本发明属于植物提取技术领域，尤其是涉及一种平卧菊三七叶粗多糖提取方法。
背景技术：
平卧菊三七，又名蔓三七、蛇接骨、续命草、神仙草，味辛、微苦、性凉，为多年生草本药食两用植物。民间利用其通经活络，消肿止痛，消炎止咳，治疗跌打损伤，支气管肺炎、肺结核等。现代生物化学和医学研究证明，蔓三七对人体既有营养价值，又有药理作用。2009年上半年，中国疾病预防控制中心、国家食品质量监督检验中心、中国食品发酵工业研究院等有关单位完成了平卧菊三七毒理学检验、卫生学检验和多种成分的检验，结论是：无毒、无致畸影响；其有效成份具有通经活络，消炎止咳，散淤消肿，活血生肌等功效；能延缓衰老、激活免疫细胞、改善机体免疫功能、提高人体免疫力，增强人体的新陈代谢并对记忆障碍有一定改善作用；具有降血压、降血糖和预防慢性肾病、抑制乙型肝炎的显著效果；对预防和治疗心脑血管疾病、糖尿病等有一定的疗效；还具有抗病毒、抗菌活性、抑制骨髓癌和志贺样毒素细胞的活性。平卧菊三七能够广泛利用于食品医药工业、日用化工等领域，是一种极具潜力和高经济价值的药食两用植物。
多糖（polysaccharide）又称多聚糖，是由20个以上的单糖以糖昔键相连组成的聚合物，它是组成高分子化合物家族中最丰富多彩的成员。多糖是来自于高等植物、动物细胞膜、微生物的细胞壁中的天然大分子物质，是所有生命有机体的重要组成成分与维持生命所必需的结构材料。人们对多糖的研究最早是在20世纪40年代，但其作为广谱免疫促进剂而引起人们的极大重视是在60年代，经过40余年的不断发展，人们对多糖这一类重要生命物质产生了新的认识，使这一学科成为目前生命科学中研究最活跃的领域之一。人们发现糖类在生物体中不仅是作为能量物质或结构材料，更重要的是它参与了生命科学中细胞的各种活动，具有多种多样的生物功能，因此糖的研究逐步活跃起来，其中，一些分子量在几千以上，具有很强生物活性的活性多糖的研究受到日益重视。这些活性多糖的生理活性、化学结构以及构效关系成为多糖研究的前沿阵地，并取得了很大的进展。科学工作者逐渐发现多糖类化合物具有抗肿瘤、抗衰老、抗感染、降血糖血脂和治疗艾滋病等方面的生物活性。近年来，又发现多糖的糖链在控制细胞的分裂和分化，调节细胞的生长和衰老方面起着决定性作用，多糖已逐渐显示出越来越广泛的应用前景。
平卧菊三七是一种药食兼可的独特植物，具有极好的营养价值，和现在人们食用的木耳菜同属，食味柔滑，清香可口，可清炒、凉拌、氽汤，茎叶切碎作饺子、包子的馅颇具香味，煮泡饭的味道尤佳；叶也可生吃，或取鲜叶开水冲泡当茶饮，如把叶子晒干泡水更是别有一番风味。研究结果表明：平卧菊三七茎叶营养丰富，具有粗多糖含量（比色法）为18.2%，粗多糖是平卧菊三七叶的主要有效成分，药理与临床研究十分引人瞩目，具有广泛的药理学作用，能够促进造血、降血脂、保肝及抗癌等作用。
目前，在植物多糖的提取工艺中，常用的提取方法有热水浸提法、酸浸提法和酶解法，各有优缺点，虽然工艺条件温和，低能耗、无污染，但提取率不理想，多糖结构易被破坏，多糖易损失，提取时间过长，提取过程复杂，影响产物产量，提取成本较高，导致总体经济效益并不高。
技术实现要素：
为解决上述问题，本发明的目的是提供一种平卧菊三七叶粗多糖提取方法，其工艺流程简单，易于操作，提取成本低，产品产率高、质量好。
为实现上述发明目的，本发明采用如下技术方案：
一种平卧菊三七叶粗多糖提取方法，其包括以下步骤：
步骤1、原料预处理：选取新鲜平卧菊三七叶片，用清水洗净，再沥干；
步骤2、灭酶干燥处理：将步骤1中沥干后的平卧菊三七叶片放入滚筒杀青机内进行灭酶干燥，杀青温度为160～180℃，时间为5～7min，干燥至含水量低于6％；
步骤3、超声波辅助提取：将步骤2得到的平卧菊三七叶片与弱碱水按质量比1：12～15混合，采用超声波辅助提取，超声波功率为100～200w，提取温度为70～80℃，提取时间为40～45min，提取完成后用板框过滤，得过滤液；
步骤4、脱色：向步骤3得到的过滤液中加入改性二氧化硅微球，在温度为35～40℃的条件下脱色20～30min，改性二氧化硅微球用量为步骤2中得到的平卧菊三七叶片物料质量的0.2～0.4%，溶液的颜色由深绿色变成淡青色，色素清除率达到了96～99%；
上述改性二氧化硅微球的制备方法，其包括以下步骤：
（a）、将粒径为1～2μm的微米级二氧化硅微球在100～130℃下真空干燥3～5h，再采用质量分数10～30%碱性溶液进行活化处理，然后用纯水冲洗至中性；其中，碱性溶液为三乙胺、氢氧化钠、氢氧化钾、氢化钠或叔丁醇钾；
（b）、步骤a中洗至中性后的溶液与氯代乙酸乙酯在体积浓度50～70%的乙醇溶液中混合搅拌2～3h，继续加入乙二胺，室温下反应5～6h，反应结束后将溶液离心收集产物，再用干燥的二氯甲烷多次洗涤收集后的产物，常温真空干燥过夜，即可得到改性二氧化硅微球；所述的微米级二氧化硅微球、碱性溶液、氯代乙酸乙酯、乙二胺用量比例为3～8g：0.5～1g：2～6ml：2～6ml；
步骤5、浓缩、醇沉：将步骤4脱色后得到的溶液在真空下进行浓缩到原体积的40～50%，再加入无水乙醇，浓缩液与无水乙醇体积比为1：1～1.5，静置3～4小时，将沉淀的平卧菊三七叶粗多糖用离心机离心过滤，得离心物；
步骤6、干燥：将步骤5得到的离心物进行真空干燥，干燥温度为50～70℃，真空度为-0.08～-0.05mpa，即得到平卧菊三七叶粗多糖。
进一步地，上述的步骤3中，弱碱为氨水、碳酸钠或碳酸氢钠，弱碱水的ph值为8.0～9.0。
进一步地，上述的步骤3中，用板框过滤时，采用10～12μm滤布，并且加入过滤介质滑石粉和活性炭混合物，用量为步骤2得到的平卧菊三七叶片物料用量的1～1.3%；滑石粉和活性炭的质量比为8～12：2～5。
进一步地，上述的步骤4中，制备改性二氧化硅微球所用的原料微米级二氧化硅微球采用改良的stöber法合成，其包括以下步骤：
步骤a1、10～15g去离子水溶解0.03～0.06gkcl后，依次加入75～80g无水乙醇、4～7mlnh3•h2o和2～5g正硅酸乙酯，混合搅拌均匀至溶液呈乳白色；
步骤a2、4～8g正硅酸乙酯分散于25～33g无水乙醇中，溶解4～8g正硅酸乙酯，超声分散后得到的混合溶液在常温下加入步骤a1中得到的乳白色溶液中，混合反应1～2h，反应结束后，收集产物；
步骤a3、得到的产物用水和乙醇多次清洗，至上清液完全澄清，再将清洗后的产物干燥得到微米级二氧化硅微球。
进一步地，上述的步骤5中，离心机为平板离心机，离心机转速3000～4000r/min，滤袋400目～600目。
由于采用如上所述的技术方案，本发明具有如下优越性：
本发明平卧菊三七叶粗多糖提取方法，其对清洗沥干后的平卧菊三七叶片进行灭酶干燥处理，能够在高温、短时条件下会破坏新鲜平卧菊三七叶片中酶的活性，同时有利于提高多糖的提取率；利用超声波提高细胞壁的破碎，加速了多糖的溶出，使细胞内容物缓慢释放，显著提升了多糖的得率，超声波的次级效应如机械振动、乳化、扩散、化学效应等也能加速多糖的扩散释放并充分与溶剂混合，有利于提取；利用后期接枝的方法使微米级二氧化硅微球表面的硅羟基和氯代乙酸乙酯作为桥梁，将乙二胺键合在二氧化硅微球表面上，制备出具有高度规则的多孔道结构、孔道大小能自由调节、吸附目标分子容量高、吸脱附速率快且同时具有大分子协同效应的吸附材料，增大了水溶性色素的吸附性能。
本发明平卧菊三七叶粗多糖提取方法，其工艺流程简单，操作方便，成本低，无有害溶剂，产物纯度高，且纯化、除杂效果更好，节能环保，生产安全性高，适合工业化生产，具有良好的市场前景。
具体实施方式
参照以下实施例可以对本发明作进一步详细说明；但是，以下实施例仅仅是例证，本发明并不局限于这些实施例。
实施例1
首先制备改性二氧化硅微球，以备用；制备改性二氧化硅微球的微米级二氧化硅微球为市售的已知原料。
一种改性二氧化硅微球的制备方法，其包括以下具体步骤：
（a）、将粒径为1μm的微米级二氧化硅微球5g在130℃下真空干燥3h，再采用0.5g质量分数30%的氢氧化钠进行处理使其表面活性基团硅羟基活化，然后用纯水冲洗至中性；
（b）、步骤a中洗至中性后的溶液加入3ml氯代乙酸乙酯，在体积浓度70%乙醇溶液中混合搅拌2h，继续加入3ml乙二胺，室温下反应5h，反应结束后将溶液离心收集产物，再用干燥的二氯甲烷以每次5ml用量洗涤收集后的产物3次，以除去剩余的乙二胺和反应生成的hcl，常温真空干燥过夜，即可得到改性二氧化硅微球。
一种平卧菊三七叶粗多糖提取方法，其包括以下具体步骤：
步骤1、选取新鲜平卧菊三七叶片，用清水清洗两次，以去除叶片上的杂物，再沥干；
步骤2、将步骤1中沥干后的平卧菊三七叶片放入滚筒杀青机内进行灭酶干燥，杀青温度为160℃，时间为7min，干燥至含水量低于6％；
步骤3、将步骤2得到的平卧菊三七叶片与氨水按质量比1：12混合，采用超声波辅助提取，超声波功率为100w，提取温度为70℃，提取时间为45min，提取完成后用板框过滤，板框采用粒径为10μm滤布，得过滤液；
步骤4、向步骤3得到的过滤液中加入改性二氧化硅微球，在温度为35℃的条件下脱色30min，改性二氧化硅微球用量为步骤2中得到的平卧菊三七叶片物料质量的0.2%，溶液的颜色由深绿色变成淡青色，色素清除率达到了96%；
步骤5、将步骤4脱色后得到的溶液在真空下进行浓缩到原体积的40%，再加入无水乙醇，浓缩液与无水乙醇体积比为1：1，静置4小时，将沉淀的平卧菊三七叶粗多糖用平板离心机离心过滤，离心机转速3000r/min，滤袋为400目，得离心物；
步骤6、将步骤5得到的离心物进行真空干燥，干燥温度为50℃，真空度为-0.08mpa，即得到平卧菊三七叶粗多糖。
实施例2
首先制备改性二氧化硅微球，以备用；制备改性二氧化硅微球的微米级二氧化硅微球为使用改良的stöber法所合成，其包括以下具体步骤：
步骤a1、10g去离子水溶解0.03gkcl，将kcl溶液转移到250ml三口烧瓶中后，依次加入75g无水乙醇，4mlnh3•h2o和2g正硅酸乙酯，混合搅拌均匀至溶液呈乳白色；
步骤a2、4g正硅酸乙酯分散于25g无水乙醇中，超声分散后得到的混合溶液在常温下以0.1ml/min的速度滴加到步骤a1中的三口烧瓶中的乳白色溶液中，3h滴加完成后，继续反应1h，反应结束后，收集产物；
步骤a3、得到的产物用水和乙醇多次清洗，至上清液完全澄清，再将清洗后的产物置于鼓风干燥箱中干燥得到微米级二氧化硅微球。
一种改性二氧化硅微球的制备方法，其包括以下具体步骤：
（a）、将制得的粒径为1.3μm的微米级二氧化硅微球3g在110℃下真空干燥4.5h，再采用0.5g质量分数18%的氢氧化钾进行处理使其表面活性基团硅羟基活化，然后用纯水冲洗至中性；
（b）、步骤a中洗至中性后的溶液加入2.5ml氯代乙酸乙酯，在体积浓度65%乙醇溶液中混合搅拌2.5h，继续加入3.5ml乙二胺，室温下反应5.3h，反应结束后将溶液离心收集产物，再用干燥的二氯甲烷以每次5ml用量洗涤收集后的产物4次，以除去剩余的乙二胺和反应生成的hcl，常温真空干燥过夜，即可得到改性二氧化硅微球。
一种平卧菊三七叶粗多糖提取方法，其包括以下具体步骤：
步骤1、选取新鲜平卧菊三七叶片，用清水洗净，以去除叶片上的杂物，再沥干；
步骤2、将步骤1中沥干后的平卧菊三七叶片放入滚筒杀青机内进行灭酶干燥，杀青温度为165℃，时间为6min，干燥至含水量低于6％；
步骤3、将步骤2得到的平卧菊三七叶片与弱碱水按质量比1：13混合，采用超声波辅助提取，超声波功率为100w，提取温度为80℃，提取时间为45min，提取完成后用板框过滤，板框采用粒径为10μm滤布，得过滤液；
步骤4、向步骤3得到的过滤液中加入改性二氧化硅微球，在温度为37℃的条件下脱色28min，改性二氧化硅微球用量为步骤2中得到的平卧菊三七叶片物料质量的0.3%，溶液的颜色由深绿色变成淡青色，色素清除率达到了98%；
步骤5、将步骤4脱色后得到的溶液在真空下进行浓缩到原体积的43%，再加入无水乙醇，浓缩液与无水乙醇体积比为1：1.1，静置3.8小时，将沉淀的平卧菊三七叶粗多糖用平板离心机离心过滤，离心机转速3300r/min，滤袋为400目，得离心物；
步骤6、将步骤5得到的离心物进行真空干燥，干燥温度为58℃，真空度为-0.08mpa，即得到平卧菊三七叶粗多糖。
实施例3
首先制备改性二氧化硅微球，以备用；制备改性二氧化硅微球的微米级二氧化硅微球为使用改良的stöber法所合成，其包括以下具体步骤：
步骤a1、12g去离子水溶解0.05gkcl，将kcl溶液转移到250ml三口烧瓶中后，依次加入77g无水乙醇，5mlnh3•h2o和3g正硅酸乙酯，混合搅拌均匀至溶液呈乳白色；
步骤a2、5.5g正硅酸乙酯分散于29g无水乙醇中，超声分散后得到的混合溶液在常温下以0.3ml/min的速度滴加到步骤a1中的三口烧瓶中的乳白色溶液中，3h滴加完成后，继续反应1h，反应结束后，收集产物；
步骤a3、得到的产物用水和乙醇多次清洗，至上清液完全澄清，再将清洗后的产物置于鼓风干燥箱中干燥得到微米级二氧化硅微球。
一种改性二氧化硅微球的制备方法，其包括以下步骤：
（a）、将粒径为1.5μm的微米级二氧化硅微球5g在110℃下真空干燥4.5h，再采用0.7g质量分数15%叔丁醇钾进行活化处理，然后用纯水冲洗至中性；
（b）、步骤a中洗至中性后的溶液加入4ml氯代乙酸乙酯在体积浓度55%乙醇溶液中混合搅拌2.3h，继续加入4ml乙二胺，室温下反应5.8h，反应结束后将溶液离心收集，再用干燥的二氯甲烷以每次5ml用量洗涤收集后的产物3次，以除去剩余的乙二胺和反应生成的hcl，常温真空干燥过夜，即可得到改性二氧化硅微球。
一种平卧菊三七叶粗多糖提取方法，其包括以下具体步骤：
步骤1、选取新鲜平卧菊三七叶片，用清水清洗三次，以去除叶片上的杂物，再沥干；
步骤2、将步骤1中沥干后的平卧菊三七叶片放入滚筒杀青机内进行灭酶干燥，杀青温度为170℃，时间为5.8min，干燥至含水量低于6％；
步骤3、将步骤2得到的平卧菊三七叶片与弱碱水按质量比1：13混合，采用超声波辅助提取，超声波功率为150w，提取温度为77℃，提取时间为43min，提取完成后用板框过滤，板框采用粒径为11μm滤布，得过滤液；
步骤4、向步骤3得到的过滤液中加入改性二氧化硅微球，在温度为38℃的条件下脱色26min，改性二氧化硅微球用量为步骤2中得到的平卧菊三七叶片物料质量的0.3%，溶液的颜色由深绿色变成淡青色，色素清除率达到了97%；
步骤5、将步骤4脱色后得到的溶液在真空下进行浓缩到原体积的46%，再加入无水乙醇，浓缩液与无水乙醇体积比为1：1.3，静置3.7小时，将沉淀的平卧菊三七叶粗多糖用平板离心机离心过滤，离心机转速3500r/min，滤袋为480目，得离心物；
步骤6、将步骤5得到的离心物进行真空干燥，干燥温度为63℃，真空度为-0.06mpa，即得到平卧菊三七叶粗多糖。
实施例4
首先制备改性二氧化硅微球，以备用；制备改性二氧化硅微球的微米级二氧化硅微球为使用改良的stöber法所合成，其包括以下具体步骤：
步骤a1、13.5g去离子水溶解0.06gkcl，将kcl溶液转移到250ml三口烧瓶中后，依次加入79g无水乙醇，6mlnh3•h2o和4g正硅酸乙酯，混合搅拌均匀至溶液呈乳白色；
步骤a2、7g正硅酸乙酯分散于31g无水乙醇中，超声分散后得到的混合溶液在常温下以0.5ml/min的速度滴加到步骤a1中的三口烧瓶中的乳白色溶液中，3h滴加完成后，继续反应1h，反应结束后，收集产物；
步骤a3、得到的产物用水和乙醇多次清洗，至上清液完全澄清，再将清洗后的产物置于鼓风干燥箱中干燥得到微米级二氧化硅微球。
一种改性二氧化硅微球的制备方法，其包括以下步骤：
（a）、将粒径为1.8μm的微米级二氧化硅微球7g在120℃下真空干燥3.5h，再采用0.8g质量分数20%叔丁醇钾进行活化处理，然后用纯水冲洗至中性；
（b）、步骤a中洗至中性后的溶液加入5ml氯代乙酸乙酯在体积浓度65%乙醇溶液中混合搅拌4.5h，继续加入5ml乙二胺，室温下反应5.2h，反应结束后将溶液离心收集，再用干燥的二氯甲烷以每次5ml用量洗涤收集后的产物3次，以除去剩余的乙二胺和反应生成的hcl，常温真空干燥过夜，即可得到改性二氧化硅微球。
一种平卧菊三七叶粗多糖提取方法，其包括以下具体步骤：
步骤1、选取新鲜平卧菊三七叶片，用清水清洗三次，以去除叶片上的杂物，再沥干；
步骤2、将步骤1中沥干后的平卧菊三七叶片放入滚筒杀青机内进行灭酶干燥，杀青温度为175℃，时间为5.3min，干燥至含水量低于6％；
步骤3、将步骤2得到的平卧菊三七叶片与弱碱水按质量比1：14混合，采用超声波辅助提取，超声波功率为180w，提取温度为79℃，提取时间为41min，提取完成后用板框过滤，板框采用粒径为12μm滤布，得过滤液；
步骤4、向步骤3得到的过滤液中加入改性二氧化硅微球，在温度为39℃的条件下脱色24min，改性二氧化硅微球用量为步骤2中得到的平卧菊三七叶片物料质量的0.36%，溶液的颜色由深绿色变成淡青色，色素清除率达到了98%；
步骤5、将步骤4脱色后得到的溶液在真空下进行浓缩到原体积的48%，再加入无水乙醇，浓缩液与无水乙醇体积比为1：1.4，静置3.9小时，将沉淀的平卧菊三七叶粗多糖用平板离心机离心过滤，离心机转速3800r/min，滤袋为550目，得离心物；
步骤6、将步骤5得到的离心物进行真空干燥，干燥温度为67℃，真空度为-0.05mpa，即得到平卧菊三七叶粗多糖。
实施例5
首先制备改性二氧化硅微球，以备用；制备改性二氧化硅微球的微米级二氧化硅微球为使用改良的stöber法所合成，其包括以下具体步骤：
步骤a1、15g去离子水溶解0.06gkcl，将kcl溶液转移到250ml三口烧瓶中后，依次加入80g无水乙醇，7mlnh3•h2o和5g正硅酸乙酯，混合搅拌均匀至溶液呈乳白色；
步骤a2、8g正硅酸乙酯分散于33g无水乙醇中，超声分散后得到的混合溶液在常温下以0.3ml/min的速度滴加到步骤a1中的三口烧瓶中的乳白色溶液中，3h滴加完成后，继续反应1h，反应结束后，收集产物；
步骤a3、得到的产物用水和乙醇多次清洗，至上清液完全澄清，再将清洗后的产物置于鼓风干燥箱中干燥得到微米级二氧化硅微球。
一种改性二氧化硅微球的制备方法，其包括以下步骤：
（a）、将粒径为2μm的微米级二氧化硅微球8g在100℃下真空干燥5h，再采用1g质量分数10%叔丁醇钾进行活化处理，然后用纯水冲洗至中性；
（b）、步骤a中洗至中性后的溶液加入6ml氯代乙酸乙酯在体积浓度50%乙醇溶液中混合搅拌3h，继续加入6ml乙二胺，室温下反应6h，反应结束后将溶液离心收集，再用干燥的二氯甲烷以每次5ml用量洗涤收集后的产物3次，以除去剩余的乙二胺和反应生成的hcl，常温真空干燥过夜，即可得到改性二氧化硅微球。
一种平卧菊三七叶粗多糖提取方法，其包括以下具体步骤：
步骤1、选取新鲜平卧菊三七叶片，用清水清洗三次，以去除叶片上的杂物，再沥干；
步骤2、将步骤1中沥干后的平卧菊三七叶片放入滚筒杀青机内进行灭酶干燥，杀青温度为180℃，时间为5min，干燥至含水量低于6％；
步骤3、将步骤2得到的平卧菊三七叶片与弱碱水按质量比1：15混合，采用超声波辅助提取，超声波功率为200w，提取温度为80℃，提取时间为40min，提取完成后用板框过滤，板框采用粒径为12μm滤布，得过滤液；
步骤4、向步骤3得到的过滤液中加入改性二氧化硅微球，在温度为40℃的条件下脱色20min，改性二氧化硅微球用量为步骤2中得到的平卧菊三七叶片物料质量的0.4%，溶液的颜色由深绿色变成淡青色，色素清除率达到了98%；
步骤5、将步骤4脱色后得到的溶液在真空下进行浓缩到原体积的48%，再加入无水乙醇，浓缩液与无水乙醇体积比为1：1.4，静置3.9小时，将沉淀的平卧菊三七叶粗多糖用平板离心机离心过滤，离心机转速4000r/min，滤袋为600目，得离心物；
步骤6、将步骤5得到的离心物进行真空干燥，干燥温度为67℃，真空度为-0.05mpa，即得到平卧菊三七叶粗多糖。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。