本发明属于医药
技术领域：
，更具体地，涉及一种具有抗炎作用的化合物及其在制备抗炎药物中的应用。
背景技术：
：炎症作为一种重要的病理过程在人体中十分常见，它本身是作为机体对于外来的或者异体的刺激的一种自身免疫应答。而当这种应答失调或者过分应答导致机体的自损伤时，就演变成了炎症。所以大多数的疾病都伴随着炎症的介导和发生，而炎症的介导和发生又使得疾病对于机体的损伤加重，如风湿性关节炎、糖尿病合并症、癌症、动脉粥样硬化、炎性肠病等。在这些过程中，促炎因子如tnf-α、il-6、il-1β等都起到了重要的作用。巨噬细胞能产生多种炎症介质参与炎症反应，其中，no为重要的细胞炎症因子，no参与机体许多生理和病理过程，参与巨噬细胞的细胞毒和免疫调节、松驰血管平滑肌、抑制血小板聚集和传递神经信息等，同时在炎症反应中也发挥复杂作用。过量no会促进炎症性疾病的发生与发展外，还能诱导其他炎症因子释放。no生成过量可见于：骨性关节炎、类风湿性关节炎、风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、全身炎性反应综合征、脓毒血症、脓毒性休克等多种疾病。妇科千金方是由穿心莲、当归、党参、单面针、金樱根、鸡血藤、功劳木和千斤拔8味药材制成的药物。功效为清热除湿，补益气血。用于湿热瘀阻所致的带下病、腹痛，症见带下量多、色黄质稠、臭秽，小腹疼痛，腰骶酸疼，神疲乏力；慢性盆腔炎、子宫内膜炎，慢性宫颈炎见上述证候者。其中，穿心莲内酯是穿心莲的主要活性成分之一，其无明显毒副作用、药效长，一直是研究的热点。然而，进一步的研究发现，穿心莲内酯水溶性较差，具有多个不稳定的化学位点，在体内吸收少和生物利用度低，极大地限制了它的应用。而且，穿心莲中二萜内酯类化合物成分复杂，目前发现约四十种，而且不同化合物结构上的细微差别，也会使其功效相差甚远。目前，穿心莲中二萜内酯类化合物的活性机制尚未有确切的研究成果，同时，本领域急需植物来源的、增加抗炎活性和提高化学稳定性的新型抗炎化合物，以高效抑制细胞炎症因子no、tnf-α、il-1β、il-6的表达和含量，从而有效应用于炎症或与炎症相关疾病的治疗。技术实现要素：本发明的目的是针对穿心莲中二萜内酯类化合物的活性机制不明，以及植物来源的、增加抗炎活性和提高化学稳定性的新型抗炎物质的不足，提供一种从传统中药妇科千金片或妇科千金胶囊中提取、分离、纯化得到的具有抗炎作用的化合物。本发明的目的在于提供一种穿心莲中二萜内酯类化合物、或其药学上可接受的盐、或其前药在制备用于治疗炎症或与炎症相关的疾病的药物中的应用。本发明的另一目的是提供一种含有所述化合物、或其药学上可接受的盐、或前药的用于治疗炎症或与炎症相关疾病的药物组合物。本发明的上述目的通过如下技术方案予以实现：发明人从妇科千金片提取物中分离得到一种穿心莲内脂类似物，其结构式如式(i)所示：本发明并进一步确认该化合物具有显著的抗炎活性，细胞试验表明，该化合物对lps刺激引起的raw264.7炎症细胞因子no、tnf-α、il-1β、il-6含量均有明显的抑制作用，明显优越于现有已知的穿心莲中提取分离到的类似化合物，同时稳定性较好；而且mtt实验结果显示，该化合物在设定浓度范围内，细胞存活率>95％，说明该化合物没有明显的毒副作用，安全性好。因此，本发明提供式(i)所示化合物、或其药学上可接受的盐、或其前药在制备用于治疗炎症或与炎症相关的疾病的药物中的应用。本文所用术语“抑制”是指发生可检测的下降，或完全阻止。所述化合物的前药通常指一种物质，当用适当的方法施用后，可在应用对象体内进行代谢或化学反应而转变成所述化合物或其盐。本文所用的“药学上可接受的盐”指所述化合物的衍生物，其中通过制备其酸盐或碱盐而修饰母体化合物。药学上可接受的盐的例子包括但不限于：碱性残基(如胺)的无机酸或有机酸盐；酸性残基(如羧酸)的碱或有机盐，等等。药学上可接受的盐包括例如由无毒无机酸或有机酸形成的常规的母体化合物的无毒盐或季铵盐。例如，这种常规无毒盐包括衍生自无机酸，例如盐酸、氢溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等的那些盐；由有机酸，例如乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、棕榈酸、马来酸、羟基马来酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、对氨基苯磺酸、2-乙酰氧基苯甲酸、延胡索酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙二磺酸、草酸、羟乙磺酸等制备的盐。通过本领域已知方法制备这些生理上可接受的盐，例如，将游离胺碱溶解于过量酸的水性醇溶液中，或用碱金属碱如氢氧化物或胺中和游离羧酸。药学上可接受的盐从可溶于水的和不溶于水的盐中选择。所述化合物的应用对象包括但不限于哺乳动物。所述哺乳动物包括但不限于人类或鸡、鸭、猪、鹅、羊、牛等家用牲畜或猫、狗等宠物。所述炎症包括急性炎症或慢性炎症。所述炎症或与炎症相关的疾病是由炎症细胞因子超出正常量表达和释放而导致的疾病。优选地，所述炎症细胞因子为no、tnf-α、il-1β和/或il-6。本发明同时提供所述化合物在制备抑制细胞炎症因子no、tnf-α、il-1β和/或il-6表达，或者降低细胞炎症因子no、tnf-α、il-1β和/或il-6含量的药物中的应用。本发明所述化合物可以应用于制备抗炎药物及与炎症相关疾病的治疗药物中，所述疾病的病因至少部分地是由炎症引起，所述疾病包括但不限于以下疾病：缓解类风湿关节炎、骨关节炎、脊柱关节病、痛风性关节炎、风湿性关节炎、各种慢性关节炎的急性发作期或持续性的关节肿痛症状；治疗妇科性炎症，如宫颈炎、子宫内膜炎、盆腔炎、乳腺炎等；治疗前列腺炎、咽喉炎、自身免疫性疾病、腹膜后纤维化、肝炎、肺炎、肾炎、尿道炎、牙周炎、结膜炎、结肠炎、胰腺炎、过敏性炎症、全身炎症反应综合征、败血症、感染性休克、以及与炎症相关的代谢性疾病及其并发症。本发明所述化合物在提高抗炎效果方面的应用，尤其针对宫颈炎、子宫内膜炎、盆腔炎、乳腺炎和/或前列腺炎具有良好的疗效。本发明同时提供一种用于治疗炎症或与炎症相关的疾病的药物组合物，包含有效量的所述化合物、或其药学上可接受的盐、或前药。优选地，所述药物组合物还包含药学上可接受的辅料或载体。本发明所述药物中，所述化合物为抗炎的活性成分，可以作为唯一的活性成分，也可以作为活性成分之一，与当归、党参、单面针、金樱根、鸡血藤、功劳木、千斤拔中的一种或几种中药材或提取物的组合用作药物组合物，或者作为活性成分之一，与其他现已上市的抗炎药物联合使用，制备得到的防治炎症疾病类药物的组合物，已上市的抗炎药物包括各种甾体类抗炎药物和非甾体类抗炎药物。本文中所用“药学上可接受的辅料或载体”指药学领域常规的药物载体，例如：稀释剂、赋形剂如水等，填充剂如淀粉、蔗糖等；粘合剂如纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮；湿润剂如甘油；崩解剂如琼脂、碳酸钙和碳酸氢钠；吸收促进剂如季铵化合物；表面活性剂如十六烷醇；吸附载体如高岭土和皂粘土；润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙/镁、聚乙二醇等。另外还可以在组合物中加入其它辅剂如香味剂、甜味剂等。本发明药物组合物的各种剂型可以按照药学领域的常规生产方法制备。例如使活性成分与一种或多种载体混合，然后将其制成所需的剂型。所述药物的制剂形式包括片剂、胶囊剂、丸剂、散剂、颗粒剂、糖浆剂、注射剂、喷雾剂、软膏剂、栓剂、膜剂、控释剂、缓释剂或纳米制剂。本发明可以组合物的形式通过口服，鼻吸入、直肠或者肠胃外给药的方式施用于需要这种治疗的患者。用于口服时，可将其制成常规的固体制剂如片剂、粉剂、粒剂、胶囊等，制成液体制剂如水或油悬浮剂或其它液体制剂如糖浆、酏剂等；用于肠胃外给药时，可将其制成注射用的溶液、水或油性悬浮剂等。这些制剂的有效成分的量为制剂重量的0.01％～85％，优选为制剂重量的1％～50％，本发明化合物的使用量可根据用药途径、患者年龄、体重、所治疗的疾病种类调整，可以一次或多次使用。本发明化合物、或其药学上可接受的盐、或其前药可直接通过市场购得，或者利用市售原料，参照现有技术中的合成方法合成获得。合成的化合物可以进一步通过柱色谱法、高效液相色谱法或结晶等方式进一步纯化。本发明提供所述化合物的一种优选制备方法，基于妇科千金片或妇科千金胶囊的处方，选取穿心莲的干燥地上部分，通过溶剂提取、柱层析分离、制备液相分离、纯化，得到本发明所述化合物。与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明从传统中药处方角度出发，利用现代技术手段，从传统中药妇科千金片或妇科千金胶囊中提取、分离、纯化得到一种新型抗炎化合物。更重要的是，本发明提供了所述化合物或其药学上可接受的盐、或前药显著的抗炎活性应用，所述化合物结构简单、纯度高、稳定性较好，提取分离方法简便、易于合成，且无毒副作用，安全性好，可适应新药的产业化应用，本发明为植物源为抗炎活性药物的开发和应用提供了新的方向。所述化合物可显著抑制细胞炎症因子no、tnf-α、il-1β和il-6的表达，显著降低细胞中和组织中细胞炎症因子的含量，具有显著的抗炎活性，为炎症或与炎症相关的疾病，尤其是针对宫颈炎、子宫内膜炎、盆腔炎、乳腺炎和/或前列腺炎的有效治疗提供了新的技术手段。具体实施方式下面结合具体实施方式对本发明作进一步的说明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非另有说明，本发明实施例采用的原料试剂为常规购买的原料试剂。本发明的化合物是所述式(i)所示的化合物。该化合物可以采用以穿心莲为原料提取的方法制备得到，也可以根据本发明提供的结构式结合采用本领域的化学合成等方法制备得到。实施例1抗炎化合物的制备本实施例提供式(i)所示化合物的一种制备方法，包括如下步骤：s1.按《中华人民共和国药典》妇科千金胶囊项下方法[1]由株洲千金药业股份有限公司提取、制备妇科千金方提取物干膏(fkqj)1.5kg。将此干膏用3倍体积的etoac萃取8次，得到etoac萃取物(fkqje，156g)；s2.取etoac萃取物(fkqje,142.2g)硅胶拌样后经硅胶(1kg,200～300目)柱色谱，环己烷-etoac(9:1，8:2，7:3，6:4，5:5，v/v)梯度洗脱，tlc检识合并相似流分，共得到10个流分，分别命名为：fr.1、fr.2、fr.3、fr.4、fr.5、fr.6、fr.7、fr.8、fr.9、fr.10，备用；s3.将步骤s2中的收集到的流分fr.5(11g)通过mci柱色谱除去色素(meoh:h2o＝5:5，6:4，7:3，8:2，9:1，v/v)，tlc检识合并相似流分，共得到3个亚流分，分别命名为：fr.5-1、fr.5-2、fr.5-3，备用；s4.将步骤s3中的收集到的亚流分fr.5-1(1.1g)经反复硅胶柱色谱分离(环己烷-etoac30:1，10:1，5:1，1:1，v/v)，最终经sp-hplc(acn:h2o＝45:55，v/v)分离，得到式(i)所示化合物(5mg)。将实施例1制备得到的化合物进行质谱、核磁共振氢谱、核磁共振碳谱的检测，结果证明所得化合物为：19-羟基-8(17),13-半日花二烯-15,16-内酯。其结构式如式(i)所示：其质谱、核磁共振氢谱、核磁共振碳谱的谱图数据如下：无色针状结晶(meoh)，mp153～154℃；ei-msm/z318[m+h]+。1h-nmr(cdcl3,400mhz)δ:2.38–2.22(2h,m,h2-1),1.30–1.24(2h,m,h2-2),1.55(1h,dd,j＝10.8,3.3hz,h-5),2.00–1.72(3h,m,h2-7,h-9),1.43–1.31(2h,m,h2-11),2.56(1h,m,ha-12),2.43(1h,m,hb-12),5.87(1h,t-like,j＝1.6hz,h-14),4.75(1h,d,j＝1.6hz,ha-16),4.73(1h,d,j＝1.6hz,hb-16),4.89(1h,brs,ha-17),4.48(1h,brs,hb-17),3.77(1h,d,j＝10.9hz,ha-19),3.42(1h,brd,j＝10.9hz,hb-19),1.01(3h,s,4-ch3),0.70(3h,s,10-ch3)。13c-nmr(cdcl3,100mhz)δ:35.3(c-1),24.4(c-2),38.5(c-3),38.9(c-4),56.2(c-5),21.4(c-6),39.1(c-7),147.4(c-8),56.2(c-9),39.7(c-10),18.9(c-11),27.2(c-12),170.9(c-13),115.2(c-14),174.2(c-15),73.1(c-16),106.8(c-17),27.4(c-18),65.0(c-19),15.2(c-20)。实验例2体外对炎症细胞因子的影响本发明所述化合物对lps诱导的raw264.7巨噬细胞氧化应激与炎症的影响。(为了实验过程中记录方便，以下将本发明式(i)所示的化合物标号为：药物fr.5-1，即本发明中所述的药物fr.5-1即是指本发明式(i)所示化合物。)1、材料与方法(1)药品及仪器小鼠单核巨噬细胞raw264.7细胞株(3111c0001ccc000146)购自中国医学科学院基础医学研究所基础医学细胞中心。dmem培养基(dulbecco'smodifiedeaglemedium)和胎牛血清(fetalbovineserum,fbs)购自美国gibco公司。96孔板购自corningcostar(cambridge,ma,usa)公司。磷酸盐缓冲液(pbs)、二甲基亚砜(dmso)、griess试剂、脂多糖(lps)、溴化噻唑蓝四氮唑(mtt)和吲哚美辛购自美国sigma公司。穿心莲内酯、新穿心莲内酯、穿心莲宁为购自国内的标准品，其他常用生化试剂均为国产分析纯。白细胞介素-1β(il-1β)、肿瘤坏死因子(tnf-α)、白细胞介素-6(il-6)elisa测定试剂盒，南京建成生物工程研究所产品。dmem-15培养液：fbs75ml加不完全dmem培养液至500ml。dmem-10培养液：fbs50ml加不完全dmem培养液至500ml。lps溶液：lps1mg，加pbs至1ml制备储备液；取200μl储备液加培养基至50ml制备工作液。griess显色剂：griess试剂10g，加三蒸水定容至250ml。三联液：10g十二烷基硫酸钠(sodiumdodecylsulfate,sds)，5ml异丙醇，0.1ml浓盐酸，三蒸水定容至100ml。mtt工作液：mtt粉末加pbs配制成浓度5mg/ml的工作液，0.22μm过滤除菌。(2)药物制备首先用少量dmso溶解，然后用dmem-10培养液稀释至一定的浓度。(3)细胞培养用完全dmem-15培养基复苏冻存的raw264.7细胞，在37℃、5％co2条件下培养，待细胞状态、生长速度正常后，改用完全dmem-10培养液培养，每天换液，待细胞在细胞瓶中生长达到80％时传代，传代比例为1:3～1:5。(4)细胞活力测定细胞活力通过mtt法来测定。取对数生长期raw264.7细胞，用移液器轻柔吹打成细胞悬液，用完全dmem-10培养液调整细胞密度为4×105个/ml，接种于96孔板中(边缘用pbs填充)，每孔100μl。37℃、5％co2条件下温孵培养24h后加入50μl终浓度为1μg/ml的lps和50μl不同浓度的待测样品，继续温孵培养24h。每孔取上清100μl置于96孔板中，原培养板每孔加入20μl的mtt(5mg/ml)工作液，继续温孵培养4h后，每孔加入三联液100μl，培养箱中放置10h。用酶标仪于490nm处测定吸光度值(a)，计算细胞存活率。为保证结果的可靠性及实验的稳定性，所有实验在相同条件下重复三次。存活率的计算：存活率％＝(实验组a-空白组a)/(模型组a-空白组a)×100％。(5)no含量测定取对数生长期raw264.7细胞，用移液器轻柔吹打成细胞悬液，用完全dmem-10培养液调整细胞密度为4×105个/ml，接种于96孔板中(边缘用pbs填充)，每孔100μl。37℃、5％co2条件下温孵培养24h后加入50μl终浓度为1μg/ml的lps和50μl不同浓度的待测样品，同时设模型组即阴性对照组、阳性对照组(穿心莲内酯、新穿心莲内酯、穿心莲宁和吲哚美辛)、空白对照组(只加入培养基，不加细胞以调零)和实验组，每组设3个平行孔，继续温孵培养24h。每孔取上清100μl置于96孔板中，加入100μl配制好的griess试剂，室温下反应15min，酶标仪540nm处测定吸光度(a)，标准曲线法计算浓度(nano2作为对照品)，所获数据用spss24.0软件统计处理，计算抑制率，求半数抑制浓度(ic50)。为保证结果的可靠性及实验的稳定性，所有实验在相同的条件下均重复进行三次。测得抑制率后，计算各样品的ic50。详见下表1。抑制率的计算：抑制率％＝[1-(实验组a-空白组a)/(模型组a-空白组a)]×100％；a＝540nm处吸光度值；空白组＝培养基+溶解最高浓度被测物所需dmso；模型组＝细胞+培养基+lps+溶解最高浓度被测物所需dmso；实验组＝细胞+培养基+lps+不同浓度测试样品+dmso。(6)炎症因子tnf-α、il-1β、il-6测量样品取(5)制备好的样品用于后续炎症因子测定。细胞产生tnf-α、il-1β、il-6的量通过小鼠tnf-α、il-1β、il-6elisa试剂盒来测定。2、实验结果(1)细胞活力测定结果药物对细胞活力的影响通过mtt法来评价。mtt实验结果显示，药物fr.5-1在设定浓度0.5～15.0μg/ml浓度范围内，细胞存活率>95％，说明药物fr.5-1在实验浓度范围内无细胞毒作用，在此范围浓度下的药物浓度对于后续实验是合适的。(2)药物抑制no的产生表1各受试药物体外no抑制活性表1结果显示，药物fr.5-1的no生成抑制活性最强，药物fr.5-1虽较穿心莲宁仅是内酯环中羰基结构的位置改变，但no抑制活性却提高近2.5倍，甚至远高于现有的药物吲哚美辛。新穿心莲内酯在穿心莲宁的基础上进行了羟基化，而穿心莲宁的no抑制活性显著高于新穿心莲内酯的no抑制活性，可见受试化合物结构的改变对穿心莲内酯类化合物的活性影响显著。(3)药物抑制tnf-α、il-1β、il-6的产生表2各受试物体外tnf-α抑制活性由表2可知，药物fr.5-1与穿心莲内酯皆可显著抑制lps诱导的tnf-α的分泌，药物fr.5-1抑制tnf-α分泌和表达的活性远远高于吲哚美辛和穿心莲内酯。表3各受试物体外il-1β抑制活性由表3可知，药物fr.5-1与穿心莲内酯皆可显著抑制lps诱导的il-1β的分泌，药物fr.5-1抑制il-1β分泌和表达的活性远远高于穿心莲内酯。表4各受试物体外il-6抑制活性由表4可知，药物fr.5-1与穿心莲内酯皆可显著抑制lps诱导的il-6的分泌，药物fr.5-1抑制il-6分泌和表达的活性远远高于吲哚美辛和穿心莲内酯。实验例3对兔内毒素休克模型的影响(药物fr.5-1体内对炎性细胞因子的抑制作用)由于内毒素休克模型为全身炎性反应综合征(sirs)、感染性休克、多器官功能障碍综合征、败血症的代表模型，而炎性细胞因子在上述疾病的发生发展过程中起着至关重要的作用，而且该模型在阐述炎性细胞因子与炎性细胞因子相关性疾病之间的关系中最具代表性，故下面以兔内毒素休克模型为代表，阐述下面几方面内容：药物fr.5-1的体内炎性细胞因子抑制作用；药物fr.5-1对全身炎性反应综合征(sirs)、感染性休克、多器官功能障碍综合征、败血症的治疗作用；药物fr.5-1用以治疗
发明内容中所述炎症或与炎症相关的疾病的依据。1、试验材料译(1)受试品和阳性对照药：药物fr.5-1：按实施例1制备；地塞米松注射液，天津药业集团新郑股份有限公司产品。(2)动物：日本大耳白兔，雌雄兼用，体重2.5～3.0kg；由湖南省药品检验所提供。(3)试剂：大肠杆菌内毒素(lps，e.coli0111：b4)，为sigma公司产品。白细胞介素-1β(il-1β)、肿瘤坏死因子(tnf-α)elisa测定试剂盒、一氧化氮(no)elisa检测试剂盒，南京建成生物工程研究所产品。2、试验方法(1)造模：兔以40mg/kg(5ml/kg)戊巴比妥钠腹腔注射(ip)麻醉，分离颈总动脉，颈总动脉插入连有三通的静脉插管，通过压力换能器与八导生理记录仪连接，用于测量平均动脉血压(map)和采血，密闭系统采用0.3％肝素抗凝。四肢标ii导联连接电极，八导生理记录仪测量心率变化。数字温度计测量肛温变化。兔耳静脉注射lps300μg/kg(1ml/kg)后形成兔内毒素休克模型。译(2)给药：兔注射lps后立即耳静脉缓慢推入受试药物，给药组分别为地塞米松5mg/kg组；药物fr.5-1高中低剂量组(0.5mg/kg、1mg/kg、3mg/kg)，正常对照组及模型对照组给予同体积生理盐水。(3)检测：①平均动脉压(map)、心率(hr)、肛温测量：兔于给lps前及后30min、60min、120min、180min、240min、300min分别以八导生理记录仪通过压力换能器测量map，以肢体标ii导联测量心率，以数字温度计测量肛温变化。②血清tnf-α、il-1β、no测量：兔于给lps前及后30min、60min、120min，180min、240min、300min分别于颈总动脉采血1ml、2500rpm离心得血清，以放免法测定血清tnf-α及il-1β含量，以硝酸还原酶法测定血清no含量。3、试验结果(1)药物fr.5-1对内毒素休克兔平均动脉压(map)、心率(hr)、肛温变化的影响兔给予lps后，模型对照组与正常对照组比较，所测各时间点map均明显下降，120min时下降到最低点。地塞米松、药物fr.5-1各剂量治疗组均可明显抑制map降低；统计学分析表明，与模型对照组比较，地塞米松5mg/kg给药后60min时有显著性差异(p<0.05)，120min时有高度显著性差异(p<0.01)；与模型对照组比较，药物fr.5-13mg/kg组给药后120min时有高度显著性差异(p<0.01)，60min时有显著性差异(p<0.05)，药物fr.5-11mg/kg给药后120min时有显著性差异(p<0.05)，药物fr.5-10.5mg/kg给药后120min时有显著性差异(p<0.05)；药物fr.5-13mg/kg同地塞米松5mg/kg作用强度接近，结果见表5。表5药物fr.5-1对内毒素休克兔map、hr、肛温变化的影响注：与正常对照组比较：##p<0.01；与模型对照组比较：**p<0.01，**p<0.05。(2)药物fr.5-1对内毒素休克兔血清tnf-α、il-1β、no含量的影响兔给予lps后，模型对照组与正常对照组比较，所测各时间点血清tnf-α、il-1β、no含量均明显升高(p<0.01)。与模型对照组比较，药物fr.5-13mg/kg组给药后30～120min时可使tnf-α含量明显降低，30min、120min时可使il-1含量明显降低，60～120min可使no含量明显降低。药物fr.5-11mg/kg给药后120min时可使no含量明显降低。结果见表6。表6药物fr.5-1对内毒素休克兔血清tnf-α、il-1β、no含量的影响注：与正常对照组比较：##p<0.01；与模型对照组比较：**p<0.01，**p<0.05。综上所述，药物fr.5-1可明显改善内毒素休克兔的几个重要生命指标，即体温、血压；且可显著降低内毒素休克兔的tnf-α、il-1β、no水平。说明药物fr.5-1对内毒素休克兔具有治疗作用。实验例4抗炎作用1、对急性炎症模型的影响(对巴豆油所致小鼠肿胀的影响)小鼠50只，雄性，体重24～26g，均分为正常对照组、吲哚美辛组、药物fr.5-1低剂量组、中剂量组、高剂量组，共5组(n＝10)，各组灌予相应药物后，将0.1ml2％巴豆油(2％巴豆油、20％无水乙醇、5％蒸馏水和73％乙醚)涂于小鼠右耳前后两面，4小时后颈椎脱臼处死小鼠，沿耳廓基线剪下两耳，打孔称重，计算每组小鼠肿胀度。表7药物fr.5-1对巴豆油所致小鼠耳肿胀的影响注：与正常对照组比较，*p＜0.05。从表7可以看出阳性药吲哚美辛、药物fr.5-1高、中、低剂量组对巴豆有油致小鼠耳肿胀均有显著的抑制作用，提示，药物fr.5-1对急性炎症具有抑制作用。2、对慢性炎症模型的影响(大鼠棉球肉芽肿)取体重150～180g雄性大鼠，适应性饲养3天后以3％戊巴比妥钠麻醉(1.0ml/kg)，将已称重并经高压灭菌的棉球植入大鼠两侧腹股沟部皮下，术后随机分为5组，每组10只，手术当日开始连续灌胃给药7天，术后第8天处死动物，剥离并取出棉球肉芽组织，于60～90℃烘箱内干燥1h后称重，减去棉球的重量，即为肉芽肿的净量，比较组间肉芽肿的重量，计算其抑制率。表8药物fr.5-1对大鼠棉球肉芽肿的影响组别剂量(g/kg)肿胀度(mg)抑制率(％)模型对照组生理盐水116.5±5.7-吲哚美辛0.574.84±11.28***36％药物fr.5-1高1585.97±10.01***27％药物fr.5-1中7.592.12±7.65**21％药物fr.5-1低0.599.03±14.52*15％注：与模型对照组比较：*p＜0.05；**p＜0.01；***p＜0.001。表8结果显示，药物fr.5-1高、中、低三剂量均可抑制大鼠棉球肉芽肿，提示，药物fr.5-1对慢性炎症具有抑制作用。实验例5对妇科炎症模型大鼠的影响下面以宫颈炎模型为代表，阐述药物fr.5-1对宫颈炎、子宫内膜炎、盆腔炎、乳腺炎等妇科炎症的治疗作用。1、试验方法采用苯酚胶浆造模后进行药物fr.5-1抗宫颈炎实验研究。将大鼠均分为正常对照组、吲哚美辛组、药物fr.5-1低剂量组、中剂量组、高剂量组，共5组，每组10只大鼠。药物fr.5-1高、中、低剂量组及阳性组大鼠每天灌予对应药物，共10天。经10天给药后，各大鼠眼球取血测白细胞总数，处死动物立即取阴道、子宫称重并于福尔马林溶液中固定。2、试验结果表9药物fr.5-1对宫颈炎模型大鼠脏器指数及白细胞总数的影响注：与模型对照组比较，*p＜0.05，**p＜0.01。结果见表9，阳性组(吲哚美辛)及药物fr.5-1组均有降低模型大鼠子宫器指数的作用；阳性药及药物fr.5-1组对宫颈炎模型大鼠白细胞总数具有显著的抑制作用。另外，组织病理学检查发现，正常组阴道、宫颈组织无病理学改变，而模型组阴道明显的上皮脱落，宫颈黏膜增厚、嗜酸性粒细胞浸润；与模型组比较，阳性组的嗜酸性粒细胞明显减少，上皮无脱落无增厚；药物fr.5-1高剂量组嗜酸性粒细胞明显减少，上皮无脱落无增厚；中剂量组子宫少量嗜酸性粒细胞浸润，阴道上皮有一定脱落；低剂量阴道上皮无见明显脱落，与模型组比较宫颈嗜酸性粒细胞浸润无明显改变。上述实验结果说明，中、高剂量的药物fr.5-1组对宫颈炎模型大鼠白细胞总数具有显著的抑制作用，可用于宫颈炎、子宫内膜炎、盆腔炎、乳腺炎等妇科炎症的治疗。实施例6药物fr.5-1不同剂型的制备(1)丸剂：取药物fr.5-1、淀粉、交联羧甲基纤维素钠分别粉碎过100目筛，混合均匀，用水泛丸，干燥，每丸含药物fr.5-1为0.1～500mg，检验合格，包装即得。(2)口服液：取药物fr.5-1，加水溶解，加矫味剂适量，加活性炭5g，加热30min，滤过，加水至1000ml，滤过，灌封，灭菌，每ml含药物fr.5-1为0.1～500mg，检验合格，包装即得。(3)糖浆：取药物fr.5-1，加水溶解，加蔗糖500g及防腐剂适量，煮沸使溶解，滤过，加水至1000ml，滤过，灌封，灭菌，每ml含药物fr.5-1为0.1～850mg，检验合格，包装即得。(4)散剂、片剂、胶囊、颗粒剂、浸膏剂：均按常规工艺制备，每片或每颗胶囊中含药物fr.5-1为0.1～850mg；散剂或颗粒剂每小袋为1g含药物fr.5-1为0.1～850mg，经检验合格后，包装即得。实施例7稳定性实验按照实施例6中的制备方法，将穿心莲内酯、新穿心莲内酯、穿心莲宁分别制备成丸剂，制备方法中除了将药物fr.5-1分别替换成穿心莲内酯、新穿心莲内酯、穿心莲宁外，其他制备条件与实施例6中丸剂的制备方法相同。然后，将该处方工艺制备的4种不同的丸剂进行稳定性考察，按照实验例2的实验方法测试各受试药物体外no抑制活性，具体结果见表10。表10稳定性实验结果从稳定性实验结果可以发现，药物fr.5-1在室温及40℃/rh75％加速条件下长期放置时，no抑制活性下降不明显。同等条件下，与穿心莲内酯、新穿心莲内酯和穿心莲宁对比，药物fr.5-1依然具有很好的抗炎效果，药物fr.5-1的稳定性较好。显然，本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。当前第1页12