本发明涉及一种羊栖菜多糖的提取方法，属于多糖提取技术领域。
背景技术：
羊栖菜(sargassumfusiforme(harv.)setch)是褐藻门马尾藻属植物，别名羊奶子、海大麦等。分布广泛，日本和朝鲜沿岸都有分布，在浙江沿海地区分布更多。在日本，羊栖菜被称为“长寿菜”；在我国，羊栖菜入药已经有久远历史，《神农本草经》、《本草纲目》等记载其食用价值和药用价值。羊栖菜本身含有丰富的营养物质，其中碳水化合物占有很大比例，赋予了其有较多的生物学功能和较高的开发价值。羊栖菜广泛应用于降血脂、抗血栓、抗肿瘤以及消除大脑疲劳、增进机体免疫力、延缓衰老等食疗方面，治疗风湿病、糖尿病等药物制剂的研制方面同时也应用化工相关添加剂和粘合剂的原料等方面。
羊栖菜多糖(spf)是从全藻羊栖菜中提取得到的一种水溶性多糖，羊栖菜藻体的主要成分，主要有褐藻胶和褐藻多糖硫酸酯组成。现代药理学研究表明羊栖菜多糖具有抗肿瘤、降血糖、降血脂、增强机体免疫力、延缓衰老等功效。羊栖菜的多种药理活性与其多糖结构密切相关。spf是一类组成结构相似的酸性多糖混合物，水溶性好，粘度高，主要包括褐藻酸(acidicpolysaccharidesofalgae，apa)、褐藻糖(fucoidanpolysaccharidesulfate，fps)及褐藻淀粉(laminaran)，羊栖菜中多糖的含量分析是对羊栖菜药效研究和开发利用的重要依据。
近年来，多糖的提取和纯化方法有了迅速的发展，新的方法也不断涌现，包括hplc法、酶法、膜分离法等。但由于各方面的原因，这些方法并未得到广泛的应用。目前多采用中性热水浸提法或酸浸提法。以羊栖菜多糖为主的各种营养成分大部分是水可溶性物质，因此可以利用热水浸提的方法加以提取；这种提取方法简单可行，操作方便，对设备要求不高，但其生产时间长，多糖得率不高，浪费严重。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题是：提供一种提高羊栖菜多糖提取率，并且杂质含量少的多糖提取方法。
为解决上述技术问题，本发明提供的羊栖菜多糖的提取方法，包括下列步骤：
（1）打浆。
（2）初步酶解。
（3）特定微生物发酵降解。
（4）二次酶解。
（5）过滤。
（6）乙醇沉淀。
（7）真空干燥。
步骤（1）打浆具体操作是：将羊栖菜洗净，加入2-3倍重量的纯净水，打浆机或均质机中打浆10～20分钟。
步骤（2）初步酶解具体操作是：调节浆液的ph至4.2-5.2；在浆液中加入复合酶液，酶添加量0.5-2.3mkat/g，酶解时间1-3h，酶解结束后，将温度升高灭酶。
步骤（3）特定微生物发酵降解具体操作是：将酶解后的原料升温到37-40℃，调节物料的ph至7.9-8.3；然后加入米曲霉、双歧杆菌、枯草芽孢杆菌菌种0.05-1.5份，充分拌匀，发酵5-10h。
本步骤中加入的米曲霉、双歧杆菌、枯草芽孢杆菌菌种的质量按照步骤（1）中羊栖菜的质量为标准，即羊栖菜的重量为1份。
步骤（4）二次酶解具体操作是：调节浆液的ph至5.3-6.1；在浆液中加入复合酶液，酶添加量0.5-1.5mkat/g，酶解时间2-3h，酶解结束后，将温度升高灭酶。
步骤（5）过滤具体操作是：将上述步骤得到的物料过滤，除去100目以下的杂质，离心分离得到滤液。
步骤（6）乙醇沉淀具体操作是：向滤液中添加无水乙醇，搅拌15min后静置0.5-3h，冷却至10-15℃后离心分离，收集沉淀物。
步骤（7）真空干燥具体操作是：将步骤（6）收集沉淀物真空冷冻干燥，得到羊栖菜多糖。
步骤（2）和（4）中，复合酶液是纤维素酶、果胶酶和木聚糖酶，它们的酶活力的比例为3:1-2:1。
多糖得率(%)=提取物质量/原料质量。
羊栖菜多糖的纯度测定：采用蒽酮-硫酸法对制备的多糖进行含量测定。
本发明的有益效果：
本发明在现有多糖提取方法上进行了改良，首先采用初步酶解的方法，将单糖、双糖、低聚糖、生物碱等去除。然后利用特定微生物降解，将多糖充分释放出来，并优化了复合酶酶解条件（复合酶比例，酶解温度，酶解时间）。
本发明提取羊栖菜多糖提取率高，可以达到41.5-50.3%；提取羊栖菜多糖的纯度高。传统的提取方式，羊栖菜多糖有效成分易变性，颜色较深，且提取出来的多糖含有蛋白质杂质，需要额外增加除去蛋白的步骤，采用本发明提供提取工艺，蛋白质在提取过程中已被除去，多糖成品纯度高。
具体实施方式
实施例1
本实施例提供了一种羊栖菜多糖的提取方法，包括下列步骤：
打浆：将羊栖菜洗净，加入2倍重量的纯净水，打浆机或均质机中打浆10分钟。
初步酶解：调节浆液的ph至4.2；在浆液中加入复合酶液，酶添加量0.5mkat/g，酶解时间3h，酶解结束后，将温度升高灭酶。
特定微生物发酵降解：将酶解后的原料升温到37℃，调节物料的ph至7.9；然后加入米曲霉、双歧杆菌、枯草芽孢杆菌菌种0.05份，充分拌匀，发酵5-10h。
二次酶解：调节浆液的ph至5.3；在浆液中加入复合酶液，酶添加量1.5mkat/g，酶解时间2h，酶解结束后，将温度升高灭酶。
过滤：将上述步骤得到的物料过滤，除去100目以下的杂质，离心分离得到滤液。
乙醇沉淀：向滤液中添加无水乙醇，搅拌15min后静置0.5h，冷却至10℃后离心分离，收集沉淀物。
真空干燥：将步骤（6）收集沉淀物真空冷冻干燥，得到羊栖菜多糖。
初步酶解和二次酶解中，复合酶液是纤维素酶、果胶酶和木聚糖酶，它们的酶活力的比例为3:1:1。
采用本实施例制备的羊栖菜多糖的提取率为41.5%。
采用蒽酮-硫酸法对提取的粗羊栖菜多糖进行含量测定，其纯度达到87.6%。
实施例2
本实施例提供的羊栖菜多糖的提取方法，包括下列步骤：
打浆：将羊栖菜洗净，加入3倍重量的纯净水，打浆机或均质机中打浆20分钟。
初步酶解：调节浆液的ph至5.2；在浆液中加入复合酶液，酶添加量2.3mkat/g，酶解时间1h，酶解结束后，将温度升高灭酶。
特定微生物发酵降解：将酶解后的原料升温到40℃，调节物料的ph至8.3；然后加入米曲霉、双歧杆菌、枯草芽孢杆菌菌种1.5份，充分拌匀，发酵10h。
二次酶解：调节浆液的ph至6.1；在浆液中加入复合酶液，酶添加量1.5mkat/g，酶解时间2h，酶解结束后，将温度升高灭酶。
过滤：将上述步骤得到的物料过滤，除去100目以下的杂质，离心分离得到滤液。
乙醇沉淀：向滤液中添加无水乙醇，搅拌15min后静置3h，冷却至15℃后离心分离，收集沉淀物。
真空干燥：将步骤（6）收集沉淀物真空冷冻干燥，得到羊栖菜多糖。
初步酶解和二次酶解中，复合酶液是纤维素酶、果胶酶和木聚糖酶，它们的酶活力的比例为3:1:1。
采用本实施例制备的羊栖菜多糖的提取率为50.3%。
采用蒽酮-硫酸法对提取的粗羊栖菜多糖进行含量测定，其纯度达到85.2%。