一种基于糖蜜废醪液提高单针藻油脂积累的方法与流程

本发明涉及一种基于糖蜜废醪液提高单针藻油脂积累的方法，属于生物柴油技术领域。

背景技术：

生物柴油提炼自动植物油，它是指以油料作物如大豆、油菜等，野生油料植物和工程微藻等水生植物油脂以及动物油脂、餐饮垃圾油等为原料油通过酯交换或热化学工艺制成的可代替石化柴油的再生性柴油燃料。生物柴油是生物质能的一种，其在物理性质上与石化柴油接近，但化学组成不同。

利用微藻制备生物柴油的传统方法，不仅生产成本高，油脂含量和油脂产率低，而且很难应用于大规模生产，本发明在微藻具有光合效率高，生长周期短等优势的基础上改变了传统的微藻培养方式，利用糖蜜废醪液作为基础培养基，既可以解决糖蜜废醪液污水处理的问题，又可以利用糖蜜废醪液中的营养成分培养微藻，同时又能提高微藻中油脂的积累。而在微藻中添加褪黑素后，可进一步促进微藻油脂积累。

技术实现要素：

本发明的目的是提供一种基于糖蜜废醪液联合褪黑素提高单针藻油脂积累的方法，该方法过程简单，生产成本较低，具体包括以下步骤：

（1）制备诱导培养基：将糖蜜废醪液稀释，作为培养单针藻monoraphidiumsp.fxy-10的诱导培养基，调节ph值为6.8-7.0，分装，灭菌。

（2）诱导藻细胞积累油脂：将培养好的种子接种到上述培养基，然后加入不同浓度的褪黑素，进行光照摇瓶培养。

（3）制备生物柴油：每天离心收集藻细胞，冻干后，研磨，然后利用有机溶剂提取单针藻内的油脂，制备得到生物柴油。

优选的，本发明步骤（1）中糖蜜废醪液稀释3200倍。

优选的，本发明培养基中褪黑素的浓度为10^-4~10^-1μmol/l，培养条件为：温度25℃，光照强度3500lux，摇床转速150r/min。

优选的，本发明所述步骤（3）中制备生物柴油的方法具体为：将藻细胞培养液离心收集，条件为3500r/min，离心10min，并以蒸馏水反复洗涤两次后离心冻干；添加冻干藻粉2倍质量石英砂研磨后用氯仿/甲醇（2:1，v/v）提取油脂，重复提取2次后收集提取液浓缩，上述提取油脂添硫酸-甲醇进行甲酯化制备得到生物柴油，硫酸与甲醇的体积比为3:97。

本发明的有益效果是：

（1）本发明利用褪黑素，降低了生产成本；糖蜜废醪液实现零排放，有利于保护环境，将环境污染处理和微藻的培养结合在一起，变废为宝。

（2）本发明与对照组相比，添加褪黑素的油脂含量提高到52.27%。

（3）本发明中单针藻能很好地在加了褪黑素的糖蜜废醪液培养基中生长，不但解决了糖蜜废醪液的处理问题，同时提高了油脂产率。

附图说明

图1为不同浓度褪黑素和胺酰酯作用下单针藻油脂含量的变化图。

具体实施方式

结合附图和具体实施例对本发明作进一步详细说明，但本发明保护范围并不限于所述内容。

对比例1

将糖蜜废醪液稀释3200倍，添加0mg/l的褪黑素，作为培养单针藻的诱导培养基，调节ph值在6.8-7.0之间；高温高压121℃灭菌20min，接入单针藻种子液，藻细胞初始接种量为1g/l，培养温度25℃，光照强度3500lux,摇床转速150r/min，进行光照摇瓶培养。

结果：该对照组油脂含量为39.2%。

对比例2

（1）制备诱导培养基：将糖蜜废醪液稀释3200倍，作为单针藻monoraphidiumsp.fxy-10的诱导培养基，然后加入胺酰酯，调节ph值在6.8-7.0之间，分装、灭菌条件为121℃、20min；胺酰酯浓度分别为100μmol/l、10μmol/l、1μmol/l、10^-1μmol/l，10^-2μmol/l。

（2）诱导藻细胞积累油脂：将利用兼养bg-11培养好的单针藻种子接种到上述培养基，进行光照摇瓶培养；培养条件为：温度25℃，光照强度3500lux，摇床转速150r/min。

（3）制备生物柴油：每天离心收集藻细胞，将藻细胞培养液离心收集，条件为3500r/min，离心10min，并以蒸馏水反复洗涤两次后离心冻干；添加冻干藻粉2倍质量石英砂研磨，然后用氯仿与甲醇的混合溶液（氯仿、甲醇体积比为2:1）提取油脂，重复提取2次后收集提取液浓缩，提取的油脂添加硫酸-甲醇进行甲酯化制备得到生物柴油，硫酸与甲醇的体积比为3:97。

表2不同胺酰酯(da-6)浓度条件下油脂含量

实施例1

（1）制备诱导培养基：将糖蜜废醪液稀释3200倍，作为单针藻monoraphidiumsp.fxy-10的诱导培养基，然后加入褪黑素，调节ph值在6.8-7.0之间，分装、灭菌条件为121℃、20min；褪黑素浓度分别为10^-1μmol/l、10^-2μmol/l、10^-3μmol/l、10^-4μmol/l。

（2）诱导藻细胞积累油脂：将利用兼养bg-11培养好的单针藻种子接种到上述培养基，进行光照摇瓶培养；培养条件为：温度25℃，光照强度3500lux，摇床转速150r/min。

（3）制备生物柴油：每天离心收集藻细胞，将藻细胞培养液离心收集，条件为3500r/min，离心10min，并以蒸馏水反复洗涤两次后离心冻干；添加冻干藻粉2倍质量石英砂研磨，然后用氯仿与甲醇的混合溶液（氯仿、甲醇体积比为2:1）提取油脂，重复提取2次后收集提取液浓缩，提取的油脂添加硫酸-甲醇进行甲酯化制备得到生物柴油，硫酸与甲醇的体积比为3:97。

表1不同褪黑素(mt)浓度条件下油脂含量

结果表明：以糖蜜废醪液为基础培养基诱导单针藻积累油脂，添加外源褪黑素可以提高单针藻的油脂产率，而添加外源胺酰酯没有显著效果，当褪黑素浓度为10^-3μmol/l时，单针藻的油脂含量比对照组提高了19.83%；说明在糖蜜废醪液中添加褪黑素能有效提高单针藻的油脂积累。

技术特征：

技术总结
本发明公开一种基于糖蜜废醪液提高单针藻油脂积累的方法，属于生物柴油技术领域。本发明所述方法为将糖蜜废醪液稀释，作为培养单针藻Monoraphidium sp.FXY‑10的诱导培养基，调节pH值为6.8‑7.0，分装，灭菌；将培养好的种子接种到上述培养基，然后加入不同浓度的褪黑素，进行光照摇瓶培养；每天离心收集藻细胞，冻干后，研磨，然后利用有机溶剂提取单针藻内的油脂，制备得到生物柴油。本发明操作简单易行、降低生产成本，能利用糖蜜废醪液在诱导剂的作用下有效提高油脂积累，同时也能减少糖蜜废醪液处理过程中的环境污染。

技术研发人员：余旭亚;李喜明
受保护的技术使用者：昆明理工大学
技术研发日：2018.05.30
技术公布日：2018.11.06