技术特征:
技术总结
本发明公开了一种嗜热脂肪土芽孢脂肪酶基因分泌表达方法,Genbank中搜索获得嗜热脂肪土芽孢脂肪酶成熟肽基因,按照毕赤酵母对遗传密码子的喜好性对嗜热脂肪土芽孢脂肪酶成熟肽基因进行密码子优化;按照定点突变PCR的要求,分别设计三对引物;对三轮Kex2定点突变后的嗜热脂肪土芽孢脂肪酶成熟肽基因进行测序;将合成的野生型或Kex2定点突变的嗜热脂肪土芽孢脂肪酶成熟肽基因与毕赤酵母表达质粒分别进行酶切;提取上述菌株中经测序鉴定的质粒,本发明通过定点突变,改变了嗜热脂肪土芽孢脂肪酶成熟肽序列中三个潜在的丝氨酸蛋白酶识别位点Kex2,在毕赤酵母表达系统中获得了全长完整表达的、有更高酶活性的嗜热脂肪土芽孢脂肪酶。
技术研发人员:王瑞工;刘伊佳;李逸明
受保护的技术使用者:深圳昇瑞生物科技有限公司
技术研发日:2018.07.09
技术公布日:2018.11.13