本发明涉及氨基密啶类化合物及其制备方法和应用，特别涉及抑制、调节和/或调控egfr激酶的信号转导的化合物、它们的制备方法、含有它们的药物组合物以及它们的应用。
背景技术：
蛋白激酶是信号传导途径的酶组分，它催化末端磷酸盐从atp迁移至蛋白的酪氨酸、丝氨酸和/或苏氨酸残基的羟基。因此，抑制蛋白激酶功能的化合物是评估蛋白激酶活动的生理学结果的有价值的工具。哺乳动物的正常或突变蛋白激酶的过表达或不适当表达已经成为广泛研究的主题，并已经被证实在许多疾病，包括糖尿病、血管生成、银屑病、再狭窄、眼病、精神分裂症、类风湿性关节炎、动脉粥样硬化、心血管疾病和癌症的发展中起到重要作用。蛋白激酶抑制剂在治疗人和动物疾病方面具有特别的用途。
实现细胞调节的主要机制之一是通过跨膜胞外信号转导来进行的，该转导转而调控细胞内的生化通路。蛋白质磷酸化代表了一种过程，通过该过程胞内信号在分子与分子间传播，最终导致细胞应答。蛋白质磷酸化主要发生在丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸残基上，因此已经按照其磷酸化位点的特异性对蛋白激酶进行了分类，即丝氨酸/苏氨酸激酶和酪氨酸激酶。由于磷酸化是细胞内的普遍过程并且由于细胞表型主要受这些通路活性的影响，所以目前认为许多疾病状态和/或疾病可归因于激酶级联分子成分的异常活化或功能突变。
egfr是受体酪氨酸激酶erbb受体家族成员。egfr的过度表达(上调)或过度活动已经与许多癌症相关，包括头颈部癌，卵巢癌，宫颈癌，膀胱癌，食道癌，胃癌，乳腺癌，子宫内膜癌，结肠直肠癌，非小细胞肺癌，和胶质母细胞瘤。
egfr作为一种致癌基因产生了针对egfr小分子抑制剂的抗癌疗法。例如针对非小细胞肺癌(nsclc)的吉非替尼(易瑞沙)和厄洛替尼(特罗凯)。然而，许多患者治疗一段时间后就会产生耐药性，其中一个主要原因是t790m突变。t790m增加了egfr对atp的亲和力，这是最常见的可逆酪氨酸激酶抑制剂的获得性耐药性的机制。不可逆的egfr抑制剂能够共价烷基化位于活性中心的半胱氨酸残基(cys797)从而克服可逆抑制剂的这种获得性耐药性。
在50％-80％的nsclc病人中，他们的egfr都过度表达，从而引起癌变。已经应用于临床的第一代egfr抑制剂如易瑞沙、特罗凯等，它们对于nsclc的治疗取得了很大成功。但临床有非常明显的皮疹和腹泻等副作用，而且在使用一年后，患者对药物出现耐药性。临床数据显示，大约有50％的患者获得性耐药源于t790m位点的突变。第二代抑制剂如阿法替尼，与egfr的结合活性更强，但对t790m突变体的选择性差，药物无法在体内达到其有效浓度。
为了更好的解决第一代抑制剂的耐药问题及第二代抑制剂的选择性问题，开发选择性抑制t790m的第三代抑制剂具有重要意义。
技术实现要素：
本发明提供了一种较高egfrt790m选择抑制性的新型氨基嘧啶类化合物，具有如下式i所示的结构，
其中
r1为氢原子或
r2为c1-6烷基或or8，r8为氢原子，c1-8烷基，卤代c1-8烷基，c3-8环烷基，卤代c3-8环烷基，c3-7环烷基-c1-6烷基，取代或未取代含有1-2个选自n、o和s中的杂原子的4-7元杂环基，取代或未取代含有1-2个选自n、o和s中的杂原子的4-7元杂环基-c1-8烷基；
x为化学键、o、s、co、nr3或cr3，其中r3为氢，c1-6烷基，卤代c1-6烷基，c3-8环烷基，卤代c3-8环烷基，c1-6烷氧基-c1-6烷基，c1-8烷基-co或4-6元杂环基；
r4为c1-6烷基，c3-6环烷基，4-7元杂环基或4-7元双环桥杂环基，它们可以任选地被1-3个独立地选自下组的取代基所取代：c1-6烷基，卤代c1-6烷基，c1-6烷氧基，卤代c1-6烷氧基，c3-6环烷基，卤代c3-6环烷基，c3-6环烷氧基，卤代c3-6环烷氧基，c1-6烷氧基-c1-6烷基，羟基-c1-6烷基，氨基-c1-6烷基，c1-6烷基-氨基-c1-6烷基，卤素，羟基，氰基，氰基-c1-8烷基，氨基，c1-6烷基-氨基，二(c1-6烷基)-氨基，c3-6环烷基-氨基，c1-6烷基羰基，c1-6烷基-氨基-酰基，二(c1-6烷基)-氨基-酰基，c3-6环烷基-氨基-酰基，c1-6酰基-氨基，取代或未取代的杂环基，取代或未取代的杂环基-烷基，其中所述取代基可选择地和它们所连接的碳原子一起形成环；
r5为由两个环形成的并环，选自
所述的并环非必需地由1-3个取代基所取代，所述的取代基为c1-6烷基，卤代c1-6烷基，c1-6烷氧基，卤代c1-6烷氧基，c3-6环烷基，卤代c3-6环烷基，c3-6环烷氧基，卤代c3-6环烷氧基，c1-6烷氧基-c1-6烷基，羟基-c1-6烷基，氨基-c1-6烷基，c1-6烷基-氨基-c1-6烷基，卤素，羟基，氰基，氰基-c1-8烷基，氨基，c1-6烷基-氨基，二(c1-6烷基)-氨基，c3-6环烷基-氨基，c1-6烷基-氨基-酰基，二(c1-6烷基)-氨基-酰基，c3-6环烷基-氨基-酰基，c1-6酰基-氨基，取代或未取代的杂环基，取代或未取代的杂环基-烷基，其中所述取代基可选择地和它们所连接的碳原子一起形成环；
r6为氢，卤素，羟基，腈基，c1-3烷基，卤代c1-3烷基，c3-6环烷基，卤代c3-6环烷基，c1-3烷氧基，卤代c1-3烷氧基，c3-6环烷氧基，卤代c3-6环烷氧基；
z1为c-r7，z2为n，或者z1为n，z2为c-r7(即其中z1和z2不同时为n)，其中r7为氢，卤素，腈基，c1-3烷基，卤代c1-3烷基，c3-6环烷基，卤代c3-6环烷基。
在某些实施方式中，r2为or8，r8为c1-5烷基，卤代c1-5烷基，c3-7环烷基，卤代c3-7环烷基或c3-7环烷基-甲基；优选地，r2为or8，r8为甲基，乙基，正丙基，异丙基，环丙基，二氟甲基，三氟甲基，环丁基，或环丙基甲基；
在某些实施方式中，x为化学键或nr3，其中r3为氢，甲基，乙基、甲氧基乙基；
在某些实施方式中，r4为c1-3烷基，c3-6环烷基，包含1-2个选自n、o和s的杂原子的4-7元杂环基或4-7元双环桥杂环基，它们可以任选地被1-3个独立地选自下组的取代基所取代：c1-6烷基，卤代c1-6烷基，c1-6烷氧基，卤代c1-6烷氧基，c3-6环烷基，卤代c3-6环烷基，c3-6环烷氧基，卤代c3-6环烷氧基，c1-6烷氧基-c1-6烷基，羟基-c1-6烷基，氨基-c1-6烷基，c1-6烷基-氨基-c1-6烷基，卤素，羟基，氰基，氰基-c1-8烷基，氨基，c1-6烷基-氨基，二(c1-6烷基)-氨基，c3-6环烷基-氨基，c1-6烷基羰基，c1-6烷基-氨基-酰基，二(c1-6烷基)-氨基-酰基，c3-6环烷基-氨基-酰基，c1-6酰基-氨基，取代或未取代的4-7元杂环基；
优选地，r4选自下列基团：
在某些实施方式中，r5选自下列基团：
在某些实施方式中，r6为氢，卤素，羟基，腈基，c1-3烷基，卤代c1-3烷基，c1-3烷氧基，卤代c1-3烷氧基。
在某些实施方式中，z1为c-r7，z2为n，或者z1为n，z2为c-r7，其中r7为氢。
在某些具体实施方案中，在式i中：
r1为氢原子；
r2为or8，r8为c1-5烷基，卤代c1-5烷基，c3-7环烷基，卤代c3-7环烷基或c3-7环烷基-甲基；
x为化学键或nr3，其中r3为氢，c1-6烷基(例如甲基，乙基)、甲氧基乙基；
r4为c1-3烷基，c3-6环烷基，包含1-2个选自n、o和s的杂原子的4-7元杂环基或4-7元双环桥杂环基，它们可以任选地被1-3个独立地选自下组的取代基所取代：c1-6烷基，卤代c1-6烷基，c1-6烷氧基，卤代c1-6烷氧基，c3-6环烷基，卤代c3-6环烷基，c3-6环烷氧基，卤代c3-6环烷氧基，c1-6烷氧基-c1-6烷基，羟基-c1-6烷基，氨基-c1-6烷基，c1-6烷基-氨基-c1-6烷基，卤素，羟基，氰基，氰基-c1-8烷基，氨基，c1-6烷基-氨基，二(c1-6烷基)-氨基，c3-6环烷基-氨基，c1-6烷基羰基，c1-6烷基-氨基-酰基，二(c1-6烷基)-氨基-酰基，c3-6环烷基-氨基-酰基，c1-6酰基-氨基，取代或未取代的4-7元杂环基；
r5为由两个环形成的并环，选自
所述的并环非必需地由1-3个取代基所取代，所述的取代基为c1-6烷基，卤代c1-6烷基，c1-6烷氧基，卤代c1-6烷氧基，c3-6环烷基，卤代c3-6环烷基，c3-6环烷氧基，卤代c3-6环烷氧基，c1-6烷氧基-c1-6烷基，羟基-c1-6烷基，氨基-c1-6烷基，c1-6烷基-氨基-c1-6烷基，卤素，羟基，氰基，氰基-c1-8烷基，氨基，c1-6烷基-氨基，二(c1-6烷基)-氨基，c3-6环烷基-氨基，c1-6烷基-氨基-酰基，二(c1-6烷基)-氨基-酰基，c3-6环烷基-氨基-酰基，c1-6酰基-氨基，取代或未取代的杂环基，取代或未取代的杂环基-烷基，其中所述取代基可选择地和它们所连接的碳原子一起形成环；
r6为氢，卤素，羟基，腈基，c1-3烷基，卤代c1-3烷基，c1-3烷氧基，卤代c1-3烷氧基；
z1为c-r7，z2为n，或者z1为n，z2为c-r7，其中r7为氢。
在另一些具体实施方案中，在式i中：
r1为氢原子；
r2为or8，r8为甲基，乙基，正丙基，异丙基，环丙基，二氟甲基，三氟甲基，环丁基，环丙基甲基；
x为化学键或nr3，其中r3为氢，c1-6烷基(例如甲基，乙基)、甲氧基乙基；
r4选自下列基团：
r5选自下列基团：
r6为氢，卤素；
z1为c-r7，z2为n，或者z1为n，z2为c-r7，其中r7为氢。
在又一些具体实施方案中，在式i中：
r1为氢原子；
r2为or8，r8为甲基，乙基，二氟甲基；
x为化学键或nr3，其中r3为氢，c1-6烷基(例如甲基，乙基)；
r4选自下列基团：
r5选自下列基团：
r6为氢或卤素；
z1为c-r7，z2为n，或者z1为n，z2为c-r7，其中r7为氢。
在某些实施方式中，本申请提供了包含上述化合物以及药学上可接受的载体或赋形剂的药物组合物。在某些实施方式中，药物组合物为片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、散剂、栓剂、注射剂、溶液剂、混悬剂、膏剂、贴剂、洗剂、滴剂、擦剂、喷雾剂。
在某些实施方式中，本申请提供了包含上述化合物和/或药物组合物在制备抗肿瘤药物中的应用。在某些实施方式中，所述抗肿瘤药物应用于以下病症：头颈部癌，黑色素瘤，膀胱癌，食道癌，间变性大细胞淋巴瘤，肾细胞癌，乳腺癌，结肠直肠癌，卵巢癌，宫颈癌，胰腺癌，胶质瘤，胶质母细胞瘤，前列腺癌，白血病，淋巴瘤，非霍奇金淋巴瘤，胃癌，肺癌，肝细胞癌，胃肠道基质瘤，甲状腺癌，胆管癌，子宫内膜癌，多发性骨髓瘤或间皮瘤。
在某些实施方式中，本申请提供了治疗主体中肿瘤的方法，包括向所述主体给予有效量的上述化合物或药物组合物，所述的主体优选哺乳动物，所述哺乳动物优选为人。
在某些实施方式中，给药方式包括口腔、粘膜、舌下、眼部、局部、肠道外、直肠、脑池、阴道、腹膜、膀胱、鼻部给药。
在某些实施方式中，所述肿瘤包括：头颈部癌，黑色素瘤，膀胱癌，食道癌，间变性大细胞淋巴瘤，肾细胞癌，乳腺癌，结肠直肠癌，卵巢癌，宫颈癌，胰腺癌，胶质瘤，胶质母细胞瘤，前列腺癌，白血病，淋巴瘤，非霍奇金淋巴瘤，胃癌，肺癌，肝细胞癌，胃肠道基质瘤，甲状腺癌，胆管癌，子宫内膜癌，多发性骨髓瘤或间皮瘤。
在某些实施方式中，本申请提供了一种制备式i化合物的方法，包括使化合物1与化合物m在碱性条件下反应，形成化合物2，然后再使化合物2与化合物3在酸性条件下反应形成式i化合物的步骤；
其中r1、r2、r4、r5、r6、x、z1和z2如前述所定义，
优选地，所述碱为碳酸钠或碳酸氢钠；
优选地，所述酸为甲磺酸或对甲苯磺酸；
在某些实施方式中，所述制备式i化合物的方法包括如下反应步骤：
(1)使化合物1与化合物m在碱性条件下反应，形成化合物2；
(2)使化合物2与化合物4在酸性条件下反应形成化合物5；
(3)使化合物5与r4-x-h在碱性条件下反应形成化合物6；
(4)将化合物6还原为化合物7；
(5)使化合物7与化合物8反应，形成式i所示的化合物；
其中r1、r2、r4、r5、r6、x、z1和z2如前述所定义。
优选地，在步骤(1)中，所述碱为碳酸钠或碳酸氢钠；
优选地，在步骤(2)中，所述酸为甲磺酸或对甲苯磺酸；
优选地，在步骤(3)中，所述碱选自二异丙基乙胺，碳酸钠和三乙胺。
本发明的其它特点和优势可见下面的详细叙述。以下实施例和具体实施方式旨在清楚说明本发明的技术方案及其技术效果和优势，并非限制本发明的范围。
作为egfr激酶抑制剂的化合物的结构
本发明涉及式i化合物或者其药学上可接受的盐、立体异构体、前药分子或溶剂合物
其中
r1为氢原子或
r2为c1-6烷基或or8，r8为氢原子，c1-8烷基，卤代c1-8烷基，c3-8环烷基，卤代c3-8环烷基，c3-7环烷基-c1-6烷基，取代或未取代含有1-2个选自n、o和s中的杂原子的4-7元杂环基，取代或未取代含有1-2个选自n、o和s中的杂原子的4-7元杂环基-c1-8烷基；
x为化学键、o、s、co、nr3或cr3，其中r3为氢，c1-6烷基，卤代c1-6烷基，c3-8环烷基，卤代c3-8环烷基，c1-6烷氧基-c1-6烷基，c1-8烷基-co或4-6元杂环基；
r4为c1-6烷基，c3-6环烷基，4-7元杂环基或4-7元双环桥杂环基，它们可以任选地被1-3个独立地选自下组的取代基所取代：c1-6烷基，卤代c1-6烷基，c1-6烷氧基，卤代c1-6烷氧基，c3-6环烷基，卤代c3-6环烷基，c3-6环烷氧基，卤代c3-6环烷氧基，c1-6烷氧基-c1-6烷基，羟基-c1-6烷基，氨基-c1-6烷基，c1-6烷基-氨基-c1-6烷基，卤素，羟基，氰基，氰基-c1-8烷基，氨基，c1-6烷基-氨基，二(c1-6烷基)-氨基，c3-6环烷基-氨基，c1-6烷基羰基，c1-6烷基-氨基-酰基，二(c1-6烷基)-氨基-酰基，c3-6环烷基-氨基-酰基，c1-6酰基-氨基，取代或未取代的杂环基，取代或未取代的杂环基-烷基，其中所述取代基可选择地和它们所连接的碳原子一起形成环；
r5为由两个环形成的并环，选自
所述的并环非必需地由1-3个取代基所取代，所述的取代基为c1-6烷基，卤代c1-6烷基，c1-6烷氧基，卤代c1-6烷氧基，c3-6环烷基，卤代c3-6环烷基，c3-6环烷氧基，卤代c3-6环烷氧基，c1-6烷氧基-c1-6烷基，羟基-c1-6烷基，氨基-c1-6烷基，c1-6烷基-氨基-c1-6烷基，卤素，羟基，氰基，氰基-c1-8烷基，氨基，c1-6烷基-氨基，二(c1-6烷基)-氨基，c3-6环烷基-氨基，c1-6烷基-氨基-酰基，二(c1-6烷基)-氨基-酰基，c3-6环烷基-氨基-酰基，c1-6酰基-氨基，取代或未取代的杂环基，取代或未取代的杂环基-烷基，其中所述取代基可选择地和它们所连接的碳原子一起形成环；
r6为氢，卤素，羟基，腈基，c1-3烷基，卤代c1-3烷基，c3-6环烷基，卤代c3-6环烷基，c1-3烷氧基，卤代c1-3烷氧基，c3-6环烷氧基，卤代c3-6环烷氧基；
z1为c-r7，z2为n，或者z1为n，z2为c-r7(即其中z1和z2不同时为n)，其中r7为氢，卤素，腈基，c1-3烷基，卤代c1-3烷基，c3-6环烷基，卤代c3-6环烷基。
在某些实施方式中，r2为or8，r8为c1-5烷基，卤代c1-5烷基，c3-7环烷基，卤代c3-7环烷基或c3-7环烷基-甲基；优选地，r2为or8，r8为甲基，乙基，正丙基，异丙基，环丙基，二氟甲基，三氟甲基，环丁基，或环丙基甲基。
在某些实施方式中，x为化学键或nr3，其中r3为氢，甲基，乙基，甲氧基乙基。
在某些实施方式中，r4为c1-3烷基，c3-6环烷基，包含1-2个选自n、o和s的杂原子的4-7元杂环基或4-7元双环桥杂环基，它们可以任选地被1-3个独立地选自下组的取代基所取代：c1-6烷基，卤代c1-6烷基，c1-6烷氧基，卤代c1-6烷氧基，c3-6环烷基，卤代c3-6环烷基，c3-6环烷氧基，卤代c3-6环烷氧基，c1-6烷氧基-c1-6烷基，羟基-c1-6烷基，氨基-c1-6烷基，c1-6烷基-氨基-c1-6烷基，卤素，羟基，氰基，氰基-c1-8烷基，氨基，c1-6烷基-氨基，二(c1-6烷基)-氨基，c3-6环烷基-氨基，c1-6烷基羰基，c1-6烷基-氨基-酰基，二(c1-6烷基)-氨基-酰基，c3-6环烷基-氨基-酰基，c1-6酰基-氨基，取代或未取代的4-7元杂环基；优选地，r4选自下列基团：
在某些实施方式中，r5为
在某些实施方式中r6为氢，卤素，羟基，腈基，c1-3烷基，卤代c1-3烷基，c1-3烷氧基，卤代c1-3烷氧基。
在某些实施方式中z1为c-r7，z2为n，或者z1为n，z2为c-r7，其中r7为氢。
除非另外指出，阐明下列定义以举例说明和定义用于描述本发明的各种术语的含义和范围。
碳氢基团中碳原子含量的最小值和最大值通过前缀表示，例如，前缀(ca-b)烷基表示任何含“a”至“b”个碳原子的烷基。因此，例如，(c1-6)烷基是指包含一至六个碳原子的烷基。所述的烷基是支链的或直链的。
本申请化合物中所述的原子包括其同位素，例如，氢可以是氘或氚。
“烷基”是指直链或带有支链的，单价的，饱和脂肪链，包括但不限于如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、己基以及其它类似基团。优选c1-8烷基。更优选c1-6烷基。更优选c1-4烷基。
“环烷基”是指饱和的单环或多环烷基，可能与其它基团组合。环烷基包括但不限于如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基。优选c3-8环烷基。更优选c3-6环烷基。更优选c3-4环烷基。
“烷氧基”是指与一氧原子键合的直链或带有支链的，单价的，饱和脂肪链，包括但不限于如甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基以及其它类似基团。优选c1-8烷氧基。更优选c1-6烷氧基。更优选c1-4烷氧基。
“卤素”是指氟，氯，溴和碘，优选氟和氯。
“卤代烷基”是指本文定义的烷基，其中一个或多个氢已经被相同或不同卤素替换。例举性的卤代烷基包括–ch2cl，–ch2cf3，-ch2ccl3，全氟烷基(例如，-cf3)等。
“杂环基”是指非芳族单环基团，其中带有选自n，o，或s的杂原子，其余环原子是c。杂环基部分的实例包括但不限于：哌啶基，哌嗪基，高哌嗪基,吡咯烷基，吡唑烷基，咪唑烷基，咪唑啉基，吗啡啉基，吡啶基，哒嗪基，嘧啶基，噁唑烷基，异噁唑烷基，噻唑烷基，异噻唑烷基，奎宁环基，噻二唑烷基，二氢呋喃基，四氢呋喃基，二氢吡喃基，四氢吡喃基，硫代吗啉基，硫代吗啉基亚砜，硫代吗啉基砜等。优选4－7元杂环基。更优选4－6元杂环基。
一个环状基团可通过多种方式与另一基团键合。如果未明确键合方式，则表示包括所有可能的方式。例如，“吡啶基”包括2-、3-、或4-吡啶基，而“噻吩基”包括2-或3-噻吩基。
“药用盐”指常规的酸加成盐或碱加成盐，其保留式i化合物的生物有效性和性质，其由适宜的非毒性有机或无机酸或有机或无机碱形成。酸加成盐的例子包括衍生自无机酸和衍生自有机酸的那些盐，所述无机酸例如氢氯酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸和硝酸，所述有机酸例如对-甲苯磺酸、水杨酸、甲磺酸、草酸、琥珀酸、柠檬酸、马来酸、乳酸、富马酸等。碱加成盐的例子包括衍生自铵、钾、钠和季铵氢氧化物的盐，例如氢氧化四甲铵。将药用化合物(即药物)化学改性成盐是药剂师公知的技术，用以获得化合物的改善的物理和化学稳定性、吸湿性、流动性和溶解性。
作为egfr激酶抑制剂的化合物的制备方法
本申请还涉及制备式i化合物的方法。本发明的化合物可以由任何常规手段制备。实施例中提供了合成这些化合物的合适的方法。在多步骤合成路线中，反应的次序在特定情况下是可以调整的。
在某些实施方式中，本申请提供了一种制备式i化合物的方法，包括使化合物1与化合物m在碱性条件下反应，形成化合物2，然后再使化合物2与化合物3在酸性条件下反应形成式i化合物的步骤；
其中r1、r2、r4、r5、r6、x、z1和z2如前述所定义。
优选地，所述碱为碳酸钠或碳酸氢钠；
优选地，所述酸为甲磺酸或对甲苯磺酸。
在某些实施方式中，所述制备式i化合物的方法包括如下反应步骤：
(1)使化合物1与化合物m在碱性条件下反应，形成化合物2；
(2)使化合物2与化合物4在酸性条件下反应形成化合物5；
(3)使化合物5与r4-x-h在碱性条件下反应形成化合物6；
(4)将化合物6还原为化合物7；
(5)使化合物7与化合物8反应，形成式i所示的化合物；
其中r1、r2、r4、r5、r6、x、z1和z2如前述所定义。
优选地，在步骤(1)中，所述碱为碳酸钠或碳酸氢钠；
优选地，在步骤(2)中，所述酸为甲磺酸或对甲苯磺酸；
优选地，在步骤(3)中，所述碱选自二异丙基乙胺，碳酸钠和三乙胺。
作为egfr激酶抑制剂的化合物药物组合物
本发明还提供了包括所述作为egfr激酶抑制剂的化合物以及药学上可接受的载体或赋形剂的药物组合物。
在此提到的术语“药学上可接受的载体”是指一种药学上可接受的物质，成分或者介质，比如液体或固体填充剂，稀释剂，赋形剂，溶剂或灌封材料，其参与将本发明涉及的化合物从某一位置，体液，组织，器官(内部或外部)，或身体部分装载或传递到另一位置，体液，器官(内部或外部)，或身体部分。药学上可接受的载体可以是介质，稀释剂，赋形剂或者其它没有过度毒性或者副作用并能用于接触动物组织的材料。典型的药学上可接受的载体包括糖类，淀粉，纤维素类，麦芽糖，黄蓍胶，明胶，林格氏溶液，海藻酸，生理盐水，缓冲剂等。
每种药学上可接受的载体应该与其它组成成分相容，例如与本发明中提供的结合物形成制剂，对生物活体组织或者器官没有过度毒性、刺激、过敏性反应、免疫原性或其它问题或并发症，且有较合理的效益风险比。
一些药学上可接受的载体的物质包括：(1)糖类，比如乳糖，葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，比如玉米淀粉和马铃薯淀粉；(3)纤维素和其衍生物，比如羧甲基纤维素钠，乙基纤维素，醋酸纤维素；(4)西黄蓍胶粉；(5)麦芽糖；(6)明胶；(7)滑石粉；(8)赋形剂，比如可可脂和栓剂蜡；(9)油类，比如花生油，棉籽油，红花油，芝麻油，橄榄油，玉米油和大豆油；(10)二醇类，比如丙二醇；(11)多元醇类，比如甘油，山梨醇，甘露醇和聚乙二醇；(12)脂类，比如油酸乙酯，月桂酸乙酯；(13)琼脂胶；(14)缓冲剂，比如氢氧化镁和氢氧化铝；(15)海藻酸；(16)灭菌无热原水；(17)生理盐水；(18)林格氏溶液；(19)醇类，比如乙醇和丙醇；(20)磷酸缓冲液；(21)其它在药物剂型中无毒性可相容的物质，比如丙酮。
药物组合物可能包括药学上可接受的辅料，以模拟生理条件，比如ph调节和缓冲剂，毒性调节剂等等，如乙酸钠，氯化钠，氯化钾，氯化钙，乳酸钠等。
药物成分可制成任何合适的剂型，如固体剂型(例如片剂，胶囊，粉末，颗粒等)和液体剂型(例如水溶液，乳浊液，酏剂，糖浆等)。药物组合物的制备方法工艺已众所周知，可根据常规工艺进行制备，比如在remington，thescienceandpracticeofpharmacy(gennaroed.20thedition,williams&wilkinspa,usa)(2000)中提供。
在某些实施方式中，本发明中提供的化合物或药物组合物可以被制成适于药物释放的剂型，通过注射途径给药(如皮下，静脉，肌肉，动脉，鞘膜，囊内，框内，心脏内，真皮内，腹膜内，经气管，表皮，关节内，囊下，蛛网膜下，脊柱内，胸骨内，和/或输液)和非注射途径给药(如口服，肠道，口腔，鼻，鼻内，粘膜，表皮，贴膏剂，真皮，眼药，肺部，舌下，直肠，阴道或表皮局部给药)。
合适的剂型包括(但不局限于)注射用途的剂型比如乳状液，溶液和混悬液，口服用途的剂型如片剂，胶囊，丸剂，糖衣丸，粉末和颗粒，局部用药或经皮肤吸收的剂型如喷剂，软膏，糊剂，乳霜，洗剂，凝胶，溶液，药物贴片和吸入剂，阴道或直肠给药的剂型如栓剂。这些剂型可根据化合物以及合适的赋形剂在合适条件下制备，制备方法及工艺众所周知，比如由remington:在thescienceandpracticeofpharmacy(gennaroed.20thedition,williams&wilkinspa,usa)(2000)提供。
在某些实施方式中，本申请提供了包含上述化合物以及药学上可接受的载体或赋形剂的药物组合物。在某些实施方式中，药物组合物为片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、散剂、栓剂、注射剂、溶液剂、混悬剂、膏剂、贴剂、洗剂、滴剂、擦剂、喷雾剂
作为egfr激酶抑制剂的化合物药物组合物的应用
本发明的另一个方面提供了上述化合物和/或药物组合物在制备药物以及治疗疾病中的应用。
在某些实施方式中，本发明提供了上述化合物和/或药物组合物在制备抗肿瘤的药物中的应用。
在某些实施方式中，本申请提供了包含上述化合物和/或药物组合物在制备抗肿瘤药物中的应用。在某些实施方式中，所述抗肿瘤药物应用于以下病症：头颈部癌，黑色素瘤，膀胱癌，食道癌，间变性大细胞淋巴瘤，肾细胞癌，乳腺癌，结肠直肠癌，卵巢癌，宫颈癌，胰腺癌，胶质瘤，胶质母细胞瘤，前列腺癌，白血病，淋巴瘤，非霍奇金淋巴瘤，胃癌，肺癌，肝细胞癌，胃肠道基质瘤，甲状腺癌，胆管癌，子宫内膜癌，多发性骨髓瘤或间皮瘤。
在某些实施方式中，本申请提供了一种治疗主体中肿瘤的方法，包括向所述主体给予有效量的上述化合物或药物组合物，所述的主体优选哺乳动物，所述哺乳动物优选人。在某些实施方式中，给药方式包括口腔、粘膜、舌下、眼部、局部、肠道外、直肠、脑池、阴道、腹膜、膀胱、鼻部给药。
本发明涉及的化合物或药物组合物可通过任何合适的途径进入生物体内，比如通过口服，静脉注射，鼻内，外用，肌注，真皮内注射，经皮给药或皮下途径。在某些实施方式中，本发明涉及的化合物或药物组合物的给药方式包括口腔、粘膜、舌下、眼部、局部、肠道外、直肠、脑池、阴道、腹膜、膀胱、鼻部给药。
在某些实施方式中，本发明涉及的结合物或药物组合物可以与第二活性物质同时进行施用，这样能在生物体内达到叠加甚至协同的作用。例如，本发明涉及的化合物可以和第二活性物质组合成一个药物组合物，或者以单独的组合物同时施用，或者以单独的组合物依次施用。能与本发明化合物同时施用、用于治疗癌症的第二活性物质包括但不局限于：氟尿嘧啶，阿霉素，柔红霉素，它莫西芬，亮丙瑞林，戈舍瑞林，氟他米特，尼鲁米特，非那雄胺，地塞米松，氨鲁米特，安吖啶、阿那曲唑，天冬酰胺酶，卡介苗，比卡鲁胺、博来霉素、临床、白消安，喜树碱，卡培他滨，卡铂，卡莫司汀，苯丁酸氮芥，顺铂，克拉屈滨，秋水仙碱，环磷酰胺、药物、环丙孕酮、阿糖胞苷、达卡巴嗪，放线菌素d，正定霉素，双烯雌酚、己烯雌酚、多西紫杉醇、阿霉素，亚德里亚霉素、表柔比星、雌二醇，雌氮芥、依托泊苷、依西美坦，非格司亭，氟达拉滨，氟氢可的松、氟尿嘧啶、氟甲睾酮、氟他米特，吉西他滨，染料木黄酮，戈舍瑞林，三苯氧胺、替尼泊苷、睾酮、二氯化二茂钛，拓普泰康，曲妥单抗、维甲酸、长春花碱、羟基脲，伊达比星，异环磷酰胺、伊马替尼、干扰素、伊立替康，伊立替康、来曲唑、甲酰四氢叶酸，喷司他丁，光神霉素、甲基苄肼、雷替曲塞卟菲尔，利妥昔链脲菌素，苏拉明，亮丙瑞林、左旋咪唑，环己亚硝脲、氮芥、甲羟孕酮、甲地孕酮，美法仑、巯嘌呤、巯乙磺酸钠、甲氨蝶呤、丝裂霉素、米托坦、米托蒽醌，尼鲁米特，诺考达唑、奥曲肽、铂、紫杉醇、帕米磷酸，硫鸟嘌呤，三胺硫磷、氯甲烷、拓扑替康二茂钛，曲妥单抗，维甲酸、长春花碱，长春新碱、长春地辛，长春瑞斌。
在某些实施方式中，本发明提供的结合物可与非化学方法同时使用进行癌症治疗。在某些实施方式中，本发明提供的结合物可与放射疗法同时进行。在某些实施方式中，本发明提供的结合物可与外科手术，肿瘤热治疗，超声聚焦疗法，冷冻疗法或以上几种疗法结合使用。
在某些实施方式中，本发明提供的结合物可与类固醇同时使用。合适的类固醇包括但不局限于：安西缩松、倍氯米松，倍他米松，布地奈德，氯泼尼松，氯倍他索，皮质甾酮，可的松，羟泼尼缩松，去羟米松，地塞米松，双氟拉松，双氟米松，二氟孕甾丁酯，甘草次酸，氟扎可松，氟米松，氟尼缩松，氟氯奈德，肤轻松醋酸酯，氟轻松醋酸酯，氟可丁丁酯，氟可龙，丙酮缩氟氢羟龙，醋酸氟培龙，醋酸氟泼尼定，氟泼尼龙，氟氢缩松，丙酸氟、醛基缩松，丙酸氯倍他索，哈西缩松，卤米松，氢化可的松，氯替泼诺碳酸乙酯，甲哌地强龙，甲羟松，甲泼尼松，6-甲氢化泼尼松，在任糠酸盐，帕拉米松，泼尼松龙，地塞米松，和25-二乙胺醋强的松龙。
在某些实施方式中，本发明提供的化合物可与免疫治疗剂同时使用。合适的免疫治疗剂包括：肿瘤细胞多药耐药性逆转剂(比如维拉帕米)，雷帕霉素，霉酚酸酯，沙利度胺，环磷酰胺，环孢霉素，和单克隆抗体类。
具体实施方式
实施例1
1,2,6-三甲基哌嗪三氟乙酸盐的制备
第一步：3,4,5-三甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯
氩气保护下，于100ml三口瓶中加入3,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(520mg，2.43mmol)和thf(10ml)，降温至0℃左右，加入nah(70mg，2.91mmol)，保温搅拌半小时，滴加ch3i(690mg，4.86mmol)的thf(1ml)溶液。滴毕保温搅拌1小时，升至室温继续搅拌反应。tlc监测反应，反应完毕后，加入50ml纯化水，30ml乙酸乙酯，搅拌分液，水相用乙酸乙酯(30ml×2)萃取2次，合并有机相，饱和食盐水(50ml×2)洗2次，无水硫酸钠干燥，过滤，母液减压浓缩得510mg产品。
第二步：1,2,6-三甲基哌嗪三氟乙酸盐
于100ml单口瓶中依次加入3,4,5-三甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯，二氯甲烷(10ml)和三氟乙酸(4ml)，室温搅拌反应，tlc监测反应，反应完毕后，将反应液减压浓缩得1,2,6-三甲基哌嗪三氟乙酸盐870mg(理论280mg)。
实施例2
顺式-1,2,6-三甲基哌嗪三氟乙酸盐的制备
第一步：顺式-3,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯
于100ml单口瓶中加入顺式-2,6-二甲基哌嗪(1.0g，8.76mmol)和二氯甲烷(20ml)，降温至0-5℃。加入三乙胺(2.22g，21.89mmol)，滴加(boc)2o(1.92g，8.76mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液，滴毕，升温到室温搅拌过夜。tlc监测反应，反应完后，将反应液减压浓缩，柱层析纯化，洗脱液：dcm/meoh＝30/1，收集产品减压浓缩得1.9g。
第二步：顺式-3,4,5-三甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯
以顺式-3,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯和ch3i为原料，制备过程参见实施例1第一步。
第三步：顺式-1,2,6-三甲基哌嗪三氟乙酸盐合成
以顺式-3,4,5-三甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯为原料，制备过程参见实施例1第二步。
实施例3
(1s,4s)-2-甲基-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷三氟乙酸盐的制备
以(1s,4s)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-羧酸叔丁酯和ch3i为起始原料，制备过程参见实施例1。
实施例4
1-乙基-2,6-二甲基哌嗪三氟乙酸盐的制备
第一步：4-乙基-3,5-二甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯
以3,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯和c2h5i为原料，dmf为溶剂，80℃反应7-8h。制备过程参见实施例1第一步。
第二步：1-乙基-2,6-二甲基哌嗪三氟乙酸盐
以4-乙基-3,5-二甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯原料，合成过程参见实施例1第二步。
实施例5
(s)-1-乙基-2-甲基哌嗪三氟乙酸盐的制备
以(s)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯和c2h5i为原料，制备过程与实施例1相同。
实施例6
(r)-1-乙基-2-甲基哌嗪三氟乙酸盐的制备
以(r)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯和c2h5i为原料，dmf为溶剂，制备过程参见实施例1。
实施例7
(s)-1,2-二甲基哌嗪三氟乙酸盐的制备
以(s)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯为原料，制备过程参见实施例1。
实施例8
(r)-1,2-二甲基哌嗪三氟乙酸盐的制备
以(r)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯为原料，制备过程参见实施例1。
实施例9
(r)-1,3-二甲基哌嗪的制备
氩气保护下，向250ml三口瓶中加入四氢铝锂(1.36g，36mmol)降温至0℃左右，滴加thf(100ml)，滴毕，然后滴加(r)-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(3.60g，18mmol)的thf(10ml)溶液，控制温度在-5～0℃，滴毕，升温至60℃回流反应2h。tlc监控反应。原料反应完全，降温至0℃左右，依次缓慢滴加水(1.37ml)，氢氧化钠水溶液(2n，1.37ml)，水(2.74ml)淬灭反应，搅拌5min，过滤，滤饼用15ml甲醇淋洗，滤液40℃减压浓缩，得2g无色油状物。粗品经柱层析纯化，以中性氧化铝为吸附剂，以dcm/meoh＝20/1洗脱，收集产品并浓缩，得1.3g无色油状物，收率：65％。
实施例10
n,1-二甲基吡咯烷-3-胺的制备
以3-(甲基氨基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯为原料，制备过程参见实施例9。
实施例11
n-甲基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙-1-胺的制备
第一步：叔丁基甲基(2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基)氨基甲酸酯
于100ml三口瓶中加入2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙-1-胺(1.0g，6.98mmol)和dcm(15ml)。冰浴降温至0℃。加入三乙胺(1.41g，13.96mmol)，搅拌0.5h，然后滴加(boc)2o(1.53g，6.98mmol)的dcm(5ml)溶液，滴毕后升温至室温搅拌反应。tlc监控反应。反应完毕后，将反应液减压浓缩干，粗品经柱层析纯化，洗脱液：dcm/meoh＝30/1，收集产品并减压浓缩得1.4g。
第二步：n-甲基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙-1-胺
以叔丁基甲基(2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基)氨基甲酸酯为原料，制备过程参见实施例9。
实施例12
n-甲基-2-(哌啶-1-基)乙胺三氟乙酸盐的制备
第一步：(2-(哌啶-1-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯
氩气保护下，于100ml单三口瓶中加入1-(2-氨基乙基)哌啶(500mg，3.84mmol)和thf(10ml)，降温至0-5℃，滴加(boc)2o(1.05g，4.81mmol)的thf(2ml)溶液，滴毕后升温到室温搅拌反应。tlc监测反应，反应完后，加入50ml纯化水，50ml乙酸乙酯，搅拌分液，水相用乙酸乙酯(40ml)萃取1次，合并有机相，饱和食盐水(50ml×2)洗2次，无水硫酸钠干燥30min，过滤，滤液浓缩得891mg产品。
第二步：甲基(2-(哌啶-1-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯
氩气保护下，于100ml三口瓶中加入dmf(10ml)和nah(220mg，5.50mmol)，冰盐浴降温至0-5℃左右，滴加(2-(哌啶-1-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(890mg，3.67mmo)的dmf(5ml)溶液，滴加完毕后保温搅拌1h。然后滴加ch3i(780mg，5.50mmol)的dmf(1ml)溶液。滴加完毕后保温搅拌1h，升温至室温反应1d。tlc监测反应，反应完全后加入50ml氯化铵水溶液，40ml乙酸乙酯，搅拌分液，水相用乙酸乙酯(30ml×2)萃取2次，合并有机相，饱和食盐水(50ml×2)洗2次，无水硫酸钠干燥30min，过滤，滤液减压浓缩得粗品。粗品经柱层析纯化，洗脱液：dcm/meoh＝30/1，收集产品，减压浓缩得140mg。
第三步：n-甲基-2-(哌啶-1-基)乙胺三氟乙酸盐
于100ml单口瓶中依次加入甲基(2-(哌啶-1-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(130mg，0.54mmol)，二氯甲烷(3ml)和三氟乙酸(2ml)，室温搅拌反应，tlc监测反应，反应完毕后，将反应液减压浓缩得148mgn-甲基-2-(哌啶-1-基)乙胺三氟乙酸盐，产品无需纯化，直接用于下一步合成。
实施例13
n-甲基-2-(吡咯烷-1-基)乙胺三氟乙酸盐的制备
以1-(2-氨基乙基)吡咯烷为原料，制备过程参见实施例12。
实施例14
n-甲基-2-吗啉乙-1-胺三氟乙酸盐的制备
第一步：(2-吗啉乙基)氨基甲酸叔丁酯
氩气保护下，于100ml单三口瓶中依次加入1-(2-氨基乙基)吗啉(500mg，3.84mmol)，二氧六环10ml，碳酸钠(814mg，7.68mmol)和水(2ml)，冰盐浴降温至0℃。滴加(boc)2o(992mg，4.55mmol)的二氧六环(1ml)溶液，滴毕后搅拌反应。tlc监测反应，反应完全后，加入纯化水(50ml)，乙酸乙酯(40ml)，搅拌分液，水相用乙酸乙酯(40ml)萃取1次，合并有机相，饱和食盐水(50ml×2)洗2次，无水硫酸钠干燥30min，过滤，滤液减压浓缩得885mg产品。
第二步：甲基(2-吗啉乙基)氨基甲酸叔丁酯
以(2-吗啉乙基)氨基甲酸叔丁酯为原料，制备过程参见实施例12第二步。
第三步：n-甲基-2-(吡咯烷-1-基)乙胺三氟乙酸盐
以甲基(2-吗啉乙基)氨基甲酸叔丁酯为原料，制备过程参见实施例12第三步。
实施例15
1-(四氢-2h-吡喃-4-基)哌嗪三氟乙酸盐的制备
第一步：4-(四氢-2h-吡喃-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
向100ml单口瓶中依次加入哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.0g，5.37mmol)，四氢-4h-吡喃-4-酮(1.07g，10.7mmol)和甲醇(20ml)，分批加入氰基硼氢化钠(507mg，8.06mmol)，加毕，加入0.5ml醋酸，室温搅拌反应6-7h。tlc监测反应。反应完全后，加入饱和碳酸氢钠水溶液淬灭反应，水相用乙酸乙酯(100ml×3)萃取3次，合并有机相，浓缩。粗品经柱层析纯化，用dcm/meoh＝20/1洗脱，收集产品并浓缩，得到1.5g无色油状物。
第二步：1-(四氢-2h-吡喃-4-基)哌嗪三氟乙酸盐
向100ml单口瓶中依次加入4-(四氢-2h-吡喃-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.5g，5.55mmol)和二氯甲烷(20ml)，搅拌下加入三氟乙酸(6ml)，加毕，室温搅拌反应2-3h。tlc监控反应。反应完全后，浓缩。加入甲基叔丁基醚(20ml)打浆5min，过滤，烘干，得1.75g白色固体。
实施例16
n1-(叔丁基)-n2-甲基乙烷-1,2-二胺的制备
以n-boc-(甲胺基)乙醛和叔丁胺为原料，三乙酰氧基硼氢化钠为还原剂，氯仿为溶剂，制备过程参见实施例15。
实施例17
1-甲基-4-(哌啶-4-基)哌嗪三氟乙酸盐的制备
以n-叔丁氧羰基-4-哌啶酮和1-甲基哌嗪为原料，制备过程参见实施例15。
实施例18
1-甲基-4,4'-联哌啶盐酸盐的制备
第一步：三氟甲磺酸1-甲基-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基酯
氩气保护下，向250ml三口瓶中加入thf(30ml)，降至-78℃，滴加lda(30.4ml，60.8mmol)，控制温度在-78℃，滴加1-甲基哌啶-4-酮(4.0ml，30.4mmol)的thf(10ml)溶液，滴毕，升温至-10℃反应30min。降至-78℃，滴加n,n-双(三氟甲磺酰基)苯胺(16.29g，45.63mmol)的thf(50ml)溶液，加毕，升至室温反应1-2h。tlc监控反应。反应完全后，反应液浓缩。粗品经柱层析纯化，用pe/ea＝5/1(中性氧化铝)洗脱，收集产品浓缩，得8.0g淡黄色油状物，收率：74.07％。
第二步：1'-甲基-1',2',3,3',6,6'-六氢-(4,4'-联吡啶)-1(2h)-甲酸叔丁酯
氩气保护下，向100ml单口瓶中依次加入三氟甲磺酸1-甲基-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基酯(1.0g，4.08mmol)，n-叔丁氧羰基-1,2,5,6-四氢吡啶-4-硼酸频哪醇酯(2.5g，8.1mmol)，碳酸钠(865mg，8.1mmol)，pd(pph3)4(940mg，0.81mmol)，甲苯(24ml)，乙醇(4ml)和水(4ml)，加毕，升至120℃反应7-8h。tlc监控反应。反应完全后，加入5ml水，水相用乙酸乙酯(100ml×3)萃取3次，合并有机相，浓缩。粗品经柱层析纯化，用dcm/meoh＝10/1洗脱，浓缩，得500mg淡黄色油状物，收率：44.24％。
第三步：1'-甲基-(4,4'-联哌啶)-1-羧酸叔丁酯
向100ml单口瓶中依次加入1'-甲基-1',2',3,3',6,6'-六氢-(4,4'-联吡啶)-1(2h)-甲酸叔丁酯(500mg，1.79mmol)和甲醇(20ml)，搅拌下加入pd/c(200mg，50％)，加毕，室温加氢搅拌反应14-16h。过滤，滤液浓缩，得450mg黄色油状物，收率：88.75％。
第四步：1-甲基-4,4'-联哌啶盐酸盐
向100ml单口瓶中依次加入1'-甲基-(4,4'-联哌啶)-1-羧酸叔丁酯(450mg，1.59mmol)和二氯甲烷(10ml)，搅拌下加入三氟乙酸(5ml)，加毕，室温搅拌反应2-3h。反应液浓缩。向剩余物中加入甲基叔丁基醚(20ml)和浓盐酸(2ml)，浓缩，得到380mg类白色固体，收率：93.82％。
实施例19
n，1-二甲基哌啶-3-胺的制备
以3-(甲基氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯为原料，制备过程参见实施例9。
实施例20
n，1'-二甲基-[1，4'-联哌啶]-4-胺的制备
第一步：(1'-甲基-[1，4'-联哌啶]-4-基)氨基甲酸叔丁酯
以哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯和1-甲基-哌啶-4-酮为原料，制备过程参见实施例15第一步。
第二步：n，1'-二甲基-[1，4'-联哌啶]-4-胺
以(1'-甲基-[1，4'-联哌啶]-4-基)氨基甲酸叔丁酯为原料，制备过程参见实施例9。
实施例21
n1，n1，n4-三甲基-环己烷-1，4-二胺的制备
以(4-氧代环己基)氨基甲酸叔丁酯和二甲胺盐酸盐为原料，制备过程参见实施例20。
实施例22
n-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己-1-胺
以(4-氧代环己基)氨基甲酸叔丁酯和1-甲基哌嗪为原料，制备过程参见实施例20。
实施例23
n-甲基-4-(1-甲基哌啶-4-基)环己烷-1-胺
第一步：(4-(1-甲基-1，2，3，6-四氢吡啶-4-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯
以n-叔丁氧羰基环己-3-烯氨基-4-硼酸频哪醇酯和1-甲基-1，2，3，6-四氢吡啶-4-基三氟甲磺酸酯为原料，制备过程参见实施例18第二步。
第二步：(4-(1-甲基哌啶-4-基)环己基)氨基甲酸叔丁酯
以(4-(1-甲基-1，2，3，6-四氢吡啶-4-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯为原料，制备过程参见实施例18第三步。
第三步：n-甲基-4-(1-甲基哌啶-4-基)环己烷-1-胺
以(4-(1-甲基哌啶-4-基)环己基)氨基甲酸叔丁酯为原料，制备过程参见实施例9。
实施例24
n-甲基-n-(2-(甲基氨基)乙基)乙酰胺三氟乙酸盐
第一步：甲基(2-(甲基氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯
于100ml的单口瓶中加入n1，n2-二甲基乙-1，2-二胺(4g，45mmol)，冰浴降温至0℃左右，然后滴加(boc)2o(5g，23mmol)的dcm(20ml)溶液，滴毕升温至25℃搅拌反应4h。减压浓缩，向剩余物中加饱和碳酸钠溶液，用乙酸乙酯(30ml×3)萃取3次，合并有机相，用饱和食盐水(20ml×3)洗3次，无水硫酸钠干燥30min，减压抽滤，滤液于45℃减压浓缩得粗品。粗品经柱层析纯化，用dcm/meoh＝30/1洗脱，收集产品，减压浓缩得2.1g黄色油状物。
第二步：甲基(2-(n-甲基乙酰氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯
于100ml的三口瓶中依次加入甲基(2-(甲基氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(2.15g，11.4mmol)，dcm(10ml)和三乙胺(2.3g，23mmol)，冰盐浴降温至-5-0℃，缓慢滴加醋酸酐(1.4g，14.7mmol)，滴毕，升温至25℃搅拌反应1h。向反应体系中加入水(20ml)，dcm(30ml×3)萃取3次，合并有机相，饱和食盐水(20ml×3)洗3次，无水硫酸钠干燥30min，减压抽滤，滤液于45℃减压浓缩得粗品。粗品经柱层析纯化，洗脱液：dcm/meoh＝50/1，收集产品，减压浓缩得2.3g黄色油状物。
第三步：n-甲基-n-(2-(甲基氨基)乙基)乙酰胺三氟乙酸盐
于100ml单口瓶中依次加入甲基(2-(n-甲基乙酰氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(2.4g，0.01mol)和dcm(10ml)，搅拌下滴加三氟乙酸(3.0g，0.26mol)，于25℃搅拌反应3h。反应液于50℃减压浓缩，加入无水乙醇(10ml×2)浓缩2次，向剩余物加入甲基叔丁基醚搅拌，过滤，滤饼减压干燥得3.1g绿色油状物。
实施例25
环丙基(2-(甲基氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯
第一步：n-(2-(环丙基氨基)乙基)邻苯二甲酰亚胺
于100ml单口瓶中依次加入n-(2-乙醛基)邻苯二甲酰亚胺，环丙胺(663mg，11.6mmol)和氯仿(30ml)，室温搅拌1h，加入三乙酰氧基硼氢化钠(6.73g，31.7mmol)，加毕室温反应5-6h。加入饱和碳酸氢钠溶液调ph>8，水相用dcm(100ml×3)萃取3次，合并有机相，减压浓缩的粗品。粗品经柱层析纯化，洗脱液：dcm/meoh＝50/1，收集产品，减压浓缩得1.0g淡黄色固体，收率：28.7％。
第二步：环丙基(2-(邻苯二甲酰亚胺-2-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯
于100ml单口瓶中依次加入n-(2-(环丙基氨基)乙基)邻苯二甲酰亚胺(1.0g，4.34mmol)，dcm(20ml)，dipea(616mg，4.78mmol)和(boc)2o(1.04g，4.78mmol)。25℃搅拌反应3-4h。向反应体系中加入水(50ml)，dcm(30ml×3)萃取3次，合并有机相，饱和食盐水(20ml×3)洗3次，无水硫酸钠干燥30min，减压抽滤，滤液于45℃减压浓缩得粗品，粗品经柱层析纯化，洗脱液：dcm/meoh＝50/1，收集产品，减压浓缩得1.0g白色固体，收率：69.9％。
第三步：(2-氨基乙基)(环丙基)氨基甲酸叔丁酯
于100ml的单口瓶中依次加环丙基(2-(邻苯二甲酰亚胺-2-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(1.0g，3.0mmol)和无水乙醇(100ml)，搅拌下加入水合肼(1.89g，30mmol)，25℃搅拌反应2-3h。过滤，滤液于45℃减压浓缩，得700mg黄色油状物，收率：115％。
第四步：环丙基(2-甲酰氨基乙基)氨基甲酸叔丁酯
于100ml单口瓶中依次加入(2-氨基乙基)(环丙基)氨基甲酸叔丁酯(650mg，3.25mmol)和甲酸乙酯(15ml)，25℃搅拌反应15h。减压浓缩得700mg黄色油状物，收率：94.5％。
第五步：环丙基(2-(甲基氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯
氩气保护下，于100ml单口瓶中依次加入环丙基(2-甲酰氨基乙基)氨基甲酸叔丁酯(700mg，3.07mmol)和四氢呋喃(15ml)，缓慢滴加bh3(me2s)(3ml)，65℃搅拌反应3h。降至室温，减压浓缩。向剩余物中加入无水乙醇(15ml)，碳酸钾(1.0g)，25℃搅拌反应15h。过滤，滤液减压浓缩，向剩余物中加入水(30ml)，水相用乙酸乙酯(50ml×3)萃取3次，合并有机相，减压浓缩得粗品。粗品经柱层析纯化，洗脱液：dcm/meoh＝30/1，收集产品，减压浓缩得210mg淡黄色油状物，收率：31.9％。
实施例26
2-(3，3-二氟吡咯烷-1-基)-n-甲基-1-胺
以甲基(2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯和3，3-二氟吡咯烷盐酸盐为原料，制备过程参见实施例15。
实施例27
n-甲基-n-(3-(甲基氨基)丙基)乙酰胺三氟乙酸盐
以n1，n3-二甲基丙烷-1，3-二胺为原料，制备过程参见实施例24。
实施例28
异丙基(2-(甲基氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯
第一步：2-(2-(异丙基氨基)乙基)邻苯二甲酰亚胺
于100ml三口瓶中依次加入n-异丙基乙二胺，邻苯二甲酸酐(4.5g，0.03mol)，对甲苯磺酸(500mg，3mmol)和甲苯(20ml)，升温至115℃回流反应4h。降至室温，加入饱和碳酸氢钠溶液调ph>8，用乙酸乙酯(30ml×3)萃取3次，合并有机相，饱和食盐水(20ml×3)洗3次，无水硫酸钠干燥30min，减压抽滤，滤液于45℃减压浓缩，得4.2g淡黄色油状物。
第二、三、四、五步：异丙基(2-(甲基氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯
以2-(2-(异丙基氨基)乙基)邻苯二甲酰亚胺为原料，制备过程参见实施例25第二、三、四、五步。
实施例29
n1，n1二异丙基-n2-甲基乙二胺
以n1，n1-二异丙基乙二胺为原料，制备过程参见实施例11。
实施例30
1-(1-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-2-甲基丙-2-基)哌嗪
第一步：4-(1-乙氧基-2-甲基-1-氧代丙-2-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
于100ml单口瓶中依次加入哌嗪-1-甲酸叔丁酯(2.5g，13.4mmol)，碳酸钾(2.78g，20.1mmol)和dmf(60ml)，搅拌10min，然后加入2-溴-2-甲基丙酸乙酯(2.86g，14.7mmol)，室温搅拌反应过夜。向反应体系中加入水(100ml)，水相用乙酸乙酯(100ml×3)萃取3次，合并有机相，减压浓缩得粗品。粗品经柱层析纯化，洗脱液：dcm/meoh＝30/1，收集产品，减压浓缩得1.0g黄色油状物，收率：30.3％。
第二步：4-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
氩气保护下，于100ml三口瓶中依次加入4-(1-乙氧基-2-甲基-1-氧代丙-2-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.22g，4.06mmol)和四氢呋喃(40ml)，冰浴降至0℃，滴加四氢铝锂(310mg，8.13mmol)的四氢呋喃溶液，0℃搅拌反应2h。加入饱和氯化铵水溶液，水相用dcm(100ml×2)萃取2次，合并有机相，减压浓缩得粗品。粗品经柱层析(中性氧化铝)纯化，洗脱液：dcm/meoh＝20/1，收集产品，减压浓缩得1.0g无色油状物，收率：96.2％。
第三步：(1-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-2-甲基丙烷-2-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
氩气保护下，于100ml单口瓶中依次加入4-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(780mg，3.02mmol)，咪唑(617mg，9.06mmol)和dmf(20ml)，搅拌溶解后，加入叔丁基二甲基氯硅烷(1.0g，6.04mmol)，油浴升温至80℃搅拌反应4-5h。降温至室温，反应体系中加入水(50ml)，水相用乙酸乙酯(80ml×3)萃取3次，合并有机相，减压浓缩得粗品。粗品经柱层析纯化，洗脱液：dcm/meoh＝20/1，收集产品，减压浓缩得1.4g淡黄色油状物，收率：125％。
第四步：1-(1-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-2-甲基丙-2-基)哌嗪
于100ml单口瓶中依次加入(1-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-2-甲基丙烷-2-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.4g，3.76mmol)和dcm(20ml)，降温至0℃，滴加三氟乙酸(5ml)，0℃搅拌反应4-5h。加入饱和碳酸钠水溶液调ph>7，水相用dcm(80ml×3)萃取3次，合并有机相，减压浓缩得1.0g淡黄色油状物，收率：98.0％。
实施例31
(2s，6r)-1，2，6三甲基-4-(哌啶-4-基)哌嗪三氟乙酸盐
以(2r，6s)-1，2，6-三甲基哌嗪三氟乙酸盐和n-叔丁氧羰基-4-哌啶酮为原料，制备过程参见实施例15。
实施例32
1-异丙基-4-(哌啶-4-基)哌嗪三氟乙酸盐
以1-异丙基哌嗪和n-叔丁氧羰基-4-哌啶酮为原料，制备过程参见实施例15。
实施例33
(2r，6s)-2，6-二甲基哌嗪-1-甲酸烯丙酯盐酸盐
第一步：4-(叔丁基)(2r，6s)-2，6-二甲基哌嗪-1，4-二甲酸1-烯丙酯
于100ml三口瓶中依次加入顺式-3，5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(2g，9.34mmol)，吡啶(1.47g，18.6mmol)和dcm(10ml)，降温至0℃，滴加氯甲酸烯丙酯(1.68g，14mmol)的dcm溶液，升温至室温反应过夜。反应体系加入水(20ml)，静置分层，有机相浓缩得粗品。粗品经柱层析纯化，洗脱剂：pe/ea＝5/1，收集产品，减压浓缩得1.2g无色油状物，收率：43.2％。
第二步：(2r，6s)-2，6-二甲基哌嗪-1-甲酸烯丙酯盐酸盐
于100ml单口瓶中依次加入4-(叔丁基)(2r，6s)-2，6-二甲基哌嗪-1，4-二甲酸1-烯丙酯(1.1g，3.69mmol)和dcm(10ml)，搅拌下加入三氟乙酸(5ml)，室温反应2-3h。减压浓缩。加入浓盐酸(1ml)和乙醇(5ml)，继续浓缩。向剩余物中加入异丙醚(10ml)搅拌10min，过滤，滤饼干燥得640mg黄色固体，收率：74.15％。
实施例34
n1-乙基-n1，n2-二甲基乙二胺盐酸盐
以n1，n2-二甲基乙二胺为原料，制备过程参见实施例2。
实施例35
顺式-2，6-二甲基-4-(哌啶-4-基)吗啉三氟乙酸盐
以顺式-2，6-二甲基吗啉和n-叔丁氧羰基-4-哌啶酮为原料，制备过程参见实施例15。
实施例36
3-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)-n-甲基丙-1-胺
以3-(甲基氨基)丙醇为原料，制备过程参见实施例30第三步。
实施例37
4-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)哌啶
以2-(哌啶-4-基)乙-1-醇为原料，制备过程参见实施例30第三步。
实施例38
(r)-n，1-二甲基吡咯烷-3-胺
以(r)-3-氨基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯为原料，制备过程参见实施例11。
实施例39
n-甲基-2-((3s，5r)-3，4，5-三甲基哌嗪-1-基)乙胺三氟乙酸盐
以n-boc-(甲胺基)乙醛和(2s，6r)-1，2，6三甲基哌嗪三氟乙酸盐为原料，制备过程参见实施例15。
实施例40
2-(4-环丙基哌嗪-1-基)-n-甲基乙胺盐酸盐
以n-boc-(甲胺基)乙醛和1-环丙基哌嗪为原料，制备过程参见实施例15。
实施例41
1-(4-(哌啶-4-基)哌嗪-1-基)乙-1-酮盐酸盐
以1-(哌嗪-1-基)乙酮和n-叔丁氧羰基-4-哌啶酮为原料，制备过程参见实施例15。
实施例42
以1-(哌嗪-1-基)乙酮和n-boc-(甲胺基)乙醛为原料，制备过程参见实施例15。
实施例43
1-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪
以1-甲基-4-哌啶酮和哌嗪-1-甲酸叔丁酯为原料，制备过程参见实施例15。
实施例44
2-(二甲基氨基)-1-(哌嗪-1-基)乙酮盐酸盐
第一步：n，n-二甲氨基乙酰氯盐酸盐
氩气保护下，于100ml三口瓶中依次加入n，n-二甲基甘氨酸(1g，10mmol)，乙腈(15ml)和dmf(5d)，室温滴加草酰氯(1.23g，10mmol)，油浴升温至30℃反应3h。降温至室温。反应液无需处理，直接用于下一步反应。
第二、三步：2-(二甲基氨基)-1-(哌嗪-1-基)乙酮盐酸盐
以n，n-二甲氨基乙酰氯盐酸盐和哌嗪-1-甲酸叔丁酯为原料，制备过程参见实施例33。
实施例45
n，n-二甲基-2-(哌嗪-1-基)乙酰胺三氟乙酸盐
第一步：4-(2-(二甲基氨基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
于100ml单口瓶中依次加入n，n-二甲基-2-氯乙酰胺(200g，1.65mmol)，thf(10ml)，三乙胺(334mg，2eq)和哌嗪-1-甲酸叔丁酯(337mg，1.1eq)，室温搅拌反应。tlc监控反应，反应完成后，将反应液减压浓缩得粗品，粗品经柱层析纯化，洗脱液：dcm/meoh＝20/1，收集产品，减压浓缩得410mg。
第二步：n，n-二甲基-2-(哌嗪-1-基)乙酰胺三氟乙酸盐
于100ml单口瓶中依次加入4-(2-(二甲基氨基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯，dcm(10ml)和三氟乙酸(2ml)，室温搅拌反应，tlc监测反应，反应完成后，将反应液减压浓缩干得600mg三氟乙酸盐。
实施例46
4-(二乙基氨基)哌啶
以二乙胺和n-叔丁氧羰基-4-哌啶酮为原料，制备过程参见实施例15。
实施例47
异丙基(2-(甲基氨基)乙基)氨基甲酸烯丙酯盐酸盐
第一步：(2-(异丙基氨基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯
以异丙胺和n-boc-(甲胺基)乙醛为原料，制备过程参见实施例15第一步。
第二、第三步：异丙基(2-(甲基氨基)乙基)氨基甲酸烯丙酯盐酸盐
以(2-(异丙基氨基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯和氯甲酸烯丙酯为原料，制备过程参见实施例33。
实施例48
n1-异丙基-n1，n2-二甲基乙二胺
第一步：甲基(2-(异丙基氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯
以异丙胺和n-boc-(甲胺基)乙醛为原料，制备过程参见实施例15第一步。
第二、第三步：n1-异丙基-n1，n2-二甲基乙二胺
以甲基(2-(异丙基氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯和ch3i为原料，制备过程参见实施例2第二、三步。
实施例49
n，1，2，6-四甲基哌啶-4-胺三氟乙酸盐
第一步：(2，6-二甲基吡啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯
于100ml三口瓶中依次加入2，6-二甲基吡啶-4-胺(1g，8.2mmol)，dcm(20ml)三乙胺(1.66g，16.4mmol)和dmap(0.1g，0.82mmol)，室温搅拌下滴加(boc)2o(1.79g，8.2mmol)的dcm(5ml)溶液，滴完后室温搅拌反应1-2h。向反应体系中加入纯化水(50ml)和dcm(30ml)，过滤，滤液静置分层，水相用dcm萃取2次，合并有机相，饱和食盐水洗2次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得粗品，粗品经柱层析纯化，洗脱液：dcm/meoh＝25/1，收集产品，减压浓缩得750mg白色固体。
第二步：(2，6-二甲基吡啶-4-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯
氩气保护下，于100ml三口瓶依次加入dmf(30ml)和nah(406mg，10.13mmol)，冰水浴降温至0-5℃，滴加(2，6-二甲基吡啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(750mg，3.38mmol)的dmf(5ml)溶液，滴加完成后0-5℃反应1h。滴加ch3i(720mg，1.5eq)的dmf(5ml)溶液，升温至室温搅拌反应1-2h。反应完全后，降温至0-10℃，滴加纯化水(15ml)，乙酸乙酯萃(20ml×3)取3次，合并有机相，饱和食盐水洗两次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得900mg淡黄色液体。
第三步：4-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-1，2，6三甲基吡啶鎓
于50ml反应釜中依次加入(2，6-二甲基吡啶-4-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(400mg，1.69mmol)，dmf(10ml)和ch3i(1.2g，8.47mmol)，油浴升温到75-80℃，密闭条件下搅拌反应7-8h。降温到室温，无需处理，直接用于下一步反应。
第四步：(1，2，6-三甲基-1，2，3，4-四氢吡啶-4-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯
于250ml三口瓶中依次加入上步反应液，乙醇(30ml)和水(3ml)，冰水浴降温到0-5℃，分批加入nabh4(241mg，6.37mmol)，升温至室温搅拌反应过夜。向反应体系中加入纯化水(50ml)，乙酸乙酯(50ml×3)萃取3次，合并有机相，饱和食盐水洗2次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得粗品，粗品经柱层析纯化，洗脱液：dcm/meoh＝10/1，收集产品，减压浓缩得110mg油状产品。
第五步：(1，2，6-三甲基哌啶-4-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯
于100ml单口瓶依次加入(1，2，6-三甲基-1，2，3，4-四氢吡啶-4-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(110mg，0.43mmol)，甲醇(10ml)和pd/c(20mg)，置换氢气三次，室温搅拌反应2-3h。过滤，滤液减压浓缩得115mg油状产品。
第六步：n，1，2，6-四甲基哌啶-4-胺三氟乙酸盐
于100ml三口瓶中依次加入(1，2，6-三甲基哌啶-4-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(115mg，0.45mmol)和dcm(5ml)，室温搅拌下滴加三氟乙酸(3ml)，滴加完毕后室温搅拌反应。反应完成后，减压浓缩，残留物用乙酸乙酯溶解后继续减压浓缩得180mg剩余物。无需处理，直接用于下一步反应。
实施例50
1-异丙基-n-甲基哌啶-4-胺
以甲基(哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯和丙酮为原料，制备过程参见实施例15。
实施例51
4-哌啶基哌啶
以n-叔丁氧羰基-4-哌啶酮和哌啶为原料，制备过程参见实施例15。
实施例52
1-(2-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)乙基)哌嗪
以1-(2-羟乙基)哌嗪为原料，制备过程参见实施例30第三步。
实施例53
n，n-二乙基-n'-甲基乙二胺三氟乙酸盐
以乙二胺和n-boc-(甲胺基)乙醛为原料，制备过程参见实施例15。
实施例54
1-羟乙基哌啶
于100ml三口瓶加入2-溴乙醇(1g)和dcm(24ml)，磁力搅拌下加入哌啶(2ml)，室温反应过夜。减压浓缩，往剩余物中加入甲基叔丁基醚(10ml)，搅拌，过滤，滤液减压浓缩得粗品，粗品经柱层析纯化，洗脱液：dcm/meoh＝10/1，收集产品，减压浓缩得570mg产品。
实施例55
n-甲基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙胺三氟乙酸盐
以n-boc-(甲胺基)乙醛和甲基哌嗪为原料，制备过程参见实施例15。
实施例56
n-异丙基-n，n'-二甲基乙二胺盐酸盐
以n，n'-二甲基乙二胺为原料，制备过程参见实施例2。
实施例57
4-(3-甲氧基吡咯烷-1-基)哌啶
以3-甲氧基吡咯烷和n-叔丁氧羰基-4-哌啶酮为原料，制备过程参见实施例15。
实施例58
4-(4-甲氧基哌啶-1-基)哌啶盐酸盐
以4-甲氧基哌啶和n-叔丁氧羰基-4-哌啶酮为原料，制备过程参见实施例15。
实施例59
4-(3-甲氧基吖啶-1-基)哌啶
以3-甲氧基吖啶盐酸盐和n-叔丁氧羰基-4-哌啶酮为原料，制备过程参见实施例15。
实施例60
4-(四氢吡喃-4-基)哌啶
以四氢吡喃酮为原料，制备过程参见实施例18。
实施例61
1-(3-氧杂环丁基)-4-(哌啶-4-基)哌嗪三氟乙酸盐
以1-(3-氧杂环丁基)哌嗪三氟乙酸盐和n-叔丁氧羰基-4-哌啶酮为原料，制备过程参见实施例15。
实施例62
1-(哌啶-4-基)吡咯烷-2-酮
第一步：n-(1-苄基哌啶-4-基)-4-溴丁酰胺
于100ml三口瓶中依次加入1-苄基哌啶-4-胺(2.5g，1.0eq)，dcm(30ml)和吡啶(1.5eq)，降温至0℃，然后滴加4-溴丁酰氯(1.2eq)，0℃反应，tlc监控反应进程。反应结束后，加入饱和的碳酸钾溶液(30ml)，dcm(30ml×2)萃取2次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩得粗品，粗品经柱层析纯化，梯度洗脱，洗脱液：dcm/meoh＝80/1→25/1，收集产品，减压浓缩得4g油状物。
第二步：1-(1-苄基哌啶-4-基)吡咯烷-2-酮
100ml单口瓶中加入n-(1-苄基哌啶-4-基)-4-溴丁酰胺(4g，1.0eq)和thf(30ml)，降温到0℃，然后将钠氢(2.0eq)分批加入上述体系，保持室温反应，tlc监测反应，加入饱和的碳酸钾溶液(30ml)，dcm(30ml×2)萃取2次，合并有机相，饱和食盐水洗2次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，母液减压浓缩干得粗品，粗品经柱层析纯化，洗脱液：dcm/meoh＝100/1→25/1冲下产品点，减压浓缩干得1.6g油状物。
第三步：1-(哌啶-4-基)吡咯烷-2-酮
于100ml单口瓶中加入1-(1-苄基哌啶-4-基)吡咯烷-2-酮(1.6g，1.0eq)和甲醇(30ml)，搅拌溶解后加入10％pd/c和甲酸铵(6.5eq)，加热回流反应，tlc监测反应进程，过滤，滤液减压浓缩得1.1g油状物直接用于下一步。
实施例63
1-(四氢呋喃-3-基)哌嗪
以二氢-3(2h)-呋喃酮和哌嗪-1-甲酸叔丁酯为原料，制备过程参见实施例15。
实施例64
1-(3-甲氧基环戊基)哌嗪
第一步：4-(3-氧代环戊-1-烯-1-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
于250ml单口瓶中依次加入1，3-环戊二酮(7g，38mmol)，哌嗪-1-甲酸叔丁酯(7.4g，75mmol)和dcm(100ml)，室温搅拌24h。反应液减压浓缩得粗品，粗品经柱层析纯化，洗脱剂：dcm/meoh＝10/1，收集产品，减压浓缩得12g白色固体。
第二步：4-(3-羟基环戊基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
于1l三口瓶中加入氢化铝锂(6.8g，180mmol)和四氢呋喃(200ml)，冰盐浴降温-5-0℃，滴加4-(3-氧代环戊-1-烯-1-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(12g，45mmol)的四氢呋喃(200ml)溶液，0℃反应30min。冰盐浴-5-0℃下向反应液中缓慢滴加水，dcm(50ml×3)萃取3次，合并有机相，饱和食盐水(100ml×3)洗3次，无水硫酸钠干燥30min，减压抽滤，滤液45℃减压浓缩得粗品，粗品经柱层析纯化，洗脱剂：dcm/meoh＝10/1，收集产品，减压浓缩得1.76g红棕色固体。
第三步：4-(3-甲氧基环戊基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
于100ml单口瓶中加入4-(3-羟基环戊基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.73g，6.4mmol)和dmf(50ml)，搅拌溶解，冰盐浴降温至-5-0℃，分批加叔丁醇钠(1.23g，12.8mmol)，保温反应30min。加入水(30ml)，乙酸乙酯(30ml×3)萃取3次，合并有机相，饱和食盐水(20ml×3)洗3次，无水硫酸钠干燥30min，减压抽滤，滤液45℃减压浓缩得粗品，粗品经柱层析纯化，洗脱剂：dcm/meoh＝50/1，收集产品，减压浓缩得1.25g黄色油状物。
第四步：1-(3-甲氧基环戊基)哌嗪
于100ml单口瓶中加入4-(3-甲氧基环戊基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.25g，4.4mmol)和dcm(20ml)，搅拌溶解，滴加三氟乙酸(10g，88mmol)，室温反应2h。反应液于50℃减压浓缩，向剩余物中加入无水乙醇(10ml)，50℃减压浓缩，向剩余物中加异丙醚，室温磁力搅拌1h，析出白色固体，过滤，滤饼于50℃鼓风干燥得1.6g白色固体。
实施例65
1-(3-氧杂环丁基)哌嗪三氟乙酸盐
以3-氧杂环丁酮和1-boc-哌嗪为原料，制备过程参见实施例15。
实施例66
n-甲基-1-(四氢-2h-吡喃-4-基)哌啶-4-胺三氟乙酸盐
以4-n-叔丁氧羰基-4-n-甲基氨基哌啶和四氢吡喃酮为原料，制备过程参见实施例15。
实施例67
1-(2-甲氧基乙基)-n-甲基吡咯烷-3-胺
以3-n-boc-n-甲基氨基吡咯烷和2-溴乙基甲基醚为原料，制备过程参见实施例45。
实施例68
1-(2-甲氧基乙基)-n-甲基哌啶-4-胺三氟乙酸盐
以4-n-叔丁氧羰基-4-n-甲基氨基哌啶和2-溴乙基甲基醚为原料，制备过程参见实施例45。
实施例69
1-n-乙基-n-甲基哌啶-4-胺
以4-n-叔丁氧羰基-4-n-甲基氨基哌啶和碘乙烷为原料，制备过程参见实施例1。
实施例70
1-甲基-6-(三氟甲基)吲唑-5-硼酸频哪醇酯的制备
第一步：2-甲基-5-(三氟甲基)苯胺
向100ml单口瓶中依次加入1-甲基-2-硝基-4-(三氟甲基)苯(3g，14mmol)，乙醇(30ml)，pd/c(100mg)。室温加氢反应12-14h，反应液过滤，滤液减压浓缩，得到2.6g淡黄色油状物，收率：101.5％。
第二步：4-溴-2-甲基-5-(三氟甲基)苯胺
向100ml单口瓶中依次加入2-甲基-5-(三氟甲基)苯胺(2.6g，14mmol)和乙腈(40ml)，降温至10℃，分批加入nbs(2.9g，16mmol)。加毕，25℃反应1.5h。加入50ml饱和硫代硫酸钠水溶液淬灭反应，水相用乙酸乙酯(80ml×3)萃取3次，合并有机相，减压浓缩，得到粗品。粗品经柱层析纯化，用pe/ea＝6/1洗脱，收集产品并浓缩，得3.43g淡黄色油状物，收率：91.5％。
第三步：5-溴-6-(三氟甲基)-1h-吲唑
向100ml单口瓶中依次加入4-溴-2-甲基-5-(三氟甲基)苯胺(3.43g，13.55mmol)和乙酸(130ml)，滴加亚硝酸钠(1.02g，14.91mmol)的水溶液(3.5ml)。加毕，室温反应12-14h。向反应液中加入饱和碳酸钠水溶液(ph>7)，过滤，收集滤饼，用30ml石油醚打浆20min，过滤，烘干，得2.2g淡黄色固体，收率：61.6％。
第四步：5-溴-1-甲基-6-(三氟甲基)-1h-吲唑
向100ml三口瓶中依次加入5-溴-6-(三氟甲基)-1h-吲唑(2.2g，8.33mmol)，四氢呋喃(20ml)，降温至0℃，加入氢化钠(433mg，10.83mmol)。加毕，保温0℃搅拌反应30min。控制温度在0℃，滴加碘甲烷(1.77g，12.5mmol)的thf(4ml)溶液，滴毕，升温至室温搅拌反应2h。加入20ml水淬灭反应，水相用乙酸乙酯(60ml×3)萃取3次，合并有机相，减压浓缩，得到粗品。粗品经柱层析纯化，以pe/ea＝10/1洗脱，收集产品并浓缩，得600mg淡黄色固体，收率：26.1％。
第五步：1-甲基-6-(三氟甲基)吲唑-5-硼酸频哪醇酯
氩气保护下，向100ml单口瓶中依次加入5-溴-1-甲基-6-(三氟甲基)-1h-吲唑(500mg，1.79mmol)，双联频哪醇硼酸酯(685.2mg，2.69mmol)，乙酸钾(352.5mg，3.58mmol)，pd(dppf)cl2(131.6mg，0.179mmol)和二氧六环(15ml)，加毕，升温至100℃反应7h。反应体系降温至室温，向反应液中加入20ml水，水相用乙酸乙酯(50ml×3)萃取3次，合并有机相，浓缩，得到粗品。粗品经柱层析纯化，用pe/ea＝10/1洗脱，收集产品并浓缩，得300mg淡黄色油状物，收率：51.1％。
实施例71
1-甲基-7-氟吲唑-5-硼酸频哪醇酯的制备
第一步：5-溴-2,3-二氟苯甲醛
于100ml三口瓶中依次加入2,3-二氟苯甲醛(1g，7.04mmol)和浓硫酸(50ml)，室温搅拌溶解，得棕黄色反应液。分批缓慢加入nbs(1.05g，5.90mmol)，加毕，升温到45-50℃反应2-3h。将反应液缓慢滴加入200ml冰水中，用乙酸乙酯(50ml×2)萃取2次，合并有机相，用饱和食盐水洗2次，无水硫酸钠干燥30min，过滤，滤液减压浓缩得粗品，粗品经柱层析纯化，得280mg。原料回收。
第二步：5-溴-7-氟-1h-吲唑
于100ml三口瓶中依次加入5-溴-2,3-二氟苯甲醛(200mg)和水合肼(10ml)，升温到100-110℃，搅拌反应3-4h，降温到室温，加入30ml纯化水，30ml乙酸乙酯，搅拌分液，水相用乙酸乙酯(20ml×3)萃取3次，合并有机相，用饱和食盐水(30ml×2)洗2次，无水硫酸钠干燥30min，过滤，滤液减压浓缩得粗品，粗品经柱层析纯化，用pe/ea＝4/1洗脱，收集产品并浓缩得32mg。
第三步：1-甲基-5-溴-7-氟-1h-吲唑
以5-溴-7-氟-1h-吲唑为原料，制备过程参见实施例70第四步。
第四步：1-甲基-7-氟吲唑-5-硼酸频哪醇酯
以1-甲基-5-溴-7-氟-1h-吲唑为原料，制备过程参见实施例70第五步。
实施例72
1-甲基-7-(三氟甲基)吲唑-5-硼酸频哪醇酯的制备
以2-甲基-6-(三氟甲基)苯胺为起始原料，制备过程参见实施例70第二、三、四、五步。
实施例73
1-甲基-6-氟吲唑-5-硼酸频哪醇酯的制备
以4-溴-5-氟-2-甲基苯胺为原料，制备过程参见实施例70第三、四、五步。
实施例74
1,3-二甲基吲唑-6-硼酸频哪醇酯的制备
以6-溴-3-甲基-1h-吲唑为原料，制备过程参见实施例70第四、五步。
实施例75
1-甲基-3-氟吲唑-6-硼酸频哪醇酯的制备
第一步：1-甲基-6-溴-3-氟-1h-吲唑
于100ml单口瓶中依次加入6-溴-1-甲基-1h-吲唑(2g，9.48mmol)，selectflour(氟试剂)(4.4g，12.32mmol)和乙腈(40ml)，油浴升温至100℃搅拌反应。tlc监测反应。反应完毕后，降温至室温，加入纯化水(60ml)，乙酸乙酯(80ml)，萃取分液，有机相用饱和食盐水(50ml×2)洗2次，无水硫酸钠干燥30min。过滤，滤液减压浓缩得粗品，粗品经柱层析纯化，用pe/ea＝10/1洗脱，收集产品并减压浓缩得白色固体620mg。
第二步：1-甲基-3-氟吲唑-6-硼酸频哪醇酯
以1-甲基-6-溴-3-氟-1h-吲唑为原料，制备过程参见实施例70第五步。
实施例76
2-甲基-2h-吲唑-6-硼酸频哪醇酯的制备
以6-溴-2-甲基-2h-吲唑为原料，制备过程参见实施例70第五步。
实施例77
苯并噻唑-5-硼酸频哪醇酯的制备
以5-溴苯并噻唑为原料，dmf为溶剂，制备过程参见实施例70第五步。
实施例78
苯并噻唑-6-硼酸频哪醇酯的制备
以6-溴苯并噻唑为原料，dmf为溶剂，制备过程参见实施例70第五步。
实施例79
2-甲基-苯并噻唑-6-硼酸频哪醇酯的制备
以6-溴-2-甲基苯并噻唑为原料，制备过程参见实施例70第五步。
实施例80
1-乙基吲唑-5-硼酸频哪醇酯的制备
以5-溴吲唑和c2h5i为原料，制备过程参见实施例70第四、五步。
实施例81
1-异丙基吲唑-5-硼酸频哪醇酯的制备
以5-溴吲唑和碘代异丙烷为原料，制备过程参见实施例70第四、五步
实施例82
1-异丙基吲唑-6-硼酸频哪醇酯的制备
以6-溴吲唑和碘代异丙烷为原料，制备过程参见实施例70第四、五步
实施例83
4-(2-(二甲基氨基)乙氧基)-2-甲氧基-5-硝基苯胺
于100ml三口瓶中加入2-(二甲基氨基)乙醇(718mg，8.06mmol)和dmf(30ml)，冰水浴降温至0-5℃，分批加入叔丁醇钾(1.5g，13.4mmol)，保温反应30min，然后加入4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺(500mg，2.69mmol)，保温反应20min。tlc监控反应至原料反应完全，降温至室温。加入水(50ml)，用乙酸乙酯萃(50ml×3)取3次，合并有机相，饱和食盐水(20ml×3)洗3次，无水硫酸钠干燥30min，减压抽滤，滤液于45℃减压浓缩得粗品，粗品经柱层析纯化，洗脱剂：dcm/meoh＝10/1，收集产品，减压浓缩得265mg棕色油状物。
实施例84
n-(4-氨基-5-甲氧基-2-硝基苯基)-2-(二甲基氨基)-n-甲基乙酰胺
第一步：(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)氨基甲酸叔丁酯
向250ml单口瓶中依次加入4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺(5g，27mmol)，4-二甲氨基吡啶(0.33g，2.7mmol)和dcm(50ml)，搅拌10min，然后加入三乙胺(5.4g，53.75mmol)和(boc)2o(5.87g，27mmol)，滴毕，室温反应4.5h。加入水(30ml)，用dcm萃取3次(40ml×3)，合并有机相，饱和食盐水洗3次(20ml×3)，无水硫酸钠干燥30min，减压抽滤，滤液于45℃减压浓缩得粗品，粗品经柱层析纯化，洗脱剂：pe/ea＝10/1，收集产品，减压浓缩得5.34g棕黄色固体。
第二步：(2-甲氧基-4-(甲基氨基)-5-硝基苯基)氨基甲酸叔丁酯
向100ml反应釜中依次加入(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)氨基甲酸叔丁酯(1.7g，5.9mmol)，甲胺盐酸盐(1.2g，17.8mmol)，碳酸钠(3.15g，29.7mmol)，碘化钾(986mg，5.9mmol)和n-甲基吡咯烷酮(30ml)，油浴升温至60℃反应7h。降温至室温，加入水(30ml)，用乙酸乙酯(20ml×3)萃取3次，合并有机相，饱和食盐水(20ml×3)洗3次，无水硫酸钠干燥0.5h，减压抽滤，滤液于45℃减压浓缩得1.9g红棕色固体粗品。
第三步：(4-(2-氯-n-甲基乙酰氨基)-2-甲氧基-5-硝基苯基)氨基甲酸叔丁酯
氩气保护下，向100ml的三口瓶中依次加(2-甲氧基-4-(甲基氨基)-5-硝基苯基)氨基甲酸叔丁酯(1.7g，6mmol)，碳酸钾(4g，28.6mmol)，30ml四氢呋喃和氯乙酰氯(1.9g，17mmol)，油浴升温至70℃反应3h。向反应液中加入水(30ml)，乙酸乙酯(30ml×3)萃取3次，饱和食盐水(20ml×3)洗3次，无水硫酸钠干燥0.5h，减压抽滤，滤液于45℃减压浓缩得粗品，粗品经柱层析纯化，洗脱剂：pe/ea＝1/1，收集产品，减压浓缩得1.5g淡黄色固体。
第四步：(4-(2-(二甲基氨基)-n-甲基乙酰氨基)-2-甲氧基-5-硝基苯基)氨基甲酸叔丁酯
向100ml的反应釜中依次加(4-(2-氯-n-甲基乙酰氨基)-2-甲氧基-5-硝基苯基)氨基甲酸叔丁酯(1.5g，4mmol)，二甲胺盐酸盐(982mg，12mmol)，碳酸钾(2.8g，20mmol)和丙酮(30ml)，油浴升温至50℃反应15h。向反应液中加入水(30ml)，乙酸乙酯(30ml×3)萃取3次，饱和食盐水(20ml×3)洗3次，无水硫酸钠干燥0.5h，减压抽滤，滤液于45℃减压浓缩得粗品，粗品经柱层析纯化，洗脱剂：dcm/meoh＝10/1，收集产品，减压浓缩得1.2g红棕色油状物。
第五步：n-(4-氨基-5-甲氧基-2-硝基苯基)-2-(二甲基氨基)-n-甲基乙酰胺
向100ml的单口瓶中加入(4-(2-(二甲基氨基)-n-甲基乙酰氨基)-2-甲氧基-5-硝基苯基)氨基甲酸叔丁酯(1.2g，3.1mmol)和dcm(20ml)，搅拌溶解，然后滴加三氟乙酸(7.2g，62.8mmol)，室温反应2.5h。向反应液中加入水(30ml)，分批加碳酸钠固体调ph>8，乙酸乙酯(30ml×3)萃取3次，合并有机相，饱和食盐水(20ml×3)洗3次，无水硫酸钠干燥0.5h，减压抽滤，滤液于45℃减压浓缩得673mg黄色固体。
实施例85
n-(4-氨基-5-甲氧基-2-硝基苯基)-2-(二甲基氨基)-n-甲基丙酰胺
以(2-甲氧基-4-(甲基氨基)-5-硝基苯基)氨基甲酸叔丁酯和氯丙酰氯为原料，制备过程参见实施例84。
实施例86
5-(二氟甲氧基)-n1-(2-(二甲基氨基)乙基)-n1-甲基-2-硝基苯-1，4-二胺
第一步：4-氟-2-二氟甲氧基硝基苯
氩气保护下，向100ml单口瓶中依次加入5-氟-2-硝基苯酚(3g，19.1mmol)，二氟氯乙酸钠(3.8g，28.6mmol)，碳酸钾(5.28g，38.2mmol)和dmf(100ml)，升温至80℃反应7-8h。降温至室温，加入冰水，水相用乙酸乙酯(80ml×3)萃取3次，合并有机相，减压浓缩。粗品经柱层析纯化，洗脱剂：pe/ea＝20/1，收集产品，减压浓缩得3.26g淡黄色油状物，收率：82.5％。
第二步：2-(二氟甲氧基)-4-氟苯胺
向100ml单口瓶中依次加入4-氟-2-二氟甲氧基硝基苯(3.26g，15.7mmol)，pd/c(800mg，20％)和甲醇(50ml)，置换氢气2次，室温加氢反应2-3h。过滤，滤液减压浓缩得2.6g无色油状物，收率：93.5％。
第三步：2-(二氟甲氧基)-4-氟-5-硝基苯胺
向100ml三口瓶中加入浓硫酸(15ml)，降温至0℃，加入2-(二氟甲氧基)-4-氟苯胺(2.56g，14.4mmol)，0℃反应15min，然后分批加入硝酸钾(1.60g，15.9mmol)，0℃反应2-3h。将反应液缓慢倒入冰的碳酸钠水溶液中调ph>7，水相用乙酸乙酯(80ml×2)萃取2次，合并有机相，减压浓缩得粗品。粗品经柱层析纯化，洗脱剂：pe/ea＝10/1，收集产品，减压浓缩得1.8g淡黄色固体，收率：56.3％。
第四步：5-(二氟甲氧基)-n1-(2-(二甲基氨基)乙基)-n1-甲基-2-硝基苯-1，4-二胺
氩气保护下，向100ml单口瓶中依次加入2-(二氟甲氧基)-4-氟-5-硝基苯胺(1g，4.5mmol)，n1，n1，n2-三甲基乙二胺(2.3g，22.5mmol)，dipea(2.9g，22.5mmol)和nmp(20ml)。升温至100℃反应4-5h。降温至室温，向反应体系中加入水(100ml)，水相用乙酸乙酯(80ml×3)萃取3次，合并有机相，减压浓缩得粗品。粗品经柱层析(中性al2o3)纯化，洗脱剂：dcm/meoh＝50/1，收集产品，减压浓缩得1.2g淡红色油状物，收率：88.2％。
实施例87
5-(乙氧基)-n1-(2-(二甲基氨基)乙基)-n1-甲基-2-硝基苯-1，4-二胺
以5-氟-2-硝基苯酚和c2h5i为原料，制备过程参见实施例86。
实施例88
4-氟-5-硝基-2-(三氟甲氧基)苯胺
第一步：4-氟-2-(三氟甲氧基)硝基苯
向250ml三口瓶中加入20ml浓硫酸，冰盐浴降温至-5-0℃，加入间氟三氟甲氧基苯(10g，60mmol)，然后分批加入硝酸钾(5.9g，60mmol)，0℃搅拌反应1h。将反应液缓慢倒入冰水中，用乙酸乙酯(40ml×3)萃取3次，合并有机相，用饱和食盐水(20ml×3)洗3次，无水硫酸钠干燥0.5h，减压抽滤，滤液于45℃减压浓缩得8.5g淡黄色油状物。
第二、三步：4-氟-5-硝基-2-(三氟甲氧基)苯胺
以4-氟-2-(三氟甲氧基)硝基苯为原料，制备过程参见实施例86第二、三步。
实施例89
第一步：1，5-二氟-3-甲氧基-2-硝基苯
于100ml单口瓶中加入60ml甲醇，冰水浴降温到0-10℃，分批加入金属钠(2.6g，112.94mmol)，搅拌溶解，得2n甲醇钠的甲醇溶液，氩气保存备用。
于另一干燥250ml三口瓶中依次加入1,3,5-三氟-2-硝基苯(10g，56.47mmol)和甲醇(100ml)，搅拌溶解，降温到0-5℃。将上述制备的甲醇钠甲醇溶液滴加入体系，加毕，保温反应2-3h。滴加入2nhcl水溶液调ph到中性，将反应液倒入200ml纯化水中，用乙酸乙酯(100ml×3)萃取三次，合并有机相，饱和食盐水(100ml×2)洗2次，无水硫酸钠干燥30min，过滤，滤液减压浓缩得10g粗品，粗品用石油醚(30ml)室温搅拌打浆，过滤，滤液减压浓缩得4g油状产品，经柱层析纯化，以pe/ea＝10/1洗脱，收集产品减压浓缩得2.2g产品。
第二步：2，4-二氟-6-甲氧基苯胺
于250ml单口瓶中依次加入1，5-二氟-3-甲氧基-2-硝基苯(4.3g，1eq)，甲醇(50ml)，乙酸铵(3.5g，2eq)和pd/c(430mg，0.1eq)，置换氢气3次，室温搅拌反应，tlc监测反应，反应结束后过滤，滤液减压浓缩得粗品，粗品经柱层析纯化，洗脱液：pe/ea＝20/1，收集产品，减压浓缩得3.8g产物。
第三步：2，4-二氟-6-甲氧基-3-硝基苯胺
向100ml三口瓶中加入浓硫酸(20ml)，冰盐浴降温至0℃左右，加入2，4-二氟-6-甲氧基苯胺(3.8g，1eq)，搅拌溶解，然后分批加入硝酸钾(2.42g，1eq)，保温反应。tlc监控反应进程。反应结束后将反应液倒入冰水中，用碳酸钠固体调ph>7，乙酸乙酯(100ml×2)萃取2次，合并有机相，饱和食盐水(100ml×2)洗2次，无水硫酸钠干燥30min，过滤，滤液减压浓缩得粗品，粗品经柱层析纯化，洗脱液：pe/ea＝10/1，收集产品，减压浓缩得2.1g产物。
实施例90
4-氨基-n-(2-(二甲基氨基)乙基)-5-甲氧基-n-甲基-2-硝基苯甲酰胺
第一步：4-氨基-5-甲氧基-2-硝基苯甲酸
于100ml三口瓶加入浓硫酸(10ml)，冰盐浴降温至0℃，分批加入4-氨基-3-甲氧基苯甲酸(1.1g，6.58mmol)，加完后保温搅拌30min。然后分批加入硝酸钾(700mg，1.05eq)，保温反应，tlc监控反应进程。反应结束后，将反应液倒入冰水(500ml)，用碳酸钠固体调ph＝3-4之间，用乙酸乙酯(300ml×3)萃取3次，合并有机相，饱和食盐水(500ml×2)洗2次，无水硫酸钠干燥30min，过滤，滤液减压浓缩，向剩余物中加入dcm(30ml)打浆，过滤，滤饼干燥得1.1g固体。
第二步：4-氨基-n-(2-(二甲基氨基)乙基)-5-甲氧基-n-甲基-2-硝基苯甲酰胺
向100ml单口瓶中依次加入4-氨基-5-甲氧基-2-硝基苯甲酸(400mg，1.89mmol)，dmf(20ml)，edci(543mg，1.5eq)，hobt(384mg，1.5eq)，三乙胺(574mg，3eq)和n1，n1，n2-三甲基乙二胺(386mg，2eq)，油浴升温到50-55℃搅拌反应。tlc监控反应进程，反应结束后，自然降温到室温，加入水(100ml)，用乙酸乙酯(50ml×4)萃取4次，合并有机相后，用饱和食盐水(50ml×2)洗2次，无水硫酸钠干燥30min，过滤，滤液减压浓缩干得粗品，粗品经柱层析纯化，洗脱液：dcm/meoh＝10/1，收集产品，减压浓缩得370mg产物。
实施例91.中间体a1制备
于100ml三口瓶中依次加入1-甲基吲唑-5-硼酸(300mg，1.70mmol)，4,6-二氯嘧啶(330mg，2.216mmol)，碳酸钠(360mg，3.41mmol)和乙腈/水＝4/1(15ml)。氩气保护下，加入四(三苯基磷)钯(200mg，0.171mmol)，油浴升温至65-70℃反应约7h，自然降温至室温。加入水(50ml)，二氯甲烷(50ml)，搅拌5min，分液，水相用二氯甲烷(30ml×2)萃取2次。合并有机相，有机相用饱和食盐水(50ml×2)洗2次，无水硫酸钠干燥半小时。过滤，滤液减压浓缩得粗品，经柱层析纯化，用pe/ea＝6/1洗脱。收集产品并减压浓缩得中间体a1：330mg。
实施例92-112.中间体a2-a22的制备
使用市售或实施例70-82制备的硼酯或硼酸化合物和4,6-二氯嘧啶或2,4-二氯嘧啶为原料，参照实施例91合成中间体a1的方法制备中间体a2-a22.(表1)
表1中间体a2-a22
实施例113.中间体b1制备
n-(5-氨基-4-甲氧基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)丙烯酰胺
第一步：(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)氨基甲酸叔丁酯
于100ml三口瓶中加入4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺(3g，16mmol)、dcm(50ml)、吡啶(2.5g，32.2mmol)和dmap(0.19g，1.6mmol)，滴加(boc)2o(3.5g，0.016mol)的dcm溶液(10ml)，滴毕后40℃反应，反应完毕后减压浓缩，加入100ml水，100ml乙酸乙酯，搅拌分液，水相用乙酸乙酯萃取2次，合并有机相，有机相用水(100ml×2)洗2次，无水硫酸钠干燥30min，过滤，滤液减压浓缩得产品3.6g，收率：78％。
第二步：(2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-5-硝基苯基)氨基甲酸叔丁酯
于250ml单口瓶中依次加入(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)氨基甲酸叔丁酯(2.1g，07.3mmol)，dmf(50ml)，n-甲基哌嗪(808mg，8.06mmol)和dipea(1.03g，8.03mmol)，室温搅拌反应，反应完毕后加入150ml饱和氯化铵水溶液，50ml乙酸乙酯，搅拌分液，水相弃去，有机相水洗至中性，饱和食盐水(30ml×2)洗2遍，无水硫酸钠干燥30min，过滤，滤液减压浓缩，经柱层析纯化，用pe/ea＝5/1→1/1和dcm/meoh＝10/1梯度洗脱，收集产品并减压浓缩得2.65g，收率：98％。
第三步：(5-氨基-2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基甲酸叔丁酯
于250ml单口瓶中，加入(2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-5-硝基苯基)氨基甲酸叔丁酯(2.65g，7.23mmol)，甲醇(10ml)，10％pd/c(265mg)，室温加氢搅拌反应，反应完毕后，过滤，滤液减压浓缩，得2.35g产品，收率：96.7％。
第四步：(5-丙烯酰氨基-2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基甲酸叔丁酯
向250ml三口瓶中加入(5-氨基-2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(2.3g，6.8mmol)和thf(20ml)，降温至0℃，滴加丙烯酰氯(680mg，7.5mmol)，滴毕后自然升至室温反应，反应完毕后，用饱和碳酸氢钠调ph至中性，加入dcm(20ml)，水(20ml)分液，水相弃去，有机相用饱和食盐水(50ml×2)洗2次，无水硫酸钠干燥30min，过滤，滤液减压浓缩得2.3g产品，收率：100％。
第五步：n-(5-氨基-4-甲氧基-2-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)丙烯酰胺
向250ml单口瓶中加入(5-丙烯酰氨基-2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(1.9g，6.88mmol)，4mol/l的盐酸(16ml)和thf(30ml)，室温搅拌反应，反应完毕后用饱和碳酸氢钠水溶液调ph至中性，加入20ml水，20mldcm，分液，水相用dcm(20ml×2)萃取2次，合并有机相，有机相用水(20ml×2)洗2次，饱和食盐水(20ml×2)洗2次，无水硫酸钠干燥30min，过滤，母液减压浓缩干，经柱层析纯化，用dcm/meoh＝30/1洗脱，收集产品并减压浓缩得472mg。
实施例114.中间体b2制备
n-(5-氨基-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
将n,n,n'-三甲基乙二胺代替n-甲基哌嗪，中间体b2的制备过程参见实施例113。
实施例115.中间体b3制备
n-(5-氨基-2-(3-(二甲基氨基)氮杂环丁烷-1-基)-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
将3-(二甲氨基)氮杂环丁烷盐酸盐代替n-甲基哌嗪，中间体b3的制备过程参见实施例113。
实施例116.中间体b4制备
n-(5-氨基-4-甲氧基-2-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)丙烯酰胺
第一步：4-溴-2-甲氧基-5-硝基苯胺
于100ml单口瓶中依次加入85％硫酸(39ml)和4-溴-2-甲氧基苯胺(5g，24.8mmol)，降温至0-5℃，分批加入硝酸胍(3.2g，26.1mmol)，加毕，恒温反应45min。将反应液倒入冰的50％氢氧化钠水溶液(100ml，ph>8)，控制温度在5-10℃搅拌，过滤，滤饼用100ml水淋洗，烘干。粗品用50ml正己烷打浆20min，过滤，滤饼烘干得4.9g黄色固体，收率：80.19％。
第二步：(4-溴-2-甲氧基-5-硝基苯基)氨基甲酸叔丁酯
于250ml单口瓶中依次加入4-溴-2-甲氧基-5-硝基苯胺(4.9g，19mmol)，二氯甲烷(50ml)，三乙胺(4.0g，38mmol)，dmap(243mg，1.9mmol)和(boc)2o(5.21g，23mmol)，在25℃搅拌反应4h。加入100ml水淬灭反应，水相用二氯甲烷(100ml×2)萃取2次，合并有机相，减压浓缩，得到粗品。粗品经柱层析纯化，以pe/ea＝10/1洗脱，收集产品浓缩得1.4g黄色固体，收率：20.31％。
第三步：(2-甲氧基-4-(1-甲基-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)-5-硝基苯基)氨基甲酸叔丁酯
氩气保护下，于100ml单口瓶中依次加入(4-溴-2-甲氧基-5-硝基苯基)氨基甲酸叔丁酯(500mg，1.44mmol)，1-甲基-1,2,3,6-四氢吡啶-4-硼酸频哪醇酯(322mg，1.44mmol)，乙腈(40ml)，碳酸钠(306mg，2.88mmol)，水(8ml)和pd(pph3)4(167mg，0.144mmol)，在80℃搅拌反应3.5h。反应体系降温至室温，加入50ml水，水相用乙酸乙酯萃取(50ml×2)，合并有机相，减压浓缩，得到粗品。粗品经柱层析纯化，以dcm/meoh＝20/1洗脱，收集产品并浓缩，得480mg黄色固体，收率：91.5％。
第四步：(5-氨基-2-甲氧基-4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)氨基甲酸叔丁酯
于100ml单口瓶中依次加入(2-甲氧基-4-(1-甲基-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)-5-硝基苯基)氨基甲酸叔丁酯(480mg，1.32mmol)，四氢呋喃(20ml)和pd/c(50mg)。室温加氢搅拌反应12-14h。过滤，减压浓缩，得到340mg淡黄色油状物，收率：76.8％。
第五步：(5-丙烯酰氨基-2-甲氧基-4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)氨基甲酸叔丁酯
以(5-氨基-2-甲氧基-4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)氨基甲酸叔丁酯为原料，制备过程参见实施例113第四步。
第六步：n-(5-氨基-4-甲氧基-2-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)丙烯酰胺
于100ml单口瓶中依次加入(5-丙烯酰氨基-2-甲氧基-4-(1-甲基哌啶-4-基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(300mg，0.77mmol)和二氯甲烷(20ml)，滴加三氟乙酸(4ml)。加毕，室温反应30min。向反应液中加入50ml饱和碳酸氢钠水溶液，分液，水相用二氯甲烷萃取(50ml×2)，合并有机相，减压浓缩，得170mg淡灰色固体，收率：76.6％。
实施例117.中间体b5制备
n-(5-氨基-4-甲氧基-2-(4-甲基哌嗪-1-羰基)苯基)丙烯酰胺
第一步：3-甲氧基-4-(2,2,2-三氟乙酰氨基)苯甲酸
于500ml三口瓶中加入4-氨基-3-甲氧基苯甲酸(5g，29.9mmol)和乙酸乙酯(200ml)，冰盐浴降温至0℃，滴加tfaa(5ml)的乙酸乙酯(5ml)溶液。恒温搅拌反应2h，然后升温至室温继续搅拌反应2h。加入200ml水，分液，水相用乙酸乙酯(50ml×2)萃取2次，合并有机相，饱和食盐水(100ml×2)洗2次，无水硫酸钠干燥30min，抽滤，滤液减压浓缩得7.8g产品。
第二步：5-甲氧基-2-硝基-4-(2,2,2-三氟乙酰氨基)苯甲酸
于100ml三口瓶中加入3-甲氧基-4-(2,2,2-三氟乙酰氨基)苯甲酸(1g，3.8mmol)和浓硫酸(10ml)，冰盐浴降温至0℃，分批加入硝酸钾(840mg，5.7mmol)，保温搅拌反应1h。将反应液缓慢滴加入100ml冰水中，再加入100ml乙酸乙酯，分液，水相用乙酸乙酯(50ml×2)萃取2次，合并有机相，饱和食盐水(50ml×2)洗2次，无水硫酸钠干燥30min，抽滤，滤液减压浓缩得500mg产品。
第三步：2,2,2-三氟-n-(2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-羰基)-5-硝基苯基)乙酰胺
于100ml三口瓶中依次加入5-甲氧基-2-硝基-4-(2,2,2-三氟乙酰氨基)苯甲酸(500mg，1.622mmol)，30ml二氯甲烷，n-甲基哌嗪(325mg，3.245mmol)，edci(436mg，2.271mmol)，hobt(313mg，2.044mmol)和三乙胺(656mg，6.49mmol)，室温搅拌反应约2h，将反应液调ph至中性，用乙酸乙酯(30ml×3)萃取3次。合并有机相，有机相用饱和食盐水(50ml×2)洗2次，无水硫酸钠干燥30min。抽滤，滤液减压浓缩得250mg棕黄色油状产品。
第四步：n-(5-氨基-2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-羰基)苯基)-2,2,2-三氟乙酰胺
以2,2,2-三氟-n-(2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-羰基)-5-硝基苯基)乙酰胺为原料，制备过程参见实施例113第三步。
第五步：n-(4-甲氧基-2-(4-甲基哌嗪-1-羰基)-5-(2,2,2-三氟乙酰氨基)苯基)丙烯酰胺
以n-(5-氨基-2-甲氧基-4-(4-甲基哌嗪-1-羰基)苯基)-2,2,2-三氟乙酰胺为原料，制备过程参见实施例113第四步。
第六步：n-(5-氨基-4-甲氧基-2-(4-甲基哌嗪-1-羰基)苯基)丙烯酰胺
于250ml单口瓶中依次加入n-(4-甲氧基-2-(4-甲基哌嗪-1-羰基)-5-(2,2,2-三氟乙酰氨基)苯基)丙烯酰胺(410mg，0.99mmol)，乙腈(30ml)和碳酸钾(683mg，4.95mmol)水溶液(30ml)，室温搅拌反应过夜。反应完后加入30ml水，50ml二氯甲烷，萃取分液，水相用二氯甲烷(30ml×2)萃取2次，合并有机相，饱和食盐水(30ml×2)洗2次。无水硫酸钠干燥30min，抽滤，滤液减压浓缩得290mg产品。
实施例118.中间体b6制备
n-(3-氨基-6-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-2-氟-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
第一步：1,3-二氟-5-甲氧基-2-硝基苯
以1，3，5-三氟-2-硝基苯为原料，制备过程参见实施例89第一步。第二步：n1-(3-氟-5-甲氧基-2-硝基苯基)-n1，n2，n2-三甲基乙烷-1,2-二胺
于100ml三口瓶中依次加入1,3-二氟-5-甲氧基-2-硝基苯(1.27g，6.72mmol)和dmf(50ml)，搅拌溶解，然后加入dipea(1.13g，1.3eq)和n,n,n'-三甲基乙二胺(686mg，1eq)，油浴升温到50-55℃回流反应4-5h。自然降温到室温，将反应液倒入150ml纯化水中，用乙酸乙酯(100ml，50ml，50ml)萃取三次，合并有机相后，饱和氯化钠(50ml×2)洗两次，无水硫酸钠干燥30min，过滤，滤液减压浓缩得1.8g油状粗品。
第三步：n1-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-氟-5-甲氧基n1甲基苯-1,2-二胺
于100ml单口瓶中依次加入n1-(3-氟-5-甲氧基-2-硝基苯基)-n1，n2，n2-三甲基乙烷-1,2-二胺(1.8g，6.63mmol)和甲醇(36ml)，搅拌溶解，再加入180mgpd/c，加氢条件下室温搅拌反应5-6h。过滤去掉pd/c，滤液减压浓缩得1.7g产品。
第四步：n-(2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-6-氟-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
于100ml三口瓶中加入n1-(2-(二甲基氨基)乙基)-3-氟-5-甲氧基n1甲基苯-1,2-二胺(920mg，3.81mmol)和干燥thf(20ml)，搅拌溶解。反应体系降温到0-5℃。滴加丙烯酰氯(379mg，1.1eq)的thf溶液(1ml)，加毕后保温反应30min。将反应液倒入100ml饱和碳酸氢钠水溶液中，用dcm(50ml×3)萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥30min，过滤，滤液减压浓缩得粗品，粗品经柱层析纯化，用dcm/meoh＝20/1→10/1梯度洗脱，收集产品，减压浓缩得596mg灰色固体。
第五步：n-(6-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-2-氟-4-甲氧基-3-硝基苯基)丙烯酰胺
于100ml三口瓶中加入n-(2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-6-氟-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺(519mg，1.76mmol)和浓硫酸(10ml)，搅拌溶解，反应体系降温到0-5℃。分批缓慢添加硝酸钾(195mg，1.93mmol)到体系，加毕后，保温搅拌反应30min，然后升温到室温搅拌反应1-2h。将反应液缓慢滴加入200ml冰水中淬灭，用碳酸钠固体调节ph到中性，用乙酸乙酯(100ml×3)萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥30min，过滤，滤液减压浓缩得粗品。粗品经柱层析纯化，收集产品减压浓缩得137mg产品。
第六步：n-(3-氨基-6-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-2-氟-4-甲氧基苯基)丙烯酰胺
于100ml三口瓶中依次加入n-(6-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-2-氟-4-甲氧基-3-硝基苯基)丙烯酰胺(137mg，0.4mmol)，fe(135mg，6eq)，氯化铵(127mg，6eq)，无水乙醇(8ml)和纯化水(2ml)，油浴升温到90-100℃反应2-3h。自然降温到室温，将反应液加入30ml纯化水中，用乙酸乙酯(30ml×3)萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥30min，过滤，滤液减压浓缩得粗品，粗品经柱层析纯化，用dcm/meoh＝5/1洗脱，收集产品，减压浓缩得90mg产品。
实施例119.中间体c1制备
n-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-6-(1-甲基-1h-吲唑-5-基)嘧啶-4-胺
于250ml单口瓶中依次加入4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯胺(2g，10.75mmol)，中间体a1(2.38g，9.77mmol)，1,4-二氧六环(100ml)和甲磺酸(2.82g，29.32mmol)。油浴升温至回流，搅拌反应约4h，自然降温至室温。室温搅拌30min，过滤，滤饼用石油醚淋洗，40-45℃鼓风干燥2-3h，得3.8g黄色固体。
实施例120-149.中间体c2-c31制备
以中间体a和取代的硝基苯胺化合物为原料，应用中间体c1合成方法，制备中间体c2-c31.(表2)
表2中间体c2-c31
实施例150.n-(2-(2-二甲基氨基乙基-甲氨基)-4-甲氧基-5-{[6-(1-甲基-1h-吲唑-5-基)嘧啶-4-基]氨基}苯基)丙烯酰胺(终产物1)
于100ml三口瓶中依次加入中间体a1(200mg，0.82mmol)，异丁醇(15ml)，中间体b2(218mg，0.74mmol)和甲磺酸(102mg，1.06mmol)。油浴升温至105-110℃，回流反应约1.5h，自然降温至室温。将反应液减压浓缩。粗产品经柱层析纯化，用二氯甲烷/甲醇/氨水＝20/1/0.1洗脱，收集产品并减压浓缩，剩余物加正己烷打浆，抽滤，滤饼于40℃烘2h得浅白色固体108mg。
ms(esi+)m/z＝501.33[m+h]+,1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.13(s,1h),8.76(s,1h),8.70(s,1h),8.60(s,1h),8.50(s,1h),8.17(s,1h),8.08(d,j＝8.8hz,1h),7.75(d,j＝8.8hz,1h),7.38(s,1h),7.02(s,1h),6.37-6.50(m,1h),6.25(d,j＝16.9hz,1h),5.76(d,j＝10.0hz,1h),4.09(s,3h),3.84(s,3h),2.88(brs,2h),2.73(s,3h),2.33(brs,2h),2.21(s,6h)。
实施例151-166.终产物2-17的制备
应用上述终产物1的合成方法，用中间体a和b制备终产物2-17(表3)。
表3终产物2-17
实施例167.终产物18制备
n-(2-(4-乙基哌嗪-1-基)-4-甲氧基-5-{[6-(1-甲基-1h-吲唑-5-基)嘧啶-4-基]氨基}苯基)丙烯酰胺(终产物18)
第一步：n-(4-(4-乙基哌嗪-1-基)-2-甲氧基-5-硝基苯基)-6-(1-甲基-1h-吲唑-5-基)嘧啶-4-胺
于100ml单口瓶中加入n-(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)-6-(1-甲基-1h-吲唑-5-基)嘧啶-4-胺(中间体c1)(400mg，1.014mmol)和dmf(20ml)，室温搅拌下加入1-乙基哌嗪(150mg，1.319mmol)、dipea(196mg，1.521mmol)。油浴升温至45-50℃搅拌反应，tlc监测反应进程。反应完全后，加入水50ml，乙酸乙酯30ml，分液，水相用乙酸乙酯(30ml×2)萃取2次，合并有机相，有机相用水(50ml×2)洗2次，饱和食盐水(50ml×2)洗2次。无水硫酸钠干燥30min，抽滤，减压浓缩干得粗品。粗品经柱层析纯化，用dcm/meoh＝10/1→5/1梯度洗脱，收集产品并减压浓缩得390mg，反应体系中加入的碱可以是tea或na2co3/ki。
第二步：4-(4-乙基哌嗪-1-基)-6-甲氧基-n1-(6-(1-甲基-1h-吲唑-5-基)嘧啶-4-基)苯-1,3-二胺
于100ml单口瓶中依次加入n-(4-(4-乙基哌嗪-1-基)-2-甲氧基-5-硝基苯基)-6-(1-甲基-1h-吲唑-5-基)嘧啶-4-胺(390mg，0.798mmol)、dcm(10ml)、thf(10ml)和10％pd/c(80mg)，室温加氢搅拌反应约10h。过滤，滤液减压浓缩得300mg。或使用铁粉和nh4cl作为还原剂，乙醇和水作为溶剂，85-90℃搅拌反应还原硝基。
第三步：n-(2-(4-乙基哌嗪-1-基)-4-甲氧基-5-{[6-(1-甲基-1h-吲唑-5-基)嘧啶-4-基]氨基}苯基)丙烯酰胺
于100ml单口瓶中加入4-(4-乙基哌嗪-1-基)-6-甲氧基-n1-(6-(1-甲基-1h-吲唑-5-基)嘧啶-4-基)苯-1,3-二胺(300mg，0.654mmol)和thf溶(10ml)，冰盐浴降温，滴加丙烯酰氯(65mg，0.72mmol)，滴毕，体系由清液变浑浊，tlc监测反应，原料反应完后加入30ml饱和碳酸氢钠溶液，再加入二氯甲烷30ml，分液，水相用二氯甲烷(30ml×2)萃取2次，合并有机相，有机相用饱和食盐水(30ml×2)洗2次。无水硫酸钠干燥30min，抽滤，滤液减压浓缩得粗品。粗品经柱层析纯化，用dcm/meoh＝10/1洗脱，收集产品并减压浓缩，剩余物用正己烷打浆，抽滤，滤饼在45℃中鼓风干燥2h，得浅黄色固体76mg。
ms(esi+)m/z＝459.21[m+h]+.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.03(s,1h),8.75(s,1h),8.59(s,1h),8.49(s,1h),8.35(s,1h),8.17(d,j＝0.8hz,1h),8.08(dd,j＝1.2,8.8hz,1h),7.75(d,j＝8.8hz,1h),7.38(s,1h),6.89(s,1h),6.58-6.70(m,1h),6.23(dd,j＝1.6,17.2hz,1h),5.73(d,j＝10.8hz,1h),4.08(s,3h),3.85(s,3h),2.87(t,j＝4.3hz,4h),2.58(brs,4h),2.40-2.42(m,2h),1.04(t,j＝7.2hz,3h).
实施例168-411.终产物19-262制备
以中间体c和市售或实施例1-69合成的胺或醇为原料，运用合成终产物18(实施例167)的方法制备终产物19-262.(表4)
表4终产物19-262
实施例412-430.
以中间体c和市售或实施例1-69合成的带有保护基的胺为原料，运用合成终产物18(实施例167)的方法制备带有保护基的终产物。氩气保护下，带有保护基的终产物经pd(pph3)4/tes，以dcm或dcm/meoh为溶剂，室温搅拌脱保护基；或经酸如tfa或hcl，dcm为溶剂，室温搅拌脱保护基得终产物263-281。(表5)
表5终产物263-281
实施例431.终产物282制备
n-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-乙基-5-{[6-(1-甲基-1h-吲唑-5-基)嘧啶-4-基]氨基}苯基)丙烯酰胺(终产物282)
第一步：2-溴-4-氟-5-硝基苯胺
向250ml单口瓶中依次加入2-溴-4-氟苯胺(10g，52.9mmol)和浓硫酸(100ml)，控制温度在30℃搅拌1h。降温至-5--10℃，分批加入硝酸钾(5.61g，55.5mmol)，加毕，0℃反应2h，原料反应完全后，将反应液倒入冷的50％氢氧化钠水溶液中(ph>7)，过滤，滤液减压浓缩得到粗品。粗品经柱层析纯化，以pe/ea＝10/1洗脱，收集产品并减压浓缩，得到6.0g淡黄色固体，收率：48.8％。
第二步：2-溴-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-5-硝基苯胺
向100ml单口瓶中依次加入2-溴-4-氟-5-硝基苯胺(1.0g，4.27mmol)，n-甲基哌嗪(2.13g，21.3mmol)，dipea(2.75g，21.3mmol)和nmp(20ml)，加毕，升温至120℃反应1.5h，tlc监测反应。原料反应完全后，降温至室温，将反应液倒入100ml水中，水相用乙酸乙酯(100ml×2)萃取2次，合并有机相，减压浓缩得粗品。粗品经柱层析纯化，用dcm/meoh＝50/1洗脱，收集产品并减压浓缩，得到1.4g淡红色固体，收率：104.4％。
第三步：4-(4-甲基哌嗪-1-基)-5-硝基-2-乙烯基苯胺
氩气保护下，向100ml单口瓶中依次加入2-溴-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-5-硝基苯胺(1.3g，4.14mmol)，乙烯基硼酸(956mg，6.21mmol)，醋酸钯(278mg，1.24mmol)，三苯基膦(542mg，2.07mmol)，碳酸铯(13.5g，41.4mmol)，甲苯(40ml)和水(10ml)。加毕，升温至100℃搅拌反应2-3h。原料反应完全后降温至室温，加入50ml水，用乙酸乙酯(100ml×2)萃取2次，合并有机相，浓缩得粗品。粗品经柱层析纯化，以dcm/meoh＝50/1洗脱，收集产品并减压浓缩，得490mg淡红色油状物，收率：45.4％。
第四步：(1-甲基-1h-吲唑-5-基)-n-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)-5-硝基-2-乙烯基苯基)嘧啶-4-胺
以4-(4-甲基哌嗪-1-基)-5-硝基-2-乙烯基苯胺和中间体a1为原料，制备过程参见实施例150，得到460mg淡红色固体，收率：55.7％。
第五步：6-乙基-n1-(6-(1-甲基-1h-吲唑-5-基)嘧啶-4-基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯-1,3-二胺
以(1-甲基-1h-吲唑-5-基)-n-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)-5-硝基-2-乙烯基苯基)嘧啶-4-胺为原料，制备过程参见实施例167第二步。得到120mg淡红色固体，收率：58.4％。
第六步：n-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-乙基-5-{[6-(1-甲基-1h-吲唑-5-基)嘧啶-4-基]氨基}苯基)丙烯酰胺
以6-乙基-n1-(6-(1-甲基-1h-吲唑-5-基)嘧啶-4-基)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯-1,3-二胺为原料，制备过程参见实施例167第三步，得40mg淡黄色固体，收率：21.1％。
ms(esi+)m/z＝497.25[m+h]+.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.05(s,1h),8.96(s,1h),8.53(s,1h),8.47(s,1h),8.15(s,1h),8.05(d,j＝8.8hz,1h),7.96(s,1h),7.73(d,j＝8.8hz,1h),7.09(d,j＝9.2hz,2h),6.60-6.67(m,1h),6.24(d,j＝16.8hz,1h),5.75(d,j＝10.8hz,1h),4.07(s,3h),2.86(s,4h),2.61-2.70(m,6h),2.26(s,3h),1.10(t,j＝7.6hz,3h).
实施例432.终产物283制备
n-(2-(4-吗啉基哌啶-1-基)-4-乙基-5-{[6-(1-甲基-1h-吲唑-5-基)嘧啶-4-基]氨基}苯基)丙烯酰胺(终产物283)
以2-溴-4-氟-5-硝基苯胺和4-吗啉基哌啶为原料，运用合成终产物282的方法制备终产物283。
ms(esi+)m/z＝567.26[m+h]+.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.04(s,1h),8.95(s,1h),8.54(s,1h),8.47(s,1h),8.15(d,j＝0.4hz,1h),8.06(dd,j＝1.2,8.4hz,1h),8.00(s,1h),7.73(d,j＝6.8hz,1h),7.10(s,1h),7.06(s,1h),6.67-6.73(m,1h),6.25(dd,j＝1.6,13.6hz,1h),5.75(dd,j＝1.2,9.6hz,1h),4.08(s,3h),3.60(s,4h),3.05(s,4h),2.67(t,j＝9.2hz,2h),2.57-2.60(m,2h),2.57(s,2h),2.27(t,j＝8.8hz,1h),1.88(d,j＝8.4hz,2h),1.70-1.76(m,2h),1.10(t,j＝6.0hz,3h).
实施例433.终产物284制备
n-(2-(4-(3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基)-4-甲氧基-5-{[6-(1-甲基-1h-吲唑-5-基)嘧啶-4-基]氨基}苯基)丙烯酰胺(终产物284)
第一步：(4-(3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基)-2-甲氧基-5-硝基苯基)氨基甲酸叔丁酯
以(4-氟-2-甲氧基-5-硝基苯基)氨基甲酸叔丁酯和3-(二甲氨基)吡咯烷双盐酸盐为原料，制备过程参见实施例113第二步。
第二步：1-(4-氨基-5-甲氧基-2-硝基苯基)-n，n-二甲基吡咯烷-3-胺
于100ml单口瓶中依次加入(4-(3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基)-2-甲氧基-5-硝基苯基)氨基甲酸叔丁酯(210mg，1.91mmol)，dcm(10ml)和三氟乙酸(4ml)，室温搅拌30min。反应完全后，用饱和碳酸氢钠溶液调ph至碱性，用二氯甲烷(30ml×3)萃取3次，合并有机相，有机相用饱和食盐水(30ml×2)洗2次，无水硫酸钠干燥30min，抽滤，减压浓缩，粗品经柱层析纯化，用dcm/ch3oh＝30/1洗脱，收集产品并减压浓缩，得110mg红色油状物.
第三步：n-(4-(3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基)-2-甲氧基-5-硝基苯基)-6-(1-甲基-1h-吲唑-5-基)嘧啶-4-胺
以1-(4-氨基-5-甲氧基-2-硝基苯基)-n,n-二甲基吡咯烷-3-胺和中间体a1为原料，制备过程参见实施例150。
第四步：(3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基)-6-甲氧基-n1-(6-(1-甲基-1h-吲唑-5-基)嘧啶-4-基)苯-1,3-二胺
以n-(4-(3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基)-2-甲氧基-5-硝基苯基)-6-(1-甲基-1h-吲唑-5-基)嘧啶-4-胺为原料。制备过程参见实施例167第二步。
第五步：n-(2-(4-(3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基)-4-甲氧基-5-{[6-(1-甲基-1h-吲唑-5-基)嘧啶-4-基]氨基}苯基)丙烯酰胺
以(3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基)-6-甲氧基-n1-(6-(1-甲基-1h-吲唑-5-基)嘧啶-4-基)苯-1,3-二胺为原料。制备过程参见实施例167第三步。
ms(esi+)m/z＝513.23[m+h]+.1hnmr(500mhz,dmso-d6)δ9.41(s,1h),8.64(s,1h),8.55(s,1h),8.46(s,1h),8.16(s,1h),8.06(d,j＝9.0hz,1h),7.73(d,j＝9.0hz,1h),7.60(s,1h),7.22(s,1h),6.46-6.52(m,2h),6.21(d,j＝18.0hz,1h),5.70(d,j＝10.0hz,1h),4.08(s,3h),3.84(s,3h),3.36-3.41(m,1h),3.20-3.28(m,3h),2.66(d,j＝25.6hz,1h),2.24(d,j＝65.3hz,6h),2.08(d,j＝5.1hz,1h),1.72(m,1h).
实施例434-439.
以中间体a和实施例83-90合成的硝基苯胺为原料按照合成终产物284方法制备终产物285-290。(表6)
表6终产物285-290
实施例440.终产物291制备
n-(4-环丙氧基-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-5-((6-(1-甲基-1h-吲唑-5-基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(终产物291)
第一步：2，4-二氟苯胺
于100ml单口瓶中依次加入2，4-二氟-1-硝基苯(1g)，甲醇(10ml)和pd/c(100mg)，置换氢气三次，室温搅拌反应2-3h。过滤，滤液减压浓缩得810mg产品。
第二步：2，4-二氟-5-硝基苯胺
于100ml三口瓶中加入2，4-二氟苯胺(630mg，4.88mmol)和浓硫酸(10ml)，冰水浴降温到0-5℃。分批缓慢加入硝酸钾(542mg，1.1eq)，保温反应1-2h。将反应液缓慢滴加入纯化水(200ml)，用碳酸钠固体调节ph到中性，用乙酸乙酯(50ml×3)萃取3次，合并有机相，饱和食盐水洗2次，无水硫酸钠干燥30min，过滤，滤液减压浓缩得750mg产品。
第三步：4-环丙氧基-2-氟-5-硝基苯胺
向100ml三口瓶中加入2，4-二氟-5-硝基苯胺(650mg)和dmf(20ml)，冰水浴降温到0-5℃，加入环丙醇(216.8mg，1eq)。然后分批缓慢加入叔丁醇钠(466mg，1.3eq)保温反应1-2h。将反应液倒入纯化水(100ml)，用乙酸乙酯(50ml×3)萃取3次，合并有机相，饱和食盐水洗2次，无水硫酸钠干燥30min，过滤，滤液减压浓缩得粗品，粗品经柱层析纯化，洗脱液：pe/ea＝10/1，收集产品，减压浓缩得392mg产品。
第四步：5-环丙氧基n1-(2-(二甲基氨基)乙基)-n1-甲基-4-硝基苯-1，2-二胺
于100ml三口瓶中依次加入4-环丙氧基-2-氟-5-硝基苯胺(300mg)，dmf(5ml)，n1，n1，n2-三甲基乙二胺(433mg，3eq)和dipea(548mg，3eq)，磁力搅拌溶解，油浴升温至50-60℃，搅拌反应6-7h。反应结束后，自然降温到室温，加入纯化水(50ml)，用乙酸乙酯(30ml×3)萃取3次，合并有机相，饱和食盐水洗2次，无水硫酸钠干燥30min，过滤，滤液减压浓缩得粗品，粗品经柱层析纯化，洗脱液：dcm/meoh＝20/1，收集产品，减压浓缩得292mg产品。
第五步：n-(4-环丙氧基-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-5-硝基苯基)-2，2，2-三氟乙酰胺
向100ml三口瓶中加入5-环丙氧基n1-(2-(二甲基氨基)乙基)-n1-甲基-4-硝基苯-1，2-二胺(310mg)和乙酸乙酯(25ml)，室温搅拌下滴加三氟乙酸酐(243mg，1.1eq)的乙酸乙酯(0.5ml)溶液，滴加完毕后，室温搅拌反应1h。加入纯化水(50ml)，用乙酸乙酯(30ml×3)萃取3次，合并有机相，饱和食盐水洗2次，无水硫酸钠干燥30min，过滤，滤液减压浓缩得300mg产品。
第六步：n-(5-氨基-4-环丙基-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)苯基)-2，2，2-三氟乙酰胺
于100ml单口瓶中依次加入n-(4-环丙氧基-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-5-硝基苯基)-2，2，2-三氟乙酰胺(300mg)，甲醇(10ml)和pd/c(30mg)，置换氢气三次，室温反应2-3h。过滤，滤液减压浓缩得300mg油状产品。
第七步：n-(4-环丙氧基-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-5-((6-(1-甲基-1h-吲唑-5-基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)-2，2，2-三氟乙酰胺
氩气保护下，于100ml三口瓶中依次加入n-(5-氨基-4-环丙基-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)苯基)-2，2，2-三氟乙酰胺(80mg)，中间体a1(54mg，1eq)，碳酸铯(144mg，2eq)，xantphos(26mg，0.2eq)，甲苯(10ml)和pd2(dba)3(20mg，0.1eq)，油浴升温到90-95℃，搅拌反应8-10h。降温至室温，反应液减压浓缩得粗产品，粗产品经柱层析纯化，洗脱液：dcm/meoh＝10/1，收集产品，减压浓缩得80mg产品。
第八步：5-环丙氧基n1-(2-(二甲基氨基)乙基)-n1-甲基-n4-(6-(1-甲基-1h-吲唑-5-基)嘧啶-4-基)苯-1，2，4-三胺
于100ml单口瓶中加入n-(4-环丙氧基-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-5-((6-(1-甲基-1h-吲唑-5-基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)-2，2，2-三氟乙酰胺(80mg)和乙醇/水＝1/1的1n哌啶溶液(8ml)，室温搅拌反应8-10h。加入纯化水(30ml)，乙酸乙酯(30ml)，分液，水相用乙酸乙酯萃取2次，合并有机相，无水硫酸钠干燥30min，过滤，滤液减压浓缩得粗品，粗品经柱层析纯化，洗脱液：dcm/meoh＝10/1，收集产品，减压浓缩得50mg产物。
第九步：n-(4-环丙氧基-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-5-((6-(1-甲基-1h-吲唑-5-基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺
以5-环丙氧基n1-(2-(二甲基氨基)乙基)-n1-甲基-n4-(6-(1-甲基-1h-吲唑-5-基)嘧啶-4-基)苯-1，2，4-三胺为原料，按照实施例167第三步合成方法制备终产物291。ms(esi+)m/z＝527.06[m+h]+.1hnmr(500mhz,dmso-d6)δ9.25(s,1h),9.19(s,1h),8.61(s,1h),8.53(s,1h),8.41(s,1h),8.16(s,1h),8.12(dd,j＝8.9,1.0hz,1h),7.75(d,j＝8.9hz,1h),7.30(s,1h),7.18(s,1h),6.62-6.68(m,1h),6.23(dd,j＝17.0,1.5hz,1h),5.71(dd,j＝12.0,1.5hz,1h),4.08(s,3h),3.93-3.96(m,1h),2.98(s,2h),2.71(s,3h),2.36-2.49(m,2h),2.20(brs,6h),0.76-0.82(m,4h).
实施例441.终产物292制备
n-(4-环丙氧基-2-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-5-((4-(1-甲基-1h-吲唑-5-基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(终产物292)
以2，4-二氟苯胺和中间体a3为原料，按照合成终产物291的方法制备终产物292。ms(esi+)m/z＝527.26[m+h]+.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.15-9.19(m,3h),8.85(s,1h),8.48(d,j＝5.0hz,1h),8.30(d,j＝8.8hz,1h),8.12(s,1h),7.71(d,j＝8.9hz,1h),7.44(d,j＝5.0hz,1h),7.26(s,1h),6.68-6.75(m,1h),6.32(d,j＝17.1hz,1h),5.78(d,j＝10.0hz,1h),4.09(s,3h),3.93(brs,1h),2.93(t,j＝6.0hz,2h),2.71(s,3h),2.35(t,j＝5.6hz,2h),2.18(s,6h),0.76-0.80(m,4h).
实施例442.终产物293制备
n-(2-((1-乙酰基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-4-甲氧基-5-((6-(1-甲基-1h-吲唑-5-基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺(终产物293)
第一步：((5-甲氧基-4-((6-(1-甲基-1h-吲唑-5-基)嘧啶-4-基)氨基)-2-硝基苯基)(甲基)氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
于100ml三口瓶中加入中间体c1(300mg，0.76mmol)，碳酸钾(726mg，9eq)，1-叔丁氧羰基-4-甲氨基哌啶(489mg，3eq)，碘化钾(758mg，6eq)和dmf(20ml)，油浴升温到50-60℃，搅拌反应3天，降温至室温，加入纯化水(20ml)，dcm(20ml)，分液，水相用dcm(30ml×4)萃取4次，合并有机相，饱和食盐水(30ml×3)洗3次，无水硫酸钠干燥30min，过滤，滤液减压浓缩得粗品，粗品经柱层析纯化，洗脱液：dcm/meoh＝50/1，收集产品，减压浓缩得340mg红色固体。
第二步：2-甲氧基-n4-甲基-n1-(6-(1-甲基-1h-吲唑-5-基)嘧啶-4-基)-5-硝基-n4-(哌啶-4-基)苯-1，4-二胺
于100ml单口瓶中加入(5-甲氧基-4-((6-(1-甲基-1h-吲唑-5-基)嘧啶-4-基)氨基)-2-硝基苯基)(甲基)氨基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(340mg，0.6mmol)和dcm(5ml)，搅拌溶解后，向体系中滴加三氟乙酸(4ml)，滴毕室温搅拌反应。tlc监控反应，反应结束后，将体系浓缩，用饱和碳酸氢钠溶液调ph＝9，dcm(30ml×3)萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥30min，抽滤，滤液减压浓缩得粗品，粗品经柱层析纯化，洗脱剂：dcm/meoh＝10/1，收集产品，减压浓缩得120mg产品。
第三步：1-(4-((5-甲氧基-4-((6-(1-甲基-1h-吲唑-5-基)嘧啶-4-基)氨基)-2-硝基苯基)(甲基)氨基)哌啶-1-基)乙酮
于100ml三口瓶中加入2-甲氧基-n4-甲基-n1-(6-(1-甲基-1h-吲唑-5-基)嘧啶-4-基)-5-硝基-n4-(哌啶-4-基)苯-1，4-二胺(120mg，0.25mmol)，三乙胺(50mg，2eq)和dcm(15ml)，搅拌溶解。降温至0-5℃，向体系中滴加醋酸酐(30mg，1.2eq)，滴毕升至室温搅拌。tlc监控反应进程，反应结束后，加入纯化水(20ml)，乙酸乙酯(30ml)，分液，水相用乙酸乙酯(30ml×3)萃取3次，合并有机相，用饱和食盐水(30ml×2)洗2次，无水硫酸钠干燥30min，过滤，滤液减压浓缩得100mg粗品。
第四、五步：n-(2-((1-乙酰基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-4-甲氧基-5-((6-(1-甲基-1h-吲唑-5-基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丙烯酰胺
以1-(4-((5-甲氧基-4-((6-(1-甲基-1h-吲唑-5-基)嘧啶-4-基)氨基)-2-硝基苯基)(甲基)氨基)哌啶-1-基)乙酮为原料，按照实施例167第二、三步合成方法制备终产物293。
ms(esi+)m/z＝555.30[m+h]+.1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.14(s,1h),8.75(s,1h),8.61(s,1h),8.55(s,1h),8.50(s,1h),8.18(s,1h),8.09(dd,j＝8.8,1.2hz,1h),7.77(d,j＝9.2hz,1h),7.43(s,1h),6.95(s,1h),6.61-6.68(m,1h),6.26(dd,j＝16.8,1.2hz,1h),5.74(d,j＝11.6hz,1h),4.38(d,j＝12.8hz,1h),4.09(s,3h),3.85(s,3h),3.79-3.84(m,1h),2.92-2.97(m,2h),2.63(s,2h),2.44-2.48(m,2h),1.98(s,3h),1.74-1.78(m,2h),1.37-1.50(m,2h).
实施例443.终产物294制备
n-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-甲氧基-5-{[6-(1-甲基-1h-吲唑-5-基)嘧啶-4-基]氨基}苯基)丙烯酰胺(终产物294)
第一步：2,2,2-三氟-n-(4-甲酰基-2-甲氧基-5-硝基苯基)乙酰胺
氩气保护下，于100ml三口瓶中依次加入5-甲氧基-2-硝基-4-(2,2,2-三氟乙酰氨基)苯甲酸(1g，3.24mmol)，dcm(10ml)和2滴dmf，室温搅拌下滴加草酰氯(824mg，2eq)的dcm溶液(1ml)，保温搅拌1h至体系全部澄清。将反应液转入100ml单口瓶，减压浓缩至剩余三分之一，加入甲苯20ml，室温减压浓缩。氩气保护下，将剩余物转入100ml三口瓶，降温至0-5℃，加入四三苯基膦(374mg)，然后缓慢滴加三丁基氢化锡(1400mg)，约30min，滴毕，保温搅拌反应2h，再升温到室温反应过夜。反应完毕后，将反应液减压浓缩，经柱层析纯化，用pe/ea＝5/1洗脱，收集产品并减压浓缩得446mg，收率：47％。
第二步：2-甲氧基-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-5-硝基苯胺
于100ml三口瓶中依次加入2,2,2-三氟-n-(4-甲酰基-2-甲氧基-5-硝基苯基)乙酰胺(100mg，0.34mmol)，甲醇(5ml)，1-2滴醋酸，n-甲基哌嗪(34mg，0.34mmol)，室温搅拌下分批加入氰基硼氢化钠(64mg，1.0mmol)约10min，加毕，室温搅拌反应约6-7h。反应完毕后，加入1n氢氧化钠水溶液(5ml)室温搅拌，tlc监控反应，反应完毕后，加入20ml纯化水，20ml乙酸乙酯，搅拌5min，分液，水相用乙酸乙酯(20ml×2)萃取2次，合并有机相，用饱和食盐水洗2次，无水硫酸钠干燥30min，减压浓缩得粗品，粗品经柱层析纯化，用dcm/meoh＝50/1→10/1梯度洗脱，收集产品并减压浓缩得30mg。
第三步：n-(2-甲氧基-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-5-硝基苯基)-6-(1-甲基-1h-吲唑-5-基)嘧啶-4-胺
以2-甲氧基-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-5-硝基苯胺和中间体a1为原料，制备过程参见实施例150。
第四、五步：n-(2-(4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-4-甲氧基-5-{[6-(1-甲基-1h-吲唑-5-基)嘧啶-4-基]氨基}苯基)丙烯酰胺
以n-(2-甲氧基-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-5-硝基苯基)-6-(1-甲基-1h-吲唑-5-基)嘧啶-4-胺为原料，制备过程参见实施例167第二、三步。
ms(esi+)m/z＝513.16[m+h]+.1hnmr(500mhz,dmso-d6)δ10.62(s,1h),8.81(s,1h),8.66(s,1h),8.63(d,j＝0.5hz,1h),8.50(d,j＝0.5hz,1h),8.17(d,j＝0.5hz,1h),8.08(dd,j＝1.5,9.0hz,1h),7.76(d,j＝9.0hz,1h),7.48(s,1h),7.01(s,1h),6.30-6.36(m,1h),6.23(dd,j＝2.0,17.01h),5.79(dd,j＝1.5,10.0hz,1h),4.09(s,3h),3.84(s,3h),3.59(s,2h),2.30-2.50(m,8h),2.19(s,3h).
实施例444.终产物295制备
(e)-4-(二甲基氨基)-n-(2-乙酰基-4-甲氧基-5-((6-(1-甲基-1h-吲唑-5-基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丁-2-烯酰胺(终产物295)
第一步：(4-(1-丁氧基乙烯基)-2-甲氧基-5-硝基苯基)氨基甲酸叔丁酯
氩气保护下，向100ml单口瓶中依次加入(4-溴-2-甲氧基-5-硝基苯基)氨基甲酸叔丁酯(1.4g，4.04mmol)，1-(乙烯氧基)丁烷(4.04g，40.4mmol)，三乙胺(531.2mg，5.26mmol)，正丁醇(60ml)和pd(pph3)4(468mg，0.404mmol)。升温至110℃反应12h。降温至室温，向反应液中加入50ml水，用乙酸乙酯(50ml×3)萃取3次，合并有机相，浓缩，得到粗品。粗品经柱层析纯化，用pe/ea＝100/1洗脱，收集产品并减压浓缩，得到1.4g淡黄色油状物，收率：94.6％。
第二步：(4-乙酰基-2-甲氧基-5-硝基苯基)氨基甲酸叔丁酯
向100ml单口瓶中依次加入(4-(1-丁氧基乙烯基)-2-甲氧基-5-硝基苯基)氨基甲酸叔丁酯(1.4g，3.8mmol)，四氢呋喃(30ml)和3nhcl(12ml)，加毕，室温搅拌反应1h。原料反应完全，加入50ml饱和碳酸钠水溶液调ph>7，用乙酸乙酯(50ml×3)萃取3次，合并有机相，浓缩，得到1.0g淡黄色油状物，收率：84.7％。
第三步：1-(4-氨基-5-甲氧基-2-硝基苯基)乙-1-酮
向100ml单口瓶中依次加入(4-乙酰基-2-甲氧基-5-硝基苯基)氨基甲酸叔丁酯(1.0g，3.22mmol)，二氯甲烷(20ml)和三氟乙酸(8ml)。加毕，室温反应1h，加入60ml饱和碳酸钠水溶液调ph>7，水相用二氯甲烷(50ml×2)萃取2次，合并有机相，浓缩，得到520mg淡黄色固体，收率：76.8％。
第四步：1-(5-甲氧基-4-((6-(1-甲基-1h-吲唑-5-基)嘧啶-4-基)氨基)-2-硝基苯基)乙-1-酮
以1-(4-氨基-5-甲氧基-2-硝基苯基)乙-1-酮(162mg，0.771mmol)和中间体a1为原料，dme为溶剂，制备过程参见实施例150。
第五步：1-(2-氨基-5-甲氧基-4-((6-(1-甲基-1h-吲唑-5-基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)乙-1-酮
向100ml单口瓶中依次加入1-(5-甲氧基-4-((6-(1-甲基-1h-吲唑-5-基)嘧啶-4-基)氨基)-2-硝基苯基)乙-1-酮(100mg，0.24mmol)，四氢呋喃/二氯甲烷＝1/1(20ml)和pd/c(10mg)。加毕，室温加氢反应10h。过滤，滤液减压浓缩，得到70mg淡黄色固体，收率：75.4％。
第六步：(e)-4-(二甲基氨基)-n-(2-乙酰基-4-甲氧基-5-((6-(1-甲基-1h-吲唑-5-基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)丁-2-烯酰胺
向50ml单口瓶中依次加入反式-4-二甲基胺基巴豆酸盐酸盐(220mg，1.70mmol)，乙腈(3ml)和1滴dmf，室温下滴加草酰氯(600mg，4.76mmol)，加毕，升温至45℃反应0.5-1h，原料反应完全，减压浓缩，得到200mg黑色油状物。
向100ml单口瓶中依次加入1-(2-氨基-5-甲氧基-4-((6-(1-甲基-1h-吲唑-5-基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)乙-1-酮(70mg，0.18mmol)和二氯甲烷(10ml)，降温至0-5℃，滴加(e)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰氯(80.7mg，0.549mmol)的乙腈溶液(2ml)。加毕，室温反应30min，向反应液中加入30ml饱和碳酸氢钠水溶液，水相用二氯甲烷(50ml×3)萃取3次，合并有机相，减压浓缩得到粗品。粗品经薄层制备板纯化，得6mg淡黄色固体，收率：7％。
ms(esi+)m/z＝500.12[m+h]+.1hnmr(500mhz,dmso-d6)δ11.54(s,1h),9.51(s,1h),9.12(s,1h),8.79(s,1h),8.55(s,1h),8.20(s,1h),8.12(d,j＝8.5hz,1h),7.85(s,1h),7.79(d,j＝8.5hz,1h),7.52(s,1h),6.74-6.80(m,1h),6.21(d,j＝15.5hz,1h),4.10(s,3h),3.99(s,3h),3.10(d,j＝11.0hz,2h),2.64(s,3h),2.20(s,6h).
实施例445.终产物296的制备
应用cn102083800a中实施例92的方法合成该专利中已知化合物(终产物296)(见表7)
表7.作为egfr激酶抑制剂的化合物(终产物)
实施例446：细胞增殖抑制实验
本实验采用celltiter-glo(ctg)法测量前述制备的化合物在3个肿瘤细胞株nci-h1975、pc-9和a-431中增殖抑制作用，并计算50％抑制浓度ic50。
1实验设计
在所选细胞上测定化合物，并设定溶媒对照，共检测9个浓度，每个浓度3个复孔。
2试剂和耗材
1)2.1胎牛血清fbs(gbico,cat#10099-141)
2)
3)96孔透明平底黑壁板(
3仪器
envision多标记微孔板检测仪，perkinelmer，2104-0010a；
co2培养箱，thermoscientific，model3100series；
生物安全柜，thermoscientific，model1300seriesa2；
倒置显微镜，olympus，ckx41sf；
冰箱，siemens，kk25e76ti。
4实验方法
第一天:细胞培养和接种
1)收获处于对数生长期的细胞并采用细胞计数仪进行细胞计数。用台盼蓝排斥法检测细胞活力，确保各细胞系活力在90％以上。
2)用完全培养液稀释调整细胞浓度，添加90μl细胞悬液至96孔板(t0板和待测药板)中使细胞密度达到指定的浓度。
3)96孔板中的细胞置于37℃、5％co2、95％湿度条件下培养过夜。
第二天:t0读板
1)向t0板中补入10μl培养液。
2)融化ctg试剂并平衡细胞板至室温30分钟。
3)每孔加入等体积的ctg溶液。
4)在定轨摇床上振动2分钟使细胞裂解。
5)将细胞板放置于室温10分钟以稳定冷光信号。
6)用envision读取冷光值。
加药
1)药物稀释。将待测化合物溶解并分装，进行梯度稀释，得到10倍溶液。
2)加药。在已接种细胞的96孔板中每孔加入10μl药物溶液，每个细胞浓度设置三个复孔。被测化合物在a-431上的最高浓度为30μm，9个浓度，3倍稀释；在nci-h1975及pc-9上的最高浓度为1.111μm，9个浓度，3倍稀释。
3)培养。将已加药的96孔板中的细胞置于37℃、5％co2、95％湿度条件下继续培养3天，分别进行ctg检测分析。
第三天:终点读板
1)融化ctg试剂并平衡细胞板至室温30分钟。
2)每孔加入等体积的ctg溶液。
3)在定轨摇床上振动2分钟使细胞裂解。
4)将细胞板放置于室温10分钟以稳定冷光信号。
5)用envision读取冷光值。
5数据处理
使用graphpadprism5.0软件分析数据，利用非线性s曲线回归来拟合数据得出剂量-效应曲线，并由此计算ic50值。
细胞存活率(％)＝(lum待测药-lum培养液对照)/(lum细胞对照-lum培养液对照)×100％.
6实验结果
表8.待测化合物在nci-h1975、pc-9和a-431细胞系上的抑制作用
注：nc表示未计算；nt表示未测试。
结论：本发明实施例终产物对egfr突变型nci-h1975细胞具有很强的抑制活性，对野生型a-431细胞抑制活性较低，对野生型/突变型细胞具有很好的选择性。
实施例447：p-gp底物评价实验
1.试验设计
细胞培养
1)使用含l-谷氨酰胺的高糖dmem培养基，添加10％胎牛血清、0.1mg/ml链霉素和0.6μg/ml青霉素。
2)mdckii-mdr1培养于t-75细胞培养瓶。培养箱设置为37℃、5％co2、保证相对湿度95％。细胞汇合度达到70‐90％时可用于接种transwell。
3)细胞接种前，向transwell上室每孔中加入50μl细胞培养基，下层培养板内加入25ml细胞培养基。将培养板置于37℃，5％co2培养箱内孵育1小时后可用于接种细胞。
4)使用5mlpbs轻轻清洗细胞。弃掉pbs，加入1.5ml含edta的胰酶，于37℃孵育5到10分钟至细胞完全脱落。加入含血清的培养基终止消化。
5)吸取细胞混悬液转移至圆底离心管，于120×g离心10分钟。
6)使用培养基重悬细胞，终浓度为1.56×106cells/ml。
mdckii-mdr1细胞接种
1)将细胞悬液以50μl每孔加入到96孔transwell培养板上室中，最终接种密度为5.45×105cells/cm2。
2)接种后48小时开始换液，培养4-7天，隔一天换一次培养基。
细胞单层膜完整性的评价
1)mdckii-mdr1和mdckii经过4-7天培养后，应完全汇合并完成分化。此时，可应用于穿透试验。
2)用电阻仪(millipore，usa)测量单层膜电阻，记录每孔电阻。
3)测定结束后，将transwell培养板放回培养箱。
4)电阻值的计算：
测定电阻值(ohms)x膜面积(cm2)＝teer值(ohm·cm2)
若teer值<42ohms·cm2，则该孔不能用于穿透试验。
药物穿透试验
1)从培养箱中取出mdckii-mdr1transwell培养板。使用hbss(25mmhepes，ph7.4)缓冲液润洗细胞单层膜两次，37℃条件下孵育30分钟。
2)测定化合物由顶端到基底端的转运速率。向上层小室(顶端)每孔加入100μl含ta或对照药的hbss(25mmhepes，ph7.4)缓冲液，下层小室(基底端)每孔加入300μlhbss(25mmhepes，ph7.4)缓冲液。
3)测定化合物由基底端到顶端的转运速率。向上层小室(顶端)每孔加入100μlhbss(25mmhepes，ph7.4)缓冲液，下层小室(基底端)每孔加入300μl含ta或对照药的hbss(25mmhepes，ph7.4)缓冲液。
4)将上下的转运装置合并后，37℃条件下孵育2小时。
5)孵育完成后，分别从transwell培养板上室和下室每孔取样80μl加入到新的样品管中。向样品管内加入3倍体积含内标的乙腈(200nm阿普唑仑，200nm拉贝洛尔，200nm双氯芬酸，100nm甲苯磺丁脲)，涡旋5分钟后，于4,000g离心15分钟。吸取上清液70μl，与等体积水稀释之后进行lc-ms/ms分析。所有样品进行三平行制备。
6)用荧光黄的渗漏评价孵育2小时后细胞单层膜的完整性，使用hbss(25mmhepes,ph7.4)稀释荧光黄储备液至最终浓度100μm。在上侧的transwell插板的每个孔中加入荧光黄溶液100μl，下侧接收板的每个孔中加300μlhbss(25mmhepes，ph7.4)。37℃下孵育30分钟后，分别从每孔上下层吸出80μl溶液至一个新的96孔板中。使用酶标仪，激发波长485nm和发射波长530nm条件下进行荧光测定。
2.数据处理
数据计算均使用excel进行，化合物的表观渗透系数(papp，单位：cm/s)用以下公式计算得出：
公式中膜面积为transwell-96孔板膜面积(0.143cm2)；孵育时间单位为秒(s)。外排率使用以下的公式计算得出：
表9.待测化合物的外排率