即为三白草酮粗品，再在5℃重结晶得1.82kg三白草酮纯品。将洗脱液ⅰ进行55℃减压浓缩至10l，用0.01mol/lhcl调节ph到6，静置过夜，陶瓷膜过滤一次，干燥滤渣得2.36kg金丝桃甙。经hplc检测，金丝桃甙样品的含量为98.41％，三白草酮样品的含量为98.76％。
实施例3
将500kg三白草粉碎，加入50％的乙醇水溶液1500l进行混合，50℃回流提取60min，陶瓷膜过滤一次，得1450l提取液。将提取液在50℃减压进行浓缩至80l，得到浓缩液ⅰ，向浓缩液ⅰ加入二到四倍体积的乙酸乙酯进行萃取，得乙酸乙酯萃取液和水相；将水相上硅胶柱，用三倍柱体积的水进行冲洗，并用四倍柱体积的含有30％乙醇的0.001mol/l氨水的乙醇水溶液进行洗脱，得到300l洗脱液ⅰ；将乙酸乙酯萃取液在55℃减压进行浓缩至干，得11.57kg干燥物，再加入15l乙醇进行溶解，上ab-8大孔树脂，再用五倍柱体积的含有85％乙醇水溶液对大孔树脂进行洗脱，得到400l洗脱液ⅱ。并将洗脱液ⅱ进行50℃减压浓缩至20l，得浓缩液ⅱ，放置在4℃静置过夜结晶，陶瓷膜过滤一次得结晶物，即为三白草酮粗品，再在5℃重结晶得4.78kg三白草酮纯品。将洗脱液ⅰ进行55℃减压浓缩至25l，用0.01mol/lhcl调节ph到6，静置过夜，陶瓷膜过滤一次，干燥滤渣得6.71g金丝桃甙。经hplc检测，金丝桃甙样品的含量为98.61％，三白草酮样品的含量为98.89％。