本发明属于医药及其制备和应用技术领域，具体涉及一种白桦脂酸衍生物及其合成方法和应用。
背景技术：
白桦脂酸(betulinicacid,ba)是一种五环三萜类化合物，存在于白桦树、夏枯草、木瓜等多种植物中。研究发现，白桦脂酸具有广泛的生理活性，具有抗hiv、抗肿瘤、抗炎等效用。相较于白桦脂酸，其衍生物在抗hiv、抗肿瘤等方面具有更好的活性，如rpr103611和pa457(bevirimat)已经处于抗hiv的临床实验阶段，nvx-207在进行抗肿瘤的临床实验。但是由于其在水中的溶解性太差，导致生物利用度低及体内传输、代谢等方面的缺点。
技术实现要素：
本发明的主要目的在于提供一种白桦脂酸衍生物，另一目的在于提供该类化合物的合成方法，又一目的在于提供该类化合物在制备抗肿瘤或抗病毒药物中的应用。
本发明的目的是以下述方式实现的：
一种白桦脂酸衍生物，或其药学上可接受的盐、水合物或前药，其结构式如式(ⅰ)所示：
其中：x＝nh或o，y＝oh或nh2，r1是c1-c20取代或者未取代的基团，r3是h、c1-c20取代或者未取代的基团。
结构式如式(ⅰ)所示的白桦脂酸衍生物具体为结构式如式i-xiv所示的化合物：
如上述的白桦脂酸衍生物的合成方法，合成路径如下：
其中：x＝nh或o，y＝oh或nh2，r1是c1-c20取代或者未取代的基团，r2是c1-c20取代或者未取代的基团；
具体合成步骤如下：
化合物2的合成：将化合物1溶于丙酮或者四氢呋喃中，0℃加入jones试剂，反应完毕后加入甲醇和水淬灭反应，蒸干溶剂，萃取并用柱分离得到白色固体化合物2；
化合物3的合成：将化合物2溶于二氯甲烷，0℃加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(edc)、4-二甲氨基吡啶(dmap)搅拌30min，再加入相应的胺，室温搅拌反应过夜，萃取蒸干柱层析分离得到化合物3；
化合物4的合成：化合物3溶于四氢呋喃中，加入kn(sime3)2的四氢呋喃溶液和et3b的四氢呋喃溶液；搅拌反应1h后加入溴丙炔，反应完毕后盐酸中和反应，有机相萃取蒸干后得到的化合物溶于甲醇，加入nabh4搅拌过夜，蒸干溶剂并用硅胶柱分离得到化合物4；
化合物5的合成：化合物4溶于吡啶中，加入对应的酸酐，回流过夜，蒸干溶剂并用乙酸乙酯萃取，蒸干溶剂硅胶柱分离得到化合物5；
化合物6的合成：化合物5溶于叔丁醇和水的混合溶剂，加入n,n-二异丙基乙胺和相应核苷，搅拌30分钟后加入cui的乙腈溶液继续反应过夜。反应完毕后蒸干溶剂，柱分离得到化合物6；
化合物7的合成：化合物2溶于二氯甲烷，0℃滴加草酰氯，反应完毕后蒸干溶剂，再溶于ch2cl2，加入相应的醇搅拌，蒸干得到化合物7；
化合物8的合成：化合物7溶于四氢呋喃中，加入kn(sime3)2的四氢呋喃溶液和et3b的四氢呋喃溶液；搅拌反应1h后加入溴丙炔。反应完毕后盐酸中和反应，有机相萃取蒸干并用硅胶柱分离得到白色固体化合物8；
化合物9的合成：化合物8溶于甲醇，加入nabh4搅拌过夜，蒸干溶剂并用硅胶柱分离得到化合物9；
化合物10的合成：化合物9溶于n,n-二甲基甲酰胺，加入碘化锂并加热，反应完毕后乙酸乙酯萃取，盐酸洗涤，蒸干柱分离得到白色固体化合物10；
化合物11的合成：化合物10溶于吡啶，加入对应的酸酐，回流过夜，蒸干溶剂并用乙酸乙酯萃取，蒸干溶剂硅胶柱分离得到化合物11；
化合物12的合成：化合物11溶于叔丁醇和水的混合溶剂，加入n,n-二异丙基乙胺和相应核苷，搅拌30分钟后加入cui的乙腈溶液继续反应过夜。反应完毕后蒸干溶剂，柱分离得到化合物12；
化合物13的合成：化合物9溶于吡啶，加入对应的酸酐，回流过夜，蒸干溶剂并用乙酸乙酯萃取，蒸干溶剂硅胶柱分离得到化合物13；
化合物14的合成：化合物13溶于叔丁醇和水的混合溶剂，加入n,n-二异丙基乙胺和相应核苷，搅拌30分钟后加入cui的乙腈溶液继续反应过夜。反应完毕后蒸干溶剂，柱分离得到化合物14。
如上述的白桦脂酸衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。
所述白桦脂酸衍生物诱导肿瘤细胞的凋亡、抑制肿瘤细胞的增殖、抑制肿瘤细胞的迁移。
如上述的白桦脂酸衍生物在制备抗病毒药物中的应用。
本发明制备方法中，以上反应通常采用薄板层析法来跟踪测定反应的完成程度，反应完毕后采用的后处理方法包括浓缩、萃取、柱层析分离等，最终产物通过核磁共振谱来验证。
本发明提供的白桦脂酸衍生物含有一个白桦脂酸部分，其与连接物(linker)1,2,3-三氮唑在白桦脂酸部分的c-2处共价结合，连接物又共价结合2’-氟-阿糖核苷部分。本发明提供的化合物是用化学方法设计来解决白桦脂酸的水溶性低的问题，通过稳定的1,2,3-三氮唑连接物把白桦脂酸与核苷类化合物连接在一起。
核苷类化合物通常具有很好的水溶性，因此能够有效提高本发明提供的化合物在水中的溶解度，同时白桦脂酸的抗hiv活性部位为c-3位和c-28位，作用机制为阻止病毒与细胞融合及阻止病毒成熟释放，而核苷类化合物抗hiv的机制为抗逆转录酶，保留白桦脂酸和核苷的活性位点，选择具有抗病毒作用的1,2,3-三氮唑作为连接基连接白桦脂酸和核苷，能够保证本发明提供的化合物的抗病毒和抗肿瘤活性，同时得到新的多靶点抗病毒抗肿瘤药物。另外，本发明提供的化合物的毒性较低。
相对于现有技术，本发明的有益效果在于：通过对白桦脂酸的改造，使白桦脂酸和活性核苷连接在一起，弥补了当前白桦脂酸类化合物水溶性差、生物利用率低以及核苷类化合物毒副作用大等问题；且该合成方法简便可行，收率较高，将其应用于制备抗肿瘤或者抗hiv或抗hbv病毒药物，具有较好的应用价值。
具体实施方式
实施本发明的过程、条件、试剂、实验方法等，除以下专门提及的内容之外，均为本领域的公知常识，本发明没有特别限制内容。下述实施例中，化合物结构由核磁共振仪测定，试剂主要由麦克林化学试剂公司提供，产品纯化主要通过柱色谱，硅胶(200-300目)由青岛海洋化工厂生产。
白桦脂酸的c-3位和c-28位如以下结构式所示：
实施例1化合物xiii的合成
合成路径如下：
化合物2的合成：1000ml三口瓶中，加入白桦脂醇(20.0g，45.2mmol)和丙酮(400ml)，然后在冰浴下滴加新制备的琼斯试剂(100ml)，在冰浴下继续反应30分钟后撤去冰浴，室温搅拌8h，加入甲醇(250ml)和水(250ml)终止反应，蒸干溶剂，加入水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，干燥浓缩，柱色谱分离，得到白色固体2(12.2g，26.8mmol，59.3％)。1hnmr(dmso-d6,400mhz)δ：12.08(s,1h),4.70(s,1h),4.57(s,1h),2.90～2.99(m,1h),2.46～2.30(m,2h),2.25(dt,j＝12.7,3.5hz,1h),2.15～2.08(m,1h),1.87～1.73(m,3h),1.65(s,3h),1.62(s,1h),1.54(t,j＝11.3hz,1h),1.48～1.00(m,15h),0.98(s,3h),0.95(s,3h),0.93(s,3h),0.90(s,3h),0.85(s,3h)。
化合物7的合成：在100ml圆底烧瓶中，将化合物2(4.54g，10mmol)溶于ch2cl2中，0℃滴加草酰氯(12.7g，100mmol)。反应完毕后蒸干溶剂，剩余物加入甲醇加热回流，tlc监测反应完毕后蒸干溶剂，加入乙酸乙酯萃取，水洗，有机相用na2so4干燥，柱色谱分离得到白色固体化合物7(3.36g，7.17mmol，71.7％)。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ：4.74(s,1h),4.61(s,1h),3.68(s,3h),3.05～2.94(m,1h),2.56～2.32(m,2h),2.31～2.17(m,2h),1.96～1.83(m,3h),1.77～1.66(m,1h),1.69(s,3h),1.65～1.52(m,6h),1.51～1.11(m,13h),1.07(s,3h),1.02(s,3h),0.97(s,3h),0.95(s,3h),0.92(s,3h).13cnmr(cdcl3,100mhz)δ：218.2,176.6,150.5,109.6,56.5,55.0,51.3,49.9,49.4,47.3,46.9,42.4,40.6,39.6,38.3,36.9,36.9,34.2,33.6,32.1,30.6,29.6,26.6,25.5,21.4,21.0,19.6,19.4,15.9,15.7,14.6。
化合物8的合成：在500ml圆底烧瓶中，加入化合物7(2.54g，5.42mmol)，和135ml四氢呋喃，室温搅拌加入1mol/l的kn(sime3)2的四氢呋喃溶液(40ml)，搅拌1h后加入1mol/lnet3b的四氢呋喃溶液(40ml)，继续搅拌1.5h，加入溴丙炔(4ml)。反应完毕后，加入3mol/l的hcl(3.0ml)淬灭反应，用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，将有机相用饱和碳酸氢钠溶液洗两次，na2so4干燥，柱色谱分离得到白色固体化合物8(2.32g，4.58mmol，84.5％)。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ：4.72(s,1h),4.58(s,1h),3.67(s,3h),3.05～2.94(m,1h),2.91～2.77(m,1h),2.60(ddd,j＝17.1,4.4,2.7hz,1h),2.33(dd,j＝12.9,5.6hz,1h),2.29～2.10(m,3h),1.94(t,j＝2.7hz,1h),1.91～1.83(m,1h),1.79～1.70(m,1h),1.67(s,3h),1.63～1.14(m,14h),1.17～1.01(m,3h),1.12(s,3h),1.06(s,3h),1.04(s,3h),0.98(s,3h),0.94(s,3h).13cnmr(cdcl3,100mhz)δ：215.8,176.6,150.4,109.7,83.0,69.4,57.3,56.5,51.3,50.1,49.4,48.3,47.0,46.6,42.5,41.2,40.8,38.2,37.4,36.9,34.1,32.1,30.5,29.6,25.4,25.0,21.6,21.2,19.5,19.3,16.1,14.6。
化合物9的合成：在500ml圆底烧瓶中，加入化合物8(1.88g，3.7mmol)、120ml甲醇和硼氢化钠(1.41g，37mmol)。室温搅拌5h后，加入3mol/l的hcl(60.0ml)，蒸干溶剂用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，将有机相用饱和碳酸氢钠溶液洗两次，将有机相干燥浓缩，柱色谱分离，用石油醚：乙酸乙酯＝20:1做洗脱剂，得到白色固体化合物9(1.53g，3.0mmol，81.1％)。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ：4.73(1h,d,j＝2hz),4.59(1h,s),3.70(3h,s),3.12(1h,d,j＝10.4hz),3.10(1h,m),2.60(ddd,j＝17.1,4.4,2.7hz,1h),2.42(1h,dt,j＝12.2,3.0hz),1.68(3h,s),0.97(3h,s),0.95(3h,s),0.91(3h,s),0.82(6h,s),0.79(3h,s)。
化合物13的合成：化合物9(506mg，1mmol)溶于50ml吡啶中，加入2,2-二甲基琥珀酸酐(640mg,5mmol)，加热回流过夜。蒸干吡啶，乙酸乙酯萃取，稀盐酸洗涤，无水na2so4干燥，蒸干溶剂柱色谱分离得到白色固体化合物13(382mg，0.6mmol，60.0％)。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ：4.73(1h,s),4.59(1h,s),4.51(1h,d,j＝10.6hz),3.68(3h,s),3.01(1h,m),2.36(1h,dt,j＝12.2,3.0hz),1.68(3h,s),1.26(3h,s),1.25(3h,s),0.97(3h,s),0.95(3h,s),0.91(3h,s),0.80(6h,s)。
化合物xiii的合成：化合物13(130mg，0.20mmol)、2’-脱氧-2’-氟-4’-叠氮胞苷(69mg，0.24mmol)、叔丁醇(5ml)、水(5.0ml)和dipea(50μl)。抽真空，氮气保护，加热至45℃。反应15分钟后，再加入cui(4.0mg)和乙腈(1.5ml)。45℃下搅拌48h。蒸干溶剂后加入甲醇，过滤，蒸干甲醇，柱色谱分离得到白色固体化合物xiii(150mg，0.16mmol，79.4％)。1hnmr(meoh-d4,400mhz)δ：7.99(d,j＝7.6hz,1h),7.88(s,1h),6.80(dd,j＝11.9,5.0hz,1h),6.01(d,j＝7.2hz,1h),5.37(dt,j＝54.0,4.7hz,1h),4.79(dd,j＝20.9,4.7hz,1h),4.70(s,1h),4.59(1h,s),4.51(1h,d,j＝10.6hz),4.40～4.18(2h,m),3.65(3h,s),3.26～3.09(2h,m),3.06～2.92(m,2h),2.62(dd,j＝14.3,6.8hz,1h),2.30～2.18(m,2h),2.04(dd,j＝13.0,5.3hz,1h),1.92～1.81(m,2h),1.68(s,3h),1.26(3h,s),1.25(3h,s),1.11(s,3h),1.06(s,3h),1.04(s,3h),0.98(s,3h),0.97(s,3h)。
实施例2化合物vi的合成
合成路线如下：
化合物2的合成：1000ml三口瓶中，加入白桦脂醇(20.0g，45.2mmol)和丙酮(400ml)，然后在冰浴下滴加新制备的琼斯试剂(100ml)，在冰浴下继续反应30分钟后撤去冰浴，室温搅拌8h，加入甲醇(250ml)和水(250ml)终止反应，蒸干溶剂，加入水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，干燥浓缩，柱色谱分离，得到白色固体2(12.2g，26.8mmol，59.3％)。1hnmr(dmso-d6,400mhz)δ：12.08(s,1h),4.70(s,1h),4.57(s,1h),2.90～2.99(m,1h),2.46～2.30(m,2h),2.25(dt,j＝12.7,3.5hz,1h),2.15～2.08(m,1h),1.87～1.73(m,3h),1.65(s,3h),1.62(s,1h),1.54(t,j＝11.3hz,1h),1.48～1.00(m,15h),0.98(s,3h),0.95(s,3h),0.93(s,3h),0.90(s,3h),0.85(s,3h)。
化合物7的合成：在100ml圆底烧瓶中，将化合物2(4.54g，10mmol)溶于ch2cl2中，0℃滴加草酰氯(12.7g，100mmol)。反应完毕后蒸干溶剂，剩余物加入甲醇加热回流，tlc监测反应完毕后蒸干溶剂，加入乙酸乙酯萃取，水洗，有机相用na2so4干燥，柱色谱分离得到白色固体化合物7(3.36g，7.17mmol，71.7％)。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ：4.74(s,1h),4.61(s,1h),3.68(s,3h),3.05～2.94(m,1h),2.56～2.32(m,2h),2.31～2.17(m,2h),1.96～1.83(m,3h),1.77～1.66(m,1h),1.69(s,3h),1.65～1.52(m,6h),1.51～1.11(m,13h),1.07(s,3h),1.02(s,3h),0.97(s,3h),0.95(s,3h),0.92(s,3h).13cnmr(cdcl3,100mhz)δ：218.2,176.6,150.5,109.6,56.5,55.0,51.3,49.9,49.4,47.3,46.9,42.4,40.6,39.6,38.3,36.9,36.9,34.2,33.6,32.1,30.6,29.6,26.6,25.5,21.4,21.0,19.6,19.4,15.9,15.7,14.6。
化合物8的合成：在500ml圆底烧瓶中，加入化合物7(2.54g，5.42mmol)，和135ml四氢呋喃，室温搅拌加入1mol/l的kn(sime3)2的四氢呋喃溶液(40ml)，搅拌1h后加入1mol/lnet3b的四氢呋喃溶液(40ml)，继续搅拌1.5h，加入溴丙炔(4ml)。反应完毕后，加入3mol/l的hcl(3.0ml)淬灭反应，用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，将有机相用饱和碳酸氢钠溶液洗两次，na2so4干燥，柱色谱分离得到白色固体化合物8(2.32g，4.58mmol，84.5％)。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ：4.72(s,1h),4.58(s,1h),3.67(s,3h),3.05～2.94(m,1h),2.91～2.77(m,1h),2.60(ddd,j＝17.1,4.4,2.7hz,1h),2.33(dd,j＝12.9,5.6hz,1h),2.29～2.10(m,3h),1.94(t,j＝2.7hz,1h),1.91～1.83(m,1h),1.79～1.70(m,1h),1.67(s,3h),1.63～1.14(m,14h),1.17～1.01(m,3h),1.12(s,3h),1.06(s,3h),1.04(s,3h),0.98(s,3h),0.94(s,3h).13cnmr(cdcl3,100mhz)δ：215.8,176.6,150.4,109.7,83.0,69.4,57.3,56.5,51.3,50.1,49.4,48.3,47.0,46.6,42.5,41.2,40.8,38.2,37.4,36.9,34.1,32.1,30.5,29.6,25.4,25.0,21.6,21.2,19.5,19.3,16.1,14.6。
化合物9的合成：在500ml圆底烧瓶中，加入化合物8(1.88g，3.7mmol)、120ml甲醇和硼氢化钠(1.41g，37mmol)。室温搅拌5h后，加入3mol/l的hcl(60.0ml)，蒸干溶剂用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，将有机相用饱和碳酸氢钠溶液洗两次，将有机相干燥浓缩，柱色谱分离，用石油醚：乙酸乙酯＝20:1做洗脱剂，得到白色固体化合物9(1.53g，3.0mmol，81.1％)。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ：4.73(1h,d,j＝2hz),4.59(1h,s),3.70(3h,s),3.12(1h,d,j＝10.4hz),3.10(1h,m),2.60(ddd,j＝17.1,4.4,2.7hz,1h),2.42(1h,dt,j＝12.2,3.0hz),1.68(3h,s),0.97(3h,s),0.95(3h,s),0.91(3h,s),0.82(6h,s),0.79(3h,s)。
化合物10的合成：化合物9(506mg，1mmol)溶于20mldmf，加入碘化锂(1.3g,10mmol)，加热回流48h。反应完毕后加酸水洗，乙酸乙酯萃取，蒸干溶剂，乙酸乙酯/石油醚＝1/2洗脱得到白色固体化合物10(385mg,0.78mmol,77.8％)。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ：4.73(1h,d,j＝2hz),4.59(1h,s),3.12(1h,d,j＝10.4hz),3.10(1h,m),2.60(1h,m),2.42(1h,dt,j＝12.2,3.0hz),1.68(3h,s),0.97(3h,s),0.95(3h,s),0.93(3h,s),0.84(6h,s),0.81(3h,s)。
化合物11的合成：化合物10(498mg，1mmol)溶于50ml吡啶中，加入2,2-二甲基琥珀酸酐(640mg,5mmol)，加热回流过夜。蒸干吡啶，乙酸乙酯萃取，稀盐酸洗涤，无水na2so4干燥，蒸干溶剂柱色谱分离得到白色固体化合物11(388mg，0.62mmol，62.3％)。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ：4.72(1h,s),4.60(1h,s),4.50(1h,d,j＝10.2hz),3.00(1h,m),2.38(1h,dt,j＝11.8,3.0hz),1.68(3h,s),1.28(3h,s),1.24(3h,s),0.97(3h,s),0.95(3h,s),0.91(3h,s),0.83(3h,s),0.80(3h,s)。
化合物vi的合成：化合物11(310mg,0.5mmol)、2’-脱氧-2’-氟-4’-叠氮胞苷(158mg，0.55mmol)、叔丁醇(10ml)、水(10ml)和dipea(120μl)。抽真空，氮气保护，加热至45℃。反应15分钟后，再加入cui(10mg)和乙腈(4ml)。45℃下搅拌48h。蒸干溶剂后加入甲醇，过滤，蒸干甲醇，柱色谱分离得到白色固体化合物vi(363mg，0.4mmol，80.0％)。1hnmr(meoh-d4,400mhz)δ：8.01(d,j＝7.6hz,1h),7.87(s,1h),6.81(dd,j＝11.9,5.0hz,1h),6.02(d,j＝7.2hz,1h),5.35(dt,j＝54.0,4.6hz,1h),4.79(dd,j＝20.9,4.7hz,1h),4.71(s,1h),4.59(1h,s),4.52(1h,d,j＝10.6hz),4.37～4.15(2h,m),3.24～3.10(2h,m),3.08～2.92(m,2h),2.63(dd,j＝14.5,6.6hz,1h),2.04(dd,j＝13.0,5.3hz,1h),1.68(s,3h),1.26(3h,s),1.25(3h,s),1.11(s,3h),1.05(s,3h),1.04(s,3h),1.00(s,3h),0.96(s,3h)。
实施例3化合物iv的合成
合成路径如下：
化合物2的合成：1000ml三口瓶中，加入白桦脂醇(20.0g，45.2mmol)和丙酮(400ml)，然后在冰浴下滴加新制备的琼斯试剂(100ml)，在冰浴下继续反应30分钟后撤去冰浴，室温搅拌8h，加入甲醇(250ml)和水(250ml)终止反应，蒸干溶剂，加入水，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，干燥浓缩，柱色谱分离，得到白色固体2(12.2g，26.8mmol，59.3％)。1hnmr(dmso-d6,400mhz)δ：12.08(s,1h),4.70(s,1h),4.57(s,1h),2.90～2.99(m,1h),2.46～2.30(m,2h),2.25(dt,j＝12.7,3.5hz,1h),2.15～2.08(m,1h),1.87～1.73(m,3h),1.65(s,3h),1.62(s,1h),1.54(t,j＝11.3hz,1h),1.48～1.00(m,15h),0.98(s,3h),0.95(s,3h),0.93(s,3h),0.90(s,3h),0.85(s,3h)。
化合物3的合成：在100ml圆底烧瓶中，将化合物2(454mg，1.0mmol)溶于ch2cl2(5ml)中，0℃加入edc(306mg,1.6mmol)和dmap(73mg,0.6mmol)，搅拌反应30min后，再加入l-亮氨酸甲酯盐酸盐(543mg,3mmol)和et3n(303mg,3mmol)，室温搅拌过夜，tlc监测反应完毕后水洗，有机相用na2so4干燥，柱色谱分离得到糖浆状化合物3(343mg，0.59mmol，58.9％)。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ：5.87(1h,d,j＝8.2hz),4.72(1h,s),4.64(1h,dt,j＝8.2,5.3hz),4.58(1h,s),3.73(3h,s),3.11(1h,m),2.45(1h,dt,j＝12.2,3.4hz),1.68(3h,s),0.96(6h,d,j＝7.2hz),0.95(3h,s),0.92(3h,s),0.84(6h,s),0.83(3h,s)。
化合物4的合成：在100ml圆底烧瓶中，加入化合物3(470mg，0.81mmol)，和20ml四氢呋喃，室温搅拌加入1mol/l的kn(sime3)2的四氢呋喃溶液(6ml)，搅拌1h后加入1mol/lnet3b的四氢呋喃溶液(6ml)，继续搅拌1.5h，加入溴丙炔(0.6ml)。反应完毕后，加入1mol/l的hcl(2.0ml)淬灭反应，用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，将有机相用饱和碳酸氢钠溶液洗两次，na2so4干燥，蒸干溶剂得到的残余物用甲醇溶解(20ml)，加入硼氢化钠(300mg,9mmol)。室温搅拌5h后加入3mol/l的hcl(15ml)淬灭反应，蒸干溶剂后用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，饱和碳酸氢钠溶液洗涤，无水na2so4干燥，柱色谱分离得到白色固体化合物4(340mg，0.55mmol，67.9％)。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ：5.88(1h,d,j＝8.2hz),4.73(1h,s),4.56-4.63(1h,m),4.59(1h,s),3.72(3h,s),3.15(1h,d,j＝9.6hz),3.10(1h,m),2.60(ddd,j＝17.1,4.4,2.7hz,1h),2.42(1h,dt,j＝12.2,3.0hz),1.68(3h,s),0.96(6h,d,j＝7.2hz),0.95(3h,s),0.91(3h,s),0.82(6h,s),0.79(3h,s)。
化合物4’的合成：化合物4(310mg,0.5mmol)溶于甲醇(50ml)和thf(25ml)中，冰浴下搅拌加入2mol/lkoh(10ml)，继续保持0℃搅拌3h。反应完毕后加入2mol/lhcl并用乙酸乙酯萃取，柱分离得到化合物4’(286mg，0.47mmol，94.2％)。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ：5.89(1h,d,j＝8.2hz),4.74(1h,s),4.54-4.64(1h,m),4.57(1h,s),3.13(1h,d,j＝9.8hz),3.10(1h,m),2.61(ddd,j＝17.1,4.4,2.7hz,1h),2.42(1h,dt,j＝12.2,3.0hz),1.68(3h,s),0.96(6h,d,j＝7.2hz),0.95(3h,s),0.93(3h,s),0.84(6h,s),0.80(3h,s)。
化合物5的合成：化合物4’(240mg，0.39mmol)溶于吡啶(20ml)中，加入4-甲氧基苯乙酸酐(630mg，2.0mmol)，加热回流过夜。蒸干吡啶，乙酸乙酯萃取，稀盐酸洗涤，无水na2so4干燥，蒸干溶剂柱色谱分离得到淡黄色化合物5(174mg，0.23mmol，58.2％)。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ：7.21(2h,d,j＝7.8hz),7.06(2h,d,j＝7.6hz),5.86(1h,d,j＝8.2hz),4.73(1h,s),4.56-4.63(1h,m),4.61(1h,s),4.45(1h,d,j＝10.4hz),3.61(3h,s),3.58(2h,s),3.00(1h,m),1.68(3h,s),0.96(6h,d,j＝7.2hz),0.95(3h,s),0.92(3h,s),0.86(3h,s),0.73(3h,s),0.67(3h,s)。
化合物iv的合成：在50ml圆底烧瓶中，加入化合物5(150mg，0.20mmol)、2’-脱氧-2’-氟-4’-叠氮胞苷(69mg，0.24mmol)、叔丁醇(5ml)、水(5.0ml)和dipea(50μl)。抽真空，氮气保护，加热至45℃。反应15分钟后，再加入cui(4.0mg)和乙腈(1.5ml)。45℃下搅拌48h。蒸干溶剂后加入甲醇，过滤，蒸干甲醇，柱色谱分离得到白色固体化合物iv(190mg，0.18mmol，90.7％)。1hnmr(meoh-d4,400mhz)δ：7.99(d,j＝7.6hz,1h),7.88(s,1h),7.18(2h,d,j＝7.8hz),7.00(2h,d,j＝7.6hz),6.80(dd,j＝11.9,5.0hz,1h),6.01(d,j＝7.2hz,1h),5.37(dt,j＝54.0,4.7hz,1h),4.79(dd,j＝20.9,4.7hz,1h),4.70(d,j＝2.0hz,1h),4.54-4.65(1h,m),4.59(1h,s),4.47(1h,d,j＝10.4hz),4.40～4.18(2h,m),3.63(3h,s),3.55(2h,s),3.06～2.92(m,2h),2.04(dd,j＝13.0,5.3hz,1h),1.92～1.81(m,2h),1.68(s,3h),1.11(s,3h),1.07(6h,d,j＝6.8hz),1.00(s,3h),0.95(s,3h),0.78(s,3h),0.72(s,3h)。
体外抗肿瘤实验
本实验用不同浓度的xiii、vi、iv药品分别作用于a549(肺癌)、sgc-7901(胃癌)、mcf-7(乳腺癌)和luc-7721(肝癌)细胞等不同种类的癌细胞72h，通过mtt法检测细胞生长抑制率，来检测三种药品对不同肿瘤细胞的抑制程度。
将xiii、vi、iv溶解于一定体积的dmso中，配成浓度为80mmol/l的母液4℃保存，使用的时候取母液稀释为一定倍数的溶液。
具体操作步骤如下：
(1)取处于对数生长期的a549、sgc-7901、mcf-7和luc-7721细胞，离心、重悬，调整细胞悬液密度至8×104cell/ml，接种于96孔培养板中，每孔加入100μl细胞悬液，然后放置细胞培养箱中常规培养。
(2)孵育24h后，显微镜下观察各孔细胞单层贴壁均匀生长，吸弃孔内原有培养基，实验组加入不同浓度的xiii、vi、iv溶液100μl，使三种化合物终浓度均分别为25、50、100、200、400μmol/l，每个浓度均设4个复孔；同时设空白组(只加入培养基不加细胞悬液)、阴性对照组(只加入细胞悬液)。
(3)放置培养箱培养72h后，每孔加入20μlmtt溶液，在培养箱中继续培养4h。然后小心弃去培养基，每孔加入150μldmso，至于摇床上37℃恒温震荡10min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪490nm波长下检测各孔吸光度od值。
计算样品对细胞的抑制作用，公式如下：
抑制率(％)＝(细胞对照孔od值－给药孔od值)/(细胞对照孔od值－空白孔od值)×100％
根据所计算的抑制率，求出各样品抑制细胞生长的半数抑制浓度ic50。
由表可以看出：一定剂量的xiii、vi、iv样品均对肺癌、胃癌、肝癌和乳腺癌细胞存在不同程度的抑制作用；在作用时间相同的情况下，随着样品剂量的增加，抑制率逐渐上升，对细胞的抑制作用表现为明显的剂量依赖效应；xiii对肺癌细胞的抑制作用相比肝癌、胃癌、乳腺癌细胞较为显著，ic50值较低；vi对肝癌、胃癌细胞的抑制作用相比乳腺癌、肺癌细胞较为显著，ic50值较低；iv对乳腺癌、胃癌细胞的抑制作用相比肺癌、肝癌细胞较为显著，ic50值较低。
具体见下表：
表1：xiii对各细胞的抑制作用
表2：vi对各细胞的抑制作用
表3：iv对各细胞的抑制作用
以上所述的仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明整体构思前提下，还可以作出若干改变和改进，这些也应该视为本发明的保护范围。