本发明涉及水处理技术领域，尤其涉及一种降解螺旋藻的方法。
背景技术：
近年来，伴随着经济的高速发展和生活品质不断提高，越来越多营养丰富、成分复杂的生产生活废水排入河道湖泊。这些大量含有氮、磷等污染物的废水造成排入水体富营养化，严重的导致蓝藻爆发，破坏了水体的生态环境，不仅威胁水生生物的生存，甚至威胁到了人类的身体健康。近年来，国内淡水水体的富营养化越来越严重，一些大型湖泊、水库和养殖水体均发现藻类大量生长，严重的形成蓝藻水华。螺旋藻是我国引起蓝藻水华的主要藻种，其代谢过程中会释放出藻毒素，对人类生产生活造成严重影响。因此，治理蓝藻水华刻不容缓。
目前，治理蓝藻水华的方法主要有三种：一是物理方法，如围隔栅栏、直接过滤法、人工和机械打捞等，优点是直接清除水体中的藻类且不产生二次污染，但效率低、费钱、大规模操作困难，该方法无法适用于规模较大的景观水体；二是化学方法，如投加cuso4等杀藻剂和絮凝剂，优点是操作简单，起效快，但投加的化学药剂对水生生物有毒害作用，易造成二次污染；三是生物方法，种群竞争抑藻、鱼类吞噬除藻、微生物除藻和综合防治法都是针对湖泊富营养化的生物控制技术。生物法具有廉价、高效、安全、维持水体生态平衡等优势，目前已经成为水体富营养化治理研究的热点。对于大面积水体来说，物理、化学方法均不利于实施，而生物法则利用生物间作用和生物自然繁殖，可有效实现大面积水体的除藻控藻。
细菌和微藻是水环境中分别最广、数量最多的两种生物，在自然环境下，细菌和微藻共同维护着水生生态系统中氮、磷和其他营养物质的平衡。自然界中存在溶藻细菌，起到维持藻类生物量平衡的重要作用，而当氮磷等营养物质大量超标时平衡被打破，藻类大量繁殖，天然存在的溶藻细菌难以继续维持藻类生物量平衡。因此，分离得到高效溶藻细菌，以细菌治理防控蓝藻已成为当前蓝藻水华治理的一个热点。目前，已报导多个具有溶藻功能的细菌，其中以芽孢杆菌属，假单胞菌和拟杆菌属等为主。
公布号为cn1055861395a的专利公开了一种有效抑制水华螺旋藻的复合菌剂dh-1及其应用。该专利的复合菌剂dh-1包括假单胞菌属的细菌、申氏杆菌属的细菌、热单胞菌属的细菌、德沃氏斯菌属的细菌和另类希灭氏菌属的细菌。该专利通过微生物水生微生态调节和“藻菌互作”的作用，从而达到抑制(去除)螺旋藻。但是，该专利需要多种菌种的协同作用，且投入量大，处理时间需要8天以上，抑制率只有84.4％。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题在于，提供一种降解螺旋藻的方法，采用降解菌液来降解螺旋藻，投入量少、处理时间短，且去除率高。
为了解决上述技术问题，本发明提供了一种降解螺旋藻的方法，包括：将降解菌液按0.01-10％添加量，接种到螺旋藻的培养液中，在温度为20-40℃、ph为5-10、光照强度为1600-2300lux的条件下共同培养，其中，所述降解菌液由门多萨假单胞菌(pseudomonasmendocina)制成，所述门多萨假单胞菌于2017年12月8日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，生物保藏编号为：gdmcc60297。
作为上述方案的改进，所述降解菌液包括未处理菌液、菌体重悬液和无菌上清液。
作为上述方案的改进，所述降解菌液的添加量为0.1-10％。
作为上述方案的改进，所述降解菌液的制备方法包括：
(1)取冰箱保藏的门多萨假单胞菌，于营养肉汤固体培养基平板上划线，在温度为26-33℃的条件下培养10-16h至长出单菌落；
(2)接种门多萨假单胞菌单菌落至营养肉汤液体培养基，在温度为26-33℃、转数为150-250rpm的条件下培养10-16h至对数生长期，再按0.5-2％的添加量转接至新鲜的营养肉汤液体培养基，按上述条件继续培养至对数生长期，得到未处理菌液；
(3)将未处理菌液进行离心，收集离心后的菌体，用无菌水重悬，得到菌体重悬液；
(4)将未处理菌液进行离心，收集离心后的上清液，用孔径小于0.5μm的滤膜过滤上清液，得无菌上清液。
作为上述方案的改进，离心转数为8000-15000rpm，温度为1-10℃。
作为上述方案的改进，滤膜的孔径小于等于0.22μm。
作为上述方案的改进，螺旋藻的培养液的制备方法，包括：将螺旋藻按5-20％添加量，接种于bg11培养基，在温度为25-35℃、光照强度为1600-2300lux的条件下培养至对数生长期。
作为上述方案的改进，在螺旋藻的培养液中加入700-1500mg/l的碳源。
作为上述方案的改进，所述碳源为葡萄糖、乙酸钠、柠檬酸三钠、淀粉中的一种或几种。
作为上述方案的改进，降解菌液接种到螺旋藻的培养液的培养条件为：ph为5.5-8.5，温度25-35℃。
实施本发明，具有如下有益效果：
本发明提供的一种降解螺旋藻的方法，采用降解菌液来降解螺旋藻，投入量少、处理时间短，且去除率高。其中，本发明通过对门多萨假单胞菌进行培养，制备出降解菌液，从而提高菌种的降藻能力。此外，本发明通过将门多萨假单胞菌培养至对数生长期，使得溶藻的代谢产物达到峰值，从而提高菌种降解螺旋藻的能力。
附图说明
图1是本发明实施例1的溶藻效果曲线图；
图2a是本发明实施例1在400倍显微镜下降解菌液添加前的螺旋藻显微镜检图；
图2b是本发明实施例1在400倍显微镜下降解菌液添加后的螺旋藻显微镜检图；
图3是本发明实施例2的溶藻效果曲线图；
图4是本发明实施例3的溶藻效果柱状图；
图5是本发明实施例4的溶藻效果柱状图；
图6是本发明实施例5的溶藻效果柱状图。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本发明作进一步地详细描述。
本发明提供了一种降解螺旋藻的方法，包括：将降解菌液按0.01-10％添加量，接种到螺旋藻的培养液中，在温度为20-40℃、ph为5-10、光照强度为1600-2300lux的条件下共同培养，其中，所述降解菌液由门多萨假单胞菌(pseudomonasmendocina)制成，所述门多萨假单胞菌(pseudomonasmendocina)于2017年12月8日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，生物保藏编号为：gdmcc60297。需要说明的是，本发明的门多萨假单胞菌具有高效抑藻功能。
需要说明的是，温度、ph值和关照强度对螺旋藻的溶解效果和抑制效果具有重要的影响作用。由于本申请的降解菌液需要门多萨假单胞菌来制备，而温度和ph值会门多萨假单胞菌的生长、繁殖和代谢。当ph值小于5或大于10时，门多萨假单胞菌会停止生长，甚至死亡。优选的，降解菌液接种到螺旋藻的培养液的培养条件为：ph为5.5-8.5，温度25-35℃。
具体的，本发明的降解菌液包括未处理菌液、菌体重悬液和无菌上清液。
优选的，降解菌液包括未处理菌液和无菌上清液，其中，降解菌液的添加量为0.05-10％。
最佳的，降解菌液包括未处理菌液，其中，降解菌液的添加量为10％。
未处理菌液和无菌上清液中含有大量的门多萨假单胞菌的分泌代谢产物，其具有较好的溶藻作用。而菌体重悬液只有单独的门多萨假单胞菌细胞，其在无碳源环境下因生长不明显，而溶藻效果不显著；而在碳源环境下，门多萨假单胞菌生长分泌溶藻物质，而同样具有抑藻和溶藻效果。因此，可以在螺旋藻的培养液中加入可提供codcr700-1500mg/l的碳源。优选的，所述碳源为葡萄糖、乙酸钠、柠檬酸三钠、淀粉中的一种或几种。
所述未处理菌液的制备方法包括：
(1)取冰箱保藏的门多萨假单胞菌，于营养肉汤固体培养基平板上划线，在温度为26-33℃的条件下培养10-16h至长出单菌落；
(2)接种门多萨假单胞菌单菌落至营养肉汤液体培养基，在温度为26-33℃、转数为150-250rpm的条件下培养10-16h至对数生长期，再按0.5-2％的添加量转接至新鲜的营养肉汤液体培养基，按上述条件继续培养至对数生长期，得到未处理菌液；
(3)将未处理菌液进行离心，收集离心后的菌体，用无菌水重悬，得到菌体重悬液；
(4)收集离心后的上清液，用孔径小于0.5μm的滤膜过滤上清液，得无菌上清液。
优选的，取-90℃至-60℃冰箱保藏的门多萨假单胞菌，于营养肉汤固体培养基平板上划线，在温度为28-31℃的条件下培养12-14h至长出单菌落；接种门多萨假单胞菌单菌落至营养肉汤液体培养基，在温度为28-31℃、转数为180-220rpm的条件下培养12-14h至对数生长期，再按0.5-2％的添加量转接至新鲜的营养肉汤液体培养基，按上述条件继续培养至对数生长期，得到未处理菌液；收集离心后的菌体，用无菌水重悬，得到菌体重悬液；将上述离心后的上清液，用孔径小于0.5um的滤膜过滤除菌，得无菌上清液。
优选的，取-85℃至-75℃冰箱保藏的门多萨假单胞菌，于营养肉汤固体培养基平板上划线，在温度为28-31℃的条件下培养12-14h至长出单菌落；接种门多萨假单胞菌单菌落至营养肉汤液体培养基，在温度为28-31℃、转数为180-220rpm的条件下培养12-14h至对数生长期，再按0.5-2％的添加量转接至新鲜的营养肉汤液体培养基，按上述条件继续培养至对数生长期，得到未处理菌液；将上述未处理菌液进行离心，离心转数为8000-15000rpm，温度为1-10℃，收集菌体后用无菌水重悬，得到菌体重悬液；将上述离心后的上清液，用孔径小于0.3μm的滤膜过滤除菌，得无菌上清液。
更佳的，取-80℃冰箱保藏的门多萨假单胞菌，于营养肉汤固体培养基平板上划线，在温度为30℃的条件下培养14h至长出单菌落；接种门多萨假单胞菌单菌落至营养肉汤液体培养基，在温度为30℃、转数为200rpm的条件下培养14h至对数生长期，再按0.5-2％的添加量转接至新鲜的营养肉汤液体培养基，按上述条件继续培养至对数生长期，得到未处理菌液；将上述未处理菌液进行离心，离心转数为10000rpm，温度为4℃，收集菌体后用无菌水重悬，得到菌体重悬液；将上述离心后的上清液，用孔径为0.22μm的滤膜过滤除菌，得无菌上清液。
由于门多萨假单胞菌主要通过间接作用分泌代谢产物溶藻，单独将门多萨假单胞菌加入bg11培养基中，由于该培养基缺少碳源菌体无法生长代谢，无法分泌相应代谢产物进行有效溶藻。因此本发明通过对门多萨假单胞菌进行培养，制备出降解菌液，从而提高菌种的降藻能力。此外，本发明通过将门多萨假单胞菌培养至对数生长期，使得溶藻的代谢产物达到峰值，从而提高菌种降解螺旋藻的能力。另外，通过在培养基中加入碳源，可促进门多萨假单胞菌的生长，从而提高菌种的溶藻能力。
因此，通过本发明，无论门多萨假单胞菌以何种菌液形式，都可获得较好的溶藻效果。
浮游植物的大量生长是水体富营养化的主要现象，其中叶绿素a是所有浮游植物门类都含有的叶绿素类型。其中，叶绿素a不仅作为水体营养状态划分的重要指标，而且可用于表征浮游植物的现存量。因此，本发明采用叶绿素a含量来表征水体中藻细胞的量。叶绿素a的检测方法如下：
将玻璃纤维滤膜放置在连有真空泵的抽滤器上，根据水样叶绿素浓度准确量取定量体积的水样进行抽滤。将过滤后的滤膜放入具塞玻璃离心管中，加入10ml90％丙酮溶液，盖紧塞帽剧烈振荡片刻，置于4℃冰箱避光浸泡2h，浸泡过程中需振荡3次。将离心管在转数为3500rpm、温度为4℃的条件下离心15min。取离心后的上清液倒入1cm比色皿中，以90％丙酮做参比，分别在630nm、647nm、664nm和750nm波长处测定吸光值。
计算公式如下：
ρchl-a＝[11.85(a664-a750)-1.54(a647-a750)-0.08(a630-a750)]v1/v2l；
溶藻率＝(ρ1-ρ2)/ρ1×100％；
抑藻率＝(ρ3-ρ2)/ρ3×100％。
式中：
ρchl-a—叶绿素a的质量浓度，μg/l；
a630—提取液在波长630处的吸光度值；
a647—提取液在波长647处的吸光度值；
a664—提取液在波长664处的吸光度值；
a750—提取液在波长750处的吸光度值；
v1—提取液体积，10ml；
v2—水样体积，l；
l—比色皿光程，1cm；
ρ1—样品起始叶绿素a含量，μg/l；
ρ2—样品当天叶绿素a含量，μg/l；
ρ3—对照当天叶绿素a含量，μg/l。
具体的，螺旋藻的培养液的制备方法，包括：
将螺旋藻按5-20％添加量，接种于bg11培养基，在温度为25-35℃、光照强度为1600-2300lux的条件下培养3-6天。
优选的，将螺旋藻按8-15％添加量，接种于bg11培养基，在温度为28-32℃、光照强度为1800-2100lux的条件下培养3天。
更佳的，将螺旋藻按10％添加量，接种于bg11培养基，在温度为30℃、光照强度为2000lux的条件下培养4天。
营养肉汤培液体养基的制备方法，包括：称取蛋白胨10g、牛肉浸出粉3g和氯化钠5g，加入1000ml蒸馏水搅拌溶解后调ph至7.2，于高压灭菌锅中121℃灭菌20min。
营养肉汤培固体养基的制备方法，包括：称取蛋白胨10g、牛肉浸出粉3g、氯化钠5g和琼脂粉20g，加入1000ml蒸馏水搅拌溶解后调ph至7.2，于高压灭菌锅中121℃灭菌20min。
bg11培养基的制备方法，包括：称取nano31.5g、k2hpo40.04g、mgso4·7h2o0.075g、cacl2·2h2o0.036g、柠檬酸0.006g、柠檬酸铁铵0.006g、edta-na20.001g、naco30.02g及微量元素a5溶液1ml于烧杯中，加入1000ml蒸馏水搅拌溶解后调ph至7.1，于高压灭菌锅中121℃灭菌20min。
其中，微量元素a5溶液的制备方法，包括：称取硼酸2.86g、mncl2·4h2o1.86g，znso4·7h2o0.22g，na2moo4·2h2o0.39g，cuso4·5h2o0.08g，co(no3)2·6h2o0.05g，加入1000ml蒸馏水，搅拌溶解。
下面以具体实施例来阐述本发明
实施例1
1、制备降解菌液
取-80℃冰箱保藏的门多萨假单胞菌，于营养肉汤固体培养基平板上划线，在温度为30℃的条件下培养12h至长出单菌落；接种门多萨假单胞菌单菌落至营养肉汤液体培养基，在温度为30℃、转数为200rpm条件下培养16h至对数生长期，再按1％添加量转接至新鲜的营养肉汤液体培养基，在温度为30℃、转数为200rpm的条件下培养12h至对数生长期，得到未处理菌液，备用。
2、制备螺旋藻的培养液
将螺旋藻按10％添加量接种于bg11培养基，在温度为30℃、光照强度为2000lux条件下培养3天，测得培养基中叶绿素a含量为516.9μg/l，对培养基进行稀释，使得培养基中叶绿素a的含量为100μg/l，ph为6.5。
3、利用降解菌液溶解螺旋藻
分别以0.01％、0.1％和10％添加量将上述未处理菌液加入螺旋藻的培养液中，并设置未投加降解菌液的空白实验组作为对照，在温度为30℃、光照强度为2000lux条件下培养5天，光暗比为12:12，每隔24h取样测样品中叶绿素a的含量，并做显微镜检，结果如图1和图2所示。
从图1中可知，当降解菌液的添加量为10％和0.1％时，门多萨假单胞菌有较好的溶藻效果，投加五天后分别溶解79.5％和50.5％的螺旋藻。当添加为0.01％时，溶藻效果不显著，螺旋藻在摇瓶中仍能较快生长，但相比空白组，仍具有一定的抑藻效果。相比空白对照，三种添加量条件下均有抑藻效果，其中添加量为10％、0.5％和0.01％时，五天后抑藻率分别为99.1％、97.7％和58.4％。图2a和图2b为显微镜检图，其中图2a为添加降解菌液前，图2b为添加降解菌液后。明显看出，添加降解菌液2天后，螺旋藻黄化现象明显，显微镜下可见丝状体断裂，细胞结构被破坏。
实施例2
1、制备降解菌液
取-80℃冰箱保藏的门多萨假单胞菌，于营养肉汤固体培养基平板上划线，在温度为30℃的条件下培养12h至长出单菌落；接种门多萨假单胞菌单菌落至营养肉汤液体培养基，在温度为30℃、转数为200rpm条件下培养16h至对数生长期，再按1％添加量转接至新鲜的营养肉汤液体培养基，在温度为30℃、转数为200rpm的条件下培养16h至对数生长期，得到未处理菌液，备用；
将上述未处理菌液进行离心，离心转数为10000rpm，温度为4℃，收集菌体后用无菌水重悬，得到菌体重悬液；
将上述离心后的上清液，用孔径为0.22um的滤膜过滤除菌，得无菌上清液。
2、制备螺旋藻的培养液
将螺旋藻按10％添加量接种于bg11培养基，在温度为30℃、光照强度为2000lux条件下培养5天，测得培养基中叶绿素a含量为1865.1μg/l，对培养基进行稀释，使得培养基中叶绿素a的含量为400μg/l，ph为5.5。
3、利用降解菌液溶解螺旋藻
按0.1％的添加量分别将未处理菌液、重悬菌体和无菌上清加入螺旋藻的培养液中，并设置未投加降解菌液的空白实验组作为对照，在温度为30℃、光照强度为2000lux条件下培养5天，光暗比为12:12，每隔24h取样测样品中叶绿素a的含量，结果如图3所示。
未处理菌液和无菌上清液均具有较好的溶藻作用，投加5天后，溶藻率分别达63.5％和53.5％，抑藻率分别为94.9％和93.5％。而单独投加门多萨假单胞菌细胞，溶藻效果不显著，抑藻率为42.3％。由此证明，门多萨假单胞菌主要依靠分泌代谢产物达到溶藻效果。而单独将门多萨假单胞菌加入bg11培养基中，由于该培养基缺少碳源菌体无法生长代谢，无法分泌相应代谢产物进行有效溶藻，但可在bg11培养基中加入门多萨假单胞菌适宜的碳源来解决，其中，碳源可选择：葡萄糖、乙酸钠、柠檬酸三钠、淀粉中的一种或几种。
实施例3
1、制备降解菌液
取-80℃冰箱保藏的门多萨假单胞菌，于营养肉汤固体培养基平板上划线，在温度为30℃的条件下培养12h至长出单菌落；接种门多萨假单胞菌单菌落至营养肉汤液体培养基，在温度为30℃、转数为200rpm条件下培养16h至对数生长期，再按1％接种量转接至新鲜的营养肉汤液体培养基，在温度为30℃、转数为200rpm的条件下培养12h至对数生长期，得到未处理菌液，备用。
2、制备螺旋藻的培养液
将螺旋藻按10％添加量接种于bg11培养基，在温度为30℃、光照强度为2000lux条件下培养4天，测得培养基叶绿素a含量为1388.4μg/l，对培养基进行稀释，使得培养基中叶绿素a的含量为200μg/l，ph为8.5。
3、利用降解菌液溶解螺旋藻
按0.1％的添加量将上述未处理菌液加入螺旋藻的培养液中，设置未投加降解菌液的空白实验组作为对照，光照强度为2000lux，光暗比为12:12，分别在温度为25℃、30℃、35℃和40℃条件下培养5天，每隔24h取样测样品中叶绿素a的含量，结果如图4所示。
投加0.1％降解菌液到螺旋藻培养液的条件下，培养温度为25℃、30℃、35℃和40℃时都有高效的溶藻抑藻效果。当培养温度为25℃时，溶藻率和抑藻率分别为52.3％和91.6％；当培养温度为30℃时，溶藻率和抑藻率分别为51.6％和93.5％；当培养温度为35℃时，溶藻率和抑藻率分别为56.4％和95.2％；当培养温度为40℃时，溶藻率和抑藻率分别为62.3％和96.5％。
实施例4
1、制备降解菌液
取-80℃冰箱保藏的门多萨假单胞菌，于营养肉汤固体培养基平板上划线，在温度为30℃的条件下培养12h至长出单菌落；接种门多萨假单胞菌单菌落至营养肉汤液体培养基，在温度为30℃、转数为200rpm条件下培养16h至对数生长期，再按1％接种量转接至新鲜的营养肉汤液体培养基，在温度为30℃、转数为200rpm的条件下培养12h至对数生长期，得到未处理菌液，备用。
2、制备螺旋藻的培养液
将螺旋藻按10％添加量接种于bg11培养基，在温度为30℃、光照强度为2000lux条件下培养3天，测得培养基叶绿素a含量为1354.1μg/l，对培养基进行稀释，使得培养基中叶绿素a的含量为300μg/l，分别使得培养液的ph为5.5、6.5、7.5和8.5。
3、利用降解菌液溶解螺旋藻
按0.1％的添加量将上述未处理菌液加入螺旋藻的培养液中，设置未投加降解菌液的空白实验组作为对照，光照强度为2000lux，光暗比为12:12，在温度为30℃条件下培养5天，每隔24h取样测样品中叶绿素a的含量，结果如图5所示。
投加0.1％降解菌液到螺旋藻培养液的条件下，螺旋藻的培养液ph为5.5、6.5、7.5和8.5时都有高效的溶藻抑藻效果。当培养液ph为5.5时，溶藻率和抑藻率分别为51.3％和92.4％；当培养液ph为6.5时，溶藻率和抑藻率分别为56.9％和96.5％；当培养液ph为7.5时，溶藻率和抑藻率分别为62.5％和94.3％；当培养液ph为8.5时，溶藻率和抑藻率分别为62.3％和93.7％。
实施例5
1、制备降解菌液
取-80℃冰箱保藏的门多萨假单胞菌，于营养肉汤固体培养基平板上划线，在温度为30℃的条件下培养12h至长出单菌落；接种门多萨假单胞菌单菌落至营养肉汤液体培养基，在温度为30℃、转数为200rpm条件下培养16h至对数生长期，再按1％接种量转接至新鲜的营养肉汤液体培养基，在温度为30℃、转数为200rpm的条件下培养12h至对数生长期，得到未处理菌液，备用。
2、制备螺旋藻的培养液
将螺旋藻按10％添加量接种于bg11培养基，在温度为30℃、光照强度为2000lux条件下培养6天，测得培养基叶绿素a含量为1873.1μg/l，对培养基进行稀释，使得培养基中叶绿素a的含量分别为100、300、500和700μg/l，ph为7.5。
3、利用降解菌液溶解螺旋藻
按0.1％的添加量将上述未处理菌液加入螺旋藻的培养液中，设置未投加降解菌液的空白实验组作为对照，光照强度为2000lux，光暗比为12:12，在温度为30℃条件下培养5天，每隔24h取样测样品中叶绿素a的含量，结果如图6所示。
投加0.1％降解菌液到螺旋藻培养液的条件下，起始叶绿素a含量为100、300、500和700μg/l时都有高效的溶藻抑藻效果。当起始叶绿素a含量为100μg/l时，溶藻率和抑藻率分别为52.9％和93.6％；当起始叶绿素a含量为300μg/l时，溶藻率和抑藻率分别为55.6％和94.2％；当起始叶绿素a含量为500μg/l时，溶藻率和抑藻率分别为62.6％和98.6％；当起始叶绿素a含量为700μg/l时，溶藻率和抑藻率分别为57.9％和95.6％。
统计实施例1-5所得溶藻效果，门多萨假单胞菌菌液投加量≥0.1％时，所有实施例加入降解菌液5天后藻细胞叶绿素a含量相比对照组降低90％以上，相比加入降解菌液前降低50％以上。由上可知，本发明的降解菌液在不同起始藻浓度、温度和ph条件下均可实现高效溶藻。
以上所揭露的仅为本发明一种较佳实施例而已，当然不能以此来限定本发明之权利范围，因此依本发明权利要求所作的等同变化，仍属本发明所涵盖的范围。