本发明涉及中药成分提取技术领域，具体涉及一种8-o-乙酰山栀苷甲酯和6-o-乙酰山栀苷甲酯的制备方法。
背景技术：
独一味是藏族习用药材，为唇形科植物独一味lamio-phlomisrotata(benth.)kudo的根及根状茎、全草，生长于海拔3000m以上的高原或高山上。独一味其功能与主治为活血止血、祛风止痛，用于跌打损伤，外伤出血，风湿痹痛，黄水病。独一味作为常用中药，具有强大的开发潜力。
独一味主要成分有黄酮类、环烯醚萜类和苯乙醇苷类。一方面，独一味提取物直接作用药用原料，成本低而且应用简便，但存在由于采收季节和产地不同都会造成有效成分含量的波动；同时，药用植物提取物直接应用，有效成分及其含量不清楚，给药品的质量控制造成困难的缺陷。另一方面，独一味活性成份种类多，从独一味直接提取活性成分困难，目前研究和报道均较少。
技术实现要素：
有鉴于此，本申请提供了一种8-o-乙酰山栀苷甲酯和6-o-乙酰山栀苷甲酯的制备方法，得到的8-o-乙酰山栀苷甲酯纯品和6-o-乙酰山栀苷甲酯纯品纯度高，所述制备方法收率高，工艺简单，成本低。
为解决以上技术问题，本发明提供的技术方案是一种8-o-乙酰山栀苷甲酯和6-o-乙酰山栀苷甲酯的制备方法，包括
(1)提取浓缩：取独一味药材为原料，经醇提，得到提取液a；所述提取液a减压浓缩至无醇，收集得浓缩液b；
(2)分离富集：
取所述浓缩液b上反相柱i进行吸附，得到过柱液c；
所述过柱液c上反相柱ii进行吸附，吸附完成后，洗脱，得到洗脱液d；
所述洗脱液d浓缩至浸膏，得浸膏e；
(3)分离：
所述浸膏e溶解后，用硅胶拌样，得到柱原料f，将所述柱原料f上样，用二氯甲烷-甲醇体系梯度洗脱，得到洗脱液g；
洗脱液g浓缩至浸膏，得浸膏h；
(4)纯化：
所述浸膏h溶解后，通过制备型高效液相进行纯化，根据检测图谱的相应谱带收集溶液，可得到8-o-乙酰山栀苷甲酯纯品溶液浓缩i和6-o-乙酰山栀苷甲酯纯品溶液j；
(5)富集干燥：
所述溶液浓缩i，上反相柱iii进行吸附，吸附完成后，洗脱，得到洗脱液k；将所述洗脱液k减压浓缩至干，再进行真空干燥，即得8-o-乙酰山栀苷甲酯纯品；
所述溶液浓缩j，上反相柱iii进行吸附，吸附完成后，洗脱，得到洗脱液l；将所述洗脱液l减压浓缩至干，再进行真空干燥，即得6-o-乙酰山栀苷甲酯纯品。
优选的，所述步骤(1)醇提过程，采用浓度为50％-100％的甲醇或乙醇进行提取。
优选的，所述步骤(1)醇提过程，采用的提取方法选自回流提取、超声提取和渗漉提取中任一种。
优选的，所述步骤(1)具体包括：提取浓缩：取独一味药材为原料，经醇提，提取次数3-6次，每次提取1-2小时，合并所有的提取液，得到提取液a；所述提取液a50-70℃减压浓缩至无醇，收集得浓缩液b。
优选的，所述步骤(2)具体包括：分离富集：
取所述浓缩液b上反相柱i进行吸附，得到过柱液c；
所述过柱液c上反相柱ii进行吸附，吸附完成后，依次用水，浓度为30％以下的醇溶液，浓度为90-100％的醇溶液洗脱，得到洗脱液d；
所述洗脱液d50-60℃减压浓缩至浸膏，得浸膏e。
优选的，所述步骤(2)还包括：取所述浓缩液b上反相柱i进行吸附，得到过柱液c后，用浓度为90-100％的醇溶液冲柱。该过程用浓度为90-100％的醇溶液冲柱，收得的冲柱液浓缩回收，回收的试剂可重复使用。
优选的，所述步骤(3)具体包括：分离：
所述浸膏e用甲醇溶解后，用60-80目硅胶拌样，得到柱原料f，将所述柱原料f上样，依次用体积比为15：1-8：1的二氯甲烷和甲醇的混合溶剂，和体积比为8：1-4：1的二氯甲烷和甲醇的混合溶剂洗脱，收集体积比为8：1-4：1的二氯甲烷和甲醇的混合溶剂洗脱期间的洗脱液，得到洗脱液g；
洗脱液g减压浓缩至浸膏，得浸膏h。
优选的，所述洗脱过程通过tlc跟踪监测。
优选的，所述步骤(4)具体包括：纯化：所述浸膏h用甲醇溶解后，通过制备型高效液相进行纯化，根据检测图谱的相应谱带收集溶液，可得到8-o-乙酰山栀苷甲酯纯品溶液浓缩i和6-o-乙酰山栀苷甲酯纯品溶液j。
优选的，所述(5)步骤中，所述洗脱过程采用90-95％醇溶液洗脱。
优选的，所述反相柱i的反相柱填料选自大孔树脂、聚酰胺和nm100-反相聚合物色谱填料中任一种；所述反相柱ii的反相柱填料为大孔树脂、聚酰胺和nm100-反相聚合物色谱填料中任一种；所述反相柱iii的反相柱填料选自大孔树脂、聚酰胺和nm100-反相聚合物色谱填料中任一种。
优选的，所述反相柱i的反相柱填料聚酰胺；所述反相柱ii的反相柱填料为大孔树脂。
优选的，所述大孔树脂为ab-8型大孔吸附树脂、d101型大孔吸附树脂。
本申请与现有技术相比，其详细说明如下：
8-o-乙酰山栀苷甲酯和6-o-乙酰山栀苷甲酯为环烯醚萜类化合物，具有止血镇痛的作用。本发明技术方案提供了以独一味药材为原料分离并纯化8-o-乙酰山栀苷甲酯和6-o-乙酰山栀苷甲酯的方法，包括：提取浓缩、分离富集、分离、纯化和富集干燥步骤，得到的8-o-乙酰山栀苷甲酯和6-o-乙酰山栀苷甲酯纯品纯度高。其中，先进行醇提操作，有利于后续步骤的进行，同时提高产品纯度。分离富集过程，取提取浓缩过程得到的浓缩液b上反相柱i进行吸附，得到过柱液c，分离苯乙醇苷类及黄酮类杂质；过柱液c上反相柱ii进行吸附，吸附完成后，洗脱，得到洗脱液d，分离大极性杂质；洗脱液d浓缩至浸膏，得浸膏e。该过程采用反向柱层析联动处理，使目标产品得到富集，杂质得到去除。进一步的，所述过柱液c上反相柱ii进行吸附，吸附完成后，依次用水，浓度为30％以下的醇溶液洗脱大极性杂质，包括，浓度为90-100％的醇溶液洗脱，得到洗脱液d。分离过程，浸膏e用溶解后，用硅胶拌样，得到柱原料f，将所述柱原料f上样，依次用体积比为15：1-8：1的二氯甲烷和甲醇的混合溶剂，和体积比为8：1-4：1的二氯甲烷和甲醇的混合溶剂洗脱，收集体积比为8：1-4：1的二氯甲烷和甲醇的混合溶剂洗脱期间的洗脱液，得到洗脱液g；体积比为15：1-8：1的二氯甲烷和甲醇的混合溶剂洗脱小极性杂质，体积比为8：1-4：1的二氯甲烷和甲醇的混合溶剂洗脱目标成分段。纯化过程通过制备型高效液相进行纯化，进一步提高纯度得到8-o-乙酰山栀苷甲酯纯品溶液和6-o-乙酰山栀苷甲酯的纯品溶液，纯品溶液经包括反相柱层析，浓缩至干和真空干燥过程的富集干燥步骤处理，进一步提高纯度，得到8-o-乙酰山栀苷甲酯纯品和6-o-乙酰山栀苷甲酯纯品。
经实验验证，本发明提供的制备方法，得到的8-o-乙酰山栀苷甲酯纯品纯度能达到98.5％以上和6-o-乙酰山栀苷甲酯纯品纯度能达到98％以上，8-o-乙酰山栀苷甲酯纯品收率达到80％，6-o-乙酰山栀苷甲酯纯品收率达到70％，该制备方法工艺简单，成本低，产值高，可应用于工业化生产。
具体实施方式
为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合具体实施例对本发明作进一步的详细说明。
实施例1
一种8-o-乙酰山栀苷甲酯和6-o-乙酰山栀苷甲酯的制备方法，包括
(1)提取浓缩：取独一味药材为原料，经醇提，提取方法为回流提取，提取次数3-6次，每次提取1-2小时，合并所有的提取液，得到提取液a；所述提取液a50-70℃减压浓缩至无醇，收集得浓缩液b；
(2)分离富集：
取所述浓缩液b上反相柱i进行吸附，得到过柱液c后，用浓度为90-100％的甲醇溶液冲柱；
所述过柱液c上反相柱ii进行吸附，吸附完成后，依次用水，浓度为30％以下的甲醇溶液，浓度为90-100％的甲醇溶液洗脱，得到洗脱液d；
所述洗脱液d50-60℃减压浓缩至浸膏，得浸膏e；
(3)分离：
所述浸膏e用甲醇溶解后，用60-80目硅胶拌样，得到柱原料f，将所述柱原料f上样，依次用体积比为15：1-8：1的二氯甲烷和甲醇的混合溶剂，和体积比为8：1-4：1的二氯甲烷和甲醇的混合溶剂洗脱，收集体积比为8：1-4：1的二氯甲烷和甲醇的混合溶剂洗脱期间的洗脱液，得到洗脱液g；洗脱过程通过tlc跟踪监测；
洗脱液g减压浓缩至浸膏，得浸膏h；
(4)纯化：
所述浸膏h溶解后，通过制备型高效液相进行纯化，根据检测图谱的相应谱带收集溶液，可得到8-o-乙酰山栀苷甲酯纯品溶液浓缩i和6-o-乙酰山栀苷甲酯纯品溶液j；
(5)富集干燥：
所述溶液浓缩i，上反相柱iii进行吸附，吸附完成后，90-95％甲醇溶液洗脱，得到洗脱液k；将所述洗脱液k减压浓缩至干，再进行真空干燥，即得8-o-乙酰山栀苷甲酯纯品；
所述溶液浓缩j，上反相柱iii进行吸附，吸附完成后，90-95％甲醇溶液洗脱，得到洗脱液l；将所述洗脱液l减压浓缩至干，再进行真空干燥，即得6-o-乙酰山栀苷甲酯纯品；
其中，所述反相柱i的反相柱填料为聚酰胺，所述反相柱ii的反相柱填料为大孔树脂为ab-8型大孔吸附树脂，所述反相柱iii的nm100-反相聚合物色谱填料
分组：按步骤1)中提取溶剂的不同，将实验分为6组，1～3组提取溶剂分别为浓度为30％、50％、100％的甲醇，4～6组提取溶剂分别为浓度为30％、50％、100％的乙醇。通过hplc法检测每组8-o-乙酰山栀苷甲酯纯品和6-o-乙酰山栀苷甲酯纯品纯度和收率，结果见表1。
表1
上述实验结果表明，步骤1)中采用浓度为50％-100％的甲醇或乙醇进行提取为优选方案。
实施例2
一种8-o-乙酰山栀苷甲酯和6-o-乙酰山栀苷甲酯的制备方法，包括
(1)提取浓缩：取独一味药材为原料，经采用浓度为50％-100％的乙醇进行提取，提取方法选自回流提取、超声提取和渗漉提取中任一种，提取次数3-6次，每次提取1-2小时，合并所有的提取液，得到提取液a；所述提取液a50-70℃减压浓缩至无醇，收集得浓缩液b；
(2)分离富集：
取所述浓缩液b上反相柱i进行吸附，得到过柱液c后，用浓度为90-100％的乙醇溶液冲柱；
所述过柱液c上反相柱ii进行吸附，吸附完成后，依次用水，浓度为30％以下的乙醇溶液，浓度为90-100％的乙醇溶液洗脱，得到洗脱液d；
所述洗脱液d50-60℃减压浓缩至浸膏，得浸膏e；
(3)分离：
所述浸膏e用甲醇溶解后，用60-80目硅胶拌样，得到柱原料f，将所述柱原料f上样，依次用体积比为15：1-8：1的二氯甲烷和甲醇的混合溶剂，和体积比为8：1-4：1的二氯甲烷和甲醇的混合溶剂洗脱，收集体积比为8：1-4：1的二氯甲烷和甲醇的混合溶剂洗脱期间的洗脱液，得到洗脱液g；洗脱过程通过tlc跟踪监测；
洗脱液g减压浓缩至浸膏，得浸膏h；
(4)纯化：
所述浸膏h溶解后，通过制备型高效液相进行纯化，根据检测图谱的相应谱带收集溶液，可得到8-o-乙酰山栀苷甲酯纯品溶液浓缩i和6-o-乙酰山栀苷甲酯纯品溶液j；
(5)富集干燥：
所述溶液浓缩i，上反相柱iii进行吸附，吸附完成后，90-95％甲醇溶液洗脱，得到洗脱液k；将所述洗脱液k减压浓缩至干，再进行真空干燥，即得8-o-乙酰山栀苷甲酯纯品；
所述溶液浓缩j，上反相柱iii进行吸附，吸附完成后，90-95％甲醇溶液洗脱，得到洗脱液l；将所述洗脱液l减压浓缩至干，再进行真空干燥，即得6-o-乙酰山栀苷甲酯纯品；
其中，所述反相柱i的反相柱填料为聚酰胺，所述反相柱ii的反相柱填料为大孔树脂为d101型大孔吸附树脂，所述反相柱iii的nm100-反相聚合物色谱填料。
分组：按步骤1)中提取方法的不同，将实验分为3组，8～9组提取方法依次为回流提取、超声提取、渗漉提取。通过hplc法检测每组8-o-乙酰山栀苷甲酯和6-o-乙酰山栀苷甲酯纯品纯度和收率，结果见表2。
表2
上述实验结果表明，步骤1)中采用回流提取、超声提取、渗漉提取作为提取方法，8-o-乙酰山栀苷甲酯纯品纯度能达到99.3％以上，6-o-乙酰山栀苷甲酯纯品纯度均能达到98.5％以上，8-o-乙酰山栀苷甲酯纯品收率能达80％以上，6-o-乙酰山栀苷甲酯纯品收率能达到70％以上，三种提取方法均为本发明优选方案。
实施例3
一种8-o-乙酰山栀苷甲酯和6-o-乙酰山栀苷甲酯的制备方法，包括
(1)提取浓缩：取独一味药材为原料，经采用浓度为50％-100％的甲醇进行提取，提取方法为回流提取，提取次数3-6次，每次提取1-2小时，合并所有的提取液，得到提取液a；所述提取液a50-70℃减压浓缩至无醇，收集得浓缩液b；
(2)分离富集：
取所述浓缩液b上反相柱i进行吸附，得到过柱液c后，用浓度为90-100％的甲醇溶液冲柱；
所述过柱液c上反相柱ii进行吸附，吸附完成后,洗脱，得到洗脱液d；
所述洗脱液d50-60℃减压浓缩至浸膏，得浸膏e；
(3)分离：
所述浸膏e用甲醇溶解后，用60-80目硅胶拌样，得到柱原料f，将所述柱原料f上样，依次用体积比为15：1-8：1的二氯甲烷和甲醇的混合溶剂，和体积比为8：1-4：1的二氯甲烷和甲醇的混合溶剂洗脱，收集体积比为8：1-4：1的二氯甲烷和甲醇的混合溶剂洗脱期间的洗脱液，得到洗脱液g；洗脱过程通过tlc跟踪监测；
洗脱液g减压浓缩至浸膏，得浸膏h；
(4)纯化：
所述浸膏h溶解后，通过制备型高效液相进行纯化，根据检测图谱的相应谱带收集溶液，可得到8-o-乙酰山栀苷甲酯纯品溶液浓缩i和6-o-乙酰山栀苷甲酯纯品溶液j；
(5)富集干燥：
所述溶液浓缩i，上反相柱iii进行吸附，吸附完成后，90-95％甲醇溶液洗脱，得到洗脱液k；将所述洗脱液k减压浓缩至干，再进行真空干燥，即得8-o-乙酰山栀苷甲酯纯品；
所述溶液浓缩j，上反相柱iii进行吸附，吸附完成后，90-95％甲醇溶液洗脱，得到洗脱液l；将所述洗脱液l减压浓缩至干，再进行真空干燥，即得6-o-乙酰山栀苷甲酯纯品；
其中，所述反相柱i的反相柱填料为聚酰胺，所述反相柱ii的反相柱填料为大孔树脂为d101型大孔吸附树脂，所述反相柱iii的nm100-反相聚合物色谱填料。
分组：按步骤2)中洗脱溶剂的不同，将实验分为7组，10组洗脱过程为依次用水，浓度为30％以下的甲醇溶液，浓度为90-100％的甲醇溶液洗脱，11组洗脱过程为依次用水，浓度为30％以下的乙醇溶液，浓度为90-100％的乙醇溶液洗脱，12组洗脱过程为依次用水，浓度为30％以下的甲醇溶液洗脱，13组洗脱过程为依次用水，浓度为90-100％的甲醇溶液洗脱，14组洗脱过程为依次用水，浓度为50％的甲醇溶液，浓度为90-100％的甲醇溶液洗脱，15组洗脱过程为依次用水，浓度为30％以下的甲醇溶液，浓度为80％的甲醇溶液洗脱。通过hplc法检测每组8-o-乙酰山栀苷甲酯和6-o-乙酰山栀苷甲酯纯品纯度和收率，结果见表3。
表3
上述实验结果表明，步骤2)中洗脱过程为依次用水，浓度为30％以下的醇溶液，浓度为90-100％的醇溶液洗脱为优选方案。
实施例4
一种8-o-乙酰山栀苷甲酯和6-o-乙酰山栀苷甲酯的制备方法，包括
(1)提取浓缩：取独一味药材为原料，经采用浓度为50％-100％的甲醇进行提取，提取方法为回流提取，提取次数3-6次，每次提取1-2小时，合并所有的提取液，得到提取液a；所述提取液a50-70℃减压浓缩至无醇，收集得浓缩液b；
(2)分离富集：
取所述浓缩液b上反相柱i进行吸附，得到过柱液c后，用浓度为90-100％的甲醇溶液冲柱；
所述过柱液c上反相柱ii进行吸附，吸附完成后，依次用水，浓度为30％以下的甲醇溶液，浓度为90-100％的甲醇溶液洗脱，得到洗脱液d；
所述洗脱液d50-60℃减压浓缩至浸膏，得浸膏e；
(3)分离：
所述浸膏e用甲醇溶解后，用60-80目硅胶拌样，得到柱原料f，将所述柱原料f上样，依次用体积比为15：1-8：1的二氯甲烷和甲醇的混合溶剂，和体积比为8：1-4：1的二氯甲烷和甲醇的混合溶剂洗脱，收集体积比为8：1-4：1的二氯甲烷和甲醇的混合溶剂洗脱期间的洗脱液，得到洗脱液g；洗脱过程通过tlc跟踪监测；
洗脱液g减压浓缩至浸膏，得浸膏h；
(4)纯化：
所述浸膏h溶解后，通过制备型高效液相进行纯化，根据检测图谱的相应谱带收集溶液，可得到8-o-乙酰山栀苷甲酯纯品溶液浓缩i和6-o-乙酰山栀苷甲酯纯品溶液j；
(5)富集干燥：
所述溶液浓缩i，上反相柱iii进行吸附，吸附完成后，洗脱，得到洗脱液k；将所述洗脱液k减压浓缩至干，再进行真空干燥，即得8-o-乙酰山栀苷甲酯纯品；
所述溶液浓缩j，上反相柱iii进行吸附，吸附完成后，洗脱，得到洗脱液l；将所述洗脱液l减压浓缩至干，再进行真空干燥，即得6-o-乙酰山栀苷甲酯纯品；
其中，所述反相柱i的反相柱填料为聚酰胺，所述反相柱ii的反相柱填料为大孔树脂为d101型大孔吸附树脂，所述反相柱iii的nm100-反相聚合物色谱填料。
分组：按步骤5)中洗脱溶剂的不同，将实验分为6组，16～21组提取溶剂分别为为50％甲醇溶液、90％甲醇溶液、95％甲醇溶液、50％乙醇溶液、90％乙醇溶液、95％乙醇溶液。通过hplc法检测每组8-o-乙酰山栀苷甲酯和6-o-乙酰山栀苷甲酯纯品纯度和收率，结果见表4。
表4
上述实验结果表明，步骤5)中用90-95％醇溶液洗脱为优选方案。
实施例5
一种8-o-乙酰山栀苷甲酯和6-o-乙酰山栀苷甲酯的制备方法，包括
(1)提取浓缩：取独一味药材为原料，经50％-100％的乙醇进行提取，提取方法为回流提取，提取次数3-6次，每次提取1-2小时，合并所有的提取液，得到提取液a；所述提取液a50-70℃减压浓缩至无醇，收集得浓缩液b；
(2)分离富集：
取所述浓缩液b上反相柱i进行吸附，得到过柱液c后，用浓度为90-100％的甲醇溶液冲柱；
所述过柱液c上反相柱ii进行吸附，吸附完成后，依次用水，浓度为30％以下的乙醇溶液，浓度为90-100％的乙醇溶液洗脱，得到洗脱液d；
所述洗脱液d50-60℃减压浓缩至浸膏，得浸膏e；
(3)分离：
所述浸膏e用甲醇溶解后，用60-80目硅胶拌样，得到柱原料f，将所述柱原料f上样，依次用体积比为15：1-8：1的二氯甲烷和甲醇的混合溶剂，和体积比为8：1-4：1的二氯甲烷和甲醇的混合溶剂洗脱，收集体积比为8：1-4：1的二氯甲烷和甲醇的混合溶剂洗脱期间的洗脱液，得到洗脱液g；洗脱过程通过tlc跟踪监测；
洗脱液g减压浓缩至浸膏，得浸膏h；
(4)纯化：
所述浸膏h溶解后，通过制备型高效液相进行纯化，根据检测图谱的相应谱带收集溶液，可得到8-o-乙酰山栀苷甲酯纯品溶液浓缩i和6-o-乙酰山栀苷甲酯纯品溶液j；
(5)富集干燥：
所述溶液浓缩i，上反相柱iii进行吸附，吸附完成后，90-95％甲醇溶液洗脱，得到洗脱液k；将所述洗脱液k减压浓缩至干，再进行真空干燥，即得8-o-乙酰山栀苷甲酯纯品；
所述溶液浓缩j，上反相柱iii进行吸附，吸附完成后，90-95％甲醇溶液洗脱，得到洗脱液l；将所述洗脱液l减压浓缩至干，再进行真空干燥，即得6-o-乙酰山栀苷甲酯纯品；
分组：按反相柱填料填料的不同，将实验分为6组：
22组所述反相柱i的反相柱填料为聚酰胺，所述反相柱ii的反相柱填料为d101型大孔吸附树脂，所述反相柱iii的反相柱填料为ab-8型大孔吸附树脂；
23组所述反相柱i的反相柱填料为聚酰胺，所述反相柱ii的反相柱填料为nm100-反相聚合物色谱填料，所述反相柱iii的反相柱填料为nm100-反相聚合物色谱填料；
24组所述反相柱i的反相柱填料为聚酰胺，所述反相柱ii的反相柱填料为ab-8型大孔吸附树脂，所述反相柱iii的反相柱填料为nm100-反相聚合物色谱填料；
25组所述反相柱i的反相柱填料为聚酰胺，所述反相柱ii的反相柱填料为聚酰胺，所述反相柱iii的反相柱填料为聚酰胺；
26组所述反相柱i的反相柱填料为d101型大孔吸附树脂，所述反相柱ii的反相柱填料为d101型大孔吸附树脂，所述反相柱iii的反相柱填料为ab-8型大孔吸附树脂；
27组所述反相柱i的反相柱填料为nm100-反相聚合物色谱填料，所述反相柱ii的反相柱填料为nm100-反相聚合物色谱填料，所述反相柱iii的反相柱填料为nm100-反相聚合物色谱填料。
通过hplc法检测每组8-o-乙酰山栀苷甲酯和6-o-乙酰山栀苷甲酯纯品纯度和收率，结果见表5。
表5
上述实验结果表明，所述反相柱i的反相柱填料选自大孔树脂、聚酰胺和nm100-反相聚合物色谱填料中任一种；所述反相柱ii的反相柱填料选自大孔树脂、聚酰胺和nm100-反相聚合物色谱填料中任一种；所述反相柱iii的反相柱填料选自大孔树脂、聚酰胺和nm100-反相聚合物色谱填料中任一种，8-o-乙酰山栀苷甲酯纯品纯度能达到98.5％以上和6-o-乙酰山栀苷甲酯纯品纯度能达到98％以上，8-o-乙酰山栀苷甲酯纯品收率均能达到80％以上，6-o-乙酰山栀苷甲酯纯品收率均能达到70％以上，三种提取方法均为本发明优选方案。其中，22组～24组试验效果更佳，即所述反相柱i的反相柱填料为聚酰胺，所述反相柱ii的反相柱填料为大孔树脂或nm100-反相聚合物色谱填料，所述反相柱iii的反相柱填料大孔树脂或nm100-反相聚合物色谱填料为更有选的方案。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，上述优选实施方式不应视为对本发明的限制，本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的精神和范围内，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。